花椰菜中总DNA的提取方法

DNA提取是生物技术研究的基础步骤。主要针对花椰菜组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题,本研究用改良CTAB法提取花椰菜中DNA,结果显示改良的CTAB法提取DNA量大,产率高,无明显降解,杂质少,A260/A280比值1.80左右,完全满足后续实验要求。     

转基因大豆DNA提取方法研究

为保障广大消费者在转基因大豆食品安全上的知情权和选择权,以及对转基因大豆的检测和标识性管理,本研究采用传统CTAB方法和改良的SDS法对大豆基因组DNA提取方法进行比较,并对相关内源性基因和外源基因进行PCR扩增。结果显示改良的SDS法在DNA提取量和完整性方面均优于传统CTAB;可在PCR检测转基因大豆中以大豆内源基因Lectin为内对照对其进行扩增,从而可有效检测空白对照中是否有DNA的污染来排除由模板中杂质造成的假阴性结果。     

绿色木霉PCR模板的制备方法研究

采用经典CTAB法、简化CTAB法、氯化苄法和快速提取法对绿色木霉总DNA进行制备。利用依据绿色木霉CBH2基因设计合成的一对引物,以上述方法制备的DNA为模板进行PCR反应,证明简化CTAB法是绿色木霉PCR模板DNA制备的最佳方法。     

PCR鉴定麻类纤维基因组DNA提取方法

以汉麻原麻韧皮纤维与汉麻纤维两组特殊样品为材料,比较了传统的CTAB法、试剂盒粗提法及磁珠纯化精提法DNA提取方法对提取此类样品的适宜性。结果表明,采用试剂盒粗提法可从汉麻原麻纤维中提取高品质的可用于下一步PCR检测的DNA样本,而麻类纤维的处理工艺对其DNA的影响很大,随着麻类纤维从原麻被加工为精干麻、纱线与织物的过程中,已很难提出高品质DNA样品,虽然存在一定量的DNA,但通过完整性检测发现这类DNA样品已无法满足下一步的PCR鉴定检测的要求。     

治疗用质粒DNACTAB纯化工艺的优化

目的优化治疗用质粒DNA十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)纯化工艺,为其规模化生产奠定基础。方法采用碱裂解法裂解含质粒pEGFP的大肠埃希菌(E.coli)DH5α菌种,在碱裂解液中加入不同终浓度的CTAB及不同终浓度的NaCl、KAc、LiCl、CaCl2、MgCl2溶液,确定CTAB纯化质粒DNA的最佳浓度,并分析盐对质粒DNA选择性释放的影响。分别采用BCA蛋白浓度测定试剂盒、内毒素检测试剂盒和Real time-PCR法检测纯化的质粒DNA中宿主蛋白含量、内毒素含量和细菌基因组DNA含量;通过A549细胞及动物转染试验检测纯化质粒DNA的体外和体内生物活性。结果 CTAB纯化质粒DNA的最佳浓度为0.004%;用NaCl、KAc或LiCl提取的质粒DNA中,RNA均未完全去除,而用CaCl2或MgCl2提取的质粒DNA中,RNA含量(RNA/nucleic acid)均小于1%,CaCl2最佳终浓度范围为0.4～0.5 mol/L,MgCl2最佳浓度范围为0.3～0.4 mol/L;使用0.4 mol/L MgCl2的CTAB法纯化的质粒pEGFP的杂蛋白质、细菌基因组DNA、内毒素和RNA含量均符合FDA对治疗用质粒DNA的要求;纯化的质粒pEGFP DNA回收率达80%以上,且体外生物活性显著高于市售试剂盒纯化的质粒(P<0.05),而体内生物活性与试剂盒纯化的质粒相当(P>0.05)。结论优化了CTAB法纯化质粒DNA的工艺,该方法操作简便,经济高效,纯化得到的质粒DNA各项指标均符合FDA质量标准,且转染基因表达效率较高,质量可靠,适用于质粒DNA的大规模纯化生产。     

不同固定剂处理的对虾基因组DNA提取方法研究

为了从乙醇固定和福尔马林固定的对虾标本中获得高质量的基因组DNA,对标本的预处理方法以及DNA的提取方法进行了研究。结果表明,75%乙醇作为固定剂更适合用于提取对虾标本的基因组DNA。对乙醇固定的对虾标本采用PBS溶液和TE溶液进行预处理,获得的DNA得率较高,改进法、DTT法和CTAB法是较为理想的DNA提取方法。对于福尔马林固定的对虾标本来说,所选用的3种预处理方法均能为后期的DNA提取创造条件,而4种提取方法中的DTT法和CTAB法,则较为适宜提取福尔马林固定的对虾标本DNA,其中,GTE溶液预处理与DTT法相结合为最优组合方案。     

干燥处理对银杏外种皮抑菌作用影响的初步研究

目的探究干燥处理和提取溶剂对银杏外种皮提取率和抑菌效果的影响。方法以银杏外种皮为原料,用不同溶剂提取,测定抑菌浓度。结果鲜品银杏外种皮的乙醇提取物具有较强的抑菌效果。结论干燥处理后银杏外种皮中抑菌活性物质减少。     

一种从富含多酚多糖的西葫芦组织中快速提取RNA的方法

对比研究了一步法、尿素／氯化锂法、热酚法、LUG法等4种方法,建立了一种适合西葫芦组织RNA提取的改进的CTAB方法。用该方法从西葫芦叶中提取的RNA在琼脂糖凝胶电泳上清楚显示出28S和18S两条链．A250／280值为2.08、A250/280值为2．0,表明提取的RNA没有多酚、多糖、蛋白质污染;RNA产量为210μg·g^-1鲜质量;对RT—PCR的结果进行测序,通过NCBI—BLAST比对可知,与印度南瓜的同源性达89％。用该方法从西葫芦果肉中也获取了高质量的RNA。改进的CTAB法全程只需2h,不用液氮、亚精胺、二硫苏糖醇、蛋白酶K等试剂。     

低温脂肪酶产生菌Trichosporon pullulans的脂肪酶基因克隆

以产低温脂肪酶菌株5-1为材料,用酶法和CTAB法分别提取基因组DNA,通过琼脂糖凝胶电泳检测亮带进行比较,结果表明用CTAB法提取的DNA的完整性更好、浓度更高;该菌株通过18SrDNA基因鉴定,即以待检菌株提取的DNA为模板,以18SF、18SR为引物,进行PCR扩增,由18SrRNA的保守序列分析,鉴定为Trichosporon pullu-lans茁芽丝孢酵母属;利用脂肪酶的同源基因片段来设计引物,以该菌株的DNA为模板,进行PCR筛选,克隆脂肪酶基因;并对模板量、退火温度两个重要因素进行优化,初步确定最佳PCR扩增条件为：模板量为DNA原液,退火温度为55～45℃梯度降低。     

从苹果皮中提取果胶工艺条件研究

以干燥的苹果皮粉末为原料,采用了传统的酸水解法进行了果胶提取的优化设计实验。结果表明,影响果胶产率的强弱因素依次为C〉A〉D〉B,提取果胶的最佳条件为：温度（A）为85℃、料液比（B）为1：15、pH值（c）为1.5、提取时间（D）为90min,即最佳组合条件为A3B2C4D5,此时果胶的提取率达到最优化,果胶质量最好。     

水蒸气蒸馏法提取柿叶精油的工艺研究

采用水蒸气蒸馏法对柿叶精油的提取工艺进行了研究，正交试验优选的提取工艺是每次加水8倍(w／w)，浸泡1h，回流20min，水蒸气蒸馏2h，提取效果较好。对柿叶不同生长期、贮存期挥发油含量的测定结果表明：10月份柿叶精油含量最高，干品随贮存期延长，含油量逐渐由3．71％(0个月)降至2．13％(12个月)。采用水蒸气蒸馏法得到的柿叶精油为浅黄色液体，有较浓的清香味，可用于食品、饮料、烟酒等行业，是天然香料的一种原料来源。     

水蒸气蒸馏法提取柿叶精油的工艺研究

采用水蒸气蒸馏法对柿叶精油的提取工艺进行了研究,正交试验优选的提取工艺是每次加水8倍(w/w),浸泡1h,回流20min,水蒸气蒸馏2h,提取效果较好。对柿叶不同生长期、贮存期挥发油含量的测定结果表明:10月份柿叶精油含量最高,干品随贮存期延长,含油量逐渐由3.71%(0个月)降至2.13%(12个月)。采用水蒸气蒸馏法得到的柿叶精油为浅黄色液体,有较浓的清香味,可用于食品、饮料、烟酒等行业,是天然香料的一种原料来源。     

SDS与CTAB混合表面活性剂体系对合成4A沸石的影响

研究了阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)和阳离子表面活性剂十六烷基三甲基氯化铵(CTAB)同时加入反应体系时对以硅酸钠、氢氧化铝、氢氧化钠为原料的化学法水热合成4A沸石分子筛的合成过程的影响。考察了两种表面活性剂单独存在时和复配使用时对沸石晶化速率、产品粒度分布的影响。结果表明,SDS和CTAB的加入可以缩短4A沸石晶化过程中的诱导期,加快晶化速率,并且两种表面活性剂复配使用时可以更加显著的加快晶化速率。     

从柚子皮中提取果胶研究

以干燥的柚子皮粉末为原料,利用酸性水解和乙醇沉淀,同时根据正交试验法进行果胶提取的优化实试验。结果表明：浸泡时间与水解过长或者过短,酸碱度以及水解温度过高或者过低,果胶的产率均不高,提取果胶的最佳条件是：温度（A）83摄氏度,料液比（B,g/g）1：16,PH值（C）1．0,提取时间（D）90min,即最佳组合条件为A3B2C4D3,此时果胶质量最好。     

市场销售大豆的转基因检测

在市场随机购买大豆样品,采用试剂盒法提取基因组总DNA,并通过扩增大豆凝集素参照基因验证基因组总DNA的完整性,进一步通过检测转基因常用的Ca MV35S启动子和NOS终止子,分析检测样品是否为转基因品种。检测结果显示市售大豆80%为转基因大豆。     

Bi_2WO_6光催化剂的合成及降解罗丹明B

以H_2WO_4和Bi(NO_3)_3·5H_2O为原料,用溶剂热法(无水乙醇、乙二醇、丙三醇)和添加不同表面活性剂(SDS,CTAB,PVP,PEG2000)制得了不同形貌的Bi_2WO_6粉体,利用XRD、SEM对产品进行表征。研究了Bi_2WO_6催化降解有机染料Rh B及其相关机理。考察了,溶剂(无水乙醇、乙二醇、丙三醇)、表面活性剂(SDS,CTAB,PVP,PEG2000)等因素对罗丹明B降解率的影响。结果表明添加表面活性剂PVP所制备的Bi_2WO_6粉体为中空花球状结构,其禁带宽度为2.51 e V,在150 W金卤灯辐照下2 h罗丹明B降解率达到92%。     

鸢尾根黄酮提取工艺优化的研究

以鸢尾根为原料,采用食用级乙醇水为溶剂,通过单因素和正交试验法,优选出鸢尾黄酮的最佳提取工艺参数。结果表明:在温度为80℃、p H值为7的条件下,用10(v:m)倍于鸢尾根的70%乙醇,提取2 h/次、2次,鸢尾黄酮提取效果最好,得率在5%以上,提取物中黄酮含量大于15%。     

不同类型试剂盒提取血液基因组DNA效果的比较

目的比较溶液沉淀法、离心柱法和磁珠法试剂盒提取血液基因组DNA的效果。方法采集高血压患者的血液样本90份,随机分为3组,分别采用溶液沉淀法、离心柱法和磁珠法试剂盒提取血液样本基因组DNA。通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测及PCR扩增法对血液样本基因组DNA的提取效果进行比较。结果溶液沉淀法提取的DNA浓度显著高于离心柱法和磁珠法(P0.05),离心柱法与磁珠法提取的DNA浓度差异无统计学意义(P0.05),3种方法提取血液样本基因组DNA的A_(260)/A_(280)值及A_(260)/A_(230)值的差异均无统计学意义(P0.05);3种方法提取的血液样本基因组DNA的大小基本相同,离心柱法提取的DNA点样孔处较干净,电泳条带单一,无拖尾;3种方法提取血液样本基因组DNA的PCR产物均可见单一且明亮的目的条带。结论 3种类型提取试剂盒各有优缺点,使用时应根据实际情况进行选择。     

四种不同方法提取黄芪中黄芪甲苷的对比研究

以浸膏得率、黄芪甲苷和毛蕊异黄酮的质量分数为评价指标,使用煎煮法,渗漉法,索氏提取法,超临界流体萃取法分别提取黄芪中主要成分黄芪甲苷,研究不同提取方法对黄芪甲苷提取得率的影响。结果表明,CO_2超临界流体提取法提取时间最短,提取效率最高,是一种简便、快速的提取方法,黄芪甲苷得率为198.3mg/g。     

堆肥微生物总DNA的提取与纯化方法

申请(专利权)人:湖南大学申请日期:2005.09.06申请(专利)号:CN200510032111.1主分类号:C07H21/04(2006.01)I本发明涉及堆肥中微生物总DNA的提取和纯化。本发明用磷酸盐缓冲液洗涤样品,用溶菌酶溶液和SDS溶液裂解堆肥微生物细胞,粗提的