硫胺素和核黄素对H2O2诱导的DNA氧化损伤的影响

目的 探讨硫胺素和核黄素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞ECV304的DNA氧化损伤的影响.方法 于细胞培养液中分别加入硫胺素(终浓度为10、100、500、1000 mg/L)或核黄素(终浓度为20、100、300、500 nmol/L)预处理24 h,给予H2O2(终浓度为25 μmol/L)反应30 min,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)分析DNA氧化损伤情况.以不加H2O2、硫胺素和核黄素者为阴性对照组;以加H2O2而不加硫胺素、核黄素者为阳性对照组.结果 H2O2诱导ECV304细胞DNA断裂损伤,SCGE分析显示,阳性对照组拖尾细胞率、彗星尾长、尾部DNA含量和Olive尾矩等指标均较阴性对照组升高;经10、100、500 mg/L硫胺素或20、100、300 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标均较阳性对照组显著下降(P<0.05或P<0.01);经1000 mg/L硫胺素或500 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 适宜浓度的硫胺素和核黄素能降低H2O2诱导的DNA氧化损伤,高浓度的硫胺素和核黄素不能保护H2O2诱导的DNA氧化损伤.     

硫胺素和核黄素对H2O2诱导的DNA氧化损伤的影响

目的 探讨硫胺素和核黄素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞ECV304的DNA氧化损伤的影响.方法 于细胞培养液中分别加入硫胺素(终浓度为10、100、500、1000 mg/L)或核黄素(终浓度为20、100、300、500 nmol/L)预处理24 h,给予H2O2(终浓度为25 μmol/L)反应30 min,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)分析DNA氧化损伤情况.以不加H2O2、硫胺素和核黄素者为阴性对照组;以加H2O2而不加硫胺素、核黄素者为阳性对照组.结果 H2O2诱导ECV304细胞DNA断裂损伤,SCGE分析显示,阳性对照组拖尾细胞率、彗星尾长、尾部DNA含量和Olive尾矩等指标均较阴性对照组升高;经10、100、500 mg/L硫胺素或20、100、300 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标均较阳性对照组显著下降(P<0.05或P<0.01);经1000 mg/L硫胺素或500 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 适宜浓度的硫胺素和核黄素能降低H2O2诱导的DNA氧化损伤,高浓度的硫胺素和核黄素不能保护H2O2诱导的DNA氧化损伤.     

过氧化氢诱导同步化HepG2细胞DNA损伤和凋亡的敏感时相研究

目的:探讨过氧化氢(H2O2)诱导HepG2细胞的DNA损伤和凋亡效应在细胞周期不同时相的敏感性.方法:利用胸腺嘧啶核苷(TdR)阻断肝癌HepG2细胞于G1期末后,去除胸苷,培养不同时间,分别得到同步化的G1期、S期和G2/M期细胞,150 μmol/L的H2O2处理12 h,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)测定细胞的DNA损伤;将各期细胞用200 μmol/L的H2O2处理,采用流式细胞术测定细胞凋亡.同时实验设立未同步化和正常对照组.结果:①分别获得 88.6%的G1期细胞、78.1%的S期细胞、66.8%的G2/M期细胞.② SCGE结果显示,同步化于S期和G2/M期细胞的DNA尾长明显增长,尾部DNA百分比含量和尾矩明显增加,其中S期细胞效应最为显著.③凋亡检测结果显示,同步化各组细胞的凋亡率明显高于未同步化组,以S期最为显著.结论:H2O2诱导HepG2细胞DNA损伤和细胞凋亡在细胞周期的不同时相效应敏感性不同,主要诱导S期细胞的DNA损伤和凋亡.     

白藜芦醇抑制喉癌Hep-2细胞体外生长的初步研究

目的:研究中药白藜芦醇对喉癌Hep-2细胞的作用机制. 方法:应用单细胞凝胶电泳法(SCGE),检测白藜芦醇引起Hep-2细胞的DNA损伤. 结果:5和10 mL/L白藜芦醇能引起Hep-2细胞DNA损伤并具有剂量反应关系. 实验组细胞拖尾率(%)为82.2, 94.9,尾DNA含量(%)为12.25(9.10), 23.40(13.53),尾长(μm)为10.50(9.48), 18.45(8.20),尾动量(μm)为1.80(1.60), 3.80(3.73),显著高于对照组(P<0.01). 结论:中药白藜芦醇具有致Hep-2细胞DNA损伤的作用.     

单细胞凝胶电泳法检测HBV患者外周血淋巴细胞DNA损伤

目的 探讨乙型肝炎病毒与DNA损伤的关系以及不同感染模式慢性乙型肝炎患者（大三阳和小三阳患者）DNA损伤情况.方法 应用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术检测对照组和不同感染模式慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞DNA的损伤情况,采用彗星分析软件对实验结果进行淋巴细胞损伤率、彗星尾长（Tail Extent）、彗星尾DNA百分含量（Tail %DNA）、彗星尾惯量（Tail Inertia）、Olive尾距（Olive Tail Moment）等指标进行分析.结果 经SCGE技术后得HBV感染与DNA损伤断裂关系有统计学意义（P〈0.05）;大小三阳组间DNA损伤断裂有统计学差异（P〈0.05）. 小三阳组经SCGE技术后所得彗星图像可见有少量彗星尾.大三阳组经SCGE技术后所得彗星图像可见有明显彗星尾.慢性乙型肝炎组外周血淋巴细胞DNA损伤与对照组比较彗星尾长、尾惯量在统计学上有显著性差异（P〈0.05）;不同感染模式的乙型肝炎外周血淋巴细胞DNA损伤比较,尾长、尾DNA百分含量和尾惯量在统计学上有统计学差异（P〈0.05）.结论 HBV感染可能造成外周血淋巴细胞DNA损伤,且不同感染模式的损伤情况不同.     

彗星电泳法检测阿魏酸 咖啡酸对脱氧核糖核酸氧化损伤的影响

目的研究在细胞水平阿魏酸、咖啡酸对脱氧核糖核酸（DNA）氧化损伤的影响。方法分别用不同浓度（50、100、500μmol/L）阿魏酸、咖啡酸对人外周血淋巴细胞预处理后,过氧化氢（H2O2）于4℃下作用10 min,并用500μmol/L咖啡酸对细胞进行处理（未经H2O2作用）,采用单细胞凝胶电泳法,以彗星尾距为指标进行测量、分析。结果阿魏酸各浓度组彗星尾距较阳性对照组都有显著减小,并随剂量的增加,尾距呈减小趋势;咖啡酸在100μmol/L时尾距较阳性对照组显著减小,而在500μmol/L时尾距较低浓度组有所增加,并与100μmol/L浓度之间差异有统计学意义;用500μmol/L咖啡酸对细胞进行处理（未经H2O2作用）,尾距较对照组显著增加。结论阿魏酸在细胞水平显示出较强的抗氧化保护DNA的作用,而且保护作用有随作用浓度增加而增强的趋势;咖啡酸保护DNA的作用较弱,高浓度组咖啡酸（500μmol/L）表现出明显的DNA损伤作用,证明咖啡酸具有抗氧化和氧化增强的双重作用。     

胭脂红对3T3细胞DNA损伤的SCGE检测

目的 研究人工合成偶氮类色素胭脂红对体外培养小鼠胚胎成纤维细胞株(NIH3T3)DNA的损伤作用.方法 单层培养的3T3细胞中加入不同浓度胭脂红培养4 h,用碱性单细胞凝胶电泳技术(single cell gel electrophoresis, SCGE)检测3T3细胞DNA的单链断裂(single-strand breaks,SSBs)情况.结果 各染毒组彗星细胞率、彗星细胞的尾长、尾部DNA含量及尾矩与胭脂红浓度正相关,呈剂量-反应关系.结论 胭脂红对体外培养3T3细胞DNA具有损伤作用,浓度越大,损伤越严重.     

三黄茵赤方含药血清对LO2细胞DNA氧化损伤的影响

目的探讨三黄茵赤方含药血清对H2O2诱导LO2 细胞DNA氧化损伤的保护作用。方法采集三黄茵赤方含药血清,以
LO2细胞株为研究对象,通过H2O2 诱导LO2细胞DNA氧化损伤模型,实验分正常对照组、H2O2模型组、三黄茵赤方含药血清
5%、10%、15%浓度组、维生素E组,采用倒置显微镜观察各组形态,CCK-8法测定细胞存活率,生化法检测细胞内SOD、CAT和
GSH-PX活性,流式细胞仪检测细胞内ROS水平,ELISA检测细胞内8-OHdG含量,彗星实验检测细胞DNA损伤情况。结果
与H2O2模型组比较,三黄茵赤方含药血清10%、15%浓度组、维生素E组均能提高细胞存活率（P<0.05）,增强细胞内SOD、CAT、
GSH-PX活性（P<0.05）,改善细胞对ROS清除能力（P<0.01）,降低细胞内8-OHdG含量（P<0.01）,减低细胞拖尾率、尾长、尾矩及
Olive尾矩（P<0.05）。结论三黄茵赤方含药血清对H2O2诱导LO2细胞DNA氧化性损伤具有保护作用,以15%浓度含药血清组
作用最显著。
     

单细胞碱性凝胶电泳用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂

目的 引进单细胞凝胶电泳(SCGE)实验方法,用以检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂。方法 载有经紫外线和H2O2作用过的胸腺细胞和凝胶的玻片首先在pH10的弱碱性裂解液中作用1h,在电泳缓冲液中解旋30min,电泳30min,胸腺细胞核用20mg／L的EB染色5min,用荧光显微镜和显微细胞图像分析系统观察和分析H2O2和紫外线在体外条件下对正常胸腺细胞的DNA损伤作用。结果 紫外线和不同浓度H2O20．001、0．01、0．1、1．0mmoL／L均可导致小鼠胸腺细胞DNA损伤,且随着H2O2浓度的增加DNA损伤逐渐加重。结论 SCGE可用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂,使用这一实验方法成功地检测出H2O2和紫外线引起的胸腺细胞DNA损伤。     

微胶囊化儿茶素拮抗H2O2诱导的大鼠GMCs DNA损伤

目的:研究微胶囊化儿茶素对过氧化氢(H2O2)诱导的肾小球系膜细胞(glumreular mesangial cells,GMCs)DNA损伤修复作用及可能机制.方法:按H2O2终浓度分为0(对照组)、50 μmol/L组、100 μmol/L组、150 μmol/L组、200 μmol/L组、250 μmol/L组,每个处理组又分6,12,24 h 3个小组,筛选过氧化氢对GMCs DNA损伤研究的最适剂量与最佳时点.然后将培养细胞分生理盐水对照组、H2O2组、不同浓度儿茶素组(按终浓度又分为10.0,15.0,20.0 mg/L 3个组)与不同浓度微胶囊化儿茶素组(按胶囊中儿茶素含量终浓度又分为10.0,15.0,20.0 mg/L 3个组),共8组进行培养.利用生物化学法检测各组大鼠GMCs培养上清中羟自由基(hydroxy radical,·OH-)、丙二醛(malonydialdehyde,MDA)与总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,tSOD)含量,利用单细胞凝胶电泳技术检测大鼠GMCs DNA损伤修复.结果:(1)6 h时,100 μmoL/L过氧化氢剂量组即可引起GMCs DNA损伤,150μmoL/L组则可检测到DNA出现明显损伤;(2)微胶囊化儿茶素组GMCs慧星全长在不同剂量时与儿茶素组差异无统计学意义,微胶囊化儿茶素组GMCs慧星尾长与尾部荧光强度在不同剂量时均低于儿茶素组,差异有统计学意义(均P＜0.05,0.01);(3)10.0 mg/L时,儿茶素组与微胶囊化儿茶素两组之间相比,两组·OH-,MDA与tSOD含量差异无统计学意义;15.0 mg/L与20.0 mg/L剂量时,微胶囊化儿茶素组·OH-和MDA含量较儿茶素组降低,tSOD含量较儿茶素组增高,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论:微胶囊化儿茶素可能是通过提高其抗氧化能力而提高其对DNA损伤保护及损伤修复能力.     

牛磺酸对原代培养新生大鼠乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的作用

目的：探讨牛磺酸（Tau）对原代培养的新生大鼠乳鼠心肌细胞的保护作用及对心肌成纤维细胞的生长抑制作用。方法：将心肌细胞分为对照组、H₂O₂损伤模型组以及H₂O₂损伤加药物治疗组：阳性药川芎嗪（Lig）组及Tau大、中、小（80、40及20 mmol·L^-1）剂量组，预先24 h给予治疗药物后使用0.5 mmol·L^-1 H₂O₂损伤心肌细胞6 h，观察Tau对心肌细胞形态学的影响，MTT法测定反映心肌细胞存活力的A值以及测量乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量的变化；将心肌成纤维细胞随机分为7组，分别给予0、10、20、40、80、160及320 mmol·L^-1 Tau，MTT法测定不同浓度Tau对心肌成纤维细胞生长的影响。结果：H₂O₂损伤心肌细胞6 h后，Tau（80、40及20 mmol·L^-1）剂量组A值分别为0.479±0.055、0.437±0.052及0.421±0.062，与H₂O₂组（0.304±0.050）比较，差异均具有显著性（P<0.001或P<0.01）；Tau（80及40 mmol·L^-1）剂量组使H₂O₂损伤的心肌细胞LDH释放减少、SOD含量增加、MDA含量降低，与H₂O₂损伤组比较差异均具有显著性（P<0.01或P<0.05）；40～320 mmol·L^-1 Tau抑制心肌成纤维细胞的生长，与空白对照组比较差异具有显著性（P<0.05，P<0.01或P<0.001）。结论：Tau可通过减轻自由基对心肌细胞的损伤，抑制心肌成纤维细胞生长，达到心脏保护作用。     

褪黑素对丙烯酰胺致大鼠睾丸细胞DNA损伤的拮抗作用

目的研究丙烯酰胺(AA)致大鼠睾丸细胞DNA损伤及褪黑素(MT)对损伤的拮抗作用。方法 40只8周龄SD雄鼠,随机分为空白对照组、MT组、AA组和MT+AA组,每组10只。MT(10 mg.kg-1.d-1)腹腔注射,AA(25 mg.kg-1.d-1)经口灌胃染毒,共30 d。单细胞凝胶电泳检测睾丸细胞DNA损伤(CASP软件测定慧星尾长、慧尾DNA百分含量、尾矩及Olive尾矩),TUNEL标记凋亡细胞,ELISA试剂盒检测睾丸组织中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果与对照组比较,AA组大鼠睾丸细胞彗星尾长、彗尾DNA百分含量、尾矩、Olive尾矩均显著增加,凋亡细胞增多,睾丸组织8-OHdG和MDA含量增加,SOD活力降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与AA组比较,MT+AA组大鼠睾丸细胞DNA损伤程度减轻,凋亡细胞数减少,睾丸组织8-OHdG和MDA含量降低,SOD活力升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 AA能够引起大鼠睾丸细胞DNA损伤并诱发凋亡,且对睾丸产生氧化损伤;MT则能拮抗AA引起的损伤。氧化损伤可能是AA引起大鼠睾丸细胞DNA损伤的机制之一。     

硒对氟致小鼠成釉细胞DNA损伤的作用研究

目的:探讨硒对氟致小鼠成釉细胞DNA损伤的拮抗作用。方法:小鼠成釉细胞未经氟化钠处理为对照组;以氟化钠浓度分别为0.25,0.50,1.00,2.00,4.00mmol/L处理作为单独染氟组;以2.50,5.00,10.00μmol/L Na2SeO3为单独染硒组;以2.50,5.00,10.00μmol/L Na2SeO3+0.25,0.50,1.00,2.00,4.00mmol/L氟化钠为联合作用组。细胞作用24h后,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测DNA单链断裂情况。结果:与对照组相比,单独染硒组小鼠成釉细胞的尾长、Olive尾矩、尾DNA%、尾长/头长值显著性升高(P<0.05),而单独染硒组以上指标均明显下降(P<0.05)。2.50,5.00,10.00μmol/L Na2SeO3+氟化钠联合作用小鼠成釉细胞的尾长、Olive尾矩、尾DNA%、尾长/头长值明显低于对照组和相同剂量单独染氟组(P<0.05),且高于相应剂量的单独染硒组(P<0.05)。与2.50μmol/L Na2SeO3+氟化钠联合染毒组比较,5.00,10.00μmol/L Na2SeO3+各剂量氟化钠联合作用组Olive尾矩均升高(P<0.05)。结论:过量摄入氟化物可导致小鼠成釉细胞DNA损伤,而适量的硒对氟致DNA损伤有一定的拮抗作用,且实验浓度为2.50μmol/L时其拮抗效果较好。     

薯蓣皂苷对K562细胞的细胞毒作用及对DNA影响的研究

目的研究薯蓣皂苷的细胞毒作用和对遗传物质DNA损伤效应。方法利用MTT法测定薯蓣皂苷对白血病细胞株(K562细胞)的体外抑制作用,用彗星实验法检测薯蓣皂苷元对K562细胞的DNA损伤。结果薯蓣皂苷对K562细胞的生长有抑制作用,有量效关系。薯蓣皂苷可以导致K562细胞DNA发生断裂,随薯蓣皂苷的浓度梯度增大(1～500μg/ml),细胞的拖尾率、DNA尾部百分率、尾长、尾矩和Olive尾矩增加。结论薯蓣皂苷元对K562细胞的生长具有抑制作用,并会引起DNA断裂,可能会引起细胞DNA损伤,或者诱导细胞凋亡。     

Quercetin in combating H2O2 induced early cell apoptosis and mitochondrial damage to normal human keratinocytes

Background Oxidative stress plays an important role in the pathogenesis of epidermal diseases. This study aimed to investigate the effects of quercetin on the anti-oxidative response and on mitochondrial protection in cultured normal human keratinocytes. Methods Cultured HaCaT cells were treated with different concentrations of H202 （0, 50, 100, 250, 500 pmol/L） for different periods of time （0.5, 1, 2, 4 hours） to establish an oxidative stress model. The cultured HaCaT cells were randomly assigned to control, H2O2, and quercetin＋H2O2 groups. For the quercetin groups, the cells were treated with different concentrations of quercetin （0, 10, 25, 50 umol/L） before exposure to H2O2. Morphological changes of the cells were observed under an inverted microscope and an electron microscope. The cell viability was detected by the MIF method. The cell apoptosis （AnnexinV/propidium iodide double stain） and mitochondrial membrane potential （△ψm） changes were detected by flow cytometry. Results An oxidative stress model of HaCaT cells was established under a suitable concentration （250 umol/L） and treated time of H2O2 （2 hours）. The cell viability and △ψm decreased in a concentration-dependent and time-dependent manner while the percentage of apoptotic cells significantly increased in the H2O2 groups compared with the control group （P 〈0.05）. The cell viability and △ψm of the quercetin treated group increased （P 〈0.05） and the percentage of apoptotic cells decreased at concentrations of 1-50 umol/L quercetin （P 〈0.01） compared with H2O2 treated group. Conclusion Quercetin can relieve the cell damage and apoptosis from H2O2 induced injury to HaCaT cells by anti-oxidation and mitochondrial protection.     

天麻素抗谷氨酸和氧自由基诱导的PC12细胞损伤的研究

目的：研究天麻素对谷氨酸和氧自由基所诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法：用谷氨酸和H2O2造成PC12细胞损伤模型，采用MTT比色法、乳酸脱氢酶(LDH)活力检测法，探讨天麻素对兴奋性氨基酸和过氧化氢所致PC12细胞损伤的影响；采用Furd-3／AM为荧光指示剂，用Vector^2 1420研究天麻素对谷氨酸所致损伤PC12细胞内Ca^2 的作用；用流式细胞术检测该药对谷氨酸诱导PC12细胞凋亡的影响；利用荧光染色考察该药清除自由基的能力。结果：天麻素10^-7，10^-6，10^-5mol/L可明显提高谷氨酸诱导的PC12细胞还原MTT能力，抑制该细胞LDH的释放；天麻素还可抑制兴奋性氨基酸所引起的细胞内Ca^2 含量的升高；剂量相关性地降低PC12细胞的凋亡百分率。10^-6，10^-5moL／L剂量组可明显减轻H2O2引起的PC12细胞损伤；降低静息状态下PC12细胞内过氧化氢的含量。结论：天麻素可抑制兴奋性氨基酸诱导的细胞死亡和凋亡，具有清除自由基的能力，能对抗自由基诱导的PC12细胞的损伤，具有神经元保护作用。     

山楂叶总黄酮对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制的研究

目的探讨山楂叶总黄酮(flavone mixture of crataegus leaves,FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其分子机制.方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,用流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率,用Western blot 法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3P20蛋白及用RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA表达量的变化.结果与模型组比较FMCL 100μg/ml剂量组PC12细胞凋亡率下降,Bcl-2蛋白及mRNA表达量明显升高,而Bax、Caspase-3P20蛋白及Bax mRNA表达量明显降低(P<0.05或P<0.01),且在一定范围内存在剂量依赖关系.结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因及蛋白的表达从而抑制Caspase-3活化有关.     

Genistein对受辐射L-02人肝细胞增殖和DNA损伤的影响

[摘要] 目的 探讨金雀异黄素GEN（Genistein）对L-02人肝细胞DNA辐射损伤的防护作用。方法 实验分为正常对照组（N）,不同浓度GEN处理组（G）、单纯辐照组（R）和不同浓度GEN +辐照处理组（G+R）。L-02细胞分别用1,5,10,20μM GEN处理24h后,接受不同剂量X射线（4,6,8,12Gy）照射,继续培养48 h后利用MTT法检测GEN对细胞增殖率的影响,以确定有效辐射剂量及有效药物作用浓度;L-02细胞接受8Gy（300cGy/min）X射线照射后,利用单细胞凝胶电泳检测不同浓度GEN对细胞DNA辐射损伤的保护效果。结果 与N组相比,X射线剂量≧6Gy（300cGy/min）时,细胞增殖率随X射线剂量增加而显著降低（P<0.05）;1μM,5μM,10μM GEN处理细胞后增殖率随干预剂量增加而升高,5μM GEN处理后增殖率显著高于N组（P<0.05）; 照射剂量为6、8及12Gy时,5μＭGEN组细胞增殖率显著高于未处理组（P<0.05）。DNA损伤检测方面,N组和未照射各G组细胞未见拖尾,经8GyX射线照射后24h各组彗星发生率均小于1%,各组间彗星尾长无显著差异;照后48h, 单纯辐射组彗星发生率达到24.2%,彗星尾长达283.6±22.3μm,与单纯照射组相比,各浓度GEN组的彗星发生率和彗星尾长均显著降低（P<0.05）;照后72h,单纯辐射组彗星发生率较48h显著下降（P<0.05）,尾长显著缩短（P<0.05）,1μM、5μMGEN处理组彗星发生率和尾长仍显著低于单纯辐照组（P<0.05）,但10μM及20μMGEN组彗星发生率显著升高（P<0.05）,尾长显著增长（P<0.05）。 结论 低浓度（1μＭ、5μＭ）GEN能有效减轻X射线对L-02人肝细胞的DNA辐射损伤。