缺氧复氧对乳鼠心肌细胞的损伤及其时间变化的研究

 目的 观察乳鼠心肌细胞的缺氧损伤以及缺氧复氧条件下不同复氧时间对乳鼠心肌细胞损伤的变化。方法 用MTT法检测缺氧损伤及不同复氧时间对乳鼠心肌细胞存活率的影响;LDH、T-SOD/GSH/GSSG试剂盒检测缺氧损伤及不同复氧时间下细胞损伤程度。结果 MTT及LDH、T-SOD/GSH/GSSG可检测到缺氧损伤及复氧损伤,且损伤于复氧1 h后趋于稳定。结论 乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤于复氧1 h后趋于稳定。     

还原型谷胱甘肽对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤LDH、MDA的影响

目的研究乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤后乳酸脱氧酶(LDH)及丙二醛(MDA)的变化及还原型谷胱甘肽(GSH)对其影响。方法乳鼠心肌细胞随机分为5组:A组为正常对照组;B组为A/R组(缺氧2h,复氧1h);C、D、E组为GSH处理组,即首先加入GSH,分别使其终浓度为40、80、160mg.L-1,然后进行A/R,于复氧后测定各组培养液中LDH水平及细胞内MDA含量和细胞活性。结果与正常对照组相比,A/R组LDH、MDA水平均显著升高(P<0.01),细胞活性显著降低(P<0.01)。与单纯A/R组比,D、E组上述变化均明显减轻(P<0.01)。结论GSH对乳鼠心肌细胞A/R损伤具有保护作用,并具有浓度依赖性。     

葛花总黄酮对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 观察葛花总黄酮预处理对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.方法 取0～2 d SD乳鼠原代心肌细胞培养,不同剂量葛花总黄酮预处理24 h后,采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4 )诱导心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,运用MTT法测定细胞存活率,同时测定细胞培养液中肌酸激酶(CK)含量和乳酸脱氢酶(LDH)释放量.结果 心肌细胞经过缺氧/复氧损伤后心肌细胞的存活率明显降低,上清液中心肌酸激酶的释放显著增加.葛花总黄酮预处理能浓度依赖性地升高细胞的存活率,同时降低培养液中CK和LDH释放量.结论 葛花总黄酮预处理对缺氧/复氧损伤心肌细胞都具有明显的保护作用.     

大豆苷元对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的观察大豆苷元对乳鼠心肌细胞损伤的影响并探讨其机理。方法体外培养乳鼠心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型,测定细胞存活率、上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量。结果大豆苷元10~160μmol/L均能提高缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率和用MTT法测得的A570 nm值(P<0.01);抑制缺氧/复氧损伤引起心肌细胞的LDH和CK释放;减少MDA的生成,提高SOD的活性,抑制NOS活性,降低NO水平(P<0.05,P<0.01)。结论大豆苷元对乳鼠缺氧/复氧损伤的心肌细胞具有保护作用。     

T3对缺氧/复氧致小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨小鼠乳鼠心肌细胞在缺氧和缺氧/复氧下心肌细胞损伤及凋亡情况及T3对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。 方法 采用1~2天新生昆明小鼠,分离培养心室肌细胞,分别给予不同时间缺氧及缺氧/复氧处理,观察细胞状态及细胞搏动次数,流式细胞仪分析细胞凋亡;给予T3预处理后进行缺氧/复氧损伤,流式细胞仪检测细胞凋亡,JC-1染色检测细胞线粒体膜电位;应用Western blot法检测心肌细胞凋亡蛋白。结果 缺氧可造成心肌细胞凋亡,缺氧时间越长,心肌细胞损伤越重,缺氧/复氧可进一步加重心肌细胞损伤,增加细胞凋亡率;T3预处理可减少缺氧/复氧所致损伤,减少细胞凋亡率,降低凋亡蛋白caspase-3、Bax的表达,减少细胞线粒体膜电位损伤。结论 缺氧可诱导心肌细胞损伤,缺氧时间越长,心肌细胞损伤越重,且缺氧/复氧损伤对心肌细胞损害更大;T3预处理可以保护心肌细胞并减少细胞凋亡。     

色满卡林对缺氧复氧致心肌细胞损伤的保护作用

目的研究色满卡林（Cromakalim，CRK）对缺氧复氧致大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用，并探讨其机制。方法用原代培养的Sprague—Dawley（SD）大鼠乳鼠心肌细胞建立缺氧2h复氧30min的损伤模型。采用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测培养液中LDH的活性；采用黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物岐化酶（SOD）活性；硫代巴比妥酸显色法测定细胞内丙二醛（MDA）含量；AV—PI双标记后应用流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果色满卡林对缺氧复氧造成的心肌细胞损伤有保护作用，表现为可以对抗缺氧复氧引起的LDH活性增加、MDA含量增加、SOD活性下降、凋亡率增加。结论色满卡林对缺氧复氧致培养大鼠乳鼠心肌细胞的损伤具有保护作用，此作用与抑制脂质过氧化、减少心肌细胞凋亡有关。     

淫羊藿苷预适应对乳鼠心肌细胞的保护作用

目的:探讨淫羊藿苷预适应对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤和氧化损伤的作用及其机制。方法:体外培养原代乳鼠心肌细胞,淫羊藿苷预适应24h后,采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)诱导心肌细胞缺氧/复氧损伤和过氧化氢(H2O2)诱导氧化损伤模型,测定细胞存活率(MTT法)、细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:在缺氧/复氧损伤模型和氧化损伤模型中,淫羊藿苷预适应明显提高细胞存活率,增加胞内SOD活性,降低培养液中LDH释放量和胞内MDA含量。结论:淫羊藿苷预适应对缺氧/复氧损伤以及氧化损伤心肌细胞都具有明显的保护作用,可能与其抑制脂质过氧化作用有关。     

还原型谷胱甘肽对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞的干预性研究

目的：探讨还原型谷胱甘肽（GSH）对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞损伤的保护作用。方法：将原代培养的乳鼠心室肌细胞分为正常对照与GSH不同浓度处理组,缺氧、复氧前均给予0、40、80、160mg/L浓度的GSH,缺氧2 h,复氧1 h。应用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性,用硫代巴比妥酚显色法测定丙二醛（MDA）含量。结果：与对照组相比,单纯缺氧/复氧（0 mg/L）组SOD活性显著下降、MDA水平显著升高（P＜0.01）。GSH预处理以剂量依赖性减轻细胞活力下降及MDA的上升,而对SOD的作用则在160 mg/L组达到峰值。结论：GSH对缺氧/复氧损伤的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与GSH的抗氧化作用有关。     

硫酸镁对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 研究硫酸镁对纯化培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用及其作用机制。方法 采用培养乳鼠心肌细胞建立缺氧／复氧损伤模型，实验分为五组：正常对照组、缺氧／复氧损伤模型组、缺氧／复氧损伤＋MgSO4（2．2、4．0、7．2mmol／L）组。分别用黄嘌呤氧化酶法测定细胞内SOD活性，硫代巴比妥酸法测定细胞内MDA含量，MTT染色法测定心肌细胞活力并测定培养液中LDH含量的变化。结果 硫酸镁能显著提高细胞内SOD的活性，降低MDA、LDH的含量并可提高心肌细胞的活力。结论 硫酸镁具有明显的抗缺氧／复氧损伤、保护心肌细胞的作用。     

促红细胞生成素对乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的:观察促红细胞生成素(eryrthropoietin,EP)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的影响及其相关机制探讨.方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,建立H/R模型.心肌细胞随机分为4组:①H/R组缺氧2 h,复氧4 h;②EP组在缺氧前1 h予EP(10 U/ml),随即缺氧2 h,复氧4 h;③Wortmannin EP组(W EP) 在EP预处理前30 min予3-磷脂酰肌醇激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3-K)特异性阻断剂Wortmannin(100 nmol/L);④正常对照组流式细胞仪检测细胞凋亡率.Western blot法检测心肌细胞EP受体表达和p-AKt/AKt比值.结果:EP可明显降低缺氧/复氧引起的心肌细胞凋亡,并明显增强SD乳鼠心肌细胞p-AKt/AKt比值;而Wortmannin减弱了EP的抗细胞凋亡作用,显著降低了p-AKt/AKt比值.结论:细胞凋亡参与了心肌缺氧/复氧损伤;EP可减少缺氧/复氧引起的SD乳鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与EP激活PI-3K/AKt信号通路有关.     

The antiapoptotic effect of insulin against anoxia/reoxygenation injury in cultured cardiomyocyte of neonatal rat

Objective： To study protective effect of insulin against cardiomyocyte apoptosis in anoxia/reoxygenation （A/R） injury of neonatal rat. Methods： The model of A/R injury was finished through receiving anoxia for 2h and reoxygenation for 4h in cultured cardiomyocytes of neonatal rat. The cardiomyocytes were divided randomly into 3 groups： control group （CON）, anoxia/reoxygenation group （A/R） and insulin-treated group （INS）. At the end of reoxygenation of 4 hours, activities of lactate dehydrogenase （LDH）, contents of malondiaidehyde （MDA）, were assessed through spectrophotometric procedures, myocyte apoptosis were detected through TUNEL and DNA Ladder. Results： MDA, LDH, and Apoptosis Index were significantly decreased in INS group compared with A/R group （P〈0.01）. Conclusion： Insulin has a protective effect against A/R injury in cultured cardiomyocyte of neonatal rat; the protective mechanism may contribute to antiapoptosis of insulin.     

神经再生素对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究神经再生素(NRF)对纯化培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法:采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,观察心肌细胞形态学变化,测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和线粒体脱氢酶含量改变,探讨NRF对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。结果:缺氧/复氧损伤后,胞体折光性下降,突起缩短或消失,搏动减弱或消失,NRF各剂量组心肌细胞形态均较缺氧/复氧组明显改善,NRF各剂量组SOD、MDA、线粒体脱氢酶活性与缺氧/复氧组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:神经再生素具有明显的抗缺氧/复氧损伤,保护心肌作用,其机制可能与其抑制心肌脂质过氧化损伤有关。     

钙敏感受体及钙蛋白酶在大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤中的表达及其意义

目的: 探究大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤中钙敏感受体及钙蛋白酶的表达变化及其意义。方法: 将原代培养的新生SD大鼠脊髓神经元随机分成4组：正常对照组、缺氧复氧组、激活组、抑制组。后3组神经元均制备缺氧复氧损伤模型,激活组加入钙敏感受体激动剂GdCl3,抑制组加入受体抑制剂NPS2390。应用Hoechst 33258染色观察各组脊髓神经元凋亡;应用免疫荧光技术分析钙敏感受体及钙蛋白酶蛋白在脊髓神经元的表达定位;采用蛋白质印迹法检测各组钙敏感受体、钙蛋白酶以及Bax蛋白的表达水平。结果： 与对照组比较,缺氧复氧组脊髓神经元凋亡增加,并且钙敏感受体、钙蛋白酶、Bax蛋白的表达明显升高（均P<0.01）;GdCl3可明显增强上述作用,而NPS2390可明显抑制上述作用。结论： 在缺氧复氧损伤过程中,脊髓神经元凋亡增加,钙敏感受体及钙蛋白酶表达增多。     

KATP抑制剂对七氟醚诱导乳鼠心肌细胞HSP70表达的影响

目的探讨HSP70在七氟醚诱导乳鼠心肌细胞预适应中的作用及其内在联系. 方法第2代培养心肌细胞随机分为正常对照组、缺氧/复氧组、七氟醚组、优降糖组、优降糖+七氟醚组,每组均缺氧2 h,复氧48 h.分别取复氧0、1、12、24、36和48 h的细胞用免疫组化染色检测乳鼠心肌细胞HSP70的表达.结果在各个时点,七氟醚组的HSP70表达最强,显著高于正常对照组、缺氧/复氧组、优降糖组和优降糖+七氟醚组(P<0.01),随着复氧时间的延长,七氟醚组HSP70表达从1 h开始增加,24 h表达最强, 具有显著统计学意义(P<0.05).且优降糖+七氟醚组HSP70表达与正常对照组、缺氧/ 复氧组、优降糖组组间无显著性差异(P>0.05).结论 HSP70和K ATP 通道均参与了七氟醚诱导乳鼠心肌细胞产生预适应过程,阻止KATP通道则抑制HSP70 的表达.     

参三七皂甙Rb1、Rg1预适应对肥厚心肌细胞缺氧复氧损伤细胞凋亡的影响

目的：研究参三七皂苷Rb1、Rg1药理性预适应对乳鼠肥厚心肌细胞缺氧／复氧损伤（A／R）细胞凋亡的影响。方法：采用血管紧张素Ⅱ诱导的肥厚心肌细胞A／R模型,心肌细胞随机分组：空白对照组,A／R模型对照组（组）,参三七皂苷Rb1、Rg10．01—10μmol／L药物预适应组（预适应48h后进行A／R处理）;用流式细胞术观察心肌细胞凋亡率,电镜观察细胞超微结构。结果：与A／R对照组相比参三七皂苷Rb1、Rg10．0110μmol／L预适应48h后,细胞凋亡率呈浓度依赖性下降,Rb1、Rg1最大凋亡抑制率分别为86．68％和85．26％（P〈0．01）。电镜超微结构观察显示参三七皂苷Rb1、Rg1组细胞凋亡明显减轻,细胞结构完整,细胞基本结构无损害。结论：参三七皂苷Rb1、Rg1药理性预适应具有明显抑制细胞凋亡、改善心肌细胞缺氧／复氧损伤作用。     

人小肠上皮细胞缺氧复氧损伤的预防研究

应用原代培养人小肠上皮细胞（IEC），观察缺氧复氧（A／R）对体外培养人IEC的损伤作用。结果表明：A／R可使IEC细胞存活率下降和乳酸脱氨酶（LDH）漏出增加，二者呈显著的负相关，其变化程度与A／R时间有依从关系。在缺氧前或缺氧后复氧前联合应用超氧化物歧化酶和过氧化氢酶可减轻A／R诱发的细胞存活率下降和LDH漏出量增加，应用别嘌呤醇世有同样的保护作用。表明：人IEC在复氧时可产生超氧基并引起细胞损伤。     

七氟醚和缺氧预适应诱导乳鼠心肌细胞HSP—70表达的改变

目的：探讨七氟醚预适应和缺氧预适应对乳鼠心肌细胞热休克蛋白70表达的影响。方法：第2代培养心肌细胞随机分为正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(A／R组)、缺氧预适应组(IP组)和七氟醚预适应组(S组)，每组均缺氧2h，复氧48h。分别取复氧0，1，12，24，36和48h的细胞，用免疫组化染色检测HSP70表达并进行图象分析。结果：在各个时间点，S组和IP组间的HSP70表达均显著高于A／R组和C组(P＜0．01)，A／R组的HSP70表达略高于C组，S组和IP组间的HSP70表达差异无显著性(P＞0．05)。随着复氧时间的延长，S组和IP组间的HSP70表达从1h开始增加，24h表达最强，与1h相比差异具有显著性(P＜0．05)。结论：七氟醚预处理和缺氧预处理均可诱导乳鼠心肌细胞HSP70在延迟相呈高表达，提示HSP70参与了七氟醚预适应和缺氧预适应的延迟保护相。