紫外分光光度法快速测定灵芝样品中三萜类化合物的含量

利用紫外分光光度法建立一种快速检测和定量测定灵芝中三萜类化合物含量的方法.以饱和NaHCO3溶液溶解灵芝三萜单体化合物标准品后,采用紫外分光光度法测定溶液在257 nm处具有最大吸光度,标准品在0～200.0 μg·mL-1范围内,吸光度与浓度呈良好的线性关系,相关系数r为0.999 88.利用紫外分光光度法在提取三萜类化合物工艺的中间阶段,即碱提的NaHCO3层进行检测,根据标准曲线可计算出样品中三萜类化合物的含量.该测定方法简单快速、准确度高、实验误差小、重复性好,可以应用于灵芝及其相关产品的质量评估.     

灵芝三萜提取工艺的优化

以灵芝孢子粉为原料,使用体积分数为70%的乙醇为提取剂,采用酶解与超声辅助提取相结合的方法,将不同液固比、超声时间、酶解时间和酶用量设定为4个因素,进行单因素试验并设计响应面试验,以确定最优提取方式及其影响因素.利用大孔树脂层析法对灵芝三萜进行分离纯化,通过优化分离纯化工艺,确定最佳洗脱树脂、洗脱液体积分数、上样液流速以及上样液质量比.采用高效液相色谱法分析灵芝总三萜的组分差异.通过预实验分析,与单一提取法相比,酶+超声辅助提取更高效.采用乙醇为提取剂提取灵芝中三萜类化合物可提高三萜的纯度.最优条件下可实现对三萜含量的快速、精确测定,为灵芝三萜的分离纯化提供理论依据.     

黔产赤灵芝不同部位无机元素和营养成分分析

以黔产青冈椴木赤灵芝为研究对象,测定了灵芝子实体(整支)、灵芝孢子粉(破壁)、灵芝孢子粉(未破壁)和灵芝菌盖中5种营养成分和24种无机元素,并进行相关性分析。结果表明：灵芝中营养成分与无机元素间具有一定的相关特性;灵芝不同部位的水分、灰分、多糖和三萜及甾醇含量均符合2020版《中华人民共和国药典》规定;灵芝孢子粉(破壁)具有较高的蛋白质、多糖和三萜及甾醇含量;元素Sn、Mo、B、Be和Ag在灵芝不同部位中均未检出;As在灵芝孢子粉(破壁)、灵芝孢子粉(未破壁)中未检出;元素Pb、Cd、As、Hg和Cu在灵芝不同部位中的含量均低于最大限量值;Al在灵芝子实体(整支)中超标率为100%;Cr在灵芝孢子粉(破壁)中超标率亦为100%。     

破壁灵芝孢子中生物碱和脂溶性成分GC/MS分析

采用气相色谱-质谱联用(GC/MS)的方法对破壁灵芝孢子粉中的生物碱和乙醚提取物进行了化学成分的分析.实验中,灵芝孢子粉的乙醚提取物经气相色谱共分离出39个峰,通过谱图检索和谱图解析,鉴定出24种化合物.有4种化合物是通过人工的谱图解析及其特征峰断定为胺醇类化合物.24种化合物中主要为烃、醇、醛、酯、酮等,但其相对含量均较低,绝大多数是脂类物质.对灵芝孢子粉的生物碱的GC/MS分析,没有检测到生物碱的特征峰.     

灵芝孢子粉中多糖和三萜有效成分的提取和分离

通过分析各种对灵芝多糖和三萜化合物的提取分离工艺.选择适合同时提取分离灵芝多糖和灵芝中三萜化合物的工艺.     

不同部位灵芝及子实体提取物中总三萜酸含量测定

建立不同部位灵芝及子实体提取物中总三萜酸含量测定方法.灵芝样品用乙醇提取,依次经氯仿、5%碳酸氢钠萃取,酸化后再用氯仿萃取、浓缩至干,称重,即得灵芝总三萜酸量.结果:灵芝子实体总三萜酸为(8.58±0.25)mg/g,孢子粉为(3.48±0.03)mg/g,菌丝体仅为(1.75±0.09)mg/g;菌盖总三萜酸含量为(12.62±0.22)mg/g,菌柄为(7.66±0.08)mg/g.10批次灵芝子实体的总三萜酸含量范围为4.3416.39 mg/g.灵芝子实体提取物中的总三萜酸含量以醇-水提取物的最高为(208.70±5.54)mg/g;碱水提取物的最低,仅为(123.07±4.99)mg/g.HPLC初步分析子实体和孢子及子实体提取物间三萜酸成分大部分相同.本法适用于灵芝子实体及其提取物、灵芝孢子和菌丝体总三萜酸的含量测定,结果可靠,可为灵芝产品质量指标提供依据.     

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGPase)基因调控不同地源灵芝孢子粉次生代谢产物的差异

目的 探讨不同地源灵芝孢子粉携带尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphorylase,UGPase)基因在转录水平上的差异表达,以及对灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP)含量的影响.方法 采集不同地源灵芝孢子粉共7批18份,通过水浸煮-醇沉法提取GLP,应用苯酚-硫酸法计算GLP含量.克隆、测序UGPase基因,荧光定量PCR检测UGPase-mRNA.结果 灵芝孢子粉GLP检测结果显示:吉林产含量为(3.3610±0.0046)％,云南产含量为(2.8870±0.0059)％,××堂孢子粉含量为(2.3990±0.0053)％,差异具有统计学意义(P<0.05);克隆UGPase基因测序结果显示:不同地域灵芝孢子粉携带UGPase基因序列相同,与Genbank中UGPase基因序列(Sequence:KM260167.1)核苷酸同源性达100％.UGPase-mRNA检测结果显示:吉林产灵芝孢子粉为表达量最高.结论 不同地源灵芝孢子粉GLP与UGPase-mRNA相对表达量存在差异.UGPase基因在高多糖灵芝菌株中存在明显的表达优势,与GLP的生物合成呈正相关,该机制为深入研究GLP的生物合成提供了理论依据.     

赤芝、紫芝三萜类成分指纹图谱的优化与比较

对高效液相色谱的色谱条件进行优化,建立灵芝三萜类成分的指纹图谱分析方法,拟定赤芝、紫芝指纹图谱的共有模式,并将其初步应用于评价赤芝与紫芝的质量差异。优化后的流动相为乙腈-2%冰醋酸(梯度洗脱),检测波长为252 nm,流速为1mL/min,柱温为35℃,14批赤芝、7批紫芝共标示出29个共有峰.鉴别了3个成分(灵芝酸A、C2、G),发现灵芝酸A的峰最强;赤芝与紫芝的共有峰相对比值较接近,但紫芝的单位生药峰面积只有赤芝的5%~10%左右,说明含灵芝制剂的质量评价应采用指纹图谱与含量测定相结合的方法.采用优化后的方法获得的灵芝三萜指纹图谱表明,赤芝三萜类成分较其它文献报道多,紫芝中三萜类成分能明显检出,说明该方法准确可靠,重复性好.     

不同灵芝菌株多糖、三萜化合物比较分析

比较不同灵芝菌株间及同一菌株子实体与菌丝体间多糖、三萜化合物含量差异.研究发现，不同菌株间多糖、三萜含量的差异较大，黄金芝子实体多糖含量最高，达到了5.625％；京大灵芝三萜含量最高，为5.788％；黄金芝、京大灵芝的多糖和三萜总含量最高，分别为7.044％，6.667％.灵芝子实体三萜含量低于菌丝体，而菌丝体与子实体间多糖含量的高低因菌株而异.     

一种快速测定灵芝孢子粉抗氧化性的方法

采用紫外分光光度法,以Fenton反应为基础,建立灵芝孢子粉抗氧化性快速准确测定的新方法.以水杨酸与Fenton反应产生的羟基自由基反应生成的二羟基苯甲酸在530nm处有最大吸收的原理,确立最佳反应条件.在此条件下,以抗坏血酸作为羟基自由基的清除剂,获得了标准曲线和标准对照图,为灵芝孢子粉抗氧性的快速检测提供了标准思路.在此最佳条件下,采用超声波提取法对灵芝孢子粉进行多糖的提取,将多糖提取液或者灵芝孢子粉颗粒加入反应体系中,反应后测其在530nm处的吸光度,即可快速获知其抗氧化性.同时,比较了破壁和未破壁孢子粉提取液和孢子粉颗粒的抗氧化性差异,结果表明破壁后的抗氧化性较未破壁高10%.证明此快速测定方法的实用性.本方法操作简单,所用试剂均无毒副作用,为灵芝孢子粉抗氧化性的快速测定提供一个较快速且准确的方法.