小黄鱼抗氧化肽制备条件的响应面优化

目的：优化胰蛋白酶(PTN 6.0S)酶解小黄鱼制备抗氧化肽的条件。方法：以酶解产物对1,1-二苯基苦基苯肼 (DPPH)自由基的清除率为指标,通过单因素试验及响应曲面法优化酶解条件。结果：酶解条件在pH7.0、温度52℃、时间19h、底物质量浓度4.2g/100mL,酶与底物比6‰时,产物对DPPH自由基的清除率达到最大值(46.90±0.3)%。响应面分析表明,酶解时间对产物的抗氧化活性有显著影响;温度与酶与底物比、时间与底物质量浓度、酶与底物比与底物质量浓度在酶解工艺中存在复杂的交互作用。     

脱脂米糠抗氧化肽的制备工艺研究

为了得到脱脂米糠抗氧化肽的最佳制备工艺,研究了胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶酶解脱脂米糠蛋白的进程特性以及不同的酶解条件对脱脂米糠抗氧化肽活性的影响。从5种蛋白酶中筛选出最合适的酶,通过单因素实验考察了底物浓度、加酶量、pH、温度以及时间对酶解产物水解度和ABTS自由基清除率的影响,在单因素实验的基础上,以酶解产物的ABTS自由基清除率为响应值,进行Box-Behnken中心组合实验。结果表明:选用碱性蛋白酶制备脱脂米糠抗氧化肽效果最好;最佳酶解工艺条件为加酶量1.8%、温度50℃、时间276 min、pH9.0、底物浓度5%;在最佳酶解工艺条件下,所得脱脂米糠抗氧化肽对ABTS自由基清除率可达71.85%。     

响应面法优化受精蛋蛋清制备抗氧化肽酶解工艺

以酶解产物的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-（2,4,6-trinitrophenyl）hydrazyl,DPPH）自由基清除率为指标,在单因素试验的基础上,选择酶解温度、pH值、底物质量浓度、加酶量4 个因素,通过Box-Behnken试验设计和响应面分析法优化酶解受精蛋蛋清制备抗氧化肽的最佳工艺条件。结果表明：在酶解温度46 ℃、pH 9.1、底物质量浓度4.28 g/100 mL、加酶量21 000 U/g条件下,所得酶解产物的DPPH自由基清除率活性最强,达到84.97%。碱性蛋白酶酶解得到的产物具有较强的抗氧化活性,优化工艺条件与理论预测拟合度高。     

响应面优化酶解法制备蒲公英籽蛋白抗氧化肽工艺

以蒲公英籽蛋白质抽提物为原料,采用响应面分析法(RSM)优化酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺。采用碱性蛋白酶酶解制备蒲公英籽抗氧化肽,以酶解产物对DPPH自由基清除力为评价指标,考察酶解p H、底物浓度、酶底比及酶解温度对酶解产物抗氧化活性的影响。在单因素实验的基础上,采用三因素三水平的响应面分析法确定酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺,同时建立酶解工艺的二次项数学模型并验证其可靠性。以酶解时间、酶底比和酶解p H为自变量,研究这3个因素的交互作用及最佳酶解工艺条件并进行验证。研究表明,对酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺的影响因素主次顺序为:p H酶底比酶解时间,最佳酶解工艺条件:酶解时间4.90 h,p H8.5和酶底比7.80%。在最佳工艺条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为79.13%。     

酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的研究

为优化Alcalase蛋白酶酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的工艺条件,以DPPH自由基清除率作为指标,通过单因素试验考察酶解温度、底物浓度、酶与底物浓度比([E]/[S])、酶解pH和时间对DPPH自由基清除率的影响,在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计,建立并分析各因素与清除率之间关系的数学模型;并对酸枣仁蛋白酶解产物的氨基酸组成及含量进行分析。结果表明:酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的最佳工艺条件为酶解温度51.2℃、酶解pH8.1、底物浓度4.7%,在此条件下DPPH自由基清除率的最大理论值为91.59%,该回归模型具有较好的预测性能,可用于指导生产实践。酸枣仁蛋白酶解产物共含有17种氨基酸,富含脯氨酸、甘氨酸和谷氨酸。     

酶菌协同处理对微拟球藻营养功能成分及生物活性的影响

为提高微拟球藻开发利用价值，本文开展了酶菌协同处理对微拟球藻营养功能成分及生物活性影响的研究。采用木瓜蛋白酶酶解微拟球藻，利用单因素和响应面试验获得其最佳酶解工艺，随后通过益生菌发酵酶解基质，研究发酵前后总酚、多肽和黄酮含量以及体外抗氧化和降血脂活性的变化，并对发酵后的微拟球藻酶液进行感官评价。结果表明：微拟球藻的最佳酶解工艺为：酶量5.0%、pH8.0、酶解时间4.0 h、酶解温度76℃；在此条件下酶解后发酵可有效提高产物中多肽的含量，其中混菌发酵组提高了近1.3倍，总酚含量提高了5.1%，同时总黄酮的含量降低了32.5%；酶菌协同处理显著增强了其抗氧化和胰脂肪酶抑制活性，其中混菌发酵组DPPH自由基清除率提高了1.2倍，胰脂肪酶清除率提高了59.4%。此外，发酵后感官评分显著提升。可见，酶菌协同发酵可显著提高微拟球藻多肽含量、抗氧化活性、降血脂活性及感官特性，为开发功能型发酵产品提供了参考和技术支持。     

响应面优化酶解核桃蛋白制备抗氧化肽的工艺

为优化碱性蛋白酶酶解核桃蛋白制备抗氧化活性肽的工艺条件,考察酶解条件对酶解产物的抗氧化活性的影响。以羟基自由基的清除率、超氧阴离子自由基的清除率、还原能力为考察指标,使用响应面分析法,研究温度、pH值、底物浓度和酶添加量对制备抗氧化活性肽工艺的影响。经过优化得出最优酶解条件为:温度51℃、pH值8.13、底物浓度3.16%、酶添加量3.30%,在此最优条件下核桃多肽对羟基自由基的清除率为55.93%、对超氧阴离子自由基的清除率为47.85%、还原能力为55.34%。在10mg/mL的浓度下,核桃多肽的还原能力是VC的55.3%,对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别是VC的93.8%和52.2%。     

酶法制备乳源抗氧化肽的工艺研究

酶解产物以清除DPPH自由基能力为指标,由3种食品级蛋白酶确定制备乳源蛋白抗氧化肽的最佳蛋白酶种类及其酶解工艺,考察其酶解产物的抗氧化能力。结果表明:中性蛋白酶是制备乳源蛋白抗氧化肽的优选蛋白酶,酶解工艺为温度45℃,pH为6.0,酶解时间2.5 h,底物浓度4.5%。     

响应面法优化坛紫菜抗氧化肽酶法制备工艺

以坛紫菜为原料,通过酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和纤维素酶酶解制备活性肽,以DPPH自由基清除率和多肽得率为评价指标,研究坛紫菜水解肽的抗氧化能力。结果表明:5种酶的酶解产物都具有抗氧化能力,中性蛋白酶酶解产物DPPH自由基清除率最高,选择它为最佳工具酶。通过单因素和响应面试验优化酶解工艺,得到最佳酶解工艺:酶解时间3.6 h、酶解温度47℃、酶用量16362 U/g、底物浓度3.0%、pH7.0。此条件下制备得到的水解肽具有较强抗氧化能力,DPPH自由基清除率可达(91.83±0.81)%。     

亚麻籽粕抗氧化肽制备工艺的响应面法优化

以亚麻籽粕蛋白为原料,酶解制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为实验指标,通过单因素实验,筛选最佳蛋白酶并考察底物浓度、酶添加量、温度、pH及时间等对酶解物抗氧化能力的影响。在单因素实验基础上,采用响应曲面法进行酶解工艺条件的优化。结果表明:采用胰蛋白酶作为最适酶,酶解的最佳工艺条件为:底物浓度2%,温度37 ℃,酶解时间3.00 h,加酶量为4000 U/g,pH8.5,在该条件下,1 mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率及超氧阴离子自由基清除率分别为(63.64%±0.023%)和(19.98%±0.098%),0.5 mg/mL酶解产物的ABTS自由请清除率为(88.11%±0.059%)。说明亚麻籽粕抗氧化肽具有良好的抗氧化活性。     

鸭肉蛋白源抗氧化肽的酶法制备工艺

以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为指标,采用响应曲面法（response surface methodology,RSM）优化胃蛋白酶制备鸭肉抗氧化肽的最佳酶解工艺条件。结果表明：以底物质量浓度、酶与底物质量比和酶解时间为自变量,以DPPH自由基清除率为响应值,得到的回归方程拟合度高（R2=0.995 7,R2Adj=0.992 7）。其中酶与底物质量比对DPPH自由基清除率的影响最大,其次是酶解时间,底物质量浓度的影响最小。胃蛋白酶的最优酶解工艺条件为底物质量浓度10.89 g/100 mL、酶与底物质量比0.013%、酶解时间3.54 h,此时DPPH自由基清除率的理论值可达84.23%,通过优化验证实验测得,在最优酶解条件下,DPPH自由基清除率的实际值为（83.57±0.20）%。     

水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽工艺的研究

实验是以水牛奶为原料,分离纯化后得到乳清蛋白。利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶5种不同的蛋白酶对水牛奶乳清蛋白酶解以制备抗氧化活性多肽。酶筛选结果显示,中性蛋白酶是最适宜酶解水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽,其酶解液的还原能力和DPPH自由基清除率较其他4种酶高。探讨酶解反应时pH、温度、时间、酶浓度对酶解反应的水解度、酶解液的还原能力和DPPH自由基的清除率的影响,在单因素试验基础上,采用响应面法对酶解工艺进行优化。结果表明,中性蛋白酶酶解乳清蛋白的最佳工艺参数为:pH为7.4,温度为50.5℃,酶与底物浓度比为2.1%,酶解时间5.0h,此时2mg/mL酶解物的DPPH自由基清除率为32.58%。实测结果与预测值吻合效果良好。     

Plackett-Burman和Box-Behnken试验优化苦荞蛋白酶解制备抗菌肽的工艺

用中性蛋白酶酶解苦荞蛋白制备抗菌肽,以抑菌率和肽质量浓度为响应值,在底物质量分数、加酶量、pH值、酶解温度和酶解时间5个单因素试验基础上,采用Plackett-Burman试验选出其中影响显著的因素,再以肽质量浓度为评价指标,用Box-Behnken试验优化抗菌肽制备工艺。最佳工艺为:底物质量分数3.22%、加酶量4 000 U/g、pH 6.86。在此条件下,苦荞蛋白酶解产生的肽质量浓度为32.41 mg/mL(预测值为32.12 mg/mL),对大肠杆菌抑菌率为(27.88±2.78)%,对金黄色葡萄球菌的抑菌率为(94.56±0.74)%。结果表明,优化中性蛋白酶酶解苦荞蛋白制备抗菌肽工艺合理。     

复合酶协同水解法制备绿豆抗氧化多肽

研究复合酶协同水解法制备绿豆抗氧化活性多肽的最佳条件,并探究其体外抗氧化活性。以水解度为指标,在单因素实验的基础上,以pH、温度、底物浓度、酶用量为实验因素,通过L₉(34)正交实验设计筛选出制备绿豆多肽的最佳水解条件,使用DPPH自由基、超氧阴离子自由基及羟自由基的清除能力评价其抗氧化活性。结果表明:复合酶协同水解绿豆蛋白的最适反应条件为pH8.5,温度56 ℃,底物浓度8%,酶用量4%,水解度可达到33.95%。所得绿豆抗氧化多肽对DPPH自由基、超氧阴离子自由基及羟自由基清除率分别为82.8%、76.82%和56.85%,具有较强的抗氧化活性,在天然抗氧化剂和保健食品领域有一定的开发利用价值。     

啤酒糟醇溶蛋白酶法水解及水解产物的抗氧化研究

用碱性蛋白酶(Alcalase)对啤酒糟醇溶蛋白进行水解,并使用正交试验设计以水解度为指标对酶法水解进行了优化。结果表明,啤酒糟醇溶蛋白的酶解最优条件为底物浓度2%,酶解温度60℃,pH9.5,酶浓度(E/S)0.096 AU/g,酶解时间3h。以DPPH自由基清除率和羟自由基清除率为指标,用抗坏血酸做对照,对酶解产物的抗氧化活性进行了分析。分别得到了两种自由基清除的最优酶解条件。啤酒糟醇溶蛋白酶解产物对不同自由基的最佳清除作用的水解条件不一致,可能与所产生的多肽对几种自由基的清除机理有关。     

Optimising the free radical scavenging activity of shrimp protein hydrolysate produced with alcalase using response surface methodology

Response surface methodology (RSM) was used to optimise the hydrolysis parameters of Acetes chinensis by Alcalase 2.4L in order to obtain a hydrolysate with potent radical scavenging activity. The parameters were temperature, pH and enzyme concentration/substrate concentration (E/S) ratio with degree of hydrolysis (DH) being the response. The results showed that the optimum condition was: temperature at 57 °C, pH at 8.0, E/S ratio at 2.6AU 100 g⁻¹ shrimp, hydrolysis time 3 h. The DH was 26.32%, the hydroxyl radical scavenging activity was up to 88.12% and the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity was 35.61%. The gel column filtration chromatography by a Sephadex G-25 column yielded five fractions. The molecular weight of the most potent free radical scavenging activity fraction ranged from 915 to 207 Da, its IC₅₀ for hydroxyl radical was 0.03 mg mL⁻¹, and IC₅₀ for DPPH radical was 8.86 mg mL⁻¹.     

杏仁蛋白Alcalase水解工艺及其体外抗氧化活性的研究

为深入开发利用杏仁蛋白资源,采用Alcalase蛋白酶水解杏仁蛋白,以水解度为指标对酶解过程进行研究,在单因素试验基础上以水解度和DPPH自由基清除率为指标进行酶解正交试验.结果表明制备抗氧化能力较强的杏仁蛋白水解物的最佳条件为:pH 8.0,温度55 ℃,酶底比4%,底物浓度5%.在此条件下进行水解试验,水解度为21.02%,水解物对DPPH自由基的清除率为66.13%.     

响应面试验优化裙带菜蛋白酶解工艺及酶解液抗氧化活性

运用响应面分析方法对裙带菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素试验基础上,以亚铁离子螯合率和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、p H值、底物质量浓度、加酶量对裙带菜蛋白酶解产物抗氧化活性和水解度的影响,并比较优化条件下的酶解液与常用天然抗氧化剂抗坏血酸、合成抗氧化剂丁基羟基茴香醚(butyl hydroxyanisole,BHA)的抗氧化活性。结果表明:复合蛋白酶是裙带菜蛋白酶解的最适用酶,酶解液螯合亚铁离子能力和清除DPPH自由基的最优条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50℃、p H 7.0、底物质量浓度15 g/L、加酶量0.2%(0.3 AU/g裙带菜粉末)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为88.58%,DPPH自由基清除率为59.22%,水解度为29.72%。对比常用抗氧化剂,在亚铁离子螯合能力方面,酶解液显著高于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05)。