HIF-1α对人肝癌 HepG2 细胞生长的影响

目的研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人肝癌细胞株HepG2体内生长的影响,并探讨其可能机制.方法将HIF-1α转入人肝癌细胞HepG2中,建立人肝癌裸鼠模型,观察其生长.切除瘤灶、称瘤重.标本用免疫组化和western-blot检测HIF-1α和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达.结果HepG2细胞对HIF-1α敏感,细胞生长速度加快.结论 HIF-1α体内可促进肝癌HepG2的生长,其机制可能与其促血管生成有关.     

槲皮素对HepG2细胞增殖及Cyclin D2基因表达影响的观察

目的:探讨槲皮素对人肝癌细胞(HepG2)生长的干预作用以及对其细胞周期基因Cyclin D2表达的影响;方法:倒置显微镜观察药物处理前后HepG2细胞的形态学变化,噻唑蓝(MTT)分析生存率,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测CycIin D2表达.结果:加入50μmol/L槲皮素作用24 h后,HepG2细胞逐渐变圆,附壁疏松,脱壁,增殖变慢;MTT实验结果显示,HepG2细胞生存率和槲皮素有浓度、时间依存关系,48 h的IC50约为50/μmol/L(15 mg/L);细胞周期分析显示,有明显的G0/G1期阻滞;RT-PCR结果显示,槲皮素作用组Cyclin D2表达显著降低.结论:槲皮素能抑制HepG2细胞生长增殖,阻滞其细胞周期,并且这种作用可能是通过影响HepG2细胞Cyclin D2基因表达实现的.中华肿瘤防治杂志,2009,16(1):6-9     

三氧化二砷对膀胱癌MBT-2细胞生长抑制作用

目的:研究三氧化二砷(Arsenic trioxide, As2O3)对膀胱癌MBT-2细胞生长的抑制作用.方法:采用MTT法检测不同浓度As2O3对人膀胱癌细胞株MBT-2的生长抑制率.采用原位末端转移酶标记技术检测MBT-2细胞凋亡和免疫组化分析bcl-2表达.结果:As2O3可有效抑制体外培养的MBT-2细胞生长,其作用随时间延长和浓度提高而增强,可明显诱导细胞凋亡.结论:As2O3能够抑制膀胱癌细胞生长并促使癌细胞凋亡增多,可能为膀胱癌的治疗提供新的方法.     

钩藤酸E对人肝癌HepG2细胞的抑制作用及其机制研究

目的:通过体外实验研究钩藤酸E(UAE)抑制人肝癌细胞HepG2的细胞增殖作用,并进一步研究其作用机制.方法:MTT法考察钩藤酸E对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,通过电镜观察细胞微细结构变化,流式细胞术进一步验证细胞凋亡,并检测细胞周期变化.结果:研究发现UAE能抑制HepG2细胞增殖.电镜分析证实UAE引起细胞凋亡.流式细胞术检测细胞凋亡主要发生于G0/G1期.结论:钩藤酸E诱导人肝癌细胞HepG2的细胞增殖,诱导其发生凋亡.     

siRNA干扰Pokemon基因对鼻咽癌CNE-2细胞生长作用的研究

目的:探讨siRNA干扰Pokemon基因对鼻咽癌CNE-2细胞生长作用的影响.方法:利用siRNA预测软件得到3条siRNA编码DNA序列,并制备合成siRNA片段,利用RT-PCR和蛋白质印迹法检测其沉默Pokemon基因的效果,筛选出沉默效果最佳的siRNA片段.利用MTT法和流式细胞术检测CNE-2细胞生长与凋亡情况.结果:筛选出一条≥50％沉默效应的siRNA片段,转染鼻咽癌CNE-2细胞后,Pokemon基因表达明显下降(P＜0.05),p14ARF和p53基因表达上调,P＜0.05.鼻咽癌CNE-2细胞增殖受到抑制(P=0.015),凋亡率升高,P=0.008.结论:Pokemon基因沉默后可抑制CNE-2细胞生长,促进细胞凋亡,其机制可能与p14ARF和p53的表达上调有关.     

SeO2对原癌基因c-fos调控区P250的影响

背景与目的:已有研究表明,二氧化硒(SeO2)可诱导肺癌细胞株中c-fos蛋白高表达.本研究旨在通过研究SeO2对原癌基因c-fos调控区域P250的影响,探讨其调控机理.方法:构建c-fos启动区氯霉素乙酰化转移酶(chloramphenicol acetyl-transferase,CAT),然后转染HeLa癌细胞株,用不同浓度SeO2处理后观察细胞中CAT的活性.结果:不同浓度(3μmol/L、10μmol/L、30μmol/L)SeO2对转染了c-fosCATP250的HeLa癌细胞株作用后,其CAT的活性均增高,其积分光密度值分别为0737±0085、6047±0738、3167±0183,与对照组(0490±0046)相比,10μmol/L和30μmol/L浓度组的积分光密度值变化有统计学意义(P<005).结论:SeO2可通过影响c-fos调控区域P250而发挥调控肿瘤细胞凋亡的生物学效应,SeO2可能具有潜在的抗肿瘤作用.     

阿斯匹林对喉癌细胞系Hep-2生长抑制作用的实验研究

目的通过体外实验研究阿斯匹林对人喉癌细胞系的抑制作用,探讨阿斯匹林对喉癌细胞的抑制作用机理.方法 MTT法、3H-胸腺嘧啶(3H-TDR)掺入法、流式细胞仪测试不同浓度下阿斯匹林抑制喉癌细胞株Hep-2的增殖的程度和对细胞周期的变化,采用PI和Ho33342双染荧光显微镜下观测细胞的凋亡状况.结果阿斯匹林浓度越高对细胞的增殖抑制就越大,滞留于G0/G1期的细胞数越多.结论阿斯匹林对Hep-2细胞具有抑制增殖的作用,主要是通过细胞毒及阻止细胞进入S期来作用,其诱导凋亡的作用较小.意义为临床上使用非甾体类药物作为头颈部肿瘤预防用药提供实验室依据.     

蛤蚧蛋白组分对肝癌HepG-2细胞生长抑制作用的研究

目的 从蛤蚧组织液中筛选对肝癌HepG-2细胞具有生长抑制作用的蛋白组分,体外研究其抗肿瘤作用及机制.方法 提取蛤蚧蛋白,用sephadexG-50凝胶层析分离出不同分子量的蛤蚧蛋白组分,采用MTS法观察蛤蚧蛋白各组分对肝癌HepG-2细胞的生长抑制作用;Hoechst33342/PI双荧光染色法观察其作用前后的细胞凋亡,并用RT-PCR法检测蛤蚧蛋白组分作用后bax、bcl-2、cmyc和p53基因的表达情况.结果 sephadexG-50凝胶层析可分离出3种分子量不同的蛤蚧蛋白组分,3种蛤蚧蛋白组分都具有不同程度地抑制HepG-2细胞生长的作用,其中分子量为3～20KD的蛤蚧蛋白组分抑制作用最强,且具有剂量依赖性.Hoechst33342/PI双荧光染色法检测显示3～20KD蛤蚧蛋白作用后坏死细胞和凋亡细胞均增加,RT-PCR法检测发现3～20KD蛤蚧蛋白组分作用后c-myc基因mRNA表达水平稍降低,p53基因mRNA表达水平升高,但两者差异均无统计学意义,bax基因mRNA表达水平明显增高,差异有统计学意义,bcl-2基因在蛋白作用前后均无表达.结论 实验提取的蛤蚧蛋白对肝癌HepG-2细胞具有生长抑制作用,分子量3～2KD的蛤蚧蛋白组分抑制作用最强.其作用机制可能为蛤蚧蛋白通过调高肿瘤bax基因mRNA表达水平诱导肝癌HepG-2细胞凋亡.     

番荔枝内酯Bullatacin对人肝癌细胞株HpG2凋亡影响的探讨

目的:研究番荔枝内酯 Bullatacin在诱导人肝癌细胞株HpG2凋亡中的作用.方法:MTT法测定Bullatacin对HpG2细胞增殖的影响;采用碘化丙锭染色(PI)及荧光标记的单克隆抗体(mAb)结合流式细胞仪(FCM)分析Bullatacin对HpG2细胞周期和凋亡及Fas蛋白表达的作用;RT-PCR检测Bullatacin对Fas基因表达的影响.结果:Bullatacin (100 gg/mL)能够明显抑制人肝癌细胞株HpG2的增殖,作用96 h其生长抑制率达66.3%;Bullataein将HpG2细胞周期抑制在G0/G1期,阻止其进入G2/M期,同时能诱导细胞凋亡;Bullatacin能够明显上调HpG2细胞表面Fas蛋白的表达(P=0.006),且作用优于顺铂(P=0.03);进一步研究发现,Bullatacin能够诱导Fas基因的表达.结论:Bullatacin能够诱导HpG2细胞凋亡,其可能机制是诱导Fas基因表达从而上调Fas蛋白.本研究以Bullatacin作为一种抗肿瘤药物的研发提供理论和实验依据.     

YM155对骨肉瘤细胞系F5M2增殖和凋亡的影响

目的:探讨YM155对人骨肉瘤细胞系F5M2的作用及其机制.方法:体外培养人骨肉瘤细胞系F5M2,不同浓度YM155处理人骨肉瘤细胞系F5M2,用MTT法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测survivin mRNA的表达;蛋白免疫印迹法检测survivin、caspase-3蛋白的表达.结果:YM155可抑制人骨肉瘤细胞F5M2的增殖,且呈剂量依赖性.随着YM155浓度的升高,人骨肉瘤细胞F5M2凋亡率明显增加,同时能够降低survivin在 mRNA水平和蛋白水平的表达,以及激活caspase-3.结论:YM155能够有效抑制人骨肉瘤细胞F5M2增殖,并诱导其凋亡,其可能机制为下调骨肉瘤细胞系F5M2 survivin的表达,继而激活caspase凋亡信号通路.     

腺病毒介导PKM2 RNAi对MCF7细胞影响的研究

目的 丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)是糖酵解的关键酶之一,其M2型同工酶(PKM2)高表达于乳腺癌等肿瘤中.本研究探讨PKM2 RNAi对乳腺癌细胞MCF7系增殖、ATP产生、侵袭和细胞粘附能力的影响及其可能机制.方法 通过介导PKM2 shRNA构建重组腺病毒Ad-PKM2,用以感染人乳腺癌细胞系MCF7.病毒感染细胞24和48h后,收集细胞总蛋白行免疫印迹实验检测基因沉默的效果,CCK-8实验检测细胞增殖和粘附能力,Transwell实验检测细胞穿透人工基底膜能力,采用JC-1探针观察细胞线粒体活性并用试剂盒检测细胞ATP含量.结果 免疫印迹结果表明,腺病毒成功介导MCF7细胞发生PKM2 RNAi.病毒感染后细胞的增殖能力被抑制41.0％,P＜0.05.穿过人工基底膜的细胞减少50.2％;细胞的粘附能力下降34.7％,P＜0.05;细胞内的ATP含量从正常的90 μmol/L下降至68.3μmol/L(P＜0.05),而细胞线粒体活性并未受明显影响.结论 在乳腺癌MCF7细胞中,抑制PKM2蛋白的表达可有效抑制细胞的增殖、侵袭和粘附能力,其机制可能是减少了细胞的ATP能量供应.     

干扰素α-1b对HepG2细胞MMP-2和TIMP-2表达水平影响的研究

目的:研究α干扰素(IFN-α-1b)对人肝癌细胞系HepG2细胞MMP-2和TIMP-2表达水平的影响,探讨IFN-α抗肝细胞癌生长与转移复发的相关分子机制.方法:培养HepG2细胞,在不同剂量的IFN-α干预下,于不同时间提取上清液,通过ELISA方法检测MMP-2、TIMP-2蛋白的表达浓度.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法半定量检测IFN-α干预组与对照组MMP-2、TIMP-2基因mRNA的表达.结果:在培养HepG2细胞24及48 h后,IFN-α剂量为3 000 IU/mL时的MMP-2蛋白浓度分别为(1 725.3±300.7)及(2 899.8±343.2)ρg/mL,与空白对照组相比明显降低,差异有统计学意义,P值分别为0.001和0.000;各时间段TIMP-2浓度与对照组比较差异均无统计学意义;MMP-2、TIMP-2浓度比值较对照组显著降低,差异有统计意义,P值分别为0.003和0.001.48 h干预组(3 000 IU/mL)与对照组比较MMP-2 mRNA表达水平差异有统计学意义,F=2.711,P=0.005.结论:大剂量IFN-α可通过抑制HepG2细胞MMP-2的表达水平下调MMP-2、TIMP-2浓度比值,并呈剂量效应关系.IFN-α对HepG2细胞MMP-2表达的抑制作用在其抗肝细胞癌生长与转移复发中发挥一定作用.     

苦参碱对胃腺癌细胞SGC-7901 Bcl-2表达的影响

目的　研究苦参碱 (matrine ,Ma)对胃腺癌细胞SGC 790 1Bcl 2表达的影响。方法　Ma作用于胃腺癌细胞SGC 790 1,48h后收集细胞爬片 ,用抗Bcl 2mAb和免疫组织化学SABC法及图像分析技术分析Bcl 2。结果　Ma作用的胃腺癌细胞Bcl 2表达量A值 118.80 4± 0 .2 65 ,较对照组细胞 10 4.5 2 7± 0 .0 86下降显著 (P <0 .0 5 )。结论　Ma对胃癌细胞的凋亡诱导作用可能与其影响Bcl 2表达有关     

人红细胞-兔VX2肿瘤细胞融合疫苗的制备及其对兔VX2肿瘤复发转移的影响

目的:制备一种新型肿瘤疫苗,观察其抗肿瘤效应.方法:PEG法制备人红细胞-兔VX2细胞融合疫苗,MTT法检测疫苗体外刺激兔单核细胞增殖的作用,观察疫苗治疗对兔VX2肿瘤复发转移的影响.结果:融合疫苗体外显著刺激单核细胞增殖,后者能特异性杀伤VX2靶细胞,疫苗治疗能显著降低VX2肿瘤的复发转移率.结论:人红细胞-兔VX2细胞融合疫苗体内外均可诱导特异性抗肿瘤免疫效应,该疫苗为研究人肿瘤细胞融合疫苗提供了支持.     

ZD6474对鼻咽癌细胞株CNE2抑制作用及其机制的探讨

目的:研究ZD6474对鼻咽癌细胞株CNE2的抑制作用.方法: 采用MTT 法测定ZD6474的抑制浓度(IC50) ,流式细胞仪检测ZD6474的凋亡率及细胞周期分布.结果: MTT数据显示,CNE2细胞的抑制率与ZD6474浓度成正相关,随ZD6474浓度升高,抑制作用越明显,IC50=2.531 μmol/L;流式细胞术分析显示,ZD6474处理48 h使CNE2细胞凋亡率明显升高[(24.02±5.90)%],且随浓度升高凋亡率升高越明显,P<0.001.细胞周期结果显示,ZD6474使细胞周期S期[(34.96±5.37)%]比例下降,G0/G1期[(56.25±1.45)%]和G2/M期[(17.36±5.73)%]比例升高.结论: ZD6474能明显抑制CNE2细胞的增殖,促进其凋亡并改变其细胞周期的分布.     

pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响

背景与目的:精卵融合是发生在受精过程中的重要生物学事件,Izumo是位于顶体内膜上的I型免疫球蛋白,是一种具有精子特异性的膜蛋白,在精卵融合中起关键作用.我们研究pCXN2-mIZUMO在小鼠C57BL/6肌肉中的表达及对其生育能力的影响,为进一步研究免疫避孕手段提供实验依据.材料与方法:用重组质粒pCXN2-mIZUMO分别免疫雌和雄性C57BL/6小鼠.ELISA测定小鼠体内的抗Izumo抗体水平,检测小鼠抗血清在体外受精中对受精率的影响,被免疫的雌性、雄鼠分别与正常的雄、雌鼠交配,雌雄合笼比例为2:1,分娩完成后统计其产仔数.结果:pCXN2-mIZUMO可以在小鼠体内诱发抗Izumo特异性免疫应答.被pCXN2-mIZUMO免疫后的小鼠抗血清在体外能够降低其受精率;各组产仔数分别为:实验雌鼠组2.9±0.66;对照雌鼠组5.4±0.82;实验雄鼠组5.1±0.99;对照雄鼠组6.0±1.34.实验雌鼠组的生育能力比对照雌鼠组明显降低(P＜0.05).结论:重组质粒pCXN2-mIZUMO免疫雌性小鼠具有降低生育能力的作用.     

重组痘苗病毒介导的IL-2基因对小鼠Lewis肺癌的体内药效学研究

目的应用重组痘苗病毒介导的IL-2对小鼠Lewis肺癌直接进行局部转染,并对其疗效进行观察和评价.方法本项研究采用缺陷型重组痘苗病毒为载体,经同源重组,筛选出IL-2基因的rW-IL-2,体外转染小鼠Lewis肺癌,对其疗效进行观察.结果短期内即可检出IL-2的表达,并且免疫原性也得到提高.用该载体以in vivo方式原位转染荷瘤小鼠局部;激活了小鼠体内的CTL、LAK及NK细胞,显著抑制了小鼠肿瘤的生长,部分小鼠未能形成肿瘤.结论提示重组痘苗病毒为载体介导的IL-2基因治疗具有良好的前景.     

中枢神经系统对2次照射的耐受性

在临床工作中 ,经常会遇到因中枢神经系统原发或继发性肿瘤放射治疗后复发或未控的病例 ,这些患者 2次放射治疗就成为不可避免。由于中枢神经系统重要的功能 ,使放射治疗医生对其 2次放射治疗时心存疑虑。中枢神经系统对 2次放射治疗的耐受性如何 ?对放射损伤的修复如何 ?成为众多放射治疗医生关注的重要问题。笔者就一些动物实验和临床资料 ,对该问题做一综述 ,希望对大家有所帮助。1.实验动物脊髓对 2次照射的耐受性脊髓对 2次照射的耐受性在啮齿类动物进行了广泛的研究 ,观察指标是轻瘫 ,发生在照射后 10～ 12个月内 ,并对中位轻瘫剂量进…     

人参皂甙 Rh2 联合顺铂对食管癌细胞的杀伤作用

目的：体外观察低剂量人参皂甙Rh2（ginsenoside Rh2,GS-Rh2）对抗肿瘤药顺铂（cisplatin,DDP）杀伤人食管癌细胞株Eca109的影响,并探讨其可能的作用机制.方法：人食管癌细胞Eca109经培养符合条件后,分别加用0.3μg/ml DDP（A组）、20μmol/ml GS-Rh2（B组）、0.3μg/ml DDP＋20μmol/ml GS-Rh2（C组）、对照组（D组）处理48小时.流式细胞仪检测各组细胞凋亡率和死亡率.高效液相色谱检测各组细胞内DDP的药物浓度.蛋白质印迹法检测各组细胞中p53表达.结果：细胞凋亡率和死亡率C组显著高于A、B两组（P＜0.05）;C组细胞内DDP的药物浓度显著高于A组细胞（P＜0.05）;C组细胞p53表达水平低于A组（P＜0.05）.结论：体外低剂量GS-Rh2能增强DDP对人食管癌细胞Eca109的杀伤作用,其作用机制可能与降低细胞内p53表达有关.     

双歧杆菌对实验性大肠癌化bcl-2及bax基因表达的影响

目的 通过观察大肠癌裸鼠移植瘤bcl-2及bax基因的蛋白表达水平,探讨双歧杆菌的抑瘤途径及机制.方法 采用免疫组化SP法检测了40只裸鼠大肠癌移植瘤bcl-2及bax基因的蛋白表达率及表达强度.结果 双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤bcl-2蛋白表达率及阳性细胞密度均低于肿瘤对照组,bax基因的表达情况则相反.结论 双歧杆菌可使大肠癌裸鼠移植瘤的bcl-2基因表达下调,bax基因表达增强,最终诱导肿瘤细胞凋亡,实现其抗瘤目的.