电离辐射对小鼠胸腺bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的作用机制

目的:研究不同剂量X射线照射对小鼠胸腺bcl-2 蛋白表达及细胞凋亡的作用机制.方法:用免疫组织化学、图像分析技术及透射电镜技术分别检测小鼠胸腺bcl-2蛋白表达及细胞凋亡.结果:假照组胸腺实质内bcl-2蛋白表达主要分布于髓质,胸腺皮质内可有少量凋亡的胸腺细胞.2 Gy照射后4、8和12 h胸腺髓质内bcl-2表达减少,皮质内出现许多典型的凋亡细胞;0.075 Gy照射后bcl-2蛋白表达增多,皮质内凋亡细胞减少,且可见较多的细胞分裂像.结论:不同剂量电离辐射对胸腺细胞凋亡的影响与胸腺髓质内bcl-2蛋白表达水平有关.     

高能X线照射对人肝癌细胞株HepG2凋亡及bcl-2、Fas表达的影响

目的:研究高能X线照射后不同时间点人肝癌细胞株HepG2凋亡及bcl-2、Fas表达的变化,为原发性肝癌放射治疗的时间剂量分割提供借鉴。方法:用吸收剂量为5Gy的6MVX线单次照射HepG2细胞,以流式细胞仪测定受照后不同时间的细胞凋亡率,以免疫细胞化学法检测细胞受照前后bcl-2和Fas的表达水平。结果:高能X线可诱导HepG2细胞发生凋亡,照射后6h细胞凋亡率达到高峰(32%),同时bcl-2表达水平下降,Fas表达水平升高。结论:高能X线能够诱导肝癌细胞株HepG2发生凋亡,bcl-2及Fas可能参与其细胞凋亡的调控。     

尿多酸肽诱导乳腺癌细胞凋亡及相关基因表达的实验研究

目的:研究癌细胞分化诱导剂尿多酸肽(CDA-II)诱导乳腺癌细胞凋亡以及对凋亡抑制基因bcl-2表达的影响。方法:将CDA-II与不同生物学特性的乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231进行体外培养,同时以维甲酸为对照,观察CDA-II对乳腺癌细胞生长曲线、细胞凋亡、凋亡抑制基因bcl-2表达及形态学等方面的影响。结果:CDA-II可减缓两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力,诱导乳腺癌细胞凋亡,减少乳腺癌细胞bcl-2表达。结论:CDA-II可抑制不同生物学特性的两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力,诱导乳腺癌细胞凋亡,减少乳腺癌细胞bcl-2表达,为CDA-II治疗乳腺癌提供了一定的实验依据。     

Bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡

目的:研究bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯对人慢性粒细胞白血病K562细胞株诱导凋亡效应. 方法:合成bcl-2反义核酸(ASON)导入K562细胞,应用Western blot法检测bcl-2蛋白的表达,TUNEL技术、流式细胞仪法(FCM法)检测细胞凋亡. 结果:bcl-2反义核酸(ASON)能明显抑制bcl-2蛋白的表达. 青蒿琥酯在1～7 mg/L浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性, 7 mg/L青蒿琥酯作用72 h的K562细胞株A值最低. 原位细胞凋亡检测可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞株对青蒿琥酯的诱导凋亡作用更加明显;FCM法出现低于G1期DNA含量的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡主要发生在G1/S期,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞凋亡率显著增加. 结论:青蒿琥酯在体外一定浓度范围内可诱导K562细胞株凋亡,bcl-2反义核酸可增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡的作用.     

犬颅脑枪弹伤后心肌细胞凋亡及bcl-2的表达

目的:研究犬脑枪弹伤后心肌细胞凋亡及bcl-2的表达.方法: 建立犬颅脑枪弹伤模型,制备心肌组织切片.采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡以及用免疫组织化学方法检测bcl-2的表达.结果: 对照组偶见心肌细胞凋亡及bcl-2的表达,枪弹伤后3 h凋亡心肌细胞及bcl-2表达明显(P《0.01).心室壁内侧凋亡细胞分布基本一致(P》0.05),内外侧壁凋亡细胞分布不同(P《0.01).心室壁内侧以及内外侧壁心肌细胞bcl-2表达差异无统计学意义(P》0.05).结论: 犬脑枪弹伤后可造成心肌细胞损害和bcl-2表达.     

Bcl-2基因抑制神经细胞凋亡的实验研究

目的:观察原癌基因bcl-2对神经细胞凋亡的抑制作用。方法:培养PC12细胞至对数生长期,用100感染复数(multiplicity of infection,MOI)的携带bcl-2基因的慢病毒质粒及未携带bcl-2基因的慢病毒质粒感染PC12细胞。再将其分为A、B、C、D四组,A组为携带bcl-2基因慢病毒质粒的PC12细胞(bcl-2-PC12细胞),B组为未携带bcl-2基因慢病毒质粒PC12细胞(NC-PC12细胞),C组为bcl-2慢病毒质粒PC12细胞加H2O(2bcl-2-PC12细胞+H2O2),D组为NC慢病毒质粒PC12细胞加H2O(2NC-PC12细胞+H2O2)。应用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,采用BCA(bicincho ninic acid)法检测bcl-2基因表达蛋白。结果:A组细胞凋亡率低于B组(P<0.05),C组细胞凋亡率低于D组(P<0.05);A组bcl-2基因蛋白浓度高于B组(P<0.05),C组bcl-2基因蛋白浓度高于D组(P<0.05)。结论:bcl-2基因对正常神经细胞的凋亡有抑制作用,能够增强神经细胞的抗损伤能力。     

大鼠脑出血后细胞凋亡和bcl-2表达间关系的研究

目的研究脑出血后血肿周围水肿带内细胞凋亡与bcl-2表达的关系.方法使用胶原酶法建立大鼠脑出血模型.于脑出血后6、12、24 h、3、7 d选取血肿灶周围脑组织制成冰冻切片,对切片进行相应染色:用TUNEL法观察血肿灶周围细胞凋亡,通过免疫组化和原位杂交方法分别从mRNA和蛋白的水平观察bcl-2的表达.对染色结果进行图像分析及统计学处理,分析细胞凋亡与bcl-2表达的关系.结果脑出血6 h后血肿周围出现TUNEL阳性细胞,此时bcl-2的表达降低;之后凋亡细胞数量逐渐增加,至3 d达到高峰,此时bcl-2的表达仍处于低水平;3 d至7 d凋亡细胞数量减少,而bcl-2的表达增加.结论脑出血后血肿周围存在细胞凋亡,而bcl-2的表达降低是脑出血后发生细胞凋亡的重要步骤.     

转染bcl-2基因对心肌细胞低氧/复氧损伤中细胞凋亡的影响

目的:研究转染抗凋亡基因bcl-2对心肌细胞凋亡的影响. 方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立模拟心肌缺血/再灌注模型;提取含有人bcl-2基因的逆转录病毒真核表达载体pDOR-SB质粒,用脂质体介导的基因转染法将pDOR-SB质粒转染心肌细胞. 实验分3组:正常对照组、模拟缺血/再灌注组和基因转染组;计算台盼蓝摄取率,测定肌酸磷酸肌酶活性,透射电镜及琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡情况. 结果:在正常对照组未发现细胞凋亡,而在缺血再灌注组细胞凋亡明显增多,台盼蓝摄取率和肌酸磷酸肌酶活性明显增加(P<0.01),转染bcl-2基因组心肌细胞凋亡明显减少. 结论:细胞凋亡参与了心肌缺血/再灌注损伤,转染bcl-2基因可减少缺血/再灌注中的心肌细胞凋亡.     

雄黄对白血病细胞bcl-2和Fas蛋白的表达影响的研究

目的:检测雄黄诱导白血病细胞凋亡的能力,并探讨其分子机制。方法:应用形态学观察检测细胞凋亡,应用检测流式细胞仪白血病细胞bcl-2和Fas蛋白的表达。结果:雄黄可诱导白血病细胞发生典型的凋亡,白血病细胞有bcl-2强表达,同时雄黄可使白血病细胞bcl-2蛋白表达呈时间依赖性的下降。白血病细胞有较弱的Fas蛋白表达,随着雄黄与白血病细胞作用时间的延长,未见Fas蛋白表达有明显改变。结论:雄黄通过影响白血病细胞bcl-2蛋白的表达从而导致白血病细胞发生凋亡是其治疗白血病的重要分子机制。     

103Pd放射性支架对bcl-2表达影响的研究

目的:探讨γ射线对bcl-2基因的影响及意义.方法:将103钯(103Pd)放射性支架和普通支架分别植入犬的肝外胆管,免疫组化方法检测γ射线诱导犬胆管壁凋亡增殖平滑肌细胞中的bcl-2表达,计数凋亡细胞,计算机图像分析系统检测两组胆管管腔面积.结果:bcl-2表达103Pd支架组较普通支架组为弱,胆管出现增殖平滑肌细胞明显凋亡,肝外胆管无明显狭窄;普通支架组未出现增殖平滑肌细胞明显凋亡,肝外胆管有明显狭窄.结论:bcl-2表达与细胞凋亡发生和细胞对辐射敏感性有关;103附放射性支架通过降低bcl-2表达,促进胆管壁增殖平滑肌细胞凋亡,从而抑制肝外胆管狭窄.     

人舌鳞癌Tca8113细胞株中c-erbB-2、bcl-2表达

目的探讨口腔癌肿瘤细胞中c-erbB-2、bcl-2基因的表达水平及其在肿瘤形成、发展过程中的作用.方法采用荧光定量RT-PCR实验技术检测人舌鳞癌Tca8113细胞株中c-erbB-2、bcl-2基因mRNA表达水平.结果分光光度计检测纯度A260/A280均在1.8～2.0,通过基因表达扩增曲线图与看家基因GAPDH校正,得出目的基因的相对含量高.结论 bcl-2与c-erbB-2基因的表达水平在人舌鳞癌Tca8113细胞株中显著升高,可能在肿瘤形成、发展过程中起到一定的作用.     

反义寡聚脱氧核苷酸抑制HL－60细胞中bcl－2基因表达的研究

目的：研究ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达并探索ｂｃｌ－２基因ｍＲＮＡ特异的反义寡聚脱氧核苷酸（反义ＯＤＮ）对ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因表达的影响．方法：采用细胞原位杂交和免疫细胞化学染色技术检测ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达，人工合成ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ特异性反义ＯＤＮ片段与ＨＬ－６０细胞共培养，在作用一定时间后分别测定细胞中ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ和Ｂｃｌ－２蛋白表达的变化．结果：ｂｃｌ－２基因在ＨＬ－６０细胞中既有转录水平的高表达，又有翻译水平的高表达，人工合成的反义ＯＤＮ片段在一定浓度范围内，作用一段时间后细胞内ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达无显著改变，而蛋白表达却呈现了显著下降，与浓度和作用时间呈正相关．结论：人工合成的反义ＯＤＮ片段可以抑制ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２的转录作用．在进行白血病基因治疗的实验研究中，ｂｃｌ－２基因可以作为基因治疗的一个有用的靶基因．     

儿童急性白血病survivin,bcl-2,mdr1的表达及意义

目的：探讨急性白血病患儿survivin、bcl-2、mdr1 mRNA表达及临床意义.方法：用RT-PCR的方法检测患儿骨髓survivin、bcl-2和mdr1的mRNA.结果：初诊患儿survivin、bcl-2和mdr1的阳性表达率高于对照组.初诊急性淋巴细胞性白血病和急性髓细胞性白血病survivin、bcl-2、mdr1阳性表达率无显著性差异.完全缓解期患儿survivin和bcl-2阳性表达明显低于初诊白血病患儿.复发组survivin、bcl-2、mdr1三者阳性率明显高于缓解组.survivin阳性和阴性表达者外周血白细胞总数无显著性差异（P＞0.05）.结论：survivin和bcl-2在急性白血病患儿表达增高,其表达与急性白血病的类型和外周血白细胞总数无关.survivin、bcl-2和mdr1在儿童白血病的共表达可能提示预后不良.     

肺癌组织中微血管密度和bcl-2蛋白的表达意义及其相关性研究

目的探讨肺癌组织中bcl-2蛋白表达与微血管密度(MVD)之间的关系及它们在肺癌发生、转移及预后中的意义。方法采用免疫组化S-P法检测60例肺癌标本中bcl-2蛋白表达,以血管内皮细胞表面抗原CD34单抗标记测定肿瘤微血管密度(microvessl density,MVD)。结果MVD与肺癌的淋巴转移(P<0.05)、临床分期(P<0.05)相关;MVD表达高者预后差(χ2=7.24,P<0.01)。bcl-2与肺癌的组织分型(P<0.05)、非小细胞癌的分化程度(P<0.01)相关,而与肺癌的淋巴结转移、ptnm分期、生存率无关;bcl-2阳性组MVD明显低于bcl-2表达阴性组(P<0.05)。等级相关分析bcl-2蛋白表达与肺癌的MVD呈显着负相关(r=-0.375,P<0.01)。结论MVD是影响肺癌预后的重要因素;bcl-2可能在非小细胞癌中抑制组织中微血管的生成。但不是一独立预后因素。     

p16、bcl-2基因蛋白在胃癌和癌前病变的表达及意义

目的探讨p16、bcl-2基因在胃癌发生、发展中的重要作用以及在胃癌早期诊断中的意义.方法运用免疫组化技术检测胃癌及癌前病变中p16、bcl-2基因蛋白的表达.结果p16基因蛋白阳性表达率在轻、中、重度异型增生分别为66.67%、50.00%、37.50%,在胃癌为28.57%;bcl-2基因蛋白阳性表达率在轻、中、重度异型增生分别为28.57%、33.33%、37.50%,在胃癌为68.57%.p16基因蛋白的表达在轻度异型增生组及胃癌组有显著差异(P＜0.001);bcl-2基因蛋白的表达在轻度异型增生组与胃癌组(P＜0.025)、中度异型增生组与胃癌组(P＜0.01)均有显著差异.p16与bcl-2基因蛋白表达呈显著性负相关.结论p16基因的失活与bcl-2基因的过表达在胃癌的发生、发展中起重要作用;重度异型增生是一种重要的癌前病变;对胃异型增生粘膜进行p16、bcl-2基因检测有助于胃癌的早期诊断和治疗.     

人脑星形细胞肿瘤中细胞凋亡及bcl-2，Bax基因的表达

目的 :探讨人脑星形细胞肿瘤组织中的细胞凋亡 ,以及细胞凋亡与其相关基因bcl 2、Bax表达之间的关系。方法 :采用原位末端标记的TUNEL技术及免疫组织化学S P法对 30例星形细胞肿瘤手术标本进行检测 ,分别观察了肿瘤组织中凋亡细胞密度及bcl 2、Bax基因的表达。结果 :星形细胞肿瘤组织中普遍存在细胞凋亡现象 ,凋亡细胞密度随肿瘤恶性度的升高 ,呈逐渐降低的趋势 (t=2 .77,P <0 .0 1) ;bcl 2、Bax在星形细胞肿瘤组织中表达阳性率分别为 5 0 %和 10 0 % ,其中bcl 2表达强度与凋亡细胞密度呈显著负相关 (r=- 0 .92 2 ,P <0 .0 0 1)。结论 :细胞凋亡受抑在星形细胞肿瘤发生及间变过程中起重要作用 ;bcl 2基因表达对细胞凋亡的发生起抑制作用 ;Bax基因对细胞凋亡的调节可能存在更为复杂的机制。     

槲皮素诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

槲皮素是从中药及天然植物中提取的黄酮类化合物,具有抗肿瘤细胞增殖及促肿瘤细胞凋亡的生物学作用。本文主要阐述槲皮素诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制的研究进展,其中包括阻滞细胞周期;调节Bcl-2/bax的表达;上调cspases-3;阻遏热休克蛋白;抑制Survivin;抑制端粒酶活性;改变线粒体膜电位和阻断信号转导通路等。     

bcl-2基因表达与小细胞肺癌对抗机体免疫所致细胞凋亡的关系

目的 观察小细胞肺癌细胞侏bcl-2基因表达与其耐受肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）免疫攻击的关系，探索应用bcl-2硫代反义寡核苷酸（bcl-2 SON）治疗肺癌的途径。方法 bcl-2 SON处理小细胞肺癌细胞株NCI-H69，Western blotting检测其对bcl-2表达作用；分别把bcl-2表达不同的小细胞肺癌细胞株与肺癌标本分离出来的TIL共同培养，并通过JAM试验观察TIL诱导肺癌细胞凋亡的情况。结果 经bcl-2 SON处理后NCI-H69细胞的bcl-2表达明显受抑制。JAM试验结果显示，bcl-2SON处理的H69细胞及尢bcl-2表达的NCI-H82细胞在与TIL混合培养中，随着TIL浓度增加．凋亡细胞也增加；对照的NCI-H69可见bcl-2表达，JAM试验中随着TIL浓度增加，凋亡细胞的量无明显变化。结论 表达bcl-2的肺癌细胞可对抗肿瘤浸润淋巴细胞的免疫攻击，bcl-2 SON呵作为治疗肺癌的新途径。     

胃癌标本的X线形态与bcl-2蛋白表达的关系

目的　探讨bcl 2蛋白与胃癌标本X线形态学表现及临床病理因素之间的关系。方法　经低张气钡上消化道钡剂造影检查 ,确诊胃癌患者 3 5例 ,手术切除后新鲜标本沿大弯 (或小弯 )剖开 ,摄取大体标本照片 ,标本均匀涂钡 ,摄取标本涂钡照片 ;采用免疫组化SP方法检测 3 5例手术切除胃癌标本中bcl 2蛋白的表达。结果　胃癌组织中bcl 2阳性表达率为 82 86% ,明显高于癌旁及正常胃粘膜组织 (P <0 0 1) ,且与胃癌的分化程度及淋巴结转移有关 (P <0 0 5 )。 3 5例胃癌标本涂钡照片 ,其中 2 9例清晰显示癌肿周围粘膜破坏情况 ,在高中分化胃癌中 ,癌肿组织与周围正常粘膜皱襞中断截然的为 42 86% ,而在低分化胃癌中 ,80 %的患者 ,癌肿与周围正常粘膜皱襞中断截然 ,但经统计学处理P =0 0 6,无统计学意义 ;在胃癌的大体分型、淋巴结转移及浸润深度方面 ,与粘膜皱襞中断形式无统计学意义。结论　bcl 2在胃癌发生、发展过程中起重要作用 ,可作为胃癌预后的指标 ,但胃癌涂钡标本中粘膜皱襞中断形式与bcl 2基因之间的关系 ,需进一步探讨     

胃癌组织中bcl-2和p53基因蛋白表达及其关系研究

目的通过研究胃癌和慢性胃病组织中bcl-2和p53基因蛋白的表达情况,探讨胃癌的可能发病机制.方法经胃镜取材,用免疫组织化学方法检测胃癌和慢性胃病组织细胞中bcl-2和p53基因蛋白的表达.结果胃癌组bcl-2蛋白阳性表达率(62.00%)高于慢性胃病组(41.38%),但无显著性差异(P＞0.05),表达强度也无显著性差异(P＞0.05).胃癌组p53蛋白阳性表达率(56.00%)明显高于慢性胃病组(27.59%),有显著性差异(P＜0.01),表达强度也有显著性差异(P＜0.01).且bcl-2和p53蛋白表达的之间无明显相关性(P＞0.05).结论在胃癌的发生发展中bcl-2基因的异常表达是一种渐进的过程,而p53的异常表达往往出现在胃癌发生发展的晚期.可推断:在胃癌发生发展的不同阶段先后出现bcl-2和p53基因的异常表达.