汉族多巴敏感性肌张力障碍三个家系的分子遗传学研究

背景：多巴敏感性肌张力障碍(dopa-responsive dystonia，DRD)的基本病因为遗传的缺陷，自1990年以来，中国有关本病的临床报道已有40余例，但相关的分子遗传研究报道较少。目的：分析国人DRD患者发病与三磷酸鸟苷环化水解酶1(GCH-1)基因突变的关系。设计：典型调查。地点和对象：来自3个家庭的5例于2000-10／2001-07在解放军第二军医大学长海医院神经内科确诊的DRD患者及其亲属共12个成员。方法：经静脉采血2mL，常规提取基因组DNA，以PCR扩增GCH-1基因，反应产物用自动DNA测序仪直接测序。主要观察指标：三个家系中是否有基因突变。结果：在A家系，先证者母亲为正常个体，基因测序显示无基因突变，其中3例患病个体DNA测序发现第2个外显子142号碱基由鸟嘌呤转换为腺嘌呤(G→A)，导致半胱氨酸被替换为酪氨酸；估计其突变基因来自已故父系一方。在B家庭，先证者第一个外显子71号碱基由胸腺嘧啶转换为胞嘧啶(T→C)，导致亮氨酸被替换为脯氨酸；而其父母及弟均为正常个体。C家庭无GCH-1基因突变。结论：GCH-1基因突变只是部分DRD患者的发病原因。     

一例遗传性蛋白C缺陷症家系的实验诊断

目的对1例遗传性蛋白C缺陷症家系进行临床表型诊断和基因突变检测。方法用发色底物法测定血浆蛋白C活性;用聚合酶链反应（PCR）法对先证者PC基因（PROC）的9个外显子及其侧翼序列进行扩增,PCR产物纯化后直接测序,检测其基因突变。家系成员DNA在先证者PROC基因突变区域扩增后测序,进行家系调查以期发现遗传规律。结果先证者蛋白C活性为38.6%,抗原为45.3%。直接基因测序分析发现先证者PROC基因外显子7区存在杂合错义突变c.565C〉T,该突变将引起编码的蛋白C 147位精氨酸被色氨酸替换（p.Arg147Trp）。家系分析发现先证者的c.565C〉T突变遗传于其父亲。结论 c.565C〉T杂合突变是导致该家系遗传性PC缺陷症的原因。     

两种新的无义突变Trp228stop和Trp383stop导致的遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症

目的检测遗传性凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺陷症患者家系中FⅪ基因的突变.方法检测先证者及其家系成员血浆FⅪ∶C及FⅪ∶Ag,并以其外周血单个核细胞中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增FⅪ基因的所有外显子及其侧翼内含子序列, 用DNA测序仪检测FⅪ的基因突变.结果 FⅪ基因第7号外显子和11号外显子编码228位和383位氨基酸的碱基发生无义突变TGG→TGA(Trp228stop),TGG→TAG(Trp383stop),均为杂合型.结论此两种基因突变可能是导致患者FⅪ缺陷的分子发病机制.     

Crigler-Najjar综合征Ⅱ型患者及其家系UGT1A1基因突变的分析

目的:分析1例遗传性高非结合胆红素血症Crigler—Najjar综合征Ⅱ型(CN—Ⅱ)患者及其家系尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因(UGT1A1)的突变特征,研究其遗传特点和诊断。方法:采用肝功能试验、低热卡试验、肝脏病理组织学和苯巴比妥诱导试验治疗等方法确诊1例CN—Ⅱ,追踪并抽取该先证者及其家系11例成员的外周静脉血,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增UGT1A1基因第1～5外显子基因片段,用直接DNA测序法筛查UGT1A1基因突变。结果:该先证者UGT1A1基因的第5外显子第486密码子发生了T→G碱基的错义突变,导致了酪氨酸变成了天门冬氨酸(Tyr486Asp)。先证者为该突变的纯合子,其父母、妹妹及三位祖父为该突变的杂合子。其余4例未患病成员均未发现UGT1A1基因突变。结论:Tyr486Asp突变是本例CN—Ⅱ家系的致病性基因,该突变不影响UGT1A1基因启动子区苯巴比妥酸的应答元件,其遗传规律符合常染色体隐性遗传。经查询人类基因文库证实,本例CN—Ⅱ基因突变类型在我国是首例,国外尚未见到相同的家系分析报告。     

应用全外显子组测序技术鉴定1个白化病家系致病基因HPS1

目的采用全外显子组测序鉴定1个常染色体隐性遗传白化病家系患者的致病基因,探讨其发病机制。方法采集先证者及其家系成员外周血并提取其基因组DNA,对先证者进行全基因外显子组测序,并结合序列变异生物信息学分析方法,鉴定其致病基因,利用Sanger测序对基因突变位点验证。结果全外显子组测序结果显示,先证者HPS1基因存在由c.1276_1279dupGGAG(p.Asp427fs)移码突变和c.398+5GA剪切位点变异组成的复合杂合突变,而其表型正常的父亲为c.1276_1279dupGGAG(p.Asp427fs)杂合突变,表型正常的母亲为c.398+5GA杂合突变。结论该白化病先证者由HPS1基因c.1276_1279dupGGAG和c.398+5GA复合杂合突变导致,此患者被诊断为Hermansky-Pudlak综合征1型。外显子测序技术可以快速准确地筛查白化病候选基因,并明确其具体临床亚型,有利于临床医师积极干预患者潜在并发症以及改善患者生存质量。     

ALK-1基因无义突变Arg 479 Stop导致的遗传性出血性毛细血管扩张症

目的：对一个遗传性出血性毛细血管扩张症家系进行Endoglin基因和ALK1基因突变检测，以探讨其病因。方法：用PCR法对先证者的Endoglin基因14个外显子和ALK-1基因10个外显子及其侧翼序列和5′端非翻译区(5′UTR)序列进行扩增，PCR产物纯化后直接测序，检测其基因突变。针对家系成员3代23人基因突变区域进行扩增后测序。结果：发现先证者及家系其他患者ALK-1基因第10外显子1437C→T，导致479位氨基酸Arg(CGA)变为Stop(UGA)，均为杂合突变。结论：杂合无义突变C1437T引起的Arg 479 stop是导致本家系遗传性出血性毛细血管扩张症的原因。     

双重杂合性突变Arg304Glh和Arg304Trp导致的遗传性凝血因子VII缺陷症

目的：探讨一例遗传性凝血因子VII（coagulation factor VII,FVII）缺陷症家系基因突变类型。方法：检测凝血指标以明确诊断；用DNA直接测序法对先证者及其家庭成员FVII基因的全部外显子和其侧翼以及启动子进行分析，寻找基因突变；将含突变序列克隆入pGEMT-easy质粒载体中，对所得两条染色体相应序列分别测序，以确定不同突变在染色体上的分布。应用限制性内切酶MspI对先证者及家系成员相应基因片段进行酶切分析，证实测序所发现的突变。结果：先证者在8号外显子上有两种基因突变：11348位C→T突变和11349C→A突变。pGEMT-easy质粒克隆测序结果显示上述两种突变位于不同的染色体上。为不同染色体同一编码区Arg(CGG)304Trp(TGG)和Arg(CGG)304Gln(CAG)双重杂合性突变。其父亲、母亲分别为11349位G→A和11348位C→T杂合突变；先证者的弟弟FVII基因为正常野生型；其哥哥和3个子女均为杂合性突变。PCR辅助限制性酶切证实了先证者及其家系成员的基因突变。结论：先证者FVII基因突变为不同染色体同一编码区Arg304Trp和Arg304Gln双重杂合性突变，此种突变类型的组合尚属首例。     

腓骨肌萎缩综合征患者MFN2基因突变检测的研究

目的对1个腓骨肌萎缩综合征核心家系的致病突变进行鉴定和遗传学分析。方法采用全外显子组测序技术筛选先证者中的致病突变,用Sanger测序技术检测核心家系中致病突变位点的基因型,并对其进行生物信息学分析。结果先证者MFN2基因存在单碱基杂合突变c.1090C>T p.R364W,母亲与妹妹均为该位点单碱基杂合突变,且均呈现不同程度的肌肉萎缩,但严重程度和发病年龄有所不同,父亲表型正常且在该位点未见异常。先证者全外显子组测序结果显示未见其他报道的相关基因突变。结论先证者MFN2基因c.1090C>T为1个致病突变位点。     

一个遗传性出血性毛细血管扩张症家系的致病基因研究

目的:通过对一个遗传性出血性毛细血管扩张症家系进行ENG基因和ALK1基因测序,确定基因突变位点。方法:用RT-PCR方法对家系4代11名成员的ENG基因14个外显子和ALK1基因9个外显子进行扩增;扩增产物纯化后直接测序查找基因突变位点。结果:先证者及家系其他患者ENG基因第4外显子存在无义突变c.447G﹥A,导致149位氨基酸Trp(UGG)变为Stop(UGA),在该家系未发现ALK1基因突变。结论:ENG基因无义突变c.G447A引起氨基酸发生p.Trp149Stop改变,是该家系致病的遗传基础。     

一角膜营养不良家系的TGFBI基因突变*

摘要:目的对一角膜营养不良家 系的致病基因进行检测,明确该家系角膜营养不良的致病基因突变位点。方法采集先证者及其家系成员外周血标本，提取基因组DNA,采用全外显子组测序筛查先证者致病基因及突变位点，并通过Sanger测序对 先证者及其家系成员DNA样本进行验证。结果全外显 子测序结果显示，先证者5号染色体上的转化生长因子β诱导基因(TGFBI)4号外显子发生c.370 C>T(p.R124C)杂合突变,8号外显子发生c.1007 A>T(p.E336V)杂合突变。Sanger 测序验证 发现患者父亲及家系其他患者TGFBI基因也发生c.370 C>T(p.R124C)杂合突变,患者母亲及家系其他正常成员未见TGFBI基因发生突变。TGFBI基因c.370 C>T(p.R124C)突变与疾病表型共分离。结论TGFBI 基因e.370 C>T(p.R124C)杂合突变 是导致该家系角膜营养不良的致病原因。     

三个血友病B家系的基因诊断

目的 探讨中国汉族3个无关血友病B家系先证者凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变及分子发病机制,对家系女性成员进行携带者诊断.方法 家系先证者及成员采静脉血,先证者表型诊断确诊后,检测先证者及其家系成员6个STR位点的基因多态性,进行家系遗传连锁分析,应用PCR法对先证者及可疑携带者FⅨ8个外显子及其侧翼序列进行扩增,用末端标记双脱氧法检测核酸序列.结果 家系1先证者FⅨ基因外显子6发现G22119A突变,家系2先证者FⅨ基因外显子2发现G7392C突变,家系3先证者FⅨ基因外显子8发现T32685C突变.结论 血友病B先证者FⅨ基因缺陷是其发病的分子机制.     

中国西北地区102例儿童Duchenne型肌营养不良基因突变及家系分析研究

目的　了解西北地区Duchenne型肌营养不良症(DMD)患者基因突变特点。方法　收集2014年7月～2020年6月的102例DMD患者作为研究对象,采用多重连接依赖探针扩增（multiplex ligationdependent probe amplification, MLPA）技术、二代基因测序（next-generation sepuencing, NGS)技术及Sanger测序方法进行基因检测,分析西北地区DMD患者基因缺失突变、重复突变、点突变的分布区域特点,且对2个DMD家系基因特点进行分析。结果　102例DMD患者,72.5%来源于遗传,27.5%为新发突变。基因突变类型中,85.3%为片段缺失,6.9%为片段重复,7.8%为点突变。片段缺失突变中,≤5个数目的外显子缺失最为常见,占比为66.6%;外显子44~54是最常见的缺失区域,外显子2是最常见的重复区域。2个家系研究,家系1中突变位点为缺失突变的热点区域,外显子45~51区域;家系2中主要是重复突变,集中在外显子2和17~18区域。结论　大样本对西北地区DMD患者及家系的基因分析,可以进一步了解DMD患者基因谱,为基因治疗建立基础。     

一个先天性长QT综合征家系的分子遗传学诊断研究

目的 对一个先天性长QT综合征（long QT syndrome，LQTS）家系进行分子遗传学分析。方法应用多聚酶链式反应-单链构象多态分析（Polymemse Chain Reaction—single Strand Conformation Polymorphism，PCR—SSCP）结合测序的方法，筛选KCNH2基因的突变位点。结果 患者第7外显子在编码序列的1682位点发生C〉T碱基替换，引起A561V错义突变。同时，在编码序列的1691位点上存在一个G〉A的SNP，引起L564L同义突变。在该家系中患者父亲和母亲也携带了L564L同义突变。结论 分子遗传学分析可以准确的诊断LQTS，排除临床疑似患者，指导临床LQTS的治疗和遗传咨询。     

高甘油三酯血症患者脂蛋白脂肪酶基因检测意义

目的探讨脂蛋白脂肪酶（1ipoproteinlipase,LPL）基因突变与高甘油三酯血症的相关性。方法采用Primer5．0软件针对I。PI,基因分片段设计特异性引物。高甘油三脂血症患者12例,抽取外周静脉血提取基因组DNA,扩增LPI。基因1～9号外显子及相邻部分内含子,进行核苷酸测序,并与LPI。基因全序列进行比对分析。结果12例患者中1例LPL基因第4外显子存在错义杂合突变;1例I。PL基因第8外显子存在同义杂合突变;8例LPI。基因第6内含子5’端的几个位点处发生相同的碱基置换（1388＋73T〉G,1388＋108G〉A,1388＋82C〉A）;2例患者未检出核苷酸变化。结论I．PL基因缺陷与高甘油三脂血症密切相关,LPL基因检测可用于临床上有遗传倾向的严重高甘油三脂血症患者的基因诊断。     

遗传性凝因因子Ⅷ缺乏症两种新基因突变的确定

目的：探讨遗传性凝因因子Ⅷ（FⅧ）缺乏症的基因缺陷。方法：利用PCR、核苷酸测序的方法对两个遗传性FⅧ缺乏症家系先证者及其亲属外周血白细胞基因组DNA的FⅧA基因进行检测，并用RT－PCR检测先证者外周血白细胞FⅧA基因mRNA水平；ARMS－PCR对60名正常人外周血白细胞基因组DNA的FⅧA基因进行检测。结果：(1)发现两种新的基因突变，先证者1在第1241位核苷酸由C突变为G，位于外显子10，导致Ser413→Trp（TCG→TGG），先证者2及其妹妹在第232位核苷酸由C突变为T，位于外显子3，导致Arg77→Cys(CGC→TGC)，均为单碱基突变，无限制性内切酶酶切位点的改变；先证者1的父母及先证者2的父、母、舅则分别在DNA水平相同位点呈杂合状态。（2）采用ARMS－PCR法分析正常人群未发现这两种突变的存在。（3）患者血浆存在少量FⅧA，而FⅧA基因在mRNA水平几乎没有变化。结论：这两例FⅧ缺乏症患者均由于FⅧA基因缺陷造成，患者的FⅧA在细胞内不稳定，易降解可能是FⅧ缺乏的原因。家系1的突变位点在FⅧ的核心区，对其结构功能的影响较为明显，而家系2的突变位点位于FⅧ的表面，可能对蛋白的空间结构产生影响。     

家族性高胆固醇血症黄色瘤的家系遗传分析

目的:检测中国汉族家族性高胆固醇血症(familial hyper-cholesterolemia,FH)家系低密度脂蛋白受体(LDLR)基因突变,探讨FH发病的分子机制。方法:采用PCR扩增结合核苷酸序列分析检测1例临床诊断为FH纯合子患者及其家系成员LDLR基因启动子和全部18个外显子片段,结果与GenBank公布的该基因正常序列对比找出突变,同时检测载脂蛋白B100(apoB100)基因Q3500R突变,以排除家族性apoB100缺陷症。结果:该患者LDLR基因第12外显子的第1747位和1773位碱基发生替换,前者导致H583Y突变,而后者未发现氨基酸改变。同时未检测出患者及其核心家系成员apoB100Q3500R突变。结论:FH是一常染色体显性遗传性疾病,为基因突变导致LDLR缺陷所致的遗传性疾病。检测相关基因突变对临床干预和遗传指导有参考价值。     

凝血因子X基因外显子1T58→G突变导致的因子X缺陷症

目的 检测1例凝血因子X缺陷患者的基因突变。方法 PCR对凝血因子X基因进行扩增,扩增范围包括因子X基因的所有外显子及其侧翼内含子序列,用DNA测序检测因子X的基因突变。结果 因子X基因外显子1第58位核苷酸存在T→G的突变,从而导致在外显子1编码的信号肽中11Ser(AGT)→Arg(AGG）的错义突变。结论 该基因突变可能是导致患者因子X缺陷的原因。     

一例双侧肾透明细胞癌患者与家系成员VHL基因的胚系突变分析

目的　对一例家族性双侧肾透明细胞癌患者家系VHL基因的胚系突变进行分析,结合其临床特点探讨可能的分子遗传学发病机制。方法　收集病人家族史、影像学、入院诊疗和随访资料,提取患者及家系直系成员外周血DNA和RNA,采用PCR-DNA测序、荧光定量PCR,RT-PCR片段长度和序列分析等方法进行VHL基因病理性胚系突变位点的筛查和验证。结果　PCR-DNA测序分析结果显示在这家系成员中均没有发现VHL基因编码区的点突变;VHL基因外显子拷贝数的定量分析数据显示VHL基因外显子2拷贝数减少;RT-PCR产物电泳和测序结果表明先证者与其兄二人存在VHL基因第2外显子杂合性缺失所致的病理性胚系突变。结论　家族性肾细胞癌家系中VHL基因的胚系突变筛查可作为一种有效的手段预测患者的预后,并可指导临床。     

一例Fechtner综合征临床与分子缺陷研究——附文献复习

目的对1例Fechtner综合征先证者及其家系进行临床与实验室研究并检测非肌性肌球蛋白重链9基因（MYH9）突变。方法采用瑞特染色观察先证者及其家系患者的外周血涂片血小板和中性粒细胞的特殊形态；透射电镜观察先证者血小板及中性粒细胞的超微结构。从先证者及其家系成员外周血白细胞中提取基因组DNA，PCR扩增MYH9的40个外显子及侧翼内含子序列，检测其基因突变。结果该家系中Fechtner综合征患者表现为血小板减少、巨大血小板、中性粒细胞包涵体，伴或不伴遗传性肾炎。先证者及其家系患病成员的MYH9改变为外显子40第5981位核苷酸C-T杂合改变，使第1933位密码子CGA（编码Arg）突变为终止密码TGA。结论国内首次报道Fechtner综合征家系。MYH9（外显子40）R1933X杂合改变是导致Fechtner综合征的原因。     

Mutation analysis in Spanish patients with hereditary hemorrhagic telangiectasia: deficient endoglin up-regulation in activated monocytes

BACKGROUND: Mutations in the endoglin (ENG) or ALK1 genes are responsible for hereditary hemorrhagic telangiectasia types 1 and 2 (HHT1 and HHT2), respectively, a dominant vascular dysplasia caused by haploinsufficiency. No formal mutation studies of patients with HHT have been conducted in Spain. METHODS: ENG and ALK1 mutation analyses were carried out in 13 Spanish HHT patients diagnosed according to the Curacao criteria. Because endoglin is up-regulated at the cell surface during the monocyte-macrophage transition, endoglin concentrations in activated monocytes were determined by immunofluorescence flow cytometry in a systematic analysis. As controls, 40 non-HHT volunteers were studied for up-regulation of endoglin in activated monocytes. RESULTS: The mutation responsible for HHT was identified in eight patients belonging to two unrelated families. One of the families has a nonsense mutation in exon 4 (c.511C>T; R171X) of the ENG gene, and accordingly the disorder was identified as HHT1. The other family has a missense mutation affecting exon 8 (c.1120C>T; R374W) of the ALK1 gene, and hence is a HHT2 family. Interestingly, endoglin up-regulation was deficient in activated monocytes of both HHT1 and HHT2 patients compared with controls. By contrast, endoglin up-regulation was age-independent in control donors across a broad range of ages. The extent of endoglin up-regulation in activated monocytes was most diminished in those patients with the most severe symptoms. CONCLUSIONS: Endoglin up-regulation in activated monocytes is impaired in HHT1 and HHT2 patients and is age-dependent in both HHT types. Endoglin expression may predict the clinical severity of HHT.