吖啶类荧光探针用于微量蛋白质测定的研究

目的:利用合成的3种新型的蛋白质分子荧光探针N-(2-二甲氨基)乙基-9-氯吖啶-4-甲酰胺(NCAF)、9-[(N-2-二甲氨乙基)吖啶-4-甲酰胺]-α-丙氨酸(NAFA)和4,9-二[N-(2-二甲氨基)乙基]-9-吖啶胺-4-甲酰胺(DNAF)结合荧光发射光谱,建立了3种新的微量蛋白质测定方法。方法:通过建立适宜的NCAF-SDS(十二烷基硫酸钠)、NAFA-SDS和DNAF-SDS荧光猝灭体系,牛血清白蛋白(BSA)的加入对体系的荧光具有恢复作用,并随着BSA加入浓度的增大,荧光恢复程度逐渐增强,并在一定的浓度范围内呈线性关系,由此建立了用新型吖啶类荧光探针测定BSA的荧光分析新方法。结果:从NCAF、NAFA到DNAF测定线性范围分别为5.0×10-9~6.8×10-7,9.0×10-9~8.2×10-8和5.0×10-9~8.3×10-7mol·L-1;测定灵敏度(3σ/K)分别为1.1×10-10,3.8×10-10和1.0×10-10mol·L-1。结论:该测定方法具有良好的荧光响应和稳定性,为微量蛋白质定量分析提供了新的技术体系。     

吖啶-4-甲酰胺衍生物的合成与表征

吖啶类衍生物作为生物大分子探针具有广阔应用前景。本文以4-羧基吖啶酮为母体,在4位上引入N-（2-二甲氨基）乙基,并进一步在9位引入α-丙氨酸或N-（2-二甲氨基）乙基,合成了3种吖啶-4-甲酰胺衍生物：N-（2-二甲氨基）乙基-9-氯吖啶-4-甲酰胺（NCAF）、9-[（N-2-二甲氨乙基）吖啶-4-甲酰胺]-α-丙...     

4,9-二[N-(2-二甲氨基)乙基]-9-吖啶胺-4-甲酰胺与蛋白质相互作用

应用水溶性4,9一二[N-(2一二甲氨基)乙基]-9-吖啶胺-4-甲酞胺(DNAF)探针,研究了DNAF与牛血清白蛋白(BSA)的相互结合作用机理.计算出相应的热力学参数△H,△G以及△S;通过荧光猝灭方法研究结合作用,测定出结合位点数n和表观结合常数KA;根据荧光共振能童转移理论求得供体BSA和受体DNAF的距离r;...     

光谱法研究2-对氯苯氨基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮与牛血清白蛋白的相互作用

用荧光光谱及紫外可见光谱法研究了2-对氯苯氨基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮与牛血清白蛋白(BSA)之间在不同温度下的相互作用.实验表明,2-对氯苯氨基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮能强烈猝灭BSA的内源荧光,猝灭机理为动态猝灭.在此基础上计算了二者相互作用的结合常数、结合位点数及热力学参数等,结果表明,2-对氯苯氨基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮分子与BSA分子以摩尔比1∶1结合,其结合反应主要是熵驱动,主要作用力是疏水力.同时,应用同步荧光考察了FDT对BSA构象的影响.     

一种喹唑啉酮衍生物与牛血清白蛋白的相互作用

应用荧光光谱法及紫外吸收光谱法研究了3-(2-羟乙基)-2-对甲苯胺基喹唑啉-4(3-H)-酮(HTQ)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用,计算了不同温度下的猝灭常数KSV、表观结合常数Kb以及主要的热力学参数ΔHθ、ΔGθ、ΔSθ等。结果表明,HTQ能强烈猝灭牛血清白蛋白的荧光强度,其荧光猝灭机理为动态猝灭;当HTQ与BSA以摩尔比1∶1结合形成复合物时,其结合过程主要是熵驱动,相互作用力主要为疏水作用力。根据F rster非辐射能量转移理论计算了给体(BSA)与受体(HTQ)之间的结合距离。     

7-氯-9-苯基-3,4-二氢吖啶-1（2H）-酮的合成及其与牛血清白蛋白的相互作用研究

以5-氯-2-氨基二苯甲酮与1,3-环己二酮在碘催化下缩舍得到7-氯-9-苯基-3,4-二氢吖啶-1（2H）-酮（Y）.通过IR、1HNMR、13CNMR、MS及元素分析对其结构进行了表征,运用荧光猝灭法研究了Y与牛血清白蛋白（BSA）的相互作用,确定了Y对BSA荧光的猝灭机理,测定了Y与BSA之间的结合常数、结合位点数及热力学参数.结果表明,Y对BSA具有良好的静态猝灭作用,其相互作用的结合常数为3.9044×104 L·mol-1,结合位点数约为1,主要作用力类型为疏水作用力.     

含荧光基团的烯类单体的合成、聚合及其荧光行为

本论文合成了三个新型功能单体,即N-(4-N’,N’-二甲氨基苯基)马来酰亚胺(DMAPMI)、N-(4-N’,N’-二甲氨基苯基)衣糠酰亚胺(DMAPII)和N-(2-乙烯氧乙基)-1,8-萘二甲酰亚胺(VOENI),研究了它们的聚合、引发、光敏化作用及荧光行为。     

以聚醚链相连的9—氨基吖啶,苯甲酸酯二元体系的合成及分…

本文用聚四乙二醇柔性链将９－氨基吖啶和不同取代基的苯甲酸酯连接起来，合成了一类新型二元分子体系，对各种体系中９－氨基吖啶和电子转移荧光猝灭进行了研究，并根据稳态荧光猝灭计算了体系中的荧光猝灭效率和荧光猝灭速率常数。     

两种芹菜素衍生物与人血清白蛋白的相互作用

以黄酮类化合物芹菜素（4',5,7-三羟基黄酮）为原料,利用Mannich和磺化反应先后合成了两种芹菜素衍生物Ⅰ[8-(N,N-二乙基)-亚甲基胺基-4',5,7,-三羟基黄酮]、Ⅱ[8-(N,N-二乙基)-亚甲基胺基-4',5,7,-三羟基黄酮-3'-磺酸],并对其结构进行ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR表征。利用荧光猝灭光谱、同步荧光光谱、紫外光谱法结合内滤光校正、分子对接研究了298、303、308 K时两种衍生物与人血清白蛋白（HSA）的相互作用机制。光谱法结果表明,衍生物Ⅰ、Ⅱ通过与HSA形成复合物而对HSA有荧光猝灭作用,猝灭原因是静态猝灭和非辐射能量转移,且衍生物与HSA的结合位点在HSA的亚结构域ⅡA附近,Ⅱ比Ⅰ更容易被转移和运输。热力学分析结果显示结合点数为1,且ΔH和ΔS均大于0,表明疏水作用为主要作用力。分子对接结果表明,两种衍生物与HSA均是通过疏水作用力和氢键结合于HSA的疏水空腔内,其中疏水作用为主要作用力,这与热力学结果相吻合。     

两种芴基ICT化合物的合成及光谱研究

咔唑经烷基化、酰化处理后与2-氨基芴、2,7-二氨基芴进行缩合反应,得到了两种ICT化合物9-乙基咔唑-3-亚甲基-芴-2-胺(简称ECzFA)和双(N-乙基咔唑-3-基)甲醛缩2,7-二氨基芴(简称BECzFA)。采用IR、1H NMR对其结构进行了表征,并对其荧光性质进行了初步研究。结果表明,这两种化合物均具有优良的电荷转移效果,且在溶剂中呈淡蓝色荧光(Em1max1=352 nm,Em2max1=367 nm)。这两种化合物有望在光电子集成、荧光探针和双光子吸收材料等领域得到应用。     

L-半胱氨酸与牛血清白蛋白相互作用的荧光光谱分析

运用荧光猝灭光谱、同步荧光光谱探讨了L-半胱氨酸（L-Cys）与牛血清白蛋白（BSA）的相互作用,并计算了猝灭常数、结合常数、结合位点数以及3个热力学参数△H、△G和△S。结果表明,L-Cys使BSA的内源荧光发生猝灭,BSA的发射峰从350nm蓝移到347．5nm,荧光猝灭机制为动态猝灭;L-Cys与BSA之间的作用力主要为疏水作用力;L-Cys对BSA结构的微环境有一定的影响。     

荧光光谱法研究橙皮素与牛血清白蛋白的相互作用

采用荧光光谱技术研究了橙皮素与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.研究发现橙皮素对BSA的荧光猝灭属于静态猝灭过程,由热力学参数焓变△rHm=-60.543 kJ·mol<'-1>,熵变△rSm-114.121J-mol<'-1>均小于零,判断橙皮素与BSA之间主要靠氧键和范德华力相结合,生成自由能变(△rGm)为负值,...     

锡离子（Ⅳ）与牛血清白蛋白相互作用的研究

应用荧光光谱和紫外可见吸收光谱研究了锡离子（Ⅳ）与牛血清白蛋白间的结合作用,确定了锡离子（Ⅳ）对牛血清白蛋白的荧光猝灭过程的猝灭机理.测定了不同温度下该结合反应的结合常数,结合位点数,热力学参数.依据能量转移理论确定了锡离子（Ⅳ）和白蛋白间的结合距离.采用同步荧光技术考察了锡离子（Ⅳ）对牛血清白蛋白构象的影响,并讨论了锡离子（Ⅳ）与白蛋白的结合模式.实验结果表明猝灭机理是动态猝灭,锡离子（Ⅳ）与BSA以物质的量比1∶1的比例结合形成复合物,结合过程主要是熵驱动,相互作用主要为疏水作用力.     

荧光猝灭法研究Mn（Ⅱ）和Zn（Ⅱ）与牛血清白蛋白的结合竞争

应用荧光光谱法研究了Mn（Ⅱ）与牛血清白蛋白（BsA）间的结合作用;采用荧光猝灭法计算出不同温度下Mn（Ⅱ）与BSA结合的结合常数、结合位点数、热力学参数;采用同步荧光技术考察了Mn（Ⅱ）对BSA构象的影响,并讨论了Mn（Ⅱ）与BSA的结合模式。结果表明,Mn（Ⅱ）与BSA的结合位点数为1,猝灭过程为动态猝灭,结合过程主要是熵驱动,相互作用力主要为疏水作用力。在此基础上采用荧光猝灭法进一步研究了Mn（Ⅱ）-BSA-Zn（Ⅱ）双金属体系中Mn（Ⅱ）、Zn（Ⅱ）与BSA的相互作用;在Stern-Volmer方程的基础上推导出双金属体系中荧光猝灭的缔合公式;在与单金属体系对比后,推测出Zn（Ⅱ）会竞争Mn（Ⅱ）与BSA的结合。     

牛血清白蛋白与Hg(Ⅱ)配合物作用的热力学研究

采用紫外-可见吸收光谱法和荧光光谱法研究了XO-Hg(Ⅱ)配合物与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。研究结果表明,XO-Hg(Ⅱ)配合物对BSA有强的荧光猝灭作用,为静态猝灭。根据荧光猝灭数据,由Stern-Volm er方程得到了不同温度下XO-Hg(Ⅱ)配合物与BSA之间的结合位点数和结合常数,推出了结合反应的主要作用力类型。据F rster非辐射能量转移理论,探讨了给体-受体间的作用距离,阐明了XO-Hg(Ⅱ)配合物对BSA的猝灭作用不是由非辐射能量转移机制导致。     

维C和左氧氟沙星对白蛋白的荧光淬灭研究

通过荧光光谱法研究了在维生素C存在下左氧氟沙星对牛血清白蛋白的荧光淬灭作用。在模拟生理条件（pH=7.4,37℃）下,根据Stem-Volmer方程,确定了在维生素C存在条件下,左氧氟沙星与牛血清白蛋白的淬灭类型仍为静态淬灭,左氧氟沙星对牛血清白蛋白的荧光淬灭减弱,结合常数和结合位点均变小。为研究左氧氟沙星和维生素对蛋白质构象的影响等提供了重要信息。     

3-苯基-2-（4-叔丁基苯氧基）-3＇-氧环己烷并噻吩并[2，3-d]嘧啶-4（3H）-酮的合成及其与BSA的相互作用

通过Aza-Wittig反应。碳二亚胺与酚类化合物在碱性催化条件下成环,合成了3-苯基-2-（4-叔丁基苯氧基）-3’-氧环己烷并噻吩并[2,3-胡嘧啶-4（3H）-酮（PTP）。在生理条件下。采用紫外吸收光谱法及荧光光谱法研究了PTP与牛血清白蛋白（BSA）的相互作用。并采用同步荧光法考察了PTP的加入对BSA构象的影响。结果表明,PTP对BSA的荧光猝灭机理为静态猝灭过程。PTP与BSA的结合反应为自发进行,反应中主要作用力是氢键和范德华力,两者的结合位点数为1、结合距离为1．78nm．PTP的加入对BSA构象没有明显影响。     

有机氯农药与牛血清白蛋白作用机理研究

利用荧光光谱法研究了5种有机氯农药（OCPs） δ-BHC、α-氯丹、艾氏剂、o,p＇-DDT、HCB和牛血清白蛋白（BSA）的相互作用机理.280 nm波长下,OCPs可使BSA色氨酸残基发生荧光猝灭现象.通过光谱数据,绘制了Stern-Volmer曲线,测定了平衡常数和25,37℃下OCPs-BSA的结合常数.结果显示,5种OCPs猝灭蛋白质的过程均为熵驱动的静态猝灭过程,通过较弱的疏水作用力与蛋白质相互结合,结合点位数近似为1,这种结合作用会随着温度的升高而增强.     

Cu~(2+)、Zn~(2+)和Pb~(2+)对绿原酸与牛血清白蛋白结合作用的影响

以杜仲绿原酸(CA)为原料,在模拟人体生理条件下,采用荧光光谱和紫外吸收光谱等方法,考察Cu2+、Zn2+和Pb2+对CA与牛血清白蛋白(BSA)相互作用产生的影响。结果表明,金属离子的存在不会改变CA对BSA的猝灭类型,但对其猝灭速率常数(kq)、结合常数(K)以及结合位点(n)会有不同程度的影响;CA与BSA之间的反应属于自发型,主要以范德华力和氢键为主,Zn2+和Pb2+的存在不会改变其作用力类型,Cu2+则会使作用力变为以静电吸引力为主;Zn2+和Pb2+会将供体与受体之间的结合距离分别减小1.975%和14.07%,Cu2+的干扰使CA与BSA之间的结合距离增大11.58%;同步荧光光谱显示CA与BSA中的酪氨酸残基和色氨酸残基都有相互作用,三维荧光测定结果进一步表明猝灭剂对BSA构象及微环境会引起变化。