不同剂量天麻素对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路的影响

  目的  探讨不同剂量的天麻素（Gastrodin,Gas）对甲基苯丙胺（Methamphetamine,Meth）依赖条件性位置偏爱（Conditioned place preference,CPP）大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB通路的作用。  方法  建立Meth（10 mg/kg,ip,14 d）依赖大鼠CPP模型,采用低中高剂量的天麻素（10、30、100 mg/kg）干预14 d后,采用Western blotting和RT-qPCR方法检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中关键因子的蛋白和mRNA在海马中的表达水平。  结果  天麻素干预后TLR4、MyD88、NF-κB p65、TRAF6的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性降低 （P < 0.001、P < 0.01或P < 0.05）、p-NF-κB p65的蛋白表达呈剂量依赖性降低 （P < 0.01或P < 0.05） 、IκB-α的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性升高（P < 0.01或P < 0.05）,天麻素干预后p-IκB-α的蛋白表达降低（P < 0.01）。  结论  天麻素干预对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的神经炎症具有保护作用,且与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路密切相关。     

健脾养血祛风方对树突状细胞TLRs/MyD88/NF-kB信号通路的干预机制

目的探究健脾养血祛风方对树突状细胞(DCs) Toll样受体(TLRs)经典MyD 88-NF-κB信号通路的影响。方法从小鼠骨髓分离单核细胞并诱导培养为树突状细胞。采用流式细胞术检测小鼠DCs表面分子CD80和CD86的表达情况;CCK8检测健脾养血祛风方对DCs细胞活力的影响;RT-q PCR检测TLR2、TLR3、TLR4和TLR9表达水平,同时检测下游信号相关蛋白IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB表达;ELISA检测IL-4、IL-10、INF-γ、IL-12水平。结果在不影响细胞活力的前提下,50μg/mL健脾养血祛风方能明显增加TLR2、TLR3、TLR4和TLR9的表达(P<0.01),同时能促进DCs中IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB水平(P<0.01)。此外,50μg/mL、75μg/mL健脾养血祛风方还可增加INF-γ、IL-12的释放(P <0.01),抑制IL-4、 IL-10的生成(P <0.01)。结论健脾养血祛风方可促进DCs的TLRs/MyD 88/NF... 更多     

TLR4/MyD88/NF-κB 信号通路对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的影响

  目的  研究TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对甲基苯丙胺（methamphetamine,MA）依赖的条件性位置偏好（conditioned place preference,CPP）大鼠海马的影响,同时采用特异性抑制剂TAK-242抑制Toll样4受体（Toll-like receptor 4,TLR4）,减轻MA依赖诱导的海马神经炎症。  方法  建立MA（10 mg/kg,ip,14 d）依赖大鼠CPP模型,分别为生理盐水组、MA组、TAK-242组、MA+TAK-242组。TAK-242组和MA+TAK-242组先分别腹腔注射抑制剂TAK-242（3 mg/kg）,1h后MA+TAK-242组再腹腔注射MA（10 mg/kg）。采用Western Blot实验和采用荧光定量PCR实验检测MA依赖CPP大鼠海马中TLR4、MyD88、TRAF6、IκB-α、p-IκB-α、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白的表达和mRNA表达。  结果  与生理盐水组相比,MA组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均升高（P < 0.001或P < 0.01）,IκB-α的蛋白和mRNA表达下降（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65的表达升高（P < 0.01或P < 0.05）;与MA组相比,MA+TAK-242组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均下降（P < 0.001、P<0.01或P < 0.05）,IκB-α的蛋白和mRNA表达升高（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65表达下降（P < 0.01或P < 0.05）。  结论  MA依赖可通过激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,诱导CPP大鼠海马神经炎症的发生,采用特异性TLR4抑制剂可以减轻MA诱导的神经炎症。     

固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠气道上皮紧密连接蛋白及CCSP的影响

  目的  研究固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠气道上皮紧密连接蛋白及Clara细胞分泌蛋白(CCSP)的影响, 探讨其防治缓解期哮喘的可能机制。  方法  联合使用卵清蛋白(OVA)及呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)建立哮喘缓解期小鼠模型, 将36只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、固本防哮饮低剂量组、固本防哮饮中剂量组、固本防哮饮高剂量组和孟鲁司特钠组, 每组6只。模型建立完成后, 固本防哮饮各剂量组分别予不同剂量(12、24、36 g·kg-1)固本防哮饮, 孟鲁司特钠组予2.6 mg·kg-1孟鲁司特钠,各组均灌胃28 d。末次给药后24 h留取样本。使用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组小鼠肺组织病理; Western blot、qPCR及免疫组化检测各组小鼠肺组织中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)等气道上皮紧密连接蛋白表达; ELISA法检测肺组织及肺泡灌洗液(BALF)中CCSP的表达。  结果  HE染色结果显示, 与正常组相比, 模型组小鼠肺组织中可见明显的炎性细胞浸润(P < 0.01), 固本防哮饮中、高剂量组小鼠肺组织中炎性细胞浸润减少(P < 0.05,P < 0.01);与正常组相比,模型组中ZO-1、闭合蛋白(Occludin)和桥粒芯胶蛋白(Desmocollin)的蛋白表达水平显著降低(P < 0.05,P < 0.01),免疫组化结果显示上述指标蛋白在模型组中表达减少(P < 0.01, P < 0.001)且排列松散, 固本防哮饮各剂量组对上述蛋白表达有不同程度地回调; 同时,模型组中ZO-1、ZO-2、纽带蛋白(Vinculin)、连环蛋白(Catenin) mRNA的表达水平显著降低(P < 0.05,P < 0.01),固本防哮饮高剂量组ZO-1、ZO-2、Vinculin、Catenin mRNA表达水平显著升高(P < 0.05);与正常组相比, 模型组小鼠肺组织及BALF中CCSP的表达显著下降(P < 0.01), 低、高剂量固本防哮饮显著增加肺组织及BALF中CCSP的表达(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  固本防哮饮能够上调气道上皮紧密连接蛋白以及CCSP的表达水平, 修复上皮损伤, 恢复上皮屏障功能, 从而防治哮喘。      

p38/MAPK信号通路在高渗透压破坏角膜上皮屏障功能中的作用

目的 探讨高渗透压对角膜上皮屏障功能的影响及p38/MAPK信号通路在此过程中潜在的作用.方法 体外培养人永生化角膜上皮细胞(human corneal epithelial cells,HCEC),用不同浓度渗透压[302(正常渗透压)、350、500 mOsm/L]作用于HCEC细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖活性;免疫荧光检测细胞紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-1的表达和分布;p38/MAPK阻断剂预处理HCEC细胞前后,Western blot分别检测紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1和p38/MAPK信号通路表达及其磷酸化水平;跨膜电阻仪检测上皮细胞跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)的变化.结果 高渗透压对HCEC细胞增殖活性没有影响;免疫荧光染色可见正常渗透压组ZO-1、Claudin-1沿着细胞膜呈线性分布,而350、500 mOsm/L高渗透压组ZO-1、Claudin-1荧光信号均减弱,且细胞间紧密连接结构破坏(P＜0.05);在高渗透压下,HCEC细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1表达量明显下降(P＜0.05),p38/MAPK磷酸化水平增加(P＜0.05),上皮细胞跨膜电阻(TEER)降低(P＜0.05),而p38/MAPK阻断剂SB203580可抑制高渗透压引起的上述反应(P＜0.05).结论 高渗透压可以使人角膜上皮细胞屏障功能破坏,其机制为通过激活p38/MAPK信号通路导致紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1表达下降.     

颗粒物对气道上皮TLR2及其下游信号分子表达的影响

 目的  研究颗粒物(particulate matter, PM)暴露所致急性肺损伤的肺组织Toll样受体2 (Toll-like receptors 2, TLR2)及其下游分子的改变。方法  采用气管滴注PM小鼠模型, 将24只SPF级C57BL.6J雄性小鼠随机分成4组(每组6只):对照组、低浓度PM组、中浓度PM组和高浓度PM组。肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)细胞分类计数和肺组织苏木精-伊红染色评估肺损伤情况。免疫组化染色法(immunohistochemistry, IHC)观察TLR2在肺脏的表达情况。采用人支气管上皮细胞株BEAS-2B进行体外PM暴露研究, qRT-PCR、Western blot、流式细胞仪检测细胞TLR2及其下游信号分子的表达。结果  各PM暴露组小鼠BALF细胞总数增加, 中性粒细胞数量及构成比增加, 肺组织炎性损伤加重, IHC染色显示TLR2在气道上皮强表达。各PM暴露组支气管上皮细胞TLR2、MyD88 、IRAK1、RelA mRNA水平呈浓度梯度依赖上调表达, TLR2和p-NF-κB蛋白质水平增加。结论  PM所致急性肺损伤中, 肺组织尤其是气道上皮细胞TLR2表达明显上调。TLR2/MyD88/IRAK1/NF-κB信号通路在人支气管上皮细胞的激活可能介导PM所致肺组织的炎性损伤。      

脱敏煎通过TGF-β1介导的p38MAPK信号途径对大鼠睾丸支持细胞紧密连接的调节作用

[目的]探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号途径在睾丸支持细胞紧密连接中的作用以及脱敏煎含药血清对该信号途径的影响。[方法]体外分离培养大鼠睾丸支持细胞,分为空白对照组、阴性对照组、p38MAPK抑制剂组、TGF-β1刺激组、TGF-β1+p38MAPK抑制剂组和TGF-β1+脱敏煎组共6组。建立支持细胞原代双室培养模型,应用跨膜上皮电阻测定法检测细胞两侧跨膜上皮电阻值(trans-epithelial electrical resistance,TER);分别采用Real-time PCR和Western blot检测支持细胞闭合蛋白(Occludin)、p38MAPK的mRNA和蛋白表达量。[结果] 与空白对照组比较,阴性对照组TER、Occludin和p38MAPK mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05);与空白对照组及阴性对照组比较,p38MAPK抑制剂组TER、Occludin和p38MAPK mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05);而TGF-β1刺激组TER和Occludin mRNA和蛋白表达均显著降低(P＜0.01),p38MAPK mRNA和蛋白表达明显升高(P＜0.01)。与TGF-β1刺激组比较,TGF-β1+p38MAPK抑制剂组与TGF-β1+脱敏煎组细胞TER明显升高(P＜0.01),Occludin mRNA和蛋白相对表达量明显升高(P＜0.01),p38MAPK mRNA和蛋白相对表达量明显降低(P＜0.05或0.01)。[结论]TGF-β1可通过p38MAPK信号途径抑制Occludin蛋白表达,进而影响血睾屏障(blood-testis barrier,BTB)开闭,脱敏煎能够有效抑制p38MAPK表达,促进Occludin蛋白的表达。     

基于TLR4/MyD88/MAPK信号通路探讨脉络舒通丸抗血栓性浅静脉炎的作用机制研究

[目的] 探讨脉络舒通丸抗血栓性浅静脉炎（STP）的作用机制。[方法] 将36只日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、脉络舒通丸低、中、高剂量组、地奥司明组（阳性药对照），每组6只。除正常组外，其余各组均采用耳缘静脉注射20%甘露醇建立STP兔模型。造模同时各给药组连续灌胃给药14 d。苏木精-伊红（HE）染色法检测各组兔耳组织病理变化；酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平；测定凝血4项；蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测耳组织Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和c-氨基酸末端激酶（JNK）蛋白表达及相关磷酸化水平。[结果] 与正常组比较，模型组病理损伤评分显著增加（P<0.01）；血清中IL-1β、TNF-α和IL-6的表达水平明显升高（P<0.05）；活化部分凝血酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）缩短，纤维蛋白原（FIB）含量升高（P<0.05）；TLR4、MyD88、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK，包括p38MAPK、ERK1/2和JNK）蛋白及相关磷酸化水平均显著上调（P<0.01）。与模型组比较，脉络舒通丸低、中、高剂量组、地奥司明组兔耳组织病理损伤显著改善，病理损伤评分明显降低（P<0.05或P<0.01）；血清中IL-1β、TNF-α和IL-6的表达水平显著降低（P<0.05或P<0.01）；APTT、PT、TT明显延长，FIB含量明显降低（P<0.05或P<0.01）；TLR4、MyD88、MAPK（p38MAPK、ERK1/2和JNK）蛋白及相关磷酸化水平均显著下调（P<0.05或P<0.01）。[结论] 脉络舒通丸可能通过抑制TLR4/MyD88/MAPK信号通路，减轻炎症反应，改善凝血功能，从而发挥抗血栓性浅静脉炎作用。     

熊果酸(UA)对大鼠活化型肝星状细胞(HSC)的NADPH氧化酶(NOX)亚基及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路活化的影响

 目的  观察熊果酸(ursolic acid,UA)对大鼠活化型肝星状细胞-6 (hepatic stellate cell T6,HSC-T6) NADPH氧化酶(NAPDH oxidase,NOX)亚基及其调控的磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase/Akt,PI3K/Akt)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen activated protein kinase,P38MAPK)信号通路及其对基质金属蛋白酶组织抑制剂-1 (tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、基质金属蛋白酶-1(metal matrix proteinase -1,MMP-1)蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法  取对数生长期的HSC-T6细胞,随机分成6组:空白对照组、瘦素组(100 ng/mL)、UA干预组(UA 50 μmol/L+瘦素)、NOX抑制剂DPI干预组(DPI 20 μmol/L+瘦素)、P38MAPK抑制剂SB203580干预组(SB203580 10 μmol/L+瘦素)及PI3K抑制剂LY294002干预组(LY294002 10 μmol/L+瘦素)。采用Western blot法分别检测NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1蛋白表达;信号通路PI3K、Akt、P38MAPK的活化及TIMP 1、MMP 1蛋白表达。结果  UA能显著抑制瘦素诱导的gp91phox、 p22phox、p67phox、Rac1蛋白表达(P均<0.01),但UA对gp91phox、p67phox蛋白表达的抑制作用不及DPI和LY294002。UA能抑制瘦素诱导的PI3K蛋白表达及Akt、P38MAPK蛋白磷酸化(P均<0.01),与DPI及LY294002作用的差异无统计学意义。UA能抑制瘦素诱导的TIMP-1蛋白表达,同时促进MMP-1蛋白表达(P均<0.01)。结论  UA能抑制瘦素诱导的大鼠HSC T6细胞NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1表达及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的活化;其下调TIMP-1蛋白及上调MMP-1蛋白表达的机制可能与UA抑制NOX调控的PI3K/Akt及P38MAPK信号通路有关。     

连翘苷对H1N1病毒株感染小鼠的作用

目的 研究连翘苷对H1N1病毒株感染小鼠的影响。方法 60只H1N1病毒株感染小鼠经随机数字法分为感染组、连翘苷组、连翘苷+罗唑利宾(Loxoribine)[Toll样受体7(TLR7)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路激活剂]组,各20只;20只健康小鼠滴鼻等体积0.9%氯化钠溶液,设为正常组。流式细胞仪检测外周血CD4＋、CD8＋T淋巴细胞占比;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测肺组织病毒相对表达量;Western blot法检测肺组织TLR7、MyD88蛋白表达量。结果 与感染组比较,连翘苷组外周血CD8＋T淋巴细胞占比、肺组织病毒相对表达量、TLR7、MyD88蛋白表达量降低,外周血CD4＋T淋巴细胞占比、CD4＋/CD8＋升高(P＜0.05);与连翘苷组比较,连翘苷+Loxoribine组外周血CD8＋T淋巴细胞占比、肺组织病毒相对表达量、TLR7、MyD88蛋白表达量升高,外周血CD4＋T淋巴细胞占比、CD4＋/CD8＋降低(P＜0.05)。结论 连翘苷可抑制H1N1病毒株感染小鼠病毒复制,改善肺功能及免疫功能,可能通过抑制TLR7/MyD88信号通路活性降低炎性细胞因子水平,从而保护H1N1感染小鼠。     

宁泌泰胶囊改善慢性前列腺炎引发疼痛的研究

目的 研究宁泌泰(NMT)胶囊改善慢性前列腺炎引发疼痛的作用及潜在机制。方法 将50只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、NMT低剂量组、NMT中剂量组、NMT高剂量组,每组10只。造模后低、中、高剂量组分别灌胃给药6、12、18 g·kg^-1NMT溶液,空白组、模型组灌胃等量的生理盐水。采用热辐射甩尾法和热板法进行行为学检测;免疫组化法检测各组前列腺神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;qPCR法检测前列腺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA的相对表达量;ELISA法检测前列腺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α表达水平;Western blot法检测p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK蛋白表达水平。结果 与模型组比较,NMT低、中、高3个剂量组小鼠的热板法和甩尾法所测定痛阈值均显著提高(P<0.01,P<0.001),前列腺组织中GFAP和TNF-α表达量明显降低(P<0.05),TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平均显著降低(P<...     

预知子提取物增敏奥沙利铂诱导结肠癌HCT116细胞凋亡的研究

目的 探讨预知子提取物增敏奥沙利铂(OXA)诱导结肠癌HCT116细胞凋亡的作用及机制,为减少OXA毒副作用发生的临床应用提供研究基础.方法 将预知子乙酸乙酯萃取成分进行中压柱层析分离,并进行抗肿瘤药效筛选,获取活性部位B14,并进一步分离和鉴定该活性部位成分;运用MTT法检测B14、OXA及二者联用对HCT116的增...     

动脉旁路移植术后静脉桥再狭窄通路的机制

  目的  探索动脉旁路移植术后静脉桥再狭窄形成的信号通路机制。  方法  40只家兔随机分2组，假手术组和模型组，假手术组分离颈静脉、颈动脉，不做移植，模型组游离颈静脉，截取一段颈静脉方向调转后与颈动脉做端侧吻合，结扎两吻合口间的颈动脉，建立动脉旁路移植兔模型，移植后2 d、2周假手术组取出颈静脉，模型组取出移植静脉，肉眼观察，组织切片HE染色量化管腔狭窄程度，免疫组化检测p-p38表达水平，进行对比分析。  结果  与假手术组比较，模型组移植静脉2周后管腔显著性狭窄（P < 0.05），静脉移植后2 d、2周p-p38表达均显著性升高（P < 0.05），其中移植后2 d显著高于移植2周（P < 0.05）。  结论  冠状动脉旁路移植静脉桥再狭窄信号传导机制可能通过p38-MAPK通路。     

黄芪汤调节TLR4/NF-κB信号通路改善高糖诱导足细胞损伤的研究

  目的  探讨黄芪汤对高糖诱导足细胞损伤的作用及机制。  方法  体外培养人足细胞, 采用30 mmol·L-1葡萄糖干预24 h诱导足细胞损伤, 分别设置对照组、模型组、黄芪汤低浓度组(10 μg·mL-1)、黄芪汤中浓度组(30 μg·mL-1)和黄芪汤高浓度组(100 μg·mL-1)。采用CCK-8法检测细胞增殖能力, 划痕实验检测细胞迁移能力,qPCR法检测TNF-α、IL-6等炎症因子mRNA表达, ELISA法检测足细胞上清TNF-α、IL-6的含量,Western blot法检测足细胞TLR4、NF-κB、p-NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达。  结果  与对照组比较, 模型组细胞划痕愈合率明显降低(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6、CCL24 mRNA表达水平,上清液中TNF-α、IL-6的含量和TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达均显著增加(P < 0.05,P < 0.01)。与模型组相比, 黄芪汤组细胞划痕率明显升高(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6的含量和mRNA表达,以及TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达均显著减少(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  黄芪汤能有效减轻高糖对人足细胞的炎症损伤, 增强细胞增殖、迁移能力, 抑制细胞凋亡, 其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路、下调炎症因子的表达有关。      

柴胡加龙骨牡蛎汤加减通过p38 MAPK通路改善CKD小鼠PFC突触可塑性及抑郁行为研究

目的  探讨柴胡加龙骨牡蛎汤加减(CLMD)对慢性肾脏病(CKD)小鼠抑郁行为的作用及可能机制。方法  3月龄雄性C57BL/6小鼠60只, 分为对照组、模型组、氟西汀组、CLMD低剂量组、CLMD中剂量组和CLMD高剂量组。除对照组外, 其余5组小鼠先予0.2%腺嘌呤饮食喂养2周。中药干预组分别予2.36、4.725、9.45 g·kg-1·d-1的CLMD灌胃, 氟西汀组予10 mg·kg-1·d-1氟西汀灌胃, 对照组、模型组予生理盐水灌胃, 共计6周。糖水偏好测试、强迫游泳实验检测小鼠抑郁行为表型, Western blot法检测前额叶皮层(PFC) p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、脑源性神经营养因子(BDNF)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)、突触后致密蛋白95(PSD95)、突触素(SYN)、生长相关蛋白43(GAP43)和突触囊泡膜蛋白(SYP)表达; 免疫荧光法检测PFC脑区核内p-CREB的表达; Golgi-Cox染色检测PFC树突棘密度; ELISA法检测外周及PFC炎性因子水平及血清肌酐、尿素氮水平。结果  行为学检测结果显示: 与对照组相比, 模型组不动时间增加,糖水偏好指数下降(P < 0.01);与模型组相比, 给予中、高剂量CLMD干预后小鼠不动时间下降(P < 0.01), 糖水偏好指数增加(P < 0.05, P < 0.01), CLMD中、高剂量组与氟西汀组之间差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示: 与对照组相比, 模型组小鼠PFC中p-p38 MAPK/p38 MAPK表达增加(P < 0.01), BDNF、p-CREB/CREB、PSD95、SYN、GAP43、SYP表达下调(P < 0.01);与模型组相比, CLMD中、高剂量组, 氟西汀组小鼠p-p38 MAPK/p38 MAPK表达下调(P < 0.01), BDNF、p-CREB/CREB、PSD95、SYN、GAP43、SYP表达增加(P < 0.01)。免疫荧光结果显示: 与对照组相比, 模型组PFC的p-CREB核内荧光水平明显降低(P < 0.01);与模型组相比, CLMD中、高剂量组, 氟西汀组p-CREB核内荧光强度增加(P < 0.05, P < 0.01)。Golgi-Cox染色结果显示: 与对照组相比, 模型组小鼠PFC树突棘密度降低(P < 0.01);与模型组相比, CLMD中、高剂量组, 氟西汀组小鼠PFC树突棘密度增加(P < 0.01)。ELISA法检测结果显示: 与对照组相比, 模型组PFC及外周血清中炎性因子水平增加(P < 0.01), 血清尿素氮、肌酐水平增加(P < 0.01);与模型组相比, 氟西汀组及CLMD中、高剂量组PFC及外周血清中炎性因子水平下降(P < 0.05, P < 0.01), CLMD中、高剂量组血清尿素氮、肌酐水平下降(P < 0.05, P < 0.01), 氟西汀组尿素氮、肌酐水平无明显变化。结论  CLMD能调节中枢炎症状态, 改善PFC突触可塑性, 减轻CKD小鼠抑郁症状,同时可能通过影响外周炎症状态延缓CKD小鼠肾脏功能恶化。      

绿原酸通过TLR4/NF-κB信号通路调控脓毒症大鼠肠上皮细胞屏障功能的研究

目的 观察绿原酸通过调控TLR4/NF-κB信号通路减轻脓毒症(sepsis)大鼠肠道氧化应激损伤、改善肠上皮细胞屏障功能的作用。方法 选取SD大鼠60只,采用随机数字表法分成假手术组、模型对照组、绿原酸(低、高剂量)组,每组15只。术后24 h,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10;比色法测定小肠组织中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;采用Western blotting法测定小肠组织中的蛋白表达[密封蛋白-1(Claudin-1)、闭锁连接蛋白-1(ZO-1)及TLR-4/NF-κB通路相关的蛋白]。结果 与模型对照组[(4.45±0.14)分]比较,低剂量组[(4.17±0.22)分]、高剂量组[(1.95±0.08)分]Chiu评分明显下降(t=4.159、60.048,均P<0.001);高剂量组血清TNF-α、IL-6、IL-10水平及小肠组织中NO、MDA含量均显著降低(均P<0.05),SOD含量、Claudin-1、ZO-1蛋白表达量及MyD88...     

网络药理学结合转录组学方法探讨防己黄芪汤治疗肾病综合征作用机制

目的 基于转录组学与网络药理学方法探讨防己黄芪汤治疗肾病综合征的作用机制。方法 收集网络药理学和转录组学的共同靶点,进行GO/KEGG功能富集分析。构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)并进行网络拓扑分析,确定潜在核心靶点。构建通路-靶点网络图,确定发挥关键作用的信号通路。采用qPCR、Western blot法和免疫荧光染色验证大鼠肾脏组织中核心靶点的mRNA和蛋白表达水平。结果 PPI分析得到7个潜在核心靶点AKT1、AMPK、CPT1B、NF-κB1、P53、TGF-β1和TLR4,主要信号通路为AMPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、PPAR信号通路、NF-κB信号通路、TGF-β信号通路、P53信号通路、MAPK信号通路、JAK-STAT信号通路和FoxO信号通路。经动物体内实验验证,防己黄芪汤显著下调AKT1、CPT1B、NF-κB1、P53、TGF-β1、TLR4的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),上调AMPK的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论 从网络药理学和转录组学角度初步阐明了防己黄芪汤治疗肾病综合征多成分、多靶点、多途径的整体调节特点...     

金屏汤预防免疫力低下小鼠模型呼吸道合胞病毒感染的实验探究

目的 探讨金屏汤(JP)对免疫力低下小鼠的免疫调节作用及继发呼吸道合胞病毒(RSV)感染的预防效果。方法 将90只Balb/c小鼠随机分为空白对照组,模型组,匹多莫德(0.3 g·kg^-1)组,金屏汤高剂量(55.2 g·kg^-1)组、中剂量(27.6 g·kg^-1)组、低剂量(13.8 g·kg^-1)组,每组15只。通过腹腔注射地塞米松构建免疫力低下小鼠模型,分别以生理盐水,匹多莫德以及高、中、低剂量金屏汤灌胃7 d后,滴鼻感染RSV,空白组滴鼻等体积生理盐水。记录小鼠体质量,拍照记录脾脏体积,流式细胞术检测脾脏、肠系膜淋巴结、肺组织中免疫细胞亚群CD4⁺T、CD8⁺T、NK、DC比例;qPCR法检测肺部病毒载量,干扰素(Interferon, IFN)-β、干扰素刺激基因(Interferon stimulating gene, ISG)15 mRNA表达水平;HE染色评估肺组织病理学改变;流式细胞术检测肺泡灌洗液(BALF)中淋巴细胞浸润及肺组织中活...