嗜酸乳杆菌S-层蛋白对感染大肠杆菌小鼠肠黏膜免疫功能的影响

研究嗜酸乳杆菌S-层蛋白对感染致病性大肠杆菌小鼠肠黏膜免疫的影响。用5 M的氯化锂溶液对嗜酸乳杆菌的S-层蛋白进行提取,获得脱除S-层蛋白的嗜酸乳杆菌菌体。将SPF级BALB/c小鼠随机分为对照组、致病性大肠杆菌感染组、嗜酸乳杆菌预防组治疗组,脱除S-层蛋白的嗜酸乳杆菌预防组和治疗组六组,实验进行14 d。小鼠处死后取眼球血、小肠及肠黏膜,观察各组小鼠肠黏膜形态变化、肠黏膜功能因子表达的差异。致病性大肠杆菌感染组与对照组相比,肠黏膜形态明显改变,感染大肠杆菌的小鼠在灌胃嗜酸乳杆菌后各黏膜SIg A和IL-10含量明显升高,同时血清IFN-γ、TNF-α和IL-1β含量对比感染组有了显著下降,说明可以减缓炎症发生,并且比脱除S-层蛋白的嗜酸乳杆菌治疗组对肠黏膜免疫保护效果好。嗜酸乳杆菌S-层蛋白对于嗜酸乳杆菌定植于肠黏膜并形成生物屏障保护其免疫功能有着重要影响。     

植物乳杆菌NCU116发酵胡萝卜浆对免疫抑制小鼠肠道黏膜免疫的影响

目的：探讨植物乳杆菌NCU116发酵胡萝卜浆对免疫抑制小鼠肠道黏膜免疫的影响。方法：利用环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,将小鼠随机分为5 组,即正常对照组、模型组、胡萝卜原浆组、发酵胡萝卜浆组、灭活发酵胡萝卜浆组。小鼠以灌胃的方式给予胡萝卜原浆、发酵胡萝卜浆和灭活发酵胡萝卜浆后,分别测定各组小鼠胸腺指数和脾脏指数,酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）方法测定小肠组织白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、IL-10和分泌型免疫球蛋白A（secretory immunglobulin A,sIgA）含量,小肠组织病理学观察及直接免疫荧光检测IgA分泌B细胞数。结果：实验组与模型组相比,植物乳杆菌NCU116发酵胡萝卜浆能显著提高小鼠胸腺和脾脏指数,增加IgA分泌B细胞数量,提高细胞因子IL-2和sIgA的水平,改善肠道形态结构,但TNF-α和IL-10含量没有显著增加。结论：植物乳杆菌NCU116发酵胡萝卜浆能有效拮抗环磷酰胺对小鼠免疫功能的抑制作用和肠道结构损伤作用,提高免疫抑制小鼠的免疫功能和改善肠道形态结构。     

嗜酸乳杆菌对感染大肠杆菌O157:H7小鼠肠道微生物区系的影响

分析了小鼠在感染大肠杆菌O157∶H7期间肠道微生物区系的变化及嗜酸乳杆菌KLDS AD1对其肠道微生物的调节作用。结合小鼠表象特征,探讨了嗜酸乳杆菌KLDS AD1对小鼠腹泻的治疗效果。研究将小鼠分成3组,分别是PBS对照组、大肠杆菌-PBS对照组和大肠杆菌-KLDS AD1组,对实验组小鼠连续7d灌胃大肠杆菌致病后,再连续7d灌胃嗜酸乳杆菌KLDS AD1,期间采集小鼠粪便利用选择性培养基对菌群作平板计数。结果表明:嗜酸乳杆菌KLDS AD1可以极显著地提高感染大肠杆菌O157∶H7小鼠的体重(p0.01);小鼠在感染大肠杆菌O157∶H7后粪便中致病性大肠杆菌、肠杆菌和肠球菌等条件致病菌数量显著增加(p0.05),乳酸菌和双歧杆菌等益生菌显著减少(p0.05)。灌胃嗜酸乳杆菌KLDS AD1后,小鼠粪便中致病性大肠杆菌、肠杆菌和肠球菌均显著降低(p0.05),而乳酸菌和双歧杆菌增加极显著(p0.01)。证实嗜酸乳杆菌KLDS AD1对感染大肠杆菌O157∶H7小鼠肠道微生物平衡具有一定的调节作用,对其引起的腹泻有一定的治疗效果。     

泰山蛹虫草多糖对免疫抑制小鼠肠道菌群及分泌型免疫球蛋白A的影响

目的：研究泰山蛹虫草多糖对免疫抑制小鼠肠道菌群和肠黏膜分泌型免疫球蛋白A（secretoryimmunoglobulin A,sIgA）的影响。方法：将60 只雄性昆明小鼠随机平均分为5 组,空白对照组和环磷酰胺（cyclophosphamide,CY）模型组的小鼠灌胃蒸馏水,3 个蛹虫草多糖组分别以100、200、300 mg/（kg•d）（以体质量计,下同）剂量的泰山蛹虫草多糖灌胃小鼠19 d。第20天,空白对照组小鼠腹腔注射生理盐水,其余4 组小鼠均腹腔注射100 mg/kg的CY。观察蛹虫草多糖对小鼠肠道菌群和肠黏膜sIgA水平的影响。结果：与CY模型组比较,3 个蛹虫草多糖组小鼠肠道的双歧杆菌、乳酸杆菌数量均极显著增加（P＜0.01）,而大肠杆菌、肠球菌数量均显著或极显著降低（P＜0.05或P＜0.01）;3 个蛹虫草多糖组小鼠的肠道sIgA含量均极显著升高（P＜0.01）。结论：泰山蛹虫草多糖对CY所致的免疫抑制小鼠肠道菌群紊乱有拮抗作用;泰山蛹虫草多糖也能促进肠黏膜sIgA的分泌,在一定程度上拮抗CY所致的肠黏膜免疫抑制。     

瑞士乳杆菌对小鼠肠道粘膜免疫应答及细胞因子的影响

探讨灌胃瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus TS206)发酵制品对健康Balb/c 小鼠肠道黏膜免疫应答及细胞因子的影响。本实验将Balb/c 小鼠分为空白对照组、生理盐水组和瑞士乳杆菌组3 组,瑞士乳杆菌组的灌胃剂量为108CFU/mL,分别在灌胃后0 、1 、2、3 、4 、6 、8、12、24h 处死小鼠得到小肠组织样品,利用RIA 法和ELISA 法测得各组小鼠肠道黏膜SIgA 和细胞因子的含量,并作统计分析。结论：灌胃组小鼠肠道黏膜中SIgA 的含量与生理盐水对照组相比差异极显著(P ＜ 0.01);灌胃组小鼠肠道黏膜中IL-2 和IFN-γ的含量与生理盐水对照组相比具有显著性差异(P ＜ 0.05);灌胃组IL-4 与生理盐水对照组相比含量明显升高(P ＜ 0.05);而灌胃组和生理盐水对照组相比IL-6 的表达水平后期差异不显著(P ＞ 0.05);IFN-γ/IL-4 的值处于相互拮抗的状况,表明瑞士乳杆菌对健康小鼠具有维护肠黏膜免疫平衡的作用,也对保持Th1/Th2 平衡状态具有明显的作用,即证实瑞士乳杆菌作为益生菌具有调控小鼠肠道黏膜免疫应答的功效。     

牦牛酸乳分离发酵乳杆菌发酵豆浆的胃溃疡预防效果研究

以采自川西青藏高原的自然发酵牦牛酸乳样品中分离纯化得到的1 株发酵乳杆菌（Lactobacillusfermentum Zhao,LFZ）作为研究对象,探索比较其与商业用嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus,ST）发酵豆浆的胃溃疡预防效果。通过利血平诱导胃溃疡小鼠模型,LFZ组小鼠的IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ细胞因子低于ST组小鼠;血清生长抑素和血管活性肠肽水平高于ST组,胃动素和P物质水平低于ST组,且LFZ组小鼠胃溃疡面积也低于ST组小鼠。由此可知,Lactobacillus fermentum Zhao发酵豆浆的品质优于标准嗜热链球菌发酵豆浆,且其对胃溃疡有很好的预防效果。     

嗜酸乳酸杆菌对自主活动受限型应激小鼠肠道黏膜免疫状态的影响

目的：探讨嗜酸乳酸杆菌（Lactobacillus acidophilus,LA）对自主活动受限型应激小鼠肠道黏膜免疫状态的影响。方法：以健康雌性BALB/c小鼠为受试动物,分为常规饲养组（NC组）、常规饲养条件灌胃LA组（NC＋LA组）、应激组（S组）、应激条件灌胃LA组（S＋LA组）,小鼠的LA灌胃剂量为108 CFU/d;应激组小鼠每天被限制自主活动3 h;15 d后取材,采用流式细胞术、酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）等方法,对肠系膜淋巴结（mesenteric lymph nodes,MLN）中CD4＋T细胞、CD8＋T细胞和CD11c＋树突细胞（CD11c＋ dendritic cell,CD11c＋ DC）比例,结肠组织白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）和白细胞介素-17（interleukin-17,IL-17）水平,以及小肠总分泌型免疫球蛋白A（secreted immunoglobulin A,sIgA）水平进行检测。结果：常规饲养条件下,LA能极显著提高小鼠MLN中CD4＋T细胞比例（P＜0.01）,显著提高MLN中CD11c＋ DC比例、小肠总sIgA水平和结肠组织IL-10水平（P＜0.05）,显著降低结肠组织IL-17水平（P＜0.05）,而对MLN中CD8＋T细胞比例无显著影响（P＞0.05）;应激条件能极显著降低小鼠MLN中CD4＋T细胞比例和CD11c＋ DC比例（P＜0.01）,显著降低CD8＋T细胞比例（P＜0.05）,极显著降低小鼠结肠组织IL-10水平和小肠总sIgA水平（P＜0.01）,极显著提高结肠组织IL-17水平（P＜0.01）;应激条件下,LA能显著提高小鼠MLN中CD4＋T细胞比例和CD11c＋ DC比例（P＜0.05）,显著提高小鼠结肠组织IL-10水平和小肠总sIgA水平（P＜0.05）,并显著降低结肠组织IL-17水平（P＜0.05）,而对小鼠MLN中CD8＋T细胞比例无显著影响（P＞0.05）。结论：给予自主活动受限型应激小鼠LA干预,可提高小鼠MLN中CD4＋T细胞和CD11c＋ DC比例,上调结肠IL-10和小肠总sIgA分泌水平,下调结肠IL-17分泌水平,调节应激小鼠的肠道黏膜免疫状态。     

嗜酸乳杆菌缓解牛乳过敏的研究

目的:观察嗜酸乳杆菌对牛乳β-乳球蛋白(β-Lg)过敏小鼠血清抗体水平、肠道菌群结构及肠道短链脂肪酸代谢的影响,研究其缓解过敏的机制。方法:BALB/c小鼠被随机分成空白组、过敏组和不同浓度嗜酸乳杆菌组(n=6)。致敏组小鼠每周1次腹腔注射0.2 m L 1 mg/m L的β-Lg,共3次;嗜酸乳杆菌组小鼠在腹腔注射过敏原前1周灌胃小鼠低、中高浓度的菌悬液,3次/周;空白组同时灌胃生理盐水。造模结束后取小鼠血液和结肠粪便备用。采用酶联免疫法检测各组小鼠血清中总Ig E抗体水平,气相色谱法分析各组小鼠结肠粪便中短链脂肪酸代谢变化,选择性培养基计数结肠粪便中肠杆菌、双歧杆菌和乳酸杆菌。结果:嗜酸乳杆菌干预可有效改善小鼠的β-Lg过敏症状,抑制血清的总Ig E水平。与致敏组比较,不同浓度嗜酸乳杆菌组小鼠肠道双歧杆菌和乳酸杆菌数量明显回升(P0.05),肠道短链脂肪酸如丙酸、丁酸、异丁酸和异戊酸水平显著提高(P0.05),特别是高剂量嗜酸乳杆菌的效果显著,与空白组相比无差异(P0.05)。结论:嗜酸乳杆菌可有效缓解β-Lg过敏,其预防效果可能与优化肠道微生态环境密切相关。     

植物乳杆菌C88联合人参多糖的免疫调节作用

以环磷酰胺诱导昆明小鼠建立免疫抑制模型后,分别给其灌胃人参多糖、人参多糖联合植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）C88。实验结束后,采用酶联免疫吸附实验检测了小鼠血清中的白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）、白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）,并利用碳廓清法检测了小鼠吞噬细胞吞噬能力,评价了人参多糖（water-soluble ginseng polysaccharides,WGPA）联合植物乳杆菌C88的体内免疫调节作用。结果表明WGPA联合益生菌C88可明显增强免疫抑制小鼠吞噬细胞的吞噬能力和迟发型超敏反应,显著上调血清中IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α、IgG水平,下调IL-10水平,并呈现剂量依赖性,且联合用药组的作用明显强于人参多糖WGPA单独用药组。综上所述,植物乳杆菌C88联合人参多糖可以发挥一定的免疫调节作用。     

双层包埋制备嗜酸乳杆菌微胶囊及其应用

为确保嗜酸乳杆菌抵抗机械挤压、胃酸等不适条件,顺利到达肠道发挥益生作用,以多孔淀粉为壁材微胶囊化嗜酸乳杆菌,通过单因素试验和正交试验考察pH值、振荡时间、多孔淀粉用量、温度4个因素对嗜酸乳杆菌微胶囊化的影响。结果表明:108CFU/mL嗜酸乳杆菌悬液50mL、多孔淀粉用量5g、pH6.0、温度20℃、200r/min振荡50min的最佳工艺条件下,制得微胶囊包埋嗜酸乳杆菌包埋率为67.12%;将其饲喂幼犬后,检测犬粪便中双歧杆菌、乳酸菌、大肠杆菌、产气荚膜梭菌、pH值的变化,结果表明嗜酸乳杆菌微胶囊可有效改善犬肠道微生态。     

眉山泡菜中乳酸菌的分离鉴定

目的：分析眉山泡菜的基本数据和乳酸菌的菌种构成。方法：从眉山市采集泡菜12 份,测定pH值、总酸度、盐度、乳酸菌计数,用16S rRNA序列分析法鉴定菌种。结果：样品pH值的范围是3.37～3.89,总酸度的范围是0.65～0.92 g/100 g（以乳酸计）,盐度的范围是4.16%～5.28%（以NaCl计）,MRS和M17乳酸菌计数分别是1.71～6.33、1.33～5.78（lg（CFU/g））。总酸度对乳酸菌计数影响最大。共分离鉴定出16 株乳酸菌：Lactobacillus fermentum（2 株）、Lactobacillus plantarum（3 株）、Lactobacillus brevis（2 株）、Lactobacillusacidophilus（1 株）、Lactobacillus casei（1 株）、Lactobacillus pentosus（1 株）、Lactobacillus delbrueckii（1 株）、Lactococcus lactis（3 株）、Pediococcus pentosaceus（2 株）。结论：眉山泡菜中乳酸菌存在多样性,实验结果为工业发酵生产泡菜积累了菌株。     

瑞士乳杆菌对小鼠肠道黏膜和肠组织中细胞因子影响的研究

了解服用益生菌小鼠肠道黏膜和组织中细胞因子的变化情况,对阐明其对小鼠肠道黏膜免疫的影响具有重要的价值。本实验将60 只小鼠随机分成4 组：日食对照组、生理盐水对照组、瑞士乳杆菌灌喂组和大肠杆菌对照组,连续灌喂15d,采集小鼠小肠利用ELISA 法测得各组小鼠肠道黏膜和肠道组织中细胞因子的含量,并作分析。研究结果证实,与对照组相比,瑞士乳杆菌灌胃组小鼠肠黏膜和组织中4 种细胞因子明显升高,且存在显著性差异(P ＜ 0.05)：白介素-2IL-2 在3d 前达到最大值、白介素-4(IL-4)在5d 达到最高点、白介素-6(IL-6)在5d 达到顶峰、干扰素- γ(IFN- γ)在3d 前达到最大值;与对照组相比,瑞士乳杆菌灌胃组小鼠Th1 型和Th2 型T 细胞的不存在显著性差异(P ＞ 0.05),肠道免疫功能未出现异常,而大肠杆菌灌胃组Th1 型和Th2 型T 细胞平衡被打乱,免疫功能出现异常。     

Immune enhancing effects of Lactobacillus acidophilus LAFTI L10 and Lactobacillus paracasei LAFTI L26 in mice

The immune enhancing properties of Lactobacillus acidophilus LAFTI L10 and Lactobacillus paracasei LAFTI L26 in mice were investigated. Each mouse (BALB/c) was orally fed with cultures of either L. acidophilus or L. paracasei at 10(8) CFU/50 mul per day for 14 days. The effect of these strains on immunoglobulin A, interleukin-10 and interferon gamma producing cells in the gut immune system was determined by immunofluorescence assays. Systemic immune responses were analysed in mice serum upon euthanising after a 14-day feeding trial to estimate cytokines such as IL-10 and IFN-gamma by enzyme-linked immunosorbent assays. L. acidophilus and L. paracasei strains demonstrated an increase in the number of IgA producing cells, IL-10 and IFN-gamma cytokine producing cells in the small intestine. In the systemic immune response, mice fed with L. acidophilus or L. paracasei also enhanced the secretion of anti-inflammatory cytokine (IL-10) and pro-inflammatory cytokine (IFN-gamma). The results of this study suggest that L. acidophilus and L. paracasei were able to enhance specific gut and systemic immune responses in mice.     

多不饱和脂肪酸对大鼠肠道菌群及脂肪代谢相关基因的影响

目的：研究多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fat acids,PUFA）饮食对大鼠肠道菌群及相关脂肪因子的影响,探讨其作用机理。方法：将30 只5 周龄健康大鼠分为正常对照组、n-6 PUFA组和n-3 PUFA组,自由摄食饮水8 周,每周记录大鼠体质量,实验结束时取大鼠盲肠粪便和肝脏,用实时荧光定量聚合酶链式反应检测双歧杆菌（Bifidobacterium,Bif）、乳酸杆菌（Lactobacillus,Lac）、肠道细菌Akkermansia muciniphila（Akk）和脂肪因子脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）、禁食诱导脂肪因子（fasting-induced adipose factor,FIAF）的水平;并将大鼠盲肠石蜡包埋、切片、苏木精-伊红染色测量其黏膜厚度。结果：n-3 PUFA组与正常对照组相比,肥胖程度和FAS水平明显降低（P＜0.05）,Bif、Lac、Akk和FIAF水平明显升高（P＜0.05）,肠道黏膜厚度明显增加;n-6 PUFA组大鼠的各项指标和正常对照组相比均无统计学差异。结论：n-3 PUFA饮食与n-6 PUFA饮食相比,可改变肠道菌群,抑制肥胖的发生和发展。     

6 株乳酸菌在豆乳中的发酵特性

以干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）、短乳杆菌（L. brevis）、嗜酸乳杆菌（L. acidophilus）、植物乳杆菌（L. plantarum）、鼠李糖乳杆菌（L. rhamnosus）和保加利亚乳杆菌（L. bulgaricus）分别发酵豆乳,测定发酵期间pH值、滴定酸度、游离氨基氮,发酵结束后的活菌数和质构参数,并且对所得产品进行感官评价。结果表明：发酵过程中前5 株菌发酵豆乳的pH值显著下降,而L. bulgaricus下降缓慢,发酵24 h pH值仅为5.2。这6 株菌发酵产品的活菌数均达到1.0×108 CFU/mL以上。结果表明L. casei、L. brevis、L. acidophilus和L. plantarum发酵得到的产品的坚实度、稠度、黏度、黏附性指数均较高,感官评定结果表明这4 株菌发酵豆乳产品得分均较高,容易被消费者接受,适合用于生产发酵豆乳产品。     

使用FISH-FC测定益生菌对肠道菌群失衡的调节作用

目的：使用荧光原位杂交-流式细胞计数法(FISH-FC)测定灌胃自筛菌株嗜酸乳杆菌KLDS1.8701与植物乳杆菌KLDS1.0355混合液对抗生素性肠道菌群失衡小鼠的影响,并初步研究其发挥作用的机制。方法：在体外实验中,测定上述两株菌对肠道病原菌的抑制作用,并探讨其作用机理。在体内实验中,采用随机饮用盐酸克林霉素水溶液(2.8mg/mL)的方法建立抗生素性肠道菌群失衡小鼠模型,并使用FISH-FC方法测定小鼠粪便中总厌氧菌、球形梭菌属(Clostridium coccoides-Eubacterium rectale)、肠杆菌(Enterobacteria)、拟杆菌属(Bacteroides-Prevotella)的数量变化,以此判断模型是否建立成功。之后,灌胃嗜酸乳杆菌KLDS1.8701和植物乳杆菌KLDS1.0355的混合液(活菌数分别为107、108、109CFU/mL),以生理盐水为对照,采用上述方法评价混合菌液对小鼠模型的影响。结果：与对照组相比,灌胃混合菌液组可迅速恢复肠道菌群平衡(P＜0.01),产生作用的效应剂量为107CFU/mL。结论：直接的抗微生物效应可能是该混合菌液调节肠道菌群平衡的机制之一。     

市售酸奶中乳酸菌耐药性及耐药基因的检测

为探讨酸奶中乳酸菌所携带耐药基因对人类健康的潜在影响,对市售酸奶中的乳酸菌进行分离和鉴定,并通过药物敏感性实验确定菌株的耐药谱,同时利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增技术调查链霉素、庆大霉素、磺胺类和四环素等耐药基因的分布情况。结果表明：25 份市售酸奶样品中共分离得到56 株乳酸菌,包括26 株德氏乳杆菌保加利亚亚种、3 株植物乳杆菌、2 株嗜酸乳杆菌以及25 株嗜热链球菌。药敏结果显示,31 株乳杆菌对链霉素（87.1%）、庆大霉素（80.6%）、环丙沙星（74.2%）和四环素（61.3%）的耐药率较高,对头孢菌素类则较为敏感;而25 株嗜热链球菌同样对链霉素的耐药率最高,达76.0%;其次分别为万古霉素（32.0%）、环丙沙星（32.0%）和四环素（20.0%）。56 株乳酸菌中共检出5 种不同的耐药基因,分别为链霉素耐药基因ant(6)（检出率1.8%）、庆大霉素耐药基因aac(6')-aph(2')（检出率7.1%）、四环素耐药基因tetM（检出率5.4%）以及磺胺类耐药基因sulⅠ（检出率14.3%）和sulⅡ（检出率1.8%）。受试的乳酸菌中共有13 株检出耐药基因,其中有4 株携带两种不同的耐药基因。长期以来被认为安全并广泛应用于发酵食品领域的乳酸菌可能成为潜在的耐药基因贮存库。     

复合乳酸菌发酵降低蛋黄液中胆固醇的工艺优化

为降低蛋黄液中胆固醇含量,选择出降胆固醇效果较好的3 种菌作为复合发酵菌种,将复合菌株接种到蛋黄液中,于恒温培养箱中培养,用直接皂化-比色法探讨了复合乳酸菌对蛋黄液中胆固醇降低率的影响,利用正交试验优化最佳发酵工艺参数。结果表明,最佳工艺条件为发酵温度40 ℃、发酵时间24 h、接种量3%、牛胆盐质量浓度3 g/L、混合菌种（嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌）菌液体积比1∶2∶1,在此条件下,可使蛋黄中胆固醇降低率达31.5%。