自然杀伤细胞抗肿瘤治疗研究进展

自然杀伤(NK)细胞是最重要的抗肿瘤免疫细胞。提高NK细胞抗瘤活性的最新研究包括:同种异体NK细胞过继性免疫治疗;通过基因工程的方法使肿瘤细胞表达肿瘤抗原特异性嵌合受体;选择具有高亲和力Fc受体NK细胞,联合单克隆抗体通过ADCC效应杀伤肿瘤细胞;提高靶细胞对NK细胞介导的凋亡的敏感性;解除抑制因素对NK细胞的影响;促进NK细胞浸润肿瘤组织及淋巴结;NK细胞不同亚群间的功能差异研究。     

基于Ce6和MMP-2抑制剂的多级控释脂质纳米复合体用于光动力-免疫协同治疗黑色素瘤

光动力疗法（PDT）能诱导肿瘤细胞免疫原性死亡，与免疫治疗联合能够提高对各种癌症的治疗效果。基于自然杀伤（NK）细胞的免疫疗法能够增强PDT的抗癌能力。以肿瘤组织中NK细胞免疫作用的分子途径为靶点，通过药物调控增强其对肿瘤的免疫作用，并进一步联合PDT可以有效提升抗肿瘤疗效。将包封基质金属蛋白酶-2(MMP-2)抑制剂SB-3CT的β-环糊精（β-CD）与负载光敏剂Ce6的脂质体通过MMP-2响应多肽组装在一起，构建了一种肿瘤微环境/光多重响应的脂质纳米药物控制系统（MRPL-SC），在细胞和裸鼠移植瘤模型中证明了MRPLSC介导的PDT和NK免疫疗法协同抗肿瘤作用。MRPL-SC到达肿瘤部位后，连接β-CD与脂质体核心的MMP-2响应性多肽会在肿瘤组织微环境中过表达的MMP-2的作用下水解，释放包封在β-CD中的SB-3CT,SB-3CT通过直接对MMP-2进行原位抑制来有效提升肿瘤组织中NKG2DLs的表达和NK细胞免疫响应；封装了Ce6的脂质体通过细胞内吞进入肿瘤细胞后，在660 nm激光照射下通过PDT诱导肿瘤细胞凋亡，同时进一步诱导肿瘤细胞NKG2DLs表达，实现对肿瘤组织中...     

缺氧诱导因子1α对大鼠骨髓间充质干细胞核心结合因子α1表达的影响

目的：研究体外低氧实验中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）对大鼠骨髓间充质干细胞核心结合因子α1（Cbfα1）表达的影响。方法：将体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞分别置于常氧（含有5％c02的培养箱中）和低氧（含4％02、5％CO2和91％N2的三气培养箱中）中培养,分别于1d、3d、5d和7d用实时荧光定量PCR检测细胞内HIF-1α和CbfalmRNA的表达水平：用siRNA抑制细胞HIF-1αmRNA表达后用Westernblot法检测HIF-1α和Cbfal蛋白表达。结果：与常氧组相比,低氧组细胞HIF-1αanRNA的表达均增加（1d、3d、5d和7d：P〈0．05）,且3d达到最高峰;细胞CbfalmRNA的表达明显下降,3d尤为明显（P〈0．05）：低氧组细胞转染siRNA干扰HIF-1α表达后,能促进细胞内Cbfcd蛋白的表达（P〈0．05）。结论：低氧微环境抑制骨髓间充质千细胞的成骨向分化,细胞内HIF-1α反向调节Cbfal的表达。     

FTY720抑制小鼠植骨气囊模型中聚乙烯磨损颗粒诱导的骨溶解效应

目的：在小鼠植骨气囊动物模型中,观察外源性FTY720（Hngolimod,芬戈莫德）对骨溶解的抑制作用。方法：构建小鼠植骨气囊模型,将构建好气囊模型的小鼠分成4组：空白组（气囊内注人生理盐水、腹腔注射DMSO）,FTY720组（气囊内注入生理盐水、腹腔注射FTY720）,聚乙烯颗粒组（气囊内注入聚乙烯颗粒、腹腔注射DMSO）,聚乙烯颗粒＋FTY720组（气囊内注入聚乙烯颗粒、腹腔注射FTY720）。4周后处死小鼠后取气囊组织进行HE染色观察炎症反应和炎症细胞渗出情况,取组织匀浆行Elisa法检测气囊组织中IL-6和TNF-α浓度、取骨组织行电镜扫描观察骨片吸收情况,取组织匀浆行RT—PCR检测破骨细胞相关基因抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）mRNA表达水平。结果：①HE染色后炎症细胞渗出量,聚乙烯颗粒＋FTY720组（4892±457）与聚乙烯颗粒组（4931±572）比较无统计学差异（P〉0．05）,[TY720组（2013±375）与空白组（2151±310）比较无统计学差异（P〉0,05）;含有聚乙烯颗粒组高于无聚乙烯颗粒组（P〈0．05）。②Elisa法检测炎症因子（IL-6、TNF-α）浓度,聚乙烯颗粒＋FTY720组[（130．13±3．22）、（129．22±5．02）]与聚乙烯颗粒组[（149．22±6．09）、（140．52±2．68）]比较无统计学差异（P〉0．05）;FTY720组[（68．24±2．83）、（82．88±5．34）]与空白组[（69．51±2．31）、（74．15±4．64）]比较没有统计学差异（P〉0．05）;含有聚乙烯颗粒组高于无聚乙烯颗粒组（P〈0．05）。③扫描电镜检测骨片吸收面积与视野面积百分比,聚乙烯颗粒＋FTY720组[（10．21±1．78）％]低于聚乙烯颗粒组[（17．79±2．56）％],FRY720组[（1．82±1．37）％]低于空白组[（6．27±2．11）％];并且含有聚乙烯颗粒组高于无聚乙烯颗粒组（P〈0．05）。④破骨细胞相关基因TRAPmRNA表达量,聚乙烯颗粒＋FTY720组（0．53±0．04）低于聚乙烯颗粒组（0．74±0．05）,FTY720组（．22±0．03）低于空白组（0．38±0．04）;而含有聚乙烯颗粒组高于无聚乙烯颗粒组（P〈0．05）。结论：在小鼠植骨气囊动物模型中,FTY720能有效抑制聚乙烯颗粒诱导的局部骨溶解作用。     

TLR7和AP-1在基底细胞癌中的表达及意义

目的：观察基底细胞癌中TLR7和AP-1蛋白的表达,探讨二者与基底细胞癌发生发展的关系。方法：收集基底细胞癌患者皮损30例及正常人皮肤组织26例,采用免疫组织化学法检测癌组织中TLR7和AP—1蛋白的表达水平;分析TLR7和AP-1在基底细胞癌中的表达水平以及二者之间的相互关系。结果：TLR7和AP-1在癌组织中表达均较正常皮肤组织高（P〈0．05）,表达水平与性别、年龄均无差异（P〉0．05）;TLR7和AP-1在基底细胞癌中的蛋白表达水平成明显正相关（r=0．78,P〈0．01）。结论：TLR7和AP-1蛋白在基底细胞癌中高表达,且二者的表达水平呈明显正相关;TLR7和AP-1可能与基底细胞癌的发生发展有关。     

胸腺五肽对产科危重症患者免疫调理治疗的随机对照研究

目的：研究产科危重病人CD3^＋、CD4^＋,CD8^＋、NK细胞记数、CD4^＋／CD8^＋、α白细胞介紊-6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF—α）的变化,探讨胸腺五肽（Thymopentin,TP-5）对产科重症病人的免疫调理作用。方法．2005年1月至2007年12月71例收住重庆医科大学附属第一医院中心ICU的产科重症病人随机分为对照组和治疗组,两组分别于治疗后1、5、10d检测CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋和NK细胞数;于治疗前和治疗后1、5d测定病人血清IL-6和TNF—α的动态变化。结果：TP-5免疫调理治疗后两组病人T淋巴细胞总数和亚群在第5d开始有显著性差异,治疗组CD8^＋低于对照组,CD4^＋、NK细胞和CD4^＋／CD8^＋比值高于对照组（P〈0．05）。第10d治疗组CD3^＋、CD4^＋、NK细胞和CD4^＋／CD8^＋比值高于对照组,CD8^＋细胞低于对照组（P〈0．05）。治疗组血清IL-6在第5d下降（P〈0．05）。TNF—α在第1d开始低于对照组（P〈0．03）,下降在第5d显著下降（P〈0．05）。结论：TP-5能明显调节产科危重病人免疫功能,使之趋于平衡,并最终获得改善预后的效果。且副反应少,可作为良好免疫调节剂用于产科危重病人综合治疗。     

孕期微量染镉对雄性胎鼠性腺分化发育影响的研究

目的：探讨孕期微量染镉对胎鼠睾丸分化发育的影响及作用机制。方法：SD孕鼠16只,随机分为镉组（A组）、己烯雌酚组（B组）、镉加他莫静酚组（C组）和正常对照组（D组）,每组4只。A组于孕期第9、11、13天腹腔注射氯化镉1．5H影（kg．d）,B组于妊娠第9至17天皮下注射已烯雌酚10％g／（kg．d）,C组注射氯化镉的同时给予雌激素受体拮抗剂他莫昔酚50mg／（kg．d）,D组注射与镉等体积生理盐水。妊娠第18天,削商产取雄性胎鼠睾丸作光、电镜观察;免疫组化测定各组胎鼠睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白（StAR）表达水平;RT—PCR法测定曲勒氏管抑制物（MIS）表达量。结果：光镜下A组和B组睾丸生精小管内支持细胞排列紊乱,间质成分增生,C组未见明显的形态学改变;电镜下A组和B组均可见支持细胞、生殖母细胞及间质细胞线粒体肿胀、内质网扩张以及间质细胞内脂滴堆积,C组超微结构退变轻于A组和B组;A组和B组间质细胞中StAR阳性产物表达均显著低于D组（P〈0．01）,C组StAR阳性产物表达虽低于D组,其差异没有统计学意义（P〉0．05）,但却明明显高于A组（P〈0．05）;各组间MIS表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：孕期微量镉暴露可影响雄性胎鼠性腺的分化与发育,且镉具有雌激素样作用．     

尿素通道蛋白B敲除引起小鼠大脑皮质毛细血管形态改变的体视学研究

目的：研究尿素通道蛋白B（Ureatransporter B,UT—B）敲除对小鼠大脑皮质毛细血管形态结构的影响及出现抑郁样行为的病理机制。方法采用强迫游泳实验观察野生型和UT—B基因敲除小鼠的抑郁样行为,免疫组化技术和体视学方法定量检测两型小鼠大脑皮质毛细血管总长度、总体积、总表面积、平均直径等形态学指标。结果强迫游泳实验中,野生型和UT—B基因敲除小鼠的不动时间分别为（123±19s）和（86±13s）,P=0．0012〈0．05,差异具有显著性。两型小鼠大脑皮质的体积皱缩率分别为0．53±0．04、0．51±0．07（P〉0．05）,无显著性差异。野生型小鼠和uT—B基因敲除小鼠大脑皮质毛细血管的总长度为（29．20±1．20）m和（24．00±2．45）m（P=0．093〉0．05）,总体积为（1．159±0．095）mm3和（0．855±0．060）mm3（P=0．035〈0．05）,总表面积为（6．143±0．377）cm2和（4．616±0．455）cm2（P=0．042〈0．05）,平均直径为（6．506±0．161）um和（5．564±0．118）um（P=0．016〈0．05）。结论：UT—B敲除可能导致小鼠大脑皮质毛细血管总表面积、总体积和平均直径显著下降,造成大脑血灌注量不足而引发小鼠的抑郁样行为。     

痰热清注射液对慢性髓系白血病K562细胞增殖的抑制作用

目的观察痰热清注射液对慢性髓系白血病K562细胞增殖的抑制作用。方法将痰热清注射液倍比稀释成1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512共9个浓度组,分别处理增殖期慢性髓系白血病K562细胞,镜下观察不同时间点各浓度组细胞生长情况,应用CCK-8法检测细胞增殖能力,绘制生长曲线,计算抑制率和半数抑制浓度(IC50)。结果痰热清注射液能明显抑制K562细胞增殖,细胞倍增时间为24h,1:2至1:8稀释浓度组的细胞毒性大,细胞基本死亡;抑制作用呈剂量和时间依赖性,IC50约为1:55稀释浓度。结论痰热清注射液对K562细胞具有抑制作用,这为临床应用痰热清注射液治疗血液肿瘤并发感染提供了实验基础。     

数字化多功能漏电保护器

<正> 本文介绍以单片机PIC16C711为核心的数字化多功能漏电保护器。 工作原理 主机的电原理图如图1所示。打开电源开关K通电后,首先进入启动程序,即使单片机U6的RB4=+5V,T3截止,JZ2常闭触点为闭合状态;U6的RB3=0V,T1截止,T2导通,JZ1吸合而常开触点闭合。220V交流电压经保险管FUSE、电源开关K、启动热敏电阻R34、整流桥堆D14～D17、JZ2常闭触点到交流接触器线圈Q,使之合闸送电,完成大电流的直流启动过程。延时一段时     

提高mdr1基因体外转染骨髓造血细胞效率的实验研究

目的：探讨mdrl基因体外转染兔骨髓造血细胞的条件及转染后在细胞中的功能性表达。方法：秋水仙碱（90ng／ml）筛选含人mdrlcDNA的产病毒包装细胞PA317-HaMDR1／A,制备浓缩病毒上清液并转染兔骨髓单个核细胞;分别用PCR法、免疫组织化学法和柔红霉素（daunorubicinDNR）排出试验检测mdr1基...     

人参总皂苷对K562细胞的增殖抑制及诱导分化作用

目的:研究人参总皂苷TSPG对人慢性粒细胞白血病细胞株(K562细胞)增殖及分化的影响,探讨TSPG抗肿瘤作用.方法:取对数生长期K562细胞,分为阴性对照组、不同浓度TSPG组及阳性对照组进行体外培养,以噻唑蓝(MTT)比色法、台盼蓝活细胞计数法观察TSPG对K562细胞增殖的影响;用联苯胺染色及血红蛋白测定检测其诱...     

Effect of different types of interferon on the natural cellular cytotoxicity of lung cancer patients

The natural killer cell cytotoxicity was studied in the 4 hour and 18 hour cytotoxic reaction with cultured human tumour cells (K562 and lung adenocarcinoma) labelled by 51Cr. The natural killer cell activity of cancer patients was lowered only in 4 hour cytotoxic reaction with target cells K562. The natural and recombinant leucocyte interferon and natural immune interferon stimulated in vitro the activity of natural killer cells in most of the experiments (80.5 %) in the 4 hour and 18 hour cytotoxic reactions both from patients with initially lowered level, and with normal or high level of cytotoxic action of natural killer cells. In some experiments interferon preparations did not significantly influence the lysis of tumour cells or even suppressed the activity of effector cells. The heterogeneity of the population of natural killer cells and different immunomodulating effects of interferon were discussed.     

长期配戴角膜塑形镜对角膜内皮细胞的影响观察

目的：评价近视眼患者长期配戴角膜塑形镜后不同时期角膜内皮细胞密度和形态的情况。方法：用非接触型角膜内皮显微镜对22例（44眼）配戴角膜塑形镜者,在戴镜前、戴镜后1年及2年作角膜内皮细胞照相观察。结果：戴镜前、戴镜后1年及2年角膜内皮细胞密度分别为（3228±168）个／mm2、（3192±172）个／mm2及（3178...     

NHE1siRNA对VEGF诱导HUVECs细胞迁移与Matrigel小管形成的影响

目的:本文探讨用小干扰RNA(siRNA)抑制钠氧交换体-1(NHEI)能否抑制血管内皮生长因子(VEGF)诱导的体外血管生成.方法:用阳离子脂质体方法将靶向抑制NHEI的小分子RNA(NHEI siRNA)及阴性对照的寡核苷酸片段(NHE1 siNC)转染到人脐静脉内皮细胞(HUVECs),荧光显微照相检测转染效率,...     

低强度超声对鼻咽癌细胞生物学效应的研究

目的：研究不同剂量低强度超声对人低分化鼻咽癌细胞CNE-2的急,、慢性生物学效应。方法：人鼻咽癌细胞CNE-2受不同剂量、频率为1.7MHz的超声波辐照,利用台盼兰染色法确定三种未致细胞急性损伤的超声剂量,并观察受此三种剂量超声辐照后细胞的增殖能力以及克隆形成力的变化。结果：0.30W/cm^2×35s、0.65W/cm^2×10s和1.35W/cm^2×5s未致细胞急性死亡。受0.30W/cm^2×35s、0.65W/cm^2×10s、1.35W/cm^2×5s辐照及对照组细胞倍增时间分别为：15.8h、23.6h、31.6h和22.9h;克隆形成率分别为：（41.54±1.48）%、（25.41±1.70）%、（15.62±1.60）%和（28.03±1.2）%。受0.30W/m^2×35s辐照后细胞增殖和克隆形成较对照组均有所增加,受1.35W/cm^2×5s辐照后细胞增殖和克隆形成较对照组均受到抑制。（p〈0.05）结论：CNE-2细胞对超声敏感性高,其生物学效应取决于超声剂量。     

5-杂氮-2’-脱氧胞苷调控UCHL1基因表达对人前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨5-杂氮-2’-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对人前列腺癌细胞（PC-3）株增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法以2．5、5．0、10．0kenol／L的5-Aza—CAR作用于PC-3细胞48h后,采用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;逆转录聚合酶链式反应（tiT—PcR）检测UCHL1 mRNA表达;甲基化测序聚合酶链反应（BsP）检测UCHLlCpG岛的甲基化状态;蛋白质印迹法（Western Blot）检测UCHL1蛋白的表达。结果：5-Aza—CAR对PC-3细胞生长有抑制作用;与对照组相比细胞凋亡率明显增高（P〈0．01）;5-Aza—CdR处理细胞后UCHL1的启动子甲基化水平明显降低（P〈0．01）;UCHL1 mRNA表达水平显著上调（P〈0．01）;UCHL1蛋白表达水平上升（P〈0．01）。结论：5-Aza—CAR能诱导前列腺癌PC-3细胞株凋亡的作用,其机制可能是5-Aza—CdR能逆转PC-3细胞UCHLl启动子CpG岛的异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达。     

系统性红斑狼疮患者血液中PRDM1和CD138＋浆细胞表达的研究

目的;探讨系统性红斑狼疮（SiE）患者和正常人之间PRDM1和CD138＋浆细胞的差异。方法：40例SLE患者血液标本,30例健康体检血液标本,抽取RNA、利用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术研究PRDM1基因表达;收集外周血单个核细胞,利用流式细胞技术研究CD138＋浆细胞量的差异。结果：SLE患者组血液中的P...     

RNAi沉默整合素连接激酶基因对人膀胱癌BIU-87细胞体内成瘤的影响

目的：研究RNAi沉默整合素连接激酶（integrin-linked kinase,ILK）基因对人膀胱癌BIU-87细胞裸鼠皮下成瘤的影响。方法：构建4条针对ILK基因的特异性miRNA干扰载体和1条阴性对照载体,并利用脂质体转染法将其转染BIU-87细胞,并筛选获得稳定转染细胞株。利用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测抑制效果。将10只裸鼠随机分为2组,皮下分别接种转染组细胞和未转染组细胞,观察瘤体的生长情况,并于接种4周后处死裸鼠,测量其瘤体体积和重量,并将瘤体做HE染色,观察瘤体病理情况。结果：转染组细胞ILK的表达明显受到抑制,以miR-3组的抑制效率最高。裸鼠皮下成瘤实验检测发现：两组均有瘤体形成,未转染组较转染组瘤体生长快,未转染组体积平均为：289.56±36.49mm3,转染组为：56.67±4.32mm3。瘤体重量分别为：1.265±0.02 g和0.518±0.03g。转染组与未转染组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：利用RNAi技术能有效抑制靶基因ILK的表达,从而降低膀胱癌细胞的体内的增殖能力。