不同因素对诱导肿瘤患者cik细胞体外增殖能力及杀伤活性的影响

目的研究不同因素对诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells,CIK)体外增殖能力及杀伤活性的影响。为肿瘤CIK细胞治疗提供实验依据。方法细胞计数法及MTT法测定CIK细胞的增殖能力及杀伤活性。结果低年龄组较高年龄组CIK细胞体外增殖能力及杀伤活性强;在无血清培养基条件下培养的CIK细胞的体外增殖能力及杀伤活性较完全培养基的强;在一定的培养时间内CIK细胞的体外增殖能力与培养的时间成正比;CIK细胞对各种肿瘤细胞均有杀伤作用。结论不同因素对肿瘤患者CIK细胞体外增殖能力及杀伤活性有影响。     

体外利用MGc80-3胃癌细胞诱导肿瘤杀伤细胞的实验研究

以健康人外周血单个核细胞作为肿瘤杀伤细胞的前体细胞，ＭＧｃ８０ ３胃癌细胞作为刺激细胞，在体外进行同种异体淋巴细胞和肿瘤细胞混合培养之后，单独加入重组白介素 ２和同时加入重组白介素 ２、抗ＣＤ３单克隆抗体，分别诱导出Ｌ 肿瘤杀伤细胞和ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞．用噻唑蓝比色法在体外检测其对ＭＧｃ８０ ３胃癌细胞的杀伤活性，并与淋巴因子 激活杀伤细胞、ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞相比较结果显示，ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞的杀伤活性最高．在倒置显微镜下及透射电镜下观察ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞对ＭＧｃ８０ ３胃癌细胞的杀伤过程，发现ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞首先接触、粘附靶细胞，以细胞坏死和细胞凋谢的方式杀伤肿瘤细胞     

新型宫颈癌治疗性疫苗肿瘤杀伤作用

目的研究新型治疗性疫苗NTV的体内外宫颈癌杀伤作用。方法采用51Cr释放法研究脾淋巴细胞对宫颈癌细胞TC-1的体外杀伤活性,将正常小鼠体内激活的免疫活性细胞输给荷瘤小鼠,采用过继性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)转移实验研究CTL的体内抗肿瘤作用。结果 CTL杀伤实验设置的效应细胞与靶细胞数量比分别为3:1、10:1及30:1,51Cr释放分析结果显示,疫苗NTV能够显著诱导脾淋巴细胞的肿瘤特异性杀伤作用,杀伤作用呈剂量依赖性变化,杀伤效率最高可达到53.5%;疫苗NTV在过继性CTL转移实验中的肿瘤抑制率为64.7%,上述结果均与阴性对照组有统计学差异(P<0.05)。结论疫苗NTV在体内外对宫颈癌细胞均具有良好的杀伤作用。     

负载肿瘤抗原的树突状细胞疫苗诱导CTL的抗肿瘤效应

目的:探讨负载肿瘤抗原的树突状细胞(DC)疫苗诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的体外杀瘤作用及对荷瘤小鼠的治疗作用.方法:体外培养的小鼠骨髓树突状细胞用小鼠结肠腺癌细胞株CT26细胞抗原冲击致敏制备负载肿瘤抗原的DC疫苗;负载肿瘤抗原的DC疫苗激活同源T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL),采用乳酸脱氢酶(LDH) 4 h释放法检测CTL在体外对CT26细胞的杀伤活性;建立CT26荷瘤小鼠模型,应用CTL治疗荷瘤小鼠,观察肿瘤大小和小鼠存活期.结果:负载CT26肿瘤抗原的DC疫苗能够诱导T细胞增殖分化为肿瘤特异CTL,该CTL对CT26细胞有高效而强烈的杀伤作用,杀伤率为(83.95±11.25)%,而对B16细胞、3LL Lewis 细胞无明显杀伤作用,杀伤率分别为(12.75±5.36)%和(11.38±4.57)%.应用CTL治疗荷瘤小鼠能显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠存活期.结论:负载肿瘤抗原的DC疫苗能够诱导高效而特异的CTL杀瘤活性并能治疗荷瘤小鼠.提示负载肿瘤抗原的DC疫苗诱导的CTL可能在肿瘤的免疫治疗中发挥重要作用.     

树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外对自体肝癌细胞杀伤活性的研究

目的探讨树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)体外对自体肝癌细胞杀伤活性.方法从肝癌患者外周血获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤抗原激活DC,然后用DC来激活TIL,观察TIL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性.结果DC激活的TIL具有很高的对自体肝癌细胞杀伤活性,杀伤率为(89.39±3.05)%,明显高于未经DC激活的TIL、CD激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体肝癌细胞的杀伤率.结论肝癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗肝癌免疫.     

树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外对自体肝癌细胞杀伤活性的研究

目的:探讨树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)体外对自体肝癌细胞杀伤活性.方法:从肝癌患者外周血获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤抗原激活DC,然后用DC来激活TIL,观察TIL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性.结果:DC激活的TIL具有很高的对自体肝癌细胞杀伤活性,杀伤率为(89.39±3.05)%,明显高于未经DC激活的TIL、CD激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体肝癌细胞的杀伤率.结论:肝癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗肝癌免疫.     

树突状细胞活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞对大鼠原发性肝癌细胞的体外杀伤作用研究

目的　研究负载肿瘤抗原的树突状细胞活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞对原发性肝癌细胞的杀伤效应，探讨其用于临床治疗的可行性，并为其应用提供实验依据。方法　联合应用粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-4和肿瘤坏死因子－α等，对大鼠骨髓单个核细胞进行体外诱导，同时加入大鼠原发性肝癌细胞株CBRH-7919细胞匀浆粗提物进行刺激，制备负载肿瘤抗原的树突状细胞后，活化同基因大鼠的脾脏细胞，制备特异性细胞毒性T淋巴细胞，并采用MTT法检测效应细胞对CBRH-7919的杀伤效果，同时与效应细胞对K562的杀伤率进行比较。结果　大鼠骨髓单个核细胞诱导的负载肿瘤抗原的树突状细胞活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞对CBRH-7919具有较高的特异性杀伤作用。     

EBV特异性细胞毒淋巴细胞的体外诱导和对鼻咽癌细胞的杀伤活性

目的 探索体外诱导和扩增EBV特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)的方法,探讨其应用于鼻咽癌(NPC)治疗的可能性.方法 用EB病毒转化的B淋巴细胞系为抗原递呈细胞及抗原刺激剂,经照射灭活后刺激自体外周血单个核细胞(PBMC),产生EBV特异性CTL,以抗人CD3抗体OKT-3/同种异体PBMC法扩增.并检测其对NPC细胞的特异性杀伤.结果 在体外有效诱导和扩增了EBV特异性的CTL.扩增前CTL对自体BLCL的杀伤率为76%,对同种异体BLCL的杀伤率为13%,对自体肿瘤细胞的杀伤率为51%,对CNE鼻咽癌细胞的杀伤率为27%.扩增后的杀伤率分别为63%、25%、49%、33%.扩增后CTL对肿瘤杀伤力没有明显下降.结论 EBV特异性CTL能在体外有效地诱导,对NPC细胞有特异性的杀伤力,能在体外大量地扩增,且扩增后对肿瘤的杀伤力没有明显下降,有望成为NPC患者有效的过继免疫治疗方法.     

肿瘤疫苗对小鼠肝癌作用的研究

目的 :通过动物实验评价肿瘤疫苗对肝癌的防治作用 ,为临床应用提供实验依据。方法 :用小鼠肝癌细胞系MM45T .Li经过化学修饰制成肿瘤疫苗免疫小鼠 ,然后再用该细胞系接种于小鼠腋下。分别观察免疫鼠及未免疫小鼠的肿瘤生长情况 ,进行病理学检查 ;并用3H -TdR释放法检测小鼠脾细胞对MM45T .Li细胞的杀伤能力差异。结果 :①经肿瘤疫苗免疫的小鼠的肿瘤生长速度明显低于未免疫小鼠 ;②病理学检查发现免疫鼠肿瘤组织内大量淋巴细胞浸润 ,未免疫鼠内罕见淋巴细胞浸润 ;③3H -TdR释放实验显示免疫鼠脾细胞对MM45T .Li细胞的杀伤能力明显高于未免疫鼠。结论 :按我们现行方法制备的肿瘤疫苗能激活小鼠抗肝癌的免疫反应 ,抑制肝癌的生长 ,但完全保护作用尚不明确     

骨肉瘤特异杀伤性T淋巴细胞的体外扩增

目的 研究骨肉瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）体外扩增培养的方法，并进行细胞毒检测。方法 抽取骨肉瘤患自身的外周血，分离淋巴细胞，用IL-2体外短期刺激方法提高对骨肉瘤细胞的免疫性，再按一定比例体外与多西紫杉醇处理的骨肉瘤细胞及巨噬细胞混合培养（MTLC）可获得骨肉瘤的特异性CTL细胞，进行鉴定并观察其杀伤特性。结果 混合培养4d后，即可扩增出大量淋巴细胞，流式细胞仪证实主要是CD8^ 细胞，这些具有杀伤活性的CTL细胞体外对自身肿瘤细胞有很强的细胞毒作用。结论 在IL-2作用下，应用巨噬细胞、自体肿瘤细胞及淋巴细胞体外混合培养，是体外扩增特异性细胞毒性T淋巴细胞的较好方法，CTL作为新的特异性免疫治疗方法有望提高骨肉瘤的免疫治疗效果。     

细胞因子诱导的杀伤细胞影响肿瘤微环境的研究

目的：探讨细胞因子诱导的杀伤细胞对肿瘤微环境的影响及肿瘤生物治疗的有效评价体系。方法：取肿瘤患者外周血进行体外扩增培养细胞因子诱导的杀伤细胞并回输患者体内,检测回输前、后患者体内肿瘤标志物及淋巴细胞亚群的变化情况。结果：治疗后较治疗前,患者体内肿瘤标志物CA125和CEA 等明显下降,淋巴细胞亚群中CD8＋细胞及N K细胞明显升高（ P＜0．05）。结论：生物治疗通过调控肿瘤微环境来抑制肿瘤细胞生长,肿瘤标志物和淋巴细胞亚群可以作为有效的生物治疗疗效评价指标。     

树突状细胞活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞对大鼠原发性肝癌细胞的体外杀伤

目的：研究负载肿瘤抗原的树突状细胞活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞对原发性肝癌细胞的杀伤效应,探讨其用于临床治疗的可行性,并为其应用提供实验依据。方法：联合应用粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子,白细胸介素－4和肿瘤坏死因子－a等,对大鼠骨髓单个核细胞进行体外诱导,同时加入大鼠原发性肝癌细胞株CBRH－7919细胞匀粗提物进行刺激,制备负载肿瘤抗原的树突状细胞后,活化同基因大鼠的 脾脏细胞,制备特异性细胞毒性T淋巴细胞,并采用MTT法检测效应细胞对CBRH－7919的杀伤效果,同时与效应细胞对K562的杀伤率进行比较。结果：大鼠骨髓单个核细胞诱导的负载肿瘤抗原的树突状细胞活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞对CBRH－7919具有较高的特异性杀伤作用。结论：负载肿瘤抗原的树突状细胞对原发性肝癌的治疗有潜在的临床应用前景。     

人卵巢癌细胞特异CTL系的免疫学特性初步研究

目的 探讨人卵巢癌细胞体外刺激、诱导的肿瘤特异细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶细胞的杀伤活性。方法 应用建株的人卵巢癌细胞（OVA－319），在体外定期刺激、诱导肿瘤患者外周血淋巴细胞，经微量淋巴细胞毒试验和流式细胞术分别测定扩增的淋巴细胞组织相容性白细胞抗原（HLA）Ⅰ类分子表型和膜表面免疫标志物，并通过4－甲基偶氮唑盐（MTT）法分析其对肿瘤细胞的杀伤活性。结果 经卵巢癌细胞刺激、诱导3周后扩增的淋巴细胞主要为T细胞抗原受体（TCR）－α、β及CD8阳性的CTL，具有明显特异性杀伤肿瘤细胞的作用，并发现经OVA－319细胞刺激、诱导后不同个体的卵巢癌患者CTL的杀伤活性与效靶细胞的HLA－A、B位点相同数成正比。结论 肿瘤细胞体外激活的CTL具有特异杀伤靶细胞作用，提示CTL特异杀伤作用与刺激细胞、靶细胞及本身CTL表型的HLA－A、B位点密切联系。     

树突状细胞疫苗联合CpG-ODN对膀胱肿瘤细胞的免疫学效应研究

目的 探讨负载肿瘤抗原的树突状细胞(DC)疫苗联合含未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤(CpG)序列的寡脱氧核糖核苷酸(CpG-ODN)对膀胱肿瘤细胞的免疫学效应.方法 用小鼠BTT739细胞反复冻融抗原致敏培养第7天的DC,48h后分别加入CpG-ODN及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导DC成熟,制备负载肿瘤抗原的DC疫苗,灭活后用于刺激T淋巴细胞制备效应细胞(CTL),乳酸脱氢酶释放实验测定各组CTL对BTT739细胞的杀伤活性,ELISA法测定效应细胞培养上清液的干扰素-γ(IFN-γ)水平,同时检测了CTL对自体淋巴细胞的杀伤活性.结果负载肿瘤抗原的DC诱导的效应细胞分泌较高水平的IFN-γ,并对BTT739细胞具有较高的杀伤效应,CpG-ODN活化的DC疫苗诱导的效应细胞分泌IFN-γ水平及对肿瘤细胞的杀伤活性均高于TNF-α活化的DC疫苗诱导的效应细胞(P<0.01).DC疫苗对自体淋巴细胞无明显免疫杀伤活性.结论 CpG-ODN可增强负载肿瘤抗原的DC疫苗对膀胱肿瘤细胞的免疫杀伤效应,并且对自体淋巴细胞无免疫杀伤活性,为膀胱癌的免疫治疗提供了实验基础.     

CD3AK细胞抗肿瘤作用与MHC限制性关系

目的 研究抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(anti-CD3McAb activated killer cells,CD3AK细胞)杀伤肿瘤细胞作用与MHC限制性的关系。方法 采用微量淋巴细胞毒实验方法测定CD3AK细胞及肿瘤细胞MHC表型，用MTT法测定CD3AK细胞杀伤活性。结果 (1)不同人来源的CD3AK细胞，其MHC表型不同，但对同种肿瘤传代细胞都有很强的杀伤作用，且不同人来源的CD3AK细胞间杀伤作用差异无显著性(P＞0．05)；(2)同一来源CD3AK细胞对不同肿瘤传代细胞株(MHC表型不同)的杀伤作用差异无显著性(P＞0．05)；(3)人外周血诱导的CD3AK细胞对鼠肿瘤细胞株(Yac—1)与对人肿瘤传代细胞株(K—562，Raji)一样具有很强的杀伤作用。结论 CD3AK细胞杀伤肿瘤的作用是非MHC限制的，在临床应用中可用正常人外周血诱导得到的CD3AK细胞体外培养增殖后输给肿瘤病人进行治疗。该效应细胞来源方便，可用于肿瘤术后清除残留肿瘤细胞，具有重要应用价值。     

热休克诱导艾氏腹水癌细胞的抗肿瘤效应

目的研究热休克后的肿瘤细胞内多种热休克蛋白(HSP)的抗肿瘤效果及其作用机理。方法应用丝裂霉素C(MMC)灭活经43℃热休克2 h或14 h的小鼠艾氏腹水癌细胞(EAC),以此作抗原进行体内肿瘤免疫保护试验及小鼠淋巴细胞体外肿瘤杀伤实验。结果经43℃热休克2 h或14 h的EAC细胞攻击后,小鼠淋巴细胞对EAC细胞杀伤率分别为67.6%、80.6%,与对照组比较均有显著性差异(P<0.05,P<0.01);腹水生成量明显低于对照组(P<0.05)。结论热休克后的EAC细胞内的HSPs表达增多,并随热休克时间的延长而增加,其免疫效果也相应增强与多种HSPs的联合作用有关。     

体外抗原激活的CD4+T淋巴细胞以TGF-β1非依赖的途径抑制NK细胞的杀伤功能

目的初步探讨体外抗原激活的CD4^＋T淋巴细胞对NK细胞杀伤毒性的影响及其机制。方法免疫磁珠方法获得BALB/c小鼠CD4^＋T淋巴细胞和NK细胞,异种皮肤抗原刺激CD4^＋T淋巴细胞后,与NK细胞共培养,并加入TGF-β1抗体后,分别应用51Cr标记的YAC-1检测24、48、72、96h NK细胞的杀伤毒性。结果异种皮肤抗原激活的CD4^＋T淋巴细胞能够持续抑制NK细胞杀伤毒性,在检测的时相点内,其抑制率分别为：39%、37.5%、26.3%和15.9%,加入TGF-β1抗体后,抑制率无明显变化。结论体外用抗原激活的的CD4^＋T淋巴细胞能够持续显著抑制NK细胞杀伤毒性,而且这种作用是TGF-β1非依赖的。     

CD3单抗、CD28/CpGODN共刺激活化的PBMC对膀胱癌细胞杀伤作用的研究

目的探讨CD3单克隆抗体与CD28/CpGODN共刺激活化PBMC在体外对膀胱癌细胞株T24及Scarber杀伤强度及杀伤作用机理.为膀胱癌的过继免疫治疗提供新的效应细胞.方法 MTT法检测活化细胞的体外淋巴细胞毒作用,并用电镜观察效应细胞杀伤膀胱癌细胞的超微结构.结果 CD28共刺激细胞对T24杀伤作用较强,达到69.35%±1.17%,而CpGODN诱导的活化细胞对Scarber杀伤较强,达到63.11%±2.03%.且效应细胞靶细胞均需达到201才达到半数杀伤作用.电镜结果显示,效应细胞作用6小时肿瘤细胞就大部分发生坏死,部分肿瘤细胞可见凋亡,说明效应细胞是通过诱导肿瘤细胞坏死及凋亡实现杀伤作用的.结论 CD28单抗协同诱导的效应细胞对T24杀伤效果较好,而CpGODN刺激细胞对 Scarber杀伤较强,活化的淋巴细胞杀伤膀胱癌细胞是通过坏死及凋亡两条途径来实现的.     

肿瘤浸润淋巴细胞及中药调节其活性的研究进展

肿瘤浸润淋巴细胞 (Ｔｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａｉｎｇｌｙｍｐｈｃｙｔｅｓ ,ＴＩＬ)是种渗入到肿瘤组织内的抗肿瘤效应细胞 ,其活性及表型分布与恶性肿瘤发生、发展直接相关 ,具有重要潜在价值。近年 ,随着ＴＩＬ分离制备技术和体外扩增培养方法的建立 ,ＴＩＬ在免疫生物学和功能研究方面进展快速 ,已经从实验研究进入临床应用研究 ,显示了良好前景。1　ＴＩＬ及其抗肿瘤作用1.1　ＴＩＬ表型及其杀伤机制一般认为 ,ＴＩＬ表型有两个特点 :一是异质性 ,一是变化性。ＴＩＬ是以淋巴细胞为主的异质性淋巴细胞群体 ,主要由ＣＤ3+Ｔ细胞组成 ,…     

脐带血树突状细胞疫苗体外诱导杀伤人肝癌细胞

目的 :制备人脐带血来源的树突状细胞 (DC )疫苗 ,并观察其在体外对人肝癌细胞的杀伤活性。方法 :rhGM CSF10 0 μg/mL、rhTNF α 5 0u/mL诱导人脐带血CD3 4+ 干细胞向DC分化 ,用超声破碎的人肝癌细胞BEL 740 2裂解物冲击DC ,制备DC疫苗。活细胞计数和中性红比色法检测DC疫苗致敏的脐带血或外周血淋巴细胞在体外对BEL 740 2的杀伤活性。结果 :脐带血CD3 4+ 细胞在细胞因子诱导下 ,细胞体积增大 ,变为不规则形 ,细胞数量增多 ,形成细胞集落。在培养后期集落周围的细胞伸出长的树枝状突起并不断从集落脱落下来。活细胞计数和中性红比色法显示负载肿瘤抗原的DC致敏的淋巴细胞在体外对BEL 740 2的杀伤活性明显强于未致敏的淋巴细胞 (P <0 0 1) ,DC致敏的脐带血来源淋巴细胞和DC致敏的外周血来源淋巴细胞的杀伤活性分别为 44 0 9%和 47 92 % (P >0 0 5 )。结论 :人脐带血干细胞在细胞因子的诱导下扩增并分化为DC。经肝癌细胞裂解抗原致敏、人脐带血来源的DC疫苗 ,能增强淋巴细胞对相应人肝癌细胞的体外杀伤效应 ,而且DC疫苗对脐带血来源的初始型淋巴细胞和外周血来源的淋巴细胞有同样的激活作用