口腔鳞癌细胞来源外泌体的提取与鉴定

目的 提取并鉴定口腔鳞癌细胞来源的外泌体。方法 超速离心法自口腔鳞癌CAL27细胞培养上清中提取外泌体,利用透射电镜观察其形态特征和大小,纳米粒度分析检测其粒径大小和分布,Western blot检测其外泌体特异性蛋白CD9、CD81和CD63的表达。结果 自口腔鳞癌CAL27细胞上清中分离出的外泌体,形态为具有膜结构的囊泡,直径约30-100 nm;粒径分析显示其粒径的主峰为127.0 nm,大小分布集中于(127.9±4.1)nm; Western blot结果显示其具有外泌体特异性蛋白CD9、CD81和CD63的表达。结论 利用超速离心法可成功提取口腔鳞癌CAL27细胞来源的外泌体,为后续探究外泌体调控口腔鳞癌发生发展的相关机制奠定实验基础。     

基于PEG6000富集精液来源外泌体的提取及鉴定

目的介绍PEG6000富集精液来源外泌体的提取和鉴定方法,为精液外泌体相关研究奠定基础。方法选自南方医科大学 南方医院检验中心6名正常志愿者精液,经8% PEG6000富集并多步离心结合超速离心方法获取提取物,然后采用透射电子显 微镜观察其形态,纳米颗粒跟踪分析仪分析其大小,蛋白印迹法检测其蛋白组成成分。结果提取物呈类圆形、椭圆形囊泡,质 膜完整,大小约为30~150 nm,内部含有低电子密度物质,均阳性表达CD63、ALIX、TSG101 蛋白,且不含精子细胞内质网 Calnexin蛋白。结论经过对提取物的形态、大小以及其蛋白成分分析证实所提取到的物质为精液来源的外泌体,为后续开展 精液外泌体临床及基础研究提供了方法学基础。     

巨噬细胞来源外泌体的分离与鉴定

目的 分离并鉴定巨噬细胞来源的外泌体,为当前外泌体的提取研究提供一定参考,并为后续开展外泌体与牙周组织再生的相关研究奠定基础.方法 体外培养巨噬细胞RAW264.7,使用超速离心和超滤结合法提取其外泌体,通过BCA试剂盒测定外泌体的蛋白总量,透射电镜下观察其形态特征,粒径分析仪测定其粒径大小及浓度,免疫印迹法检测外泌体...     

鼻咽癌细胞来源外泌体的提取和鉴定

目的：从鼻咽癌细胞系CNE－1、CNE－2及SUNE－1中分离外泌体,并对CNE－2所得外泌体进行鉴定。方法使用ExoQuick－TC（ SBI）试剂盒法从鼻咽癌细胞系CNE－1、CNE－2及SUNE－1培养上清液分离出外泌体,使用透射电镜观察其形态特征,BCA法进行蛋白定量,Western blot进行外泌体特异性抗原分子CD63及筏蛋白－1鉴定。结果3种鼻咽癌细胞系培养上清液中均分离出大量泡状物,透射电镜下观察呈圆形的囊泡,直径为40～130 nm,具有完整胞膜。且CNE－2来源的此种泡状物表达外泌体特异性膜筏蛋白－1、CD63。10 mL对数生长期CNE－2培养上清液得到487μg／mL（以蛋白计）的外泌体200μL。结论本实验室保存的3种鼻咽癌细胞系很可能均能产生外泌体,ExoQuick－TC（ SBI）法能够简便快速地从鼻咽癌细胞系中提取到外泌体,不需要超速离心,为鼻咽癌的防治研究提供了新的研究方法和靶点。     

非小细胞肺癌源性外泌体提取方法探讨

目的:比较3种提取非小细胞肺癌A549细胞培养上清中外泌体 (Exosomes) 的方法,为获得高质量的Exosomes提供参考?方法:分别采取超速离心法?进口ExoQuick-TC提取法?国产Ribo提取法提取A549细胞培养上清中的Exosomes?利用透射电镜进行形态学观察,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠法进行蛋白定量,Western blot检测Exosomes表面标志物 CD63表达?结果:3种方法均可提取到Exosomes,电镜下可观察到圆形膜性囊泡结构?进口ExoQuick-TC提取法及国产Ribo提取法提取样本浓度显著高于超速离心法(P < 0.05);3种方法提取样本均有Exosomes特异性标志蛋白 CD63表达,超速离心法CD63表达最高?结论:超速离心法?进口ExoQuick-TC提取法?国产Ribo提取法均可成功分离Exosomes,超速离心法获得的Exosomes纯度较高,应用试剂盒方法获得的Exosomes浓度高?     

急性髓系白血病患者外周血外泌体中miR-4286表达水平检测及其诊断价值

目的：检测急性髓系白血病（AML）患者外周血中外泌体miR-4286的表达情况,阐明miR-4286在AML诊断中的价值。方法：收集45例AML初诊患者（AML组）和35名同期健康体检者（对照组）外周血标本,利用超速离心法提取外周血中外泌体,离心产物分别采用透射电子显微镜（TEM）观察形态,纳米颗粒示踪分析（NTA）法检测粒子直径,Western blotting法检测表面标志物CD63和CD9蛋白的表达情况;采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组受试者外泌体中miR-4286表达水平;利用受试者工作特征（ROC）曲线计算曲线下面积（AUC）,分析miR-4286诊断AML的灵敏度和特异度。结果：TEM观察,提取的外周血外泌体为外观圆形、中间凹陷的膜状结构,直径为30～100 nm;NTA法,外泌体颗粒直径主要分布在30～150 nm;Western blotting法检测外泌体均表达CD63和CD9蛋白,具备外泌体的典型特征。RT-qPCR法,AML组患者外周血中外泌体miR-4286表达水平明显高于对照组（Z=-5.543, P<0.01）。ROC曲线分析,当外...     

旋转超滤：一种提取细胞外泌体的新方法

目的 建立一种利用旋转超滤技术从骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）培养上清液中分离外泌体（exosome）的方法。 方法 收集BMSCs细胞培养上清,低速离心去除残余细胞,0.22 μm滤器过滤除去细胞碎片,采用旋转超滤技术提取外泌体。应用透射电子显微镜观察所获外泌体的形态,用蛋白质印迹法检测外泌体标记物CD63、CD9蛋白的表达,用CCK-8试剂盒检测外泌体对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）增殖活性的影响。 结果 使用旋转超滤技术成功分离出BMSCs分泌的外泌体,透射电镜下外泌体为圆形或椭圆形,直径约100 nm,蛋白质免疫印迹法检测结果显示外泌体中有其特异标记物CD63、CD9蛋白的表达。外泌体能够促进HUVECs增殖,并且其促细胞增殖作用随浓度增高而增强。 结论 旋转超滤技术是一种简单有效的提取外泌体的方法。     

牛奶消化前后外泌体的变化及其对细胞增殖的影响

目的 探究超速离心法获取牛奶外泌体的最适离心力,探讨牛奶外泌体在体外消化模型中的稳定性及消化后的牛奶外泌体对大鼠肠隐窝上皮细胞IEC-6增殖的影响。方法 用体外消化模型消化牛奶,不同离心力超速离心分离牛奶外泌体,用Western印迹法、动态光散射、扫描电镜对消化前后获取的外泌体进行表征,CCK8实验分析外泌体对细胞增殖的影响。结果 牛奶消化后外泌体蛋白浓度明显降低,外泌体标记蛋白CD63和CD9在消化前后的分离产物中均为阳性。消化后的外泌体粒径大于未消化组,且粒径随离心力的升高而降低。扫描电镜下观察,消化前后的牛奶外泌体形态差别不大。用50μg/mL外泌体培养IEC-6细胞,结果显示牛奶消化前后的外泌体均对IEC-6细胞的增殖有促进作用,消化后离心(130000×g)获得的外泌体对细胞增殖的促进作用较为明显。结论 130000×g是获取牛奶外泌体的最适离心力。牛奶消化前后的外泌体在标记蛋白、形态上相似,表明牛奶中的外泌体能耐受体外消化模型的消化,牛奶消化后的外泌体仍能促进IEC-6细胞的增殖。     

失巢环境下肿瘤源性外泌体调控结肠癌细胞的增殖和凋亡相关机制研究

目的探讨失巢环境下肿瘤源性外泌体调控结肠癌细胞增殖和凋亡的相关机制。方法采用低黏附细胞培养板将结肠癌细胞系SW480培养建立结肠癌抗失巢凋亡细胞株。采用超速离心法收集抗失巢凋亡细胞和常规结肠癌细胞的外泌体,利用透射电镜观察外泌体的形态,采用Westernblot法检测外泌体标志物CD63和CD81的表达。采用CCK-8试剂盒、Edu试剂盒和AV-PI试剂盒检测在两种细胞源性外泌体的刺激下结肠癌细胞的增殖和凋亡能力。采用RT-PCR和Westernblot法检测细胞外信号调节激酶5（ERK5）、凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子（Bad）和半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的mRNA和蛋白的表达水平。结果透射电镜观察结果显示,外泌体为直径50~150nm的双层膜囊泡状结构。Westernblot结果显示,外泌体的分子标志物CD81和CD63表达阳性。失巢环境下提取的外泌体与结肠癌细胞共培养的过程中,可见结肠癌细胞可以摄取并内化PKH67标记的外泌体。抗失巢凋亡结肠癌细胞的细胞凝集能力要明显高于常规结肠癌细胞,差异有统计学意义（P＜0.05）。CCK-8和Edu染色结果显示,抗失巢凋亡结肠癌细胞外泌体与结肠癌细胞共培养后细胞的增殖能力要明显高于常规结肠癌细胞组（P＜0.05）。RT-PCR和Westernblot等结果显示,抗失巢凋亡结肠癌细胞组的ERK5、Caspase-3和Bad的表达水平均明显低于常规结肠癌组（均P＜0.05）,而Bcl-2高于常规结肠癌组（P＜0.05）。AV-PI试剂盒检测结果显示,抗失巢凋亡结肠癌细胞外泌体组细胞凋亡率明显低于常规结肠癌外泌体组（P＜0.05）。结论抗失巢凋亡结肠癌细胞外泌体可以通过ERK5信号通路促进细胞的增殖,抑制细胞的凋亡。     

外泌体对鼻咽癌细胞耐药的作用研究

目的 探讨外泌体在鼻咽癌细胞顺铂耐药机制中的作用研究。方法 以鼻咽癌细胞CNE-1为基础,利用浓度梯度递增与大剂量药物冲击相结合的方法建立鼻咽癌耐药细胞系,进行形态学观察,CCK-8法检测其耐药指数,免疫印迹法（Western blot）检测耐药蛋白的表达三种方法以验证耐药细胞系的建立。利用Transwell小室将耐药细胞与敏感细胞共培养,通过CCK8检测共培养后细胞的耐药性,Western blot检测耐药蛋白的变化;利用差速离心法提取细胞外泌体,通过透射电子显微镜观察外泌体形态、纳米颗粒跟踪分析（NTA）法检测外泌体的分子大小,Western blot检测外泌体特征蛋白TSG101、CD9、CD81的表达三种方法相结合对提取的外泌体加以验证。利用PKH67对外泌体进行荧光标记染色,并与敏感细胞共培养,通过共聚焦显微镜观察外泌体被细胞摄取的过程。结果 建立的鼻咽癌耐药细胞系CNE-1/DDP,耐药指数为5.15;显微镜下观察可见敏感细胞呈现规则的圆形,耐药细胞呈不规则的梭形或多边形状态,耐药蛋白MVP、P-gp蛋白高表达。共培养后的敏感细胞耐药指数为1.98,形态学变化尚不明显。透射...     

间充质干细胞外泌体调控氧化应激减轻D 氨基半乳糖/脂多糖诱导的急性肝损伤

目的: 探讨小鼠间充质干细胞来源的外泌体(exosome, Exo)对D-氨基半乳糖(D-galactosamine hydrochloride, D-GalN)/脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导的急性肝损伤治疗作用及可能机制。方法: 提取小鼠间充质干细胞,通过流式细胞术和细胞分化实验进行验证。超速离心法提取间充质干细胞外泌体,透射电镜和蛋白质免疫印迹对其鉴定,纳米颗粒追踪分析测定外泌体粒径电位。通过活性氧荧光探针考察外泌体减轻活性氧损伤的功能。CCK-8检测外泌体对肝细胞的保护作用。腹腔注射D-GalN/LPS制备急性肝损伤小鼠模型,考察外泌体对D-GalN/LPS诱导的急性肝损伤小鼠的治疗作用。结果： 原代间充质干细胞表达CD29和CD44两个标志蛋白,而不表达CD31和CD117,具有成骨分化能力。间充质干细胞外泌体为具有典型杯状结构的纳米囊泡,表达CD9和CD63两个标志性蛋白。与PBS组相比,干细胞外泌体能够减轻L02细胞内的活性氧水平,提高L02细胞活性,且外泌体本身对L02细胞活性没有影响。与PBS组相比,Exo治疗组能够改善肝脏组织损伤,降低转氨酶水平,调节丙二醛、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的水平。结论： 在细胞实验中,间充质干细胞外泌体能够减少活性氧,保护肝细胞的活性;在动物实验中,间充质干细胞外泌体能够下调氧化应激相关蛋白的表达,促进肝脏组织修复。     

不同转移习性人鼻咽癌细胞株中外泌体的提取及鉴定

目的 探索不同转移习性人鼻咽癌细胞株SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B、SUNE-1和正常鼻咽上皮细胞NP69细胞外泌体的表达情况,为进一步研究鼻咽癌的诊断和治疗新方法提供一定的理论基础。 方法 在2018年5月—2019年6月期间,用Exosome提取试剂盒从SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B、SUNE-1和NP69培养上清液分离出外泌体,使用透射电镜进行观察验证外泌体形态,BCA试剂盒测定外泌体蛋白的浓度,蛋白质印迹法(Western blotting)法进行外泌体特异性抗原分子CD63及筏蛋白-1的检测。 结果 3种鼻咽癌细胞系和正常鼻咽上皮细胞上清液中均分离出泡状物,在透射电镜下呈椭圆形或者圆形的泡状物。SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B、SUNE-1和NP69细胞系外泌体蛋白浓度分别为0.778、0.635、0.788、0.576μg/μL;且所有细胞系来源的外泌体经检测均表达特异性抗原分子CD63及筏蛋白-1。 结论 3种鼻咽癌细胞株SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B、SUNE-1和正常鼻咽上皮细胞NP69细胞均产生外泌体。      

人脐带间充质干细胞外泌体的分离鉴定及其溶血性能研究

目的：分离并鉴定人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSC）分泌的外泌体,研究其对人血的溶血性能。方法：通过超速离心法从脐带干细胞培养上清中分离外泌体,采用蛋白免疫印迹法、透射电镜和纳米颗粒跟踪分析法进行鉴定;制备人红细胞悬液,加入不同浓度外泌体,进行溶血试验,用试管法观察并用紫外分光光度法测定计算溶血度。结果：分离获得的外泌体特异富集蛋白CD9、CD81、Alix,不含有高尔基体蛋白Gm130;透射电镜下可见其呈杯盘状结构,粒径直径为40~120 nm;脐带干细胞外泌体对人血的溶血率小于5%。结论：HUCMSC分泌的外泌体具有外泌体的经典结构及典型特征,不引起人血溶血反应,为未来脐带干细胞外泌体作为载体进行药物递送提供了实验依据。     

小干扰RNA修饰BMSCs分泌的外泌体 对CCI动物模型修复的促进作用研究

目的 探讨Piezo2沉默质粒转染骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC）来源外泌体修复慢性压迫性神经损伤（chronic constriction injury,CCI）动物模型的相关作用。方法 以成熟的大鼠为实验对象,提取大鼠的骨髓组织培养原代BMSC,超速离心法提取Piezo2基因siRNA沉默质粒转染的BMSC来源外泌体,用手术方案构建CCI动物模型,根据实验目的将入组的SD大鼠分成模型组、BMSC组和外泌体组,利用荧光定量聚合酶链反应和免疫荧光染色法检测Piezo2、NeuN、IbA1和胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的mRNA相对表达量。结果 原代BMSC的CD29、CD90和CD105蛋白呈阳性,而CD45、CD34和CD11b呈阴性。而外泌体组动物（dorsal root ganglion,DRG）组织中脊髓背角小胶质细胞的激活明显弱于模型组和BMSC组。外泌体组Piezo2的mRNA相对表达量明显低于BMSC组和模型组（P<0.05）,外泌体组NeuN、IbA1和GFAP的mRNA相对表达量明显高于BMSC组（P<0.05）。结论 Piezo2沉默质粒转染BMSC来源外泌体可以促进CCI的修复,值得进一步推广。     

BMSC外泌体调控STAT3/GAP43通路促进脊髓后索损伤大鼠感觉传导功能恢复

目的 探索骨髓间充质干细胞外泌体修复脊髓后索损伤大鼠感觉的功能.方法 抽提大鼠骨髓间充质干细胞外泌体.将大鼠分为假手术组、PBS对照组、外泌体组,构建后索损伤模型.外泌体组经尾静脉注射外泌体, PBS对照组注射等量PBS.胶带移除实验和体感诱发电位评估感觉传导功能.免疫荧光染色观察脊髓后索形态.Western Blot检测STAT3蛋白和GAP43蛋白.结果 免疫荧光染色显示所提取骨髓间充质干细胞可表达CD29和CD90.Western Blot显示抽提外泌体高表达HSP70与Alix.与PBS对照组相比,外泌体组NF-200染色阳性神经元累积光密度大,体感诱发电位波形与胶带移除实验潜伏期改善,STAT3与GAP43蛋白表达升高(P＜0.05).结论 骨髓间充质干细胞外泌体可通过STAT3/GAP43通路修复后索损伤大鼠感觉功能.     

肿瘤样干细胞来源的外泌体促进人脐带间充质干细胞的增殖和侵袭

目的探讨Piwil2诱导肿瘤干细胞（Piwil2-iCSC）来源的外泌体对人脐带间充质干细胞（hucMSCs）肿瘤样生物学行为的影 响。方法超速离心法提取Piwil2-iCSCs外泌体,透射电镜、粒径分析、Western blot及外泌体摄入实验检测外泌体形态、直径、标 志蛋白表达及作用途径。将hucMSCs 分为对照组、PBS干预组和外泌体干预组（Exo）,CCK-8、细胞划痕实验、Transwell 和 Western blot检测各组hucMSCs的增殖、迁移、侵袭能力以及基质金属蛋白酶（MMPs）MMP2和MMP9蛋白的表达水平。细胞 染色体核型分析检测经Piwil2-iCSCs外泌体长期干预的hucMSCs的染色体结构。结果透射电镜可见Piwil2-iCSCs外泌体大 小均匀,直径在50~100 nm,呈形态较规则的圆形或椭圆形囊泡状小体,粒径分析显示外泌体直径分布集中在在100~200 nm; Western blot显示外泌体标志性蛋白CD9、CD63和piwil2蛋白阳性表达;外泌体摄入实验表明外泌体进入细胞发挥作用。与对 照组和PBS干预组相比,Exo组细胞增殖数量明显增多（P<0.05）,划痕愈合速度加快（24 h,P<0.05;48 h,P<0.01）,侵袭细胞数目 显著增加（P<0.01）。经Piwil2-iCSCs外泌体干预后的hucMSCs细胞MMP2（P<0.05 vs PBS干预组,P<0.01 vs 对照组）、MMP9 蛋白水平表达增高（P<0.05）,但染色体核型仍是46XY,无异常。结论肿瘤样干细胞Piwil2-iCSC外泌体能促进hucMSCs的增 殖、迁移及侵袭,但是未出现肿瘤样异质性改变。     

结直肠癌细胞外泌体的制备及其促单核细胞增殖作用

目的：从结直肠癌细胞系中分离鉴定外泌体,初步研究结直肠癌来源的外泌体潜在的免疫学特性,为外泌体在结直肠癌免疫学治疗中的应用提供依据。方法： 超速离心法从HCT116和SW480 2种结直肠癌细胞系培养上清中分离提取正常细胞外泌体和热休克细胞外泌体,进一步用220 nm的滤膜进行纯化获得纯度较高的外泌体。采用透射电镜观察所提取外泌体表征形态,聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析细胞和外泌体的蛋白组成,检测外泌体促进外周血单个核细胞（PBMCs）的增殖功能。结果：透射电镜下正常的外泌体和细胞热休克获得的外泌体形态相近,均呈现典型的圆形或椭圆形外泌体结构,直径为50~100 nm。聚丙烯酰胺凝胶电泳,结直肠癌细胞裂解物与结直肠癌细胞系来源外泌体的蛋白组成不同,与未处理和经热休克处理的结直肠癌细胞比较,外泌体对PBMCs的增殖有更强的促进作用（P<0.05）,热休克作用可使外泌体诱导的PBMCs的增殖程度显著升高（P<0.05）。结论 ：超速离心法和滤膜过滤方法可有效地从结直肠癌细胞系中提取外泌体,细胞裂解物和外泌体的蛋白组成差异可能是造成免疫学特性差异的主要原因,将细胞经热休克处理可增强外泌体的免疫原性。     

3T3-fGFP细胞摄取神经干细胞胞外泌囊泡的途径

目的 以超速离心方案提取胞外囊泡的鉴定为基础,初步探求小鼠神经干细胞C17.2胞外囊泡与小鼠胚胎成纤维细胞3T3-fGFP细胞之间的通讯交流通路.方法 分别用超速离心法获得胞外囊泡(EV)和Total Exosome Isolation Kit试剂盒获得外泌体(EXO);用透射电镜和原子力显微镜分别对两种样品进行形态学比较;用SDS-PAGE和Western blot分别对两种样品进行生物化学比较;用染料标记超速离心法获得胞外囊泡;将标记的胞外囊泡与3T3-fGFP细胞共孵育,对3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡进行研究;通过药理实验筛选3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡的主要通路.结果 C17.2细胞生长良好,形态规则未出现明显分化现象.在透射电镜下两种样品均观察到圆形双层膜结构和“杯状”外形的囊泡,直径分布多集中在300 nm以内,并且发现胞外囊泡的平均直径大于外泌体.原子力显微镜的结果显示,两种样品的高度分布多集中在2～20 nm以内,直径分布多集中在300 nm以内,并且外泌体的平均高度和平均直径均大于胞外囊泡.SDS-PAGE结果显示两种样品所含蛋白种类、表达丰度接近.在相同上样量下HSP70的表达强度两者接近,但CD63、CD9和CD81 3种蛋白在胞外囊泡中表达更强.摄取实验表明C17.2细胞胞外囊泡可以被3T3-fGFP细胞内化,被包裹在囊泡内,转运到细胞核周围的区域,并且摄取数量随着时间延长而增加(P＜0.05).通过药理实验确定网格蛋白(Clathrin)介导的内吞通路为3T3-fGFP细胞摄取C17.2细胞胞外囊泡的主要通路.结论 小鼠神经干细胞外泌体可能主要经网格蛋白介导的通路参与了神经干细胞与3T3-fGFP细胞的通讯.     

小鼠胰岛微血管内皮细胞外泌体的提取和鉴定方法

目的：建立小鼠胰岛微血管内皮细胞来源的外泌体的提取和鉴定方法,为糖尿病胰岛微血管内皮受损的发病机制研究及重建胰岛微循环完整性的应用提供必要材料。方法选取小鼠胰岛微血管内皮细胞株（MS-1）细胞作为研究对象,取其培养上清液,经多步离心结合蔗糖／D2O垫超速离心方法获取提取物,然后采用透射电镜和Western blotting 法对提取物进行形态和蛋白成分分析,以确定其是否为外泌体。结果提取物呈形态均一的类圆形囊泡,有完整双层膜包绕,内部含有低电子密度物质。囊泡大小约为40～100 nm,可散在分布,也可聚集成团,提取物均阳性表达CD63、CD9和TSG101分子。结论经过形态和蛋白成分分析证实所提取到的物质正是MS-1细胞来源的外泌体,便于后续临床和基础研究工作的开展。     

SACC-83来源的外泌体促进腺样囊性癌细胞的增殖

目的研究腺样囊性癌（ACC）肿瘤细胞来源的外泌体对自身肿瘤细胞增殖能力的影响。方法选取ACC细胞株SACC- 83,采用超滤管浓缩与试剂盒提取相结合的方法从SACC-83的培养上清中提取外泌体,通过透射电镜及蛋白免疫印迹法对所 提取的外泌体进行鉴定;将SACC-83来源的外泌体用荧光染料PKH67标记后与其分泌细胞共培养,采用激光扫描共聚焦显微 镜（LSCM）观察SACC-83对于自身来源的外泌体的摄取情况;采用MTT细胞增殖实验、细胞划痕实验及Western blot 法检测 SACC-83经自身外泌体作用后,其细胞增殖能力的变化情况以及ERK/P-ERK蛋白的表达变化。结果透射电镜及Western blot 的检测结果显示,SACC-83培养上清中所提取到的微囊泡直径为30~100 nm,且外泌体蛋白标记物CD9、CD63和TSG101的表 达为阳性;携带PKH67荧光标记的外泌体可被SACC-83摄取。MTT及细胞划痕实验结果示SACC-83来源的外泌体可促进自 身肿瘤细胞的增殖能力,Western blot结果显示P-ERK的表达上调,ImageJ软件行蛋白条带灰度值分析并统计显示实验组与对 照组具有显著统计学差异（P<0.05）。结论SACC-83来源的外泌体可被自身肿瘤细胞摄取,并可显著促进肿瘤细胞的增殖能 力,上调P-ERK的表达。该结果提示ACC可能通过外泌体途径促进肿瘤细胞的增殖能力,且ERK的活化以及MAPK/ERK信 号通路的激活可能是其促细胞增殖的潜在机制之一。