睾丸酮诱导下的不同菌种中3α-HSD的表达及含量检测

3-羟类固醇脱氢酶(3α-hydroxysteroid dehydrogenase,3α-HSD)是睾酮丛毛单胞菌分泌的一种类固醇脱氢酶。本实验利用已构建的pET-3α-HSD转化BL21,得到BL21pET-3α-HSD,经IPTG诱导表达提纯3α-HSD蛋白,建立了3α-HSD蛋白标准曲线。应用ELISA方法检测在睾丸酮的诱导下,三种工程菌C.testosterone,Ca3,BL21PET-3 hsd对3α-HSD的表达量,经过对比研究发现,在三种工程菌中,C.testosterone更宜适合作为检测环境中载体类化合物的指示菌种,并且得出3α-HSD是C.testosterone和Ca3在降解载体化合物的关键酶,在检测中可作为目标蛋白。     

微生物在甾体激素C16α羟基化中的应用

微生物能专一地选择甾体某个碳的空间位置上的氢并氧化其为原来空间构型的羟基.在这一反应中,微生物羟基化酶利用分子态氧完成羟基化作用.本文主要综述利用微生物进行甾体激素C16α羟基化反应的应用情况.     

微生物在甾体激素C16α羟基化中的应用

微生物能专一地选择甾体某个碳的空间位置上的氢并氧化其为原来空间构型的羟基.在这一反应中,微生物羟基化酶利用分子态氧完成羟基化作用.本文主要综述利用微生物进行甾体激素C16α羟基化反应的应用情况.     

抗3α-HSD单克隆抗体制备方法的初步研究

为了利用杂交瘤技术制备抗3α-HSD单克隆抗体，用表达纯化的3α-HSD作为抗原免疫Balb/c小鼠，获得针对该抗原致敏的B淋巴细胞，并用获得的B淋巴细胞与SP2/0进行细胞融合，得到杂交瘤细胞株，在ELISA间接法筛选出阳性孔的基础上，进行亚克隆，筛选出能稳定分泌抗3α-HSD单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果得到能分泌抗3α-HSD单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备过程中发现很多特殊的现象，如杂交瘤细胞上清与单抗腹水效价过低，但多抗血清效价较高等。文章对在单抗的制备过程中遇到的问题做了初步分析，为之后制备抗3α-HSD单克隆抗体的研究提供技术支持。     

一株降解甾体雌激素的克雷伯氏菌ZY3

为研究甾体雌激素的生物降解,从某避孕药厂污水处理站的活性污泥中分离到1株降解甾体雌激素(3-甲氧基-17β羟基-1,3,5(10),8(9)-雌甾-4-烯,简称MHE)的高效菌ZY3,根据其菌体形态、生理生化特征,并结合16S rDNA序列分析,鉴定为克雷伯氏菌属．研究结果表明,菌株ZY3利用底物MHE的最适宜生长温度为25～37℃、pH为9．0～11．0．ρ(MHE)＞20 mg/L时,菌株生长受到抑制,72 h MHE最高降解率达81%．Na~+、Mg~(2+)和Ca~(2+)对菌株ZY3的生长有促进作用,而Sn~(2+)、Mn~(2+)、Cd~(2+)等重金属离子对ZY3菌株生长有较强的抑制作用．菌株ZY3对甾体化合物MHE和EE2有较强的利用能力,而以苯酚、蒽、萘等多环芳烃化合物作为唯一碳源时,菌株ZY3生长非常缓慢．     

BKR基因启动子鉴定及表达调控

BKR基因是睾丸酮丛毛单胞菌中的一个重要的甾体化合物降解酶基因,Tet R、LysR和LuxR蛋白是睾丸酮丛毛单胞菌中的调控蛋白。以EGFP为报告基因,构建p K-BKR-EGFP质粒,通过与p K-EGFP分别转化到大肠杆菌JM109,检测荧光信号,确定预测的序列中包含BKR基因的启动子。然后通过质粒共转化技术,检测Tet R、LysR和LuxR蛋白与p K-BKR-EGFP的荧光信号强度,探讨Tet R、LysR和LuxR三个蛋白与BKR基因之间的调控关系。实验结果表明:BKR基因的启动子在该基因前699bp内;LysR与BKR基因共转后荧光信号增强;Tet R和LuxR分别与BKR基因共转后荧光信号减弱。由此可以得出结论,LysR对BKR基因的调控起增强作用;Tet R和LuxR对BKR基因的调控起抑制作用。该实验揭示了睾丸酮丛毛单胞菌中BKR基因的调控序列,为CT菌利用甾体激素作为唯一的碳源及能源机理提供理论基础。     

sisI替换genP在绛红小单孢菌G1008中的功能表达

将依纽小单孢菌3′,4′-双脱羟基基因sisI组合到绛红小单孢菌G1008中,替代其中的同工异源酶基因genP,研究sisI基因异源表达的内在特征.以温敏型质粒pKC1139作为克隆载体,构建sisI替换genP的重组质粒pIP303,利用接合转移技术,将穿梭质粒导入绛红小单孢菌G1008基因组,影印筛选并通过PCR(聚合酶链式反应)鉴定,获得一株基因重组工程菌GIP95.借助TLC(薄层色谱)、HPLC(高效液相色谱)和MS(质谱)检测代谢产物组分及结构变化,结果表明突变株GIP95的代谢流未被阻断,仍能够合成庆大霉素C族组分.由此得出结论,外源基因依纽小单孢菌3′,4′-双脱羟基基因sisI参与了庆大霉素生物合成中绛红糖胺3′,4′-双脱羟基这一关键步骤,在绛红小单孢菌G1008中实现异源表达.     

Pichia stipitis木糖醇脱氢酶基因XYL2在酿酒酵母中的表达

通过PCR方法克隆得到树干毕赤氏酵母木糖醇脱氢酶（XDH）基因XYL2。将该基因连入酵母表达载体pYX212的强启动子磷酸丙糖异构酶（TPI）启动子下，得到融合表达载体pYZ－XYL2。通过电转化方法将pYX－XYL2转入酿酒酵母Saccharomyces cereuisiaeW303-1A中，酶活测定表明在酿酒酵母中树干毕赤氏酵母木糖醇脱氢酶基因XYL12得到活性表达，酿酒酵母转化子粗酶液中木糖醇脱氢酶比活为每毫克蛋白0．6U左右，约为供体菌的2．4倍。与基因供体菌不同，木糖醇脱氢酶基因在酿酒酵母中表达不需木糖诱导，为组成型表达。     

海参铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及活性鉴定

采用原核宿主大肠杆菌BL21(DE3)成功表达了具有活性的仿刺参铜锌超氧化物歧化酶(Apostichopus japonicus Cu/Zn-superoxide dismutase,Aj-SOD1)蛋白。利用Trizol法从海参肠组织中提取总RNA,通过反转录PCR扩增获得Aj-SOD1基因的编码序列(GenBank:JX097096.1,459bp),构建克隆载体pMD18-Aj-SOD1;在目的基因两端引入(XhoⅠ/NdeⅠ)酶切位点,构建克隆载体pMD18-AjSOD1(XhoⅠ/NdeⅠ)。将此载体与表达质粒pET30a(+)分别双酶切后连接,构建重组表达载体pET30a-Aj-SOD1。转化至大肠杆菌BL21(DE3),Kan+抗性筛选阳性转化子,获得基因工程菌BL21(DE3)-pET30a-Aj-SOD1。SDS-PAGE和邻苯三酚自氧化法检测发现,经0.1 mmol/L IPTG诱导8h后,成功获得具有抗氧化活性的Aj-SOD1蛋白。     

选育高效产氢细菌的诱变剂选择

为选育高效产酸产氢细菌,采用1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(NTG)、紫外线+亚硝酸(UV+亚硝酸)和5-溴尿嘧啶+紫外线(5-BU+UV)对产氢发酵细菌Ethanoligenens harbinense ZGX4进行诱变处理,显示出不同的诱变效应差异.NTG只得到一种类型产氢突变株;紫外线+亚硝酸法获得5种突变体类型,且出现一种自絮凝很强、产氢能力提高约50%的突变类型.5-溴尿嘧啶+紫外线法获得2种突变类型,约80%的突变株的释氢能力呈现负增长趋势.实验证明,紫外线+亚硝酸法的诱变效应最好,高产氢能力突变株显示其菌落直径增大、颜色透明的变化特征.     

1，3，5—三（3，5—二叔丁基—4—羟基苄基）—S—三嗪—2，4，6—（1H，3H，5H）三酮的研制

研究了抗氧剂１，３，５—三（３，５—二叔丁基—４—羟基苄基）—Ｓ—三嗪—２，４，６—（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）三酮的制备方法及最适宜的工艺条件。     

蜡状芽孢杆菌的筛选及其产氢性能

为了研究纯菌种对产氢的影响,从污水厂活性污泥中分离了纯的产氢菌种XN12,根据16S rDNA序列和DnaJ基因序列、细胞形态、生理生化数据等多项鉴定分析,该菌种被鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus).为了研究该纯菌的产氢性能,实验以葡萄糖为底物,在不同pH值条件下观察其产气情况.实验结果表明:以每摩尔葡萄糖计,该菌在中性条件下获得最大产氢量为1.6 mol.对反应的液相产物的检验结果表明:该菌为丁酸发酵菌,通过丙酮酸代谢途径产出氢气.     

脱除养殖臭气中H2S菌种的筛选及性能测定

恶臭气体作为畜禽养殖场的主要污染物,成分复杂且较难去除.生物法除臭效率高,而筛选出高效除臭的微生物又是生物法除臭的关键.从脱除硫化氢的生物反应器中取脱硫菌种,经分离纯化得到选择脱除硫化氢的6株异养氧化菌和1株自养氧化菌.根据其形态特征观察与生理生化反应结果,将其鉴定到属:菌B1、菌B5为微球菌属、菌B2为短杆菌属、菌B3为副球菌属、菌B4为微杆菌属、菌B6为埃希氏菌属、菌B7为硫杆菌属.在28℃,120r/min的条件下,依据菌体的生长情况对其进行生长繁殖期内硫化物降解能力的测定,实验结果表明:脱硫菌能利用培养液中的S2-使其主要氧化为SO42-,并且短时间异养菌的去除效果较自养菌好,去除率均在61.0%以上,自养菌的去除率最高时仅为49.7%.     

发酵白菜中乳酸菌的分离、鉴定及发酵特征研究

从泡白菜中分离出5个具有乳酸菌菌落特征的菌株，菌株编号分别为cl～c5，经革兰式染色、扫描电子显微镜观察、生理试验等初步鉴定为乳酸菌。5个菌株分属乳杆菌属、链球菌属、环丝菌属，丹毒丝菌属等4个属。C4菌株产亚硝酸盐，不宜作为纯种发酵菌种，其余菌种在纯种发酵时表现出来的适应能力、产酸能力各不相同。     

金属酞菁负载分子筛对孔雀石绿的降解

采用浸渍法制备了4种负载型金属酞菁催化剂：MCM-41-a-（GH11O）4PeCo（Ⅱ）[Ni（Ⅱ）、Cu（Ⅱ）、Zn（Ⅱ）]。并在室温（25±1℃）中性以及可见光条件下,考察了上述催化剂中心金属、催化剂用量、H2O2浓度以及重复利用方面对孔雀石绿降解速率的影响。研究结果表明：4种催化剂均具有良好的催化性能,在相同条件下,MCM-41-a-（C3H11O）4PcCo的催化效果最好,并且其浓度在0．7g／L（质量为20mg）,H2O2浓度为10mmol／L条件下,孔雀石绿在10min内降解率可达92％。对重复性的研究表明该种负载催化剂具有良好的重复利用性。     

2,6,7-Tris2,6,7-三取代 -1,3,4 -噻二唑并 [3,2 -a] -1,3,5 -三嗪 -5 -硫酮的合成(英文)

通过 2 ,3,4,6- 四 - O- 乙酰基 - β- D- 吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯与芳香醛缩 - 5 - 烷基 - 2 - 氨基 - 1 ,3,4- 噻二唑 (希夫碱 )于甲苯中回流 ,制得十二种化合物 :2 - 烷基 - 6- 2′,3′,4′,6′- 四 - O- 乙酰基 - β- D- 吡喃葡萄糖基 - 7- 芳基 - 1 ,3,4- 噻二唑并 [3,2 - a]- 1 ,3,5 - 三嗪 - 5( 6H,7H) - 硫酮 ,并通过元素分析、红外光谱、核磁共振氢谱对其结构进行了确认     

产氢细菌Ethanoligenens harbinense YUAN-3基因文库构建及分析

以高效产氢细菌哈尔滨产乙醇杆菌的模式菌株YUAN-3作为出发菌株,提取细菌总DNA,经过Sau3AI的不完全酶切,将2.5～5.0kb的片段连接入用BamHI酶切的pUC19质粒,转化入E.ColiDH5α中,构建菌株YUAN-3的基因组文库,得到克隆数接近9×103个,以最相近的梭菌属已报道的基因组平均大小4.6Mb计算,概括了其99%以上的基因组,达到了建库的理论值.随机挑取200个白色菌落进行测序,经分析得到的结果大多数与已经过全序列分析的产氢细菌的假想蛋白相近,其中有49个与其他菌株功能蛋白相似性超过70%的片段,包括叶酰聚谷氨酸合成酶、DNA拓扑异构酶、乙酰转移酶等,同时获得了7个功能蛋白或基因的完整开放阅读框.     

正己烷、正辛烷在ZSM—5分子筛催化剂上的芳构化

本文介绍了ZSM—5分子筛催化剂对nC_6~0、nC_8~0 烃类芳构化的催化效应及反应条件对反应结果的影响。并在催化剂的活性、芳烃选择性等方面对H—ZSM—5和Pt/H—ZSM—5作了比较。试验结果表明,以铂离子交换的Pt/H—ZSM—5 分子筛催化剂脱氢芳构化性能较好。在反应温度550℃、GHSV—2000时~(-1)及常压、非临氢条件下、转化率为99.98%以上,总芳烃平均选择性为61.5%,     

Schiff碱型羧酸开链冠醚的合成

按缩合反应合成了一类端基为羧基的Ｓｃｈｉｆｆ碱型开链冠醚其中,Ｘ＝ＣＨ２ＣＨ２－时,Ｒ＝ＣＯ２Ｈ（Ｈ２Ｌ１）;－ＯＣＨ２ＣＯ２Ｈ（Ｈ２Ｌ３）;－ＯＣＨ２ＣＯ２Ｃ２Ｈ５（Ｌ８）：Ｘ＝时．Ｒ＝ＣＯ２Ｈ（Ｈ２Ｌ２）：－ＯＣＨ２ＣＯ２Ｈ（Ｈ２Ｌ４）测定了配体Ｈ２Ｌ１和Ｈ２Ｌ３的酸的离解常数．