丹参酮I抗肿瘤作用及作用机制的实验研究

目的　通过丹参酮 I(tanshinone I)对肿瘤细胞的体内外实验研究 ,探讨丹参酮 I抗肿瘤作用及作用机制。方法　人肝癌细胞 (Hep G2 )培养液中加入不同浓度的丹参酮 I,培养 72小时 ,观察 Hep G2细胞的增殖率 ;倒置显微镜下观察 Hep G2细胞的形态变化 ;流式细胞仪 (FCM)检测 Hep G2细胞周期及凋亡率 ;免疫组化检测 Hep G2细胞的增殖凋亡调控相关基因 (Bax、Bcl- 2 )的蛋白表达。用 Hep G2细胞制作 Balb/c裸鼠荷瘤模型 ,每天腹腔注射丹参酮 I1次连续 10天 ,观察抑瘤率。结果　丹参酮 I抑制 Hep G2细胞生长 ;阻滞 Hep G2细胞周期于 G0 /G1 期并诱导细胞凋亡 ;通过下调 Bcl- 2基因表达 (P<0 .0 1) ,上调 Bax基因表达 (P<0 .0 1)诱导 Hep G2细胞凋亡 ;抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长 ,抑瘤率为 33.3%。结论　丹参酮 I具有抗肿瘤活性 ,其作用机制之一是诱导细胞凋亡。     

海芋粗提物对人肝癌细胞的细胞毒和凋亡诱导作用

目的:探讨海芋粗提物对人肝癌细胞的细胞毒和凋亡诱导作用及其作用机制.方法:用海芋粗提物处理人正常肝细胞(L02)及肝癌细胞(SMMC-7721),用细胞增殖试验(MTT法)、克隆形成试验、EdU掺入试验研究海芋粗提物对人正常肝细胞和肝癌细胞的增殖抑制作用;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测海芋粗提物对细胞周期的影响;RT-PCR检测细胞周期及凋亡相关基因PPARγ、Cyclin D1、Rb、P21、Bax、Bcl-2基因mRNA表达.结果:用不同浓度海芋粗提物处理后,肿瘤细胞增殖活性降低(P＜0.05),呈时间-剂量-效应关系;克隆形成下降(P＜0.05);EdU标记指数降低(P＜0.05);AO/EB染色凋亡细胞增多(P＜0.01);细胞周期分布改变,凋亡指数显著增加(P＜0.01),G0/G1期细胞增加(P＜0.05),S期和G2/M期细胞减少(P＜0.05);RT-PCR结果显示,海芋粗提物(400μg/ml)处理后,PPARγ表达增加46.0%(P＜0.01)、Cyclin D1降低43.7% (P＜0.01)、Rb增加283.3%(P＜0.01)、Bax增加77.1% (P＜0.01)、Bcl-2降低24.8% (P＜0.05).结论:海芋粗提物对肝癌细胞具有细胞毒和诱导凋亡作用,其作用机理可能与激活PPARγ,上调Rb、Bax基因表达,下调Cyclin D1、Bcl-2基因表达有关.     

三氧化二砷联合5-氟尿嘧啶抗裸鼠人结肠癌移植瘤的作用及其机制的研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）联合5-氟尿嘧啶（5-FU）对裸鼠人结肠癌移植瘤的抗肿瘤作用、作用机制以及药物毒性.方法建立裸鼠人结肠癌模型,随机分为生理盐水组、As2O3组、5-FU组和As2O3联合5-FU组,腹腔分别注射生理盐水、As2O3、5-FU和As2O3 ＋5-FU,观察各组抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化,并对体内标本行光镜、电镜、原位末端标记（TUNEL）、免疫组化和血常规检测.结果与单药作用相比,As2O3联合5-FU可显著抑制结肠癌移植瘤的增长,CDI值〈1,并显著增强诱导瘤细胞凋亡作用、调控凋亡相关基因（Bcl-2、Bax、Fas和FasL）表达.联合用药并未增加裸鼠肝、肾和造血系统的毒性.结论 As2O3与5-FU联合应用对结肠癌移植瘤有协同抗肿瘤作用,其机制可能与增强诱导癌细胞凋亡、细胞周期特异性药物与细胞周期调控剂联合增效以及调控凋亡相关基因表达有关;同时联合用药对于荷瘤裸鼠的肝、肾和造血系统无明显毒性.     

三氧化二砷和曲古抑菌素A协同诱导HL-60细胞凋亡的作用及分子机制研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)和曲古抑菌素A(TSA)在体外诱导急性早幼粒白血病细胞HL-60凋亡过程中的协同作用.方法 采用MTT法检测As2O3和(或)TSA对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达.结果 As2O3和TSA联用较单独用药能明显抑制细胞,引起细胞周期阻滞和凋亡,Bax基因表达升高,Bcl-2基因表达降低,Bax/Bcl-2比值升高.结论 As2O3和TSA均能够引起HL-60凋亡,二者具有协同效应,其机制是引起细胞周期阻滞,且上调Bax与Bcl-2比值.     

新城疫病毒对小细胞肺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)7793株在体内对肿瘤生长的抑制作用及机制.方法:体外培养人小细胞肺癌NCI-H446细胞,通过皮下接种NCI-H446细胞建立人小细胞肺癌裸鼠移植瘤模型.NDV组裸鼠瘤内注射新城疫病毒,阳性对照组注射顺铂(cisplatin,DDP),阴性对照组注射PBS.观察移植瘤生长情况和裸鼠体质量变化,绘制肿瘤生长曲线.6周后处死裸鼠剥取肿瘤组织,HE染色观察细胞学变化,免疫组织化学法检测移植瘤细胞Bax和Bcl-2蛋白表达情况.结果:NDV注射对肿瘤生长有显著抑制作用,抑瘤率达34.1%;NDV对荷瘤鼠无不良反应;光学显微镜下观察发现,NDV治疗组肿瘤组织有许多散在分布的凋亡/坏死区域.NDV能明显上调Bax蛋白的表达量(P＜0.01),对Bcl-2蛋白表达则无影响.结论:新城疫病毒7793株在体内能够有效抑制移植瘤生长,其抗肿瘤机制可能与上调Bax蛋白的表达有关.     

新型拓扑异构酶抑制剂抗肿瘤活性及其机制研究

目的 拓扑异构酶是近年来发现的多种肿瘤化疗的重要靶点,与肿瘤细胞的发生、增殖和发展密切相关.本研究分析两种新型拓扑酶抑制剂的体外抗肿瘤活性,并初步探讨其作用机制.方法 采用MTT法检测两种受试物对人肿瘤细胞增殖的抑制作用;质粒pBR322解旋反应检测抑制剂对TopoⅠ催化活性的影响,蛋白质印迹法检测细胞中Topo Ⅰ和TopoⅡ的蛋白表达变化;Hoechst 33258荧光染色、AO荧光染色、彗星实验和流式细胞术等方法观察两种受试物对HEp-2细胞凋亡和细胞周期的影响.结果 MTT法的结果显示,受试物1和2对9种人肿瘤细胞株均有显著的抗肿瘤活性(P＜0.05),并呈现浓度依赖性;受试物1和2可抑制Topo Ⅰ介导的质粒DNA超螺旋的解旋,并且两种受试物都可下调细胞中Topo Ⅰ、Ⅱ的蛋白表达,P＜0.05;Hoechst 33258荧光染色表明受试物可诱导HEp-2细胞凋亡,AO染色也得到相同的结果;彗星实验检测出两种受试物可导致DNA损伤;流式细胞仪检测的结果表明,处理组的细胞凋亡率高于对照组(P＜0.05),并且,受试物1使HEp-2细胞周期在S期和G2/M期发生阻滞(P＜0.01),而受试物2使其阻滞在G1期(72 h),P＜0.05;蛋白质印迹法结果显示促凋亡蛋白Bid、Bax和JNK表达增加(P＜0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少(P＜0.01),细胞周期蛋白Cyclin B1和Cyclin D1表达减少(P＜0.05).结论 受试物1和2可以抑制HEp-2细胞的生长,这可能与以下机制有关:通过抑制Topo Ⅰ的催化活性并下调细胞中TopoⅠ和TopoⅡ的表达;调控凋亡相关基因的表达,诱导其凋亡;造成肿瘤细胞周期紊乱,促进凋亡.     

丹参酮对人肺癌细胞株的抑制作用及其分子机理

背景与目的观察丹参酮ⅡA对人肺腺癌细胞(SPC-A-1)的抑制作用及其分子机理。方法体外培养的SPC-A-1细胞经无毒剂量(0.5μg/mL)的丹参酮ⅡA处理5天后,观察细胞形态学、增殖动力学、细胞周期分布、细胞凋亡及肿瘤相关基因表达改变,并以全反式维甲酸及顺铂作为对照。结果SPC-A-1细胞经丹参酮ⅡA处理后,细胞生长明显减慢,集落形成率显著降低。FCM细胞周期分析:S期细胞显著减少,G0/G1期细胞则明显增加,细胞凋亡数量显著增加。细胞p53、p21、Fas、Bax表达水平明显升高,而Bcl-2、CDKN2明显降低。结论丹参酮ⅡA对SPC-A-1细胞增殖具有显著抑制作用,其分子机理可能是通过上调p53、p21、Fas、Bax和下调Bcl-2、CKDN2等基因的表达而抑制DNA的合成,同时启动细胞凋亡程序,促进细胞凋亡。     

抗癌生物活性肽-S对胃癌细胞周期和凋亡的影响

目的 探讨抗癌生物活性肽-S(ACBP-s)对人胃癌细胞MGC-803细胞周期和凋亡的影响.方法 (1)体外实验:以不同浓度ACBP-S处理人胃癌MGC-803细胞,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法测定增殖抑制率;电镜下观察细胞凋亡现象;流式细胞术分析细胞周期与凋亡率;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法检测p27基因mRNA和蛋白表达的变化.(2)动物体内实验:建立裸鼠胃癌移植瘤模型,每只裸鼠经尾静脉注射7μg ACBP-S,隔日给药,2周后处死,计算抑瘤率;HE染色观察肿瘤细胞形态变化;免疫组化法检测Bcl-2、Bax和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 (1)5.0、10.0和15.0μg/ml的ACBP-S均能抑制MGC-803细胞的生长,且随浓度增加和作用时间延长抑瘤率增加.电镜下可见,MGC-803细胞经15.0μg/ml ACBP-S作用48h后,呈现典型的凋亡特征.流式细胞术分析结果显示,5.0和20.0μg/ml ACBP-S作用MGC-803细胞24h的凋亡率较高,分别为(5.7±0.2)%和(13.9±0.6)%(P<0.05);20.0μg/ml ACBP-S可使G0/G1期MGC-803细胞的构成比明显上升.ACBP-S上调MGC-803细胞p27基因mRNA和蛋白的表达.(2)ACBP-S能抑制胃癌移植瘤的生长,抑制率达34.2%.镜下可见,治疗组肿瘤组织中出现大片坏死及大量凋亡细胞,异型细胞及核分裂相减少.免疫组化分析结果显示,治疗组Bcl-2和PCNA表达降低,Bax表达增高.结论 ACBP-S能抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,其作用机制与调控胃癌细胞的细胞周期和凋亡有关.     

蟾毒灵对裸鼠大肠癌原位移植瘤的抗肿瘤作用及其对凋亡相关基因Bcl-xL、Bax表达的影响

目的探讨蟾毒灵对裸鼠大肠癌原位移植瘤的抗肿瘤作用及其可能诱导凋亡的机制。方法将60只人结肠癌细胞株HCT-116建立的裸鼠原位移植瘤模型随机分为生理盐水（NS）组、5-Fu组、蟾毒灵低（BL）、中(BM)、高(BH)5组,每组12只,腹腔注射给药持续7d。用药结束后第24天每组分别处死6只裸鼠,完整取出肿瘤,测量肿瘤大小,计算肿瘤抑制率;剩余裸鼠观察带瘤生存期;TUNEL法检测原位移植瘤细胞的凋亡指数;实时荧光定量PCR法和Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-x_L、Bax mRNA和蛋白的表达。结果5-Fu组、BL组、BM组、BH组的肿瘤抑制率分别为69.6%、45.6%、56.2%、58.5%,肿瘤体积与NS组比较明显缩小（P＜0.01);BL组、BM组带瘤生存期与NS组相比较明显延长(P< 0.05)。TUNEL结果显示蟾毒灵用药组的凋亡指数明显高于NS组(P＜0.01）;荧光定量PCR和Western结果显示蟾毒灵可抑制Bcl-x_L基因表达,促进Bax基因表达（P＜0.05）。结论蟾毒灵对裸鼠大肠癌原位移植瘤有显著的抗肿瘤作用,能够抑制Bcl-xL基因和促进Bax基因表达,诱导肿瘤细胞凋亡可能是蟾毒灵抗肿瘤的重要机制之一。     

苦参碱对小鼠H22肝癌细胞凋亡作用的实验研究

目的：研究中药苦参碱在体内外对小鼠H22肝癌细胞的诱导凋亡作用，探讨其可能的抗肿瘤作用机制。方法：Annexin V-FITC／PI双标记法检测苦参碱对H22细胞的早期促凋亡作用；免疫组织化学法检测苦参碱作用后H22细胞内Bcl-2、Bax两种凋亡相关蛋白的表达。建立H22肝癌移植瘤小鼠模型，观察苦参碱对荷瘤小鼠肿瘤生长情况的影响及肿瘤抑制率；电镜观察荷瘤小鼠肿瘤组织的超微结构改变；免疫组化方法检测小鼠肿瘤组织内Bcl-2、Bax的表达情况。结果：AnnexinV法检测到1．0mg／mL和1．5mg／mL苦参碱作用48h后H22细胞有早期凋亡改变，凋亡细胞百分率分别为11．71％和17．86％，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。苦参碱对荷瘤小鼠肿瘤的抑制率达60％以上；免疫组化显示，苦参碱作用后H22细胞内及小鼠肿瘤组织内Bcl-2蛋白的表达水平下降，Bax蛋白表达增强。电镜证实苦参碱治疗后荷瘤小鼠肿瘤组织内有凋亡细胞和凋亡小体的存在。结论：苦参碱在体内体外都对小鼠H22肝癌细胞表现出较强的抗肿瘤作用和诱导凋亡作用。促凋亡作用与其上调细胞内Bax表达，抑制Bcl-2表达有关。