发酵灵芝胞外多糖硫酸化修饰

发酵灵芝胞外多糖表现出微弱的抗肿瘤活性,硫酸化是改善多糖抑癌活性的重要途径,而多糖的硫酸化取代度与其生物活性密切相关。为了了解硫酸化取代度与硫酸化条件之间的关系,以获取不同取代度的产品,对发酵灵芝胞外多糖的硫酸化试剂以及硫酸化反应条件与取代度之间的关系进行了较深入研究。实验结果表明,氨基磺酸比氯磺酸的硫酸化过程更加缓和,尿素的加入也有利于缓和反应条件,提高取代度。     

微波辅助合成硫酸化发酵灵芝胞外多糖的研究

多糖的硫酸化修饰能提高多糖的生物活性。从灵芝深层发酵液中获取灵芝胞外多糖,以二甲基甲酰胺为反应溶剂,采用氨基磺酸为酯化剂,探讨了微波辅助加热合成多糖的途径。结果表明,将尿素作为催化剂微波辅助合成硫酸酯化多糖,反应条件温和,取代度可高达2.67。因此微波辅助合成法为获取高取代度硫酸化灵芝多糖开辟了一条新途径。     

盐胁迫环境下发菜胞外多糖抗氧化作用及镇痛抗炎活性

为研究NaCl(0.3 mol/L)胁迫条件下发菜胞外多糖体外抗氧化作用与体内镇痛抗炎活性,本实验通过体外自由基(羟自由基、O_2~-·、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical,DPPH)自由基)清除能力实验评价盐胁迫发菜胞外多糖的抗氧化作用;采取小鼠温浴甩尾法镇痛实验并结合皮下注射及腹腔注射两种给药方式分析盐胁迫发菜胞外多糖的镇痛作用;通过观察二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制效果分析盐胁迫发菜胞外多糖的抗炎作用。结果表明:相比于无盐胁迫的发菜胞外多糖,盐胁迫发菜胞外多糖对羟自由基、O_2~-·、DPPH自由基3种不同类型的自由基清除能力均有提高;盐胁迫发菜胞外多糖镇痛活性优于无盐胁迫发菜胞外多糖,痛阈值显著提高(P0.05),腹腔注射比皮下注射多糖吸收速率更快,腹腔注射后20 min药效达到峰值,皮下注射后30 min药效达到峰值;盐胁迫发菜胞外多糖有更好的抗炎效果,且盐胁迫发菜胞外多糖的抗炎作用呈现出一定的量效关系,高剂量(30 mg/kg mb)对耳肿胀治疗效果最佳。综上所述,相较于无盐胁迫发菜胞外多糖,盐胁迫发菜胞外多糖具有更好的体外抗氧化与抗炎镇痛活性。     

氨基磺酸法制备硫酸化大麦多糖

用氨基磺酸对大麦多糖进行硫酸衍生化。以大麦多糖取代度为指标,在对反应温度、时间、氨基磺酸量和甲酰胺量进行单因素试验的基础上,采用响应面法优化工艺条件,在调整的最佳反应条件下:温度80℃、时间5 h、氨基磺酸量1.5 g、甲酰胺量50 m L,硫酸化大麦多糖产品的硫酸根取代度为1.30。红外光谱分析证明硫酸根基团结合到了多糖分子上。     

豆渣多糖硫酸酯化工艺条件优化及其抗氧化活性

以豆渣为原料采用氯磺酸-吡啶法制备硫酸酯化豆渣多糖。以取代度为指标,采用单因素及正交试验对硫酸化试剂比例、硫酸酯化试剂与多糖溶液比例、反应温度及反应时间进行优化;采用邻二氮菲-H2O2法及比色法研究硫酸化豆渣多糖对羟基自由基及DPPH.的清除作用。结果表明,最佳酯化条件为:酯化试剂比例(氯磺酸:吡啶)1∶3,酯化试剂:多糖溶液(体积比)4∶3,反应温度80℃,反应时间2.5 h。在此条件下,豆渣多糖取代度达到2.15。硫酸酯化豆渣多糖对羟基自由基及DPPH.的清除作用比未酯化前豆渣多糖有明显的提高。     

裂褶菌胞外多糖的硫酸化修饰及红外表征

通过对提取出的裂褶菌胞外多糖的硫酸化修饰获得硫酸化多糖,用红外光谱检测硫酸化的结果。邻苯三酚自氧化法对多糖和硫酸化多糖的抗氧化活性进行了比较。随着多糖溶液浓度的增加,胞外多糖和硫酸化胞外的抗氧化活性也增强.当多糖溶液浓度为500μg/m L时,硫酸化胞外多糖对氧自由基的清除率达到32.73%,提高了28.88%。     

不同取代度的硫酸化肠浒苔多糖抗氧化活性研究

采用氨基磺酸-N,N-二甲基甲酰胺法进行多糖的硫酸化修饰,获得不同取代度的硫酸化肠浒苔多糖,通过测定硫酸化肠浒苔多糖对DPPH自由基,羟基自由基,超氧阴离子的清除能力和还原能力,考察了肠浒苔多糖取代度与抗氧化活性的关系。结果表明,取代度的大小受到硫酸化温度、硫酸化时间、DMF用量、氨基磺酸用量等的影响,其中氨基磺酸用量的影响最显著。随着取代度增大,肠浒苔多糖的抗氧化性先增强后减小,取代度在0.8~1.2范围内,肠浒苔多糖的抗氧化性较强,表明适度进行硫酸化修饰是提高肠浒苔多糖抗氧化活性的有效方式。     

烤烟多糖的硫酸化修饰及抗氧化活性

为了优选烤烟多糖硫酸化修饰的最佳条件,提高烤烟多糖抗氧化活性,采用超声辅助法提取烟叶多糖,并通过氯磺酸-吡啶法对其进行了硫酸化修饰;通过单因素实验和正交实验,确定了硫酸化反应的最佳工艺条件。采用DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)法和邻二氮菲法进行了抗氧化活性研究。结果表明:①硫酸化反应的最佳工艺条件为氯磺酸与吡啶的体积比l:6,反应时间3 h,反应温度80℃。在此条件下多糖硫酸酯的硫酸基质量分数为20.03%,取代度为2.587。②烤烟多糖经硫酸化修饰后,其抗氧化活性显著提高。      

硫酸化酵母多糖制备工艺及其鉴定

以废弃酵母泥为原料,用自溶-酶-碱法提取细胞壁多糖,Sevage法脱蛋白、凝胶层析、冷冻干燥得到纯度较高的酵母多糖,采用三氧化硫-吡啶法对所得多糖进行硫酸化修饰,通过单因素和正交试验确定硫酸化酵母多糖的最佳工艺,并用硫酸钡比浊法测定产物硫含量以及红外光谱分析其结构与硫酸根取代度。结果表明:多糖硫酸化的最佳条件为:三氧化硫和酵母多糖质量比3.0︰1,温度50℃,时间2.5 h,其硫酸化产物中硫含量为15.1%,硫酸化取代度为1.47,红外光谱分析提取的多糖为β-(1,3)-D-葡聚糖,经硫酸化后的多糖在833 cm-1和1203 cm-1处出现了两个吸收峰,其中833 cm-1为C-O-S的伸缩振动的特征峰,1203 cm-1为S=O拉伸特征峰,从而说明试验成功引入硫酸根。     

氮元素对发菜生长及多糖含量的影响

为优化培养条件,研究含氮(BG11)和无氮(BG110)培养基对发菜(Nostoc flagelliforme)的色素、藻胆蛋白及胞内多糖和胞外多糖(EPS)含量的影响。结果显示：含氮组发菜的叶绿素a(Chl a)、类胡萝卜素(Carotenoids)、藻蓝蛋白(PC)、别藻蓝蛋白(APC)、藻红蛋白(PE)的含量均显著高于无氮组;胞内及胞外多糖含量无氮组高于含氮组,两者胞内多糖含量最大分别为1.03mg/mL 和0.78mg/mL,EPS 含量最大分别为243.8μg/mL 和74.9μg/mL。表明氮元素的缺乏对发菜的色素合成有抑制作用,但在一定程度上能够促进胞内及胞外多糖的合成和分泌。     

脂肪酶催化猪油合成L- 抗坏血酸脂肪酸酯工艺条件

研究一种L- 抗坏血酸脂肪酸酯酶法合成的新途径。以廉价的猪油和L- 抗坏血酸作为反应底物,探讨酶法合成L- 抗坏血酸脂肪酸酯的工艺条件。结果表明,在该酶促反应中,混合有机溶剂体系中底物转化率高于相应纯有机溶剂体系中的转化率,最佳反应体系为30% 叔戊醇:70% 异辛烷(V/V)。研究各反应因素对转化率的影响,确定最适反应条件为底物L- 抗坏血酸与复合猪油甲酯的物质的量比为1:10、酶量10%、温度55℃、反应时间24h,转化率可达到(52.7 ± 2.8)%。     

响应面法优化菌草灵芝多肽-硒螯合物的制备工艺

采用响应面分析法优化菌草灵芝多肽-硒螯合物的制备工艺,以螯合物中硒含量为指标,考察亚硒酸钠溶液与多肽溶液体积比、反应温度、反应时间和pH值对螯合反应的影响,同时建立螯合物制备工艺的二次项数学模型并验证其可靠性,并利用红外光谱法对菌草灵芝多肽-硒螯合物进行表征。结果表明:影响菌草灵芝多肽与硒离子螯合的因素主次顺序为pH值反应温度体积比反应时间,最佳的螯合工艺条件为反应时间60 min、反应温度75℃、pH 9、亚硒酸钠溶液与多肽溶液体积比1∶2,最佳制备工艺条件下,螯合物中硒含量为(2 985.89±10.59)μg/g。采用红外光谱法对螯合物进行表征,表明所得物质为菌草灵芝多肽与硒的螯合物。本研究为合成有机硒化合物提供了一种新的原料,也为菌草灵芝的开发利用提供了一个新的思路。     

有机相脂肪酶催化合成阿魏酸乙酯

本实验研究了有机溶剂中脂肪酶催化阿魏酸乙酯合成反应。对催化合成阿魏酸乙酯反应的脂肪酶和反应介质进行了比较,最佳溶剂为叔丁醇,在所选的6种脂肪酶中,固定化于大孔丙烯酸树脂的南极假丝酵母脂肪酶B(Novozym 435)的催化活性最好。同时对影响合成阿魏酸乙酯反应的因素(底物浓度、底物摩尔比、温度、初始水含量、反应时间等)进行了探讨,优化了反应条件:在10ml无水叔丁醇中,当酸醇摩尔比为1:1,酸浓度为0.1mol/L,反应温度为60℃,反应时间为120h时产率达到最高,脂肪酶Novozym 435具有较高的稳定性,重复使用六次后产率仍然可达到23%。     

兰州百合多糖硫酸酯的制备及其抗氧化活性的测定

从兰州百合鳞茎中提取百合多糖（LPs）,用氯磺酸-吡啶法制备百合多糖硫酸酯（LPsS）。以百合多糖硫酸酯的硫含量为评价指标,依据响应面设计对反应温度、时间和酯化剂比例（氯磺酸∶吡啶）三个影响因素进行优化。得出最佳条件为反应时间1.5 h,反应温度43 ℃,氯磺酸与吡啶的体积比为1∶1。在此条件下,百合多糖硫酸酯中硫含量可达到10.98%。傅里叶红外光谱扫描显示在波数1 236 cm-1、813 cm-1处出现新吸收峰,说明百合多糖已被硫酸化。气质联用（GC-MS）分析百合多糖硫酸酯由甘露糖、葡萄糖、半乳糖3种单糖组成,其摩尔比为18:14:1。体外抗氧化活性试验结果表明百合多糖硫酸酯具有较好的清除DPPH自由基能力,并且抗氧化活性比未酯化前有所提高。     

麦芽糖月桂酸酯的分离纯化与结构鉴定

采用薄层层析(TLC)和硅胶柱层析分离纯化了脂肪酶催化合成的麦芽糖月桂酸酯,然后用高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)、红外光谱(IR)和核磁共振(NMR)法鉴定了纯化组分的分子结构。TLC分离麦芽糖月桂酸酯的合理条件:点样量5μl,以氯仿/甲醇(4:1,V/V)展开15min,然后用5%硫酸乙醇溶液喷雾、120℃显色20min。硅胶柱层析分离麦芽糖月桂酸酯的适宜条件:10ml反应液上12mm×1000mm硅胶(100～200目)层析柱,流动相为氯仿/甲醇(4:1,V/V),流速18ml/h,按1管/10min收集洗出液。两种分离组分分别为6’-O-麦芽糖月桂酸酯和6,6’-O-麦芽糖月桂酸二酯。     

A PCR Assay for Specific Detection of the Pandemic Vibrio parahaemolyticus O3:K6 Clone from Shellfish

: The current standard method for identifying Vibrio parahaemolyticus serotype O3:K6, an emerging pathogen with apparent enhanced virulence characteristics, typically takes 4 to 6 d to complete and requires serotyping. To provide a more rapid strategy, we optimized a polymerase chain reaction (PCR)‐based assay for specific detection of V. parahaemolyticus O3:K6. Of 78 V. parahaemolyticus isolates and other related species; only strains classified into the V. parahaemolyticus O3:K6 clonal group (n= 39) showed positive results in the PCR assay. The assay detected 2.3 cells/PCR reaction and 310 cells/g using bacterial cultures and inoculated oyster samples, respectively. Sensitive and specific detection of V. parahaemolyticus O3:K6 was possible following a 6‐h enrichment.     

甘露糖酯的分离纯化及分析方法研究

本文对脂肪酶酶催化合成月桂酸甘露糖酯的分离纯化作了研究。确定了甘露糖酯的薄层层析(TLC)条件:反应液3μl点样,在正己烷/乙酸乙酯(1:1,V/V)中展开,用5%硫酸乙醇溶液喷雾,在120℃烘箱显色20min。将TLC条件应用到硅胶柱层析分离甘露糖酯,条件为:反应液5ml上硅胶层析柱(硅胶60～100目,柱12×600mm),流动相为正己烷/乙酸乙酯(1:1,V/V),流速为18ml/h,按1管/10min收集洗出液,并用TLC检测、收集产物。采用质谱(MS)方法鉴定了分离纯化的甘露糖酯产物,发现丙酮溶剂中脂肪酶催化合成产物为月桂酸甘露糖的单酯和两种二酯异构体。而用HPLC-MS分析方法证实乙腈溶剂中合成产物为月桂酸甘露糖的单酯、二酯和三酯。     

液相色谱-串联质谱法测定食品中喹啉黄、酸性绿S和专利蓝V

目的:建立一种快速、准确的食品中喹啉黄、酸性绿S和专利蓝V的高效液相色谱-串联三重四级杆质谱测定方法。方法:样品经提取、聚酰胺小柱净化、解析处理后,采用XDB-C18色谱柱,以乙腈和0.02mol/L乙酸铵为流动相,梯度洗脱分离后,在负离子和多反应监测(MRM)模式下进行定性和定量分析。结果:在优化的条件下,喹啉黄、酸性绿S和专利蓝V的检出限为1～10ng/mL;在5～1000ng/mL质量浓度范围线性良好,相关系数均大于0.99;平均回收率在85%以上,相对标准偏差均小于10%。结论:该方法简单、灵敏度高,适用于食品中喹啉黄、酸性绿S和专利蓝V3种着色剂的同时定性和定量分析。     

河豚鱼16S rRNA基因部分DNA序列分析及应用

应用16S rRNA基因聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增通用引物,对3 属13 种福建省搜集的河豚鱼样品与9 个未知物种的河豚鱼样品的16S rRNA基因序列中的部分片段进行PCR扩增与脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid,DNA）碱基序列测定,各物种序列长度在611～614 bp之间。应用DNAMAN V6软件进行样品间DNA序列同源性比对分析,建立样品间系统关系同源树。供试13 个样品被划分为4 个类群组,群间的同源率为87%,群内同源率为94%～100%。根据序列同源性分析结果,9 个未知种名的样品被归类到3 个类群组中,推测9 个未知种名的样品为东方鲀属或腹刺鲀属。探讨了16S rRNA基因部分DNA序列测试及同源性分析技术在河豚鱼种属鉴别中应用的可能性。     

几种醇对Lipozyme RM IM催化卵磷脂乙醇解的影响及其工艺条件优化

研究脂肪酶Lipozyme RM IM催化大豆卵磷脂（phosphatidylcholine,PC）乙醇解反应制备溶血卵磷脂（lysophosphatidylcholine,LPC）过程中其他几种醇对PC乙醇解的影响,并对乙醇解条件进行了优化。发现正丁醇对PC乙醇解无明显影响,叔丁醇对PC乙醇解有一定的抑制作用,1,2-丙二醇和丙三醇呈现较好的促进作用。最后选用丙三醇作为乙醇解的促进剂,通过响应面分析法确定了无溶剂体系中Lipozyme RM IM催化PC醇解的最佳工艺条件为加酶量15%（以PC质量计,m/m）、反应温度28 ℃、加水量8%（水/乙醇溶液,V/V）、丙三醇10% （丙三醇/乙醇溶液,V/V）、底物质量浓度1.49 g/mL（PC/乙醇溶液,m/V）、反应时间11 h,此条件下 LPC转化率高达98.2%。实验证明,丙三醇对无溶剂体系中Lipozyme RM IM催化条件下的PC乙醇解反应有很好的促进作用。