中国仓鼠肺成纤维细胞和HeLa细胞DNA氧化损伤的自身修复能力与比较

目的:研究不同氧化相关因素对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)和HeLa细胞DNA损伤的自身修复情况.方法:将CHL细胞和HeLa细胞用不同氧化相关因素处理一定时间[CHL细胞:过氧化氢(H2O2)25 min,重铬酸钾(K2Cr2O7)105 min,阿霉素(Dox)75 min;HeLa细胞:H2O2 25 min,K2Cr2O7 105 min],随后立即去毒培养0、0.5、1、2、3 h,以碱性单细胞凝胶电泳技术检测DNA链断裂情况.结果:①CHL细胞经H2O2、K2Cr2O7、Dox作用后引起DNA链断裂,去毒培养1 h链断裂修复明显(P<0.01);去毒培养2～3 h,前两毒剂的损伤组完全修复,而Dox组链断裂仍高于未损伤组;②HeLa细胞经H2O2、K2Cr2O7作用后引起DNA链断裂,去毒培养0.5 h链断裂明显修复(P<0.01),去毒培养1 h则完全修复;③CHL细胞和HeLa细胞损伤后修复的拖尾率与修复时间的回归系数显著不同(P<0.05).结论:两种细胞在氧化性DNA损伤后均迅速启动自身修复,但HeLa细胞比CHL细胞有更快的修复能力;同时这两种细胞由Dox所致损伤修复能力均较H2O2、K2Cr2O7所致的差.     

硫辛酸对细胞DNA损伤保护作用的初步研究

目的:用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)研究不同浓度过氧化氢(H2O2)分别作用于HepG2细胞2 h后DNA损伤的剂量效应关系,同时观察硫辛酸对H2O2损伤细胞DNA的保护作用. 方法: 将细胞分为对照组、损伤组和保护组,依次加入不同浓度的H2O2及硫辛酸,应用SCGE检测H2O2引起细胞DNA损伤. 结果: 随着H2O2浓度的增加,细胞DNA的损伤程度加重,能使尾长、尾部DNA百分含量和尾距显著增加(P《0.05). 硫辛酸能使H2O2损伤细胞的尾长、尾部DNA百分含量和尾距均较对照组减少(P《0.05). 结论: H2O2对细胞DNA损伤具有剂量效应关系,硫辛酸可以有效地减少H2O2引起的细胞DNA的断裂损伤.     

H2O2对ECV304细胞Grx mRNA表达的影响

目的通过体外实验，研究H2O2对人脐静脉内皮细胞（ECV304）谷氧还蛋白（Grx）mRNA表达水平的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（ECV304）；MTT实验观察H2O2对ECV304细胞增殖的影响；在时间相关性研究中，将细胞分为6组，第1组为正常对照组，第2、3、4、5、6组分别给予终浓度100μmol／L H2O2作用5min、10min、30min、60min、120min；在剂量相关性研究中，将细胞分为6组，第1组为正常对照组，第2、3、4、5、6组分别给予终浓度100μmol／L、200μmol／L、300μmol／L、400μmol／L、500μmol／L H2O2作用30min，采用Trizol一步法提取细胞总RNA，并用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）研究各组细胞Grx mRNA表达水平的差异。结景MTT结果表明，100μmol／L H2O2对细胞增殖无影响，200—500μmol／L H2O2均在不同程度上抑制细胞增殖（P〈0．05）。RT-PCR结果显示，在时间相关性研究中，终浓度100μmol／L H2O2作用10min、30min、60min均能使ECV304细胞中Grx mRNA表达水平增高，30min达到最大值，差异显著（P〈0．05）；剂量相关性研究表明，终浓度100μmol／L H2O2．400μmol／L H2O2作用30min均能使Grx mRNA表达水平增高，差异显著（P〈0．05），其中终浓度300μmol／L H2O2可使Grx mRNA的表达量最高（P〈0．01）。结论H2O2影响人脐静脉内皮细胞Grx mRNA的表达水平。     

硫胺素和核黄素对H2O2诱导的DNA氧化损伤的影响

目的 探讨硫胺素和核黄素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞ECV304的DNA氧化损伤的影响.方法 于细胞培养液中分别加入硫胺素(终浓度为10、100、500、1000 mg/L)或核黄素(终浓度为20、100、300、500 nmol/L)预处理24 h,给予H2O2(终浓度为25 μmol/L)反应30 min,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)分析DNA氧化损伤情况.以不加H2O2、硫胺素和核黄素者为阴性对照组;以加H2O2而不加硫胺素、核黄素者为阳性对照组.结果 H2O2诱导ECV304细胞DNA断裂损伤,SCGE分析显示,阳性对照组拖尾细胞率、彗星尾长、尾部DNA含量和Olive尾矩等指标均较阴性对照组升高;经10、100、500 mg/L硫胺素或20、100、300 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标均较阳性对照组显著下降(P<0.05或P<0.01);经1000 mg/L硫胺素或500 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 适宜浓度的硫胺素和核黄素能降低H2O2诱导的DNA氧化损伤,高浓度的硫胺素和核黄素不能保护H2O2诱导的DNA氧化损伤.     

过氧化氢诱导同步化HepG2细胞DNA损伤和凋亡的敏感时相研究

目的:探讨过氧化氢(H2O2)诱导HepG2细胞的DNA损伤和凋亡效应在细胞周期不同时相的敏感性.方法:利用胸腺嘧啶核苷(TdR)阻断肝癌HepG2细胞于G1期末后,去除胸苷,培养不同时间,分别得到同步化的G1期、S期和G2/M期细胞,150 μmol/L的H2O2处理12 h,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)测定细胞的DNA损伤;将各期细胞用200 μmol/L的H2O2处理,采用流式细胞术测定细胞凋亡.同时实验设立未同步化和正常对照组.结果:①分别获得 88.6%的G1期细胞、78.1%的S期细胞、66.8%的G2/M期细胞.② SCGE结果显示,同步化于S期和G2/M期细胞的DNA尾长明显增长,尾部DNA百分比含量和尾矩明显增加,其中S期细胞效应最为显著.③凋亡检测结果显示,同步化各组细胞的凋亡率明显高于未同步化组,以S期最为显著.结论:H2O2诱导HepG2细胞DNA损伤和细胞凋亡在细胞周期的不同时相效应敏感性不同,主要诱导S期细胞的DNA损伤和凋亡.     

硫胺素和核黄素对H2O2诱导的DNA氧化损伤的影响

目的 探讨硫胺素和核黄素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞ECV304的DNA氧化损伤的影响.方法 于细胞培养液中分别加入硫胺素(终浓度为10、100、500、1000 mg/L)或核黄素(终浓度为20、100、300、500 nmol/L)预处理24 h,给予H2O2(终浓度为25 μmol/L)反应30 min,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)分析DNA氧化损伤情况.以不加H2O2、硫胺素和核黄素者为阴性对照组;以加H2O2而不加硫胺素、核黄素者为阳性对照组.结果 H2O2诱导ECV304细胞DNA断裂损伤,SCGE分析显示,阳性对照组拖尾细胞率、彗星尾长、尾部DNA含量和Olive尾矩等指标均较阴性对照组升高;经10、100、500 mg/L硫胺素或20、100、300 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标均较阳性对照组显著下降(P<0.05或P<0.01);经1000 mg/L硫胺素或500 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 适宜浓度的硫胺素和核黄素能降低H2O2诱导的DNA氧化损伤,高浓度的硫胺素和核黄素不能保护H2O2诱导的DNA氧化损伤.     

硫酸铍对小鼠体外脾淋巴细胞DNA损伤的剂量效应

目的:观察不同剂量硫酸铍(BeSO4)在不同时相处理后引发小鼠体外脾淋巴细胞的DNA链断裂损伤的剂量效应. 方法:采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)分别测定BALB/c小鼠脾淋巴细胞体外染毒0.2, 2, 20, 100和200 μmol/L 1 h和2 h后DNA链断裂损伤情况. 结果:在不同剂量硫酸铍染毒1 h后,脾淋巴细胞出现DNA链断裂损伤的测定指标在各剂量组明显高于对照;染毒1 h 和2 h后,细胞均出现明显的DNA链断裂损伤,但其相同剂量组之间差异无显著性. 结论:硫酸铍可诱发小鼠体外脾淋巴细胞的DNA链断裂损伤.     

青紫薯色素对 60Co辐射小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用及其机制

①目的探讨青紫薯色素对^60Coγ-射线单次辐射小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的保护作用及其体外抗氧化作用机制。②方法建立^60Co辐射（强度为3 Gy）对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞损伤病理模型,分为6组：对照组、^600Co模型组、0．625g／L青紫薯色素组、1.250g／L青紫薯色素组、2．500g／L青紫薯色素组、^60Co＋1 g／L Vit C组。琼脂糖凝胶电泳观察DNA Ladder;流式细胞仪PI染色测定细胞凋亡率;Fluo-3-AM荧光染色测定细胞内游离Ca^2＋浓度;免疫细胞化学法测定P53蛋白的表达;原位杂交检测细胞p21 mRNA的表达;化学发光法和电子自旋共振（ESR）捕集技术检测青紫薯色素对超氧阴离子（O2^-）、羟自由基（OH^＋）、过氧化亚硝基（ONOO^-）和脂类自由基的清除作用。③结果0．625～2．500g／L浓度范围内青紫薯色素能抑制^60Co辐射所致淋巴细胞DNA梯状带的出现,降低淋巴细胞凋亡率,降低淋巴细胞内游离Ca^2＋浓度,抑制^60Co辐射后小鼠胸腺淋巴细胞P53蛋白在胞浆的表达,抑制^60Co辐射后小鼠胸腺淋巴细胞p21 mRNA的表达,同时青紫薯色素还可有效清除O2^-、OH^＋、ONOO^-和脂类自由基。④结论青紫薯色素能抑制^60Co辐射诱导的淋巴细胞凋亡,对^60Co辐射损伤的小鼠胸腺淋巴细胞具有保护作用。其作用机制与青紫薯色素能清除氧自由基、降低细胞内游离Ca^2＋浓度、减少DNA的断裂、抑制突变型P53蛋白的表达、抑制p21基因的表达,影响淋巴细胞凋亡的信号转导中的基因调控有关。     

bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响

目的:建立稳定表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210的DNA损伤模型,探讨bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响.方法:彗星实验检测不同浓度H2O2诱导的BaF3-P210细胞的DNA损伤建立DNA损伤模型,以空载体转染BaF3-MIGR1细胞为对照;用彗星实验对两组细胞在DNA损伤后的修复进行不同时间段的动态观测.结果:彗星实验确定了细胞DNA损伤模型的建立条件是:采用50 μmol/L终浓度的H2O2对BaF3-MIGR1细胞和BaF3-P210细胞进行染毒,H2O2作用温度和时间均为4℃,10 min.BaF3-P210细胞与BaF3-MIGR1细胞相比DNA损伤后修复时间缩短,在损伤后60 min即可达到完全修复,而后者在损伤后120 min才能完全修复(P＜0.05).结论:建立了表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210细胞的DNA损伤模型,并发现bcr/abl融合蛋白可增强BaF3-P210细胞的DNA损伤后修复能力.     

茶多酚对紫外线引起的DNA损伤的保护作用

目的　研究茶多酚对由紫外线诱导的DNA损伤的保护作用。方法　体外培养人肺成纤维细胞 ,加茶多酚处理 2h后 ,紫外线分别照射 7、15、30min ,然后用单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA的损伤情况。结果　经紫外线直接照射的细胞DNA损伤严重 ,而在照射过程中加入浓度为 2 5 0 μg/L的茶多酚后细胞DNA损伤明显减轻。结论　紫外线照射细胞可使DNA受到损伤 ,茶多酚具有拮抗这种损伤的作用 ,可能与其抗氧化等功能有关     

The Protective Effects of N-Acetylcysteine on Exogenous Hydrogen Peroxide and Endogenous Superoxide Anion-induced DNA Strand Breakage in Human Spermatozoa

Objective To explore the protective effects of N-Acetylcysteine (NAC) on exogenous hydrogen peroxide and endogenous superoxide anion-induced DNA strand breakage in human spermatozoa by using the single-cell gel electropherosis (SCGE). Methods Sperm cells were exposed to 0. 5 mmol/L of H2O2 or 5. 0 mmol/L of β-NADPH with or without 0. 1, 0. 5, 1. 0 mmol/L of NAC. The percentage of sperm comet cells and the comet tail lengths were measured in the treated sperm cells by using SCGE. Results Both percentage of comet sperm nuclei and mean tail length in sperm cells exposed to 0. 5 mmol/L hydrogen peroxide with different concentrations of NAC decrease significantly in a dose-dependent manner as compared with sperm cells exposed to H2O2 without NAC or catalase. Although mean tail length in sperm cells exposed to 5. 0 mmol/L of β-NADPH with different concentrations of NAC decreases significantly compared with sperm cells exposed to β-NADPH without NAC or SOD, there were no significant differences on the percentage of sperm comet cells between sperm cells exposed to 5. 0 mmol/L of β-NADPH with different concentrations of NAC and sperm cells exposed to 5. 0 mmol/L of β-NADPH without NAC. Conclusion NAC has a protective effect on exogenous hydrogen peroxide-induced DNA damage, while protective effect of NAC against O2^- induced DNA strand break-age is significant but very weak.     

煤焦沥青烟提取物致大鼠肺泡巨噬细胞DNA损伤作用

目的　研究煤焦沥青烟提取物致大鼠肺泡巨噬细胞 (AM )DNA损伤作用。方法　将大鼠肺泡巨噬细胞分 4组与不同浓度的煤焦沥青烟提取物共育 1h后 ,采用单细胞凝胶电泳技术检测大鼠肺泡巨噬细胞DNA断裂情况。结果　单细胞凝胶电泳后 ,对照组肺泡巨噬细胞无明显细胞拖尾现象 ,而经不同浓度的煤焦沥青烟提取物处理后 ,AM细胞有明显的拖尾现象 ,且随煤焦沥青烟提取物浓度增加 ,AM细胞彗星率上升 ,各组间差异有高度显著性 (P <0 .0 0 1) ,而且损伤的严重程度与作用物浓度呈相关关系 (Spearman相关系数为 0 .6 73,P <0 .0 0 1)。结论　煤焦沥青烟提取物作用于大鼠肺泡巨噬细胞可引起DNA链的断裂 ,单细胞凝胶电泳适于检测肺泡巨噬细胞的DNA链断裂     

SCGE和染色体畸变分析用于遗传毒性检测的比较

目的 比较单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和染色体畸变分析(CA)在遗传毒性检测中的灵敏性. 方法48只小鼠分为4组,3个实验组小鼠分别用不同剂量(0.5,1,2mg/kg)的丝裂霉素C(MMC)进行一次性腹腔注射,对照组小鼠注射等体积生理盐水,分别用SOGE和CA对小鼠骨髓细胞的遗传损伤进行检测.结果采用SCGE方法检测,三个MMC剂量组的小鼠骨髓细胞拖尾率与平均尾长均高于对照组,差异有统计学意义;采用CA检测,只有2 mg/kg MMC组的畸变细胞率显著高于对照组(P<0.01).结论对于遗传毒性的检测,SCGE更为敏感,更适用于低剂量致变因子遗传毒性的检测分析.     

彗星试验检测武汉市氯化饮水有机提取物对HepG2 DNA的损伤

目的 研究武汉市主要水源C江、D湖、H水的氯化饮水有机提取物对HepG2 DNA的损伤。方法 氯化饮水有机提取物染毒HepG2后，用单细胞凝胶电泳(亦称彗星试验)检测DNA损伤。结果 氯化饮水有机提取物诱导DNA损伤的最低浓度，C江、D湖、H水丰水期(8月份)均为1．67ml/ml培养液，平水期(3月份)分别为167、16．7、1．67ml/ml培养液；最高浓度(167ml/ml培养液)氯化饮水有机提取物诱导的HepG2 DNA迁移度，C江、D湖的丰水期均明显高于平水期(均P＜0．05)；最高浓度氯化饮水有机提取物诱导HepG2DNA损伤的强度，H水＞D湖和C江(均P＜0．01)。结论 武汉市主要水源C江、D湖、H水的氯化饮水有机提取物对HepG2 DNA有损伤作用，损伤作用的严重程度H水＞D湖＞C江，丰水期＞平水期。     

F-2毒素致DNA损伤研究

目的　研究F - 2毒素引起体外培养细胞 (HELA细胞 )的DNA损伤。方法　应用单细胞凝胶电泳技术 (SCGE) ,测定玉米赤霉烯酮 ,即F - 2毒素。结果　F - 2毒素在 1～ 1 5 μg/mL细胞悬液浓度范围内能够引起细胞DNA损伤并存在明显的剂量反应关系。结论　不同剂量的F - 2毒素可引起体外培养细胞拖尾 ,说明F - 2可致DNA损伤 ,但其修复机制还存在。     

亚慢性吸入二硫化碳对小鼠免疫细胞损伤研究

目的:研究二硫化碳对小鼠免疫细胞的损伤。方法:以浓度为0,400,800,1200 mg/m3的二硫化碳蒸气给小鼠做静式吸入染毒5周,每天2 h。用单细胞凝胶电泳实验和流式细胞术检测二硫化碳对白细胞的损伤。结果:低、中、高染毒组与对照组小鼠白细胞彗星拖尾率经2χ检验,差异有统计学意义(P<0.01);各试验组与对照组彗星头部百分比差异有统计学意义,并且各个试验组之间差异也有统计学意义(P<0.01);各试验组与对照组尾长差异亦有统计学意义,并且各个染毒组之间差异存在统计学意义(P<0.01)。试验组与对照组生殖细胞的凋亡率分别为13.50%,22.10%,33.60%和0.2%,各剂量组与对照组之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:亚慢性吸入二硫化碳可损伤小鼠白细胞DNA并促进白细胞调亡。     

不同频率电磁场对胆囊癌细胞增殖及DNA损伤作用

目的 探讨不同频率的低功率电磁场对胆囊癌细胞恶性增殖及DNA损伤的作用及其意义。方法 采用绘制细胞生长曲线及单细胞凝胶电泳技术分别检测经不同频率电磁场作用后，胆囊癌细胞的增殖及DNA损伤情况。结果 经不同频率（0．1～40MHZ）电磁场作用后，各实验组总体上均可见细胞增殖受到抑制，DNA链产生断裂损伤，统计学检验较正常对照有显著意义。结论 0．1-40MHZ范围低功率电磁场对胆囊癌细胞增殖及DNA损伤产生明显影响，主要表现为使DNA链产生断裂损伤，进一步抑制细胞增殖，且这种作用和频率有关，但并不是“线性”关系。     

亚慢性吸入二硫化碳对小鼠生殖细胞损伤研究

目的:研究二硫化碳对小鼠生殖细胞的损伤。方法:以浓度为0,200,400,800mg·m-3的二硫化碳蒸汽给小鼠做静式吸入染毒5周,每天2h。用单细胞凝胶电泳实验和流式细胞术检测二硫化碳对精子细胞的损伤。结果:低、中、高染毒组与对照组小鼠精子细胞彗星的拖尾率分别为48.50%,71.00%,86.50%和23.50%,经χ2检验各试验组与对照组差异有统计学意义(P<0.01);彗星头部百分比分别为(62.9949±8.6242)%,(56.6580±10.5990)%,(36.5432±12.0002)%和(86.8926±5.0219)%,各试验组与对照组彗星头部百分比差异有统计学意义,并且各个试验组之间差异也有统计学意义(P<0.001),尾长分别为(8.6812±4.3330),(14.0392±4.1680),(28.6601±8.3690)和(5.9913±1.9240)μm,中、高剂量组和对照组之间差异存在统计学意义。试验组与对照组生殖细胞的凋亡率分别为12.53%,14.93%,29.09%和11.97%,其中高剂量组与对照组之间差异有统计学意义。结论:亚慢性吸入二硫化碳可以对小鼠精子细胞DNA产生损伤。     

O3衰老小鼠模型的DNA损伤研究

目的探讨自由基致衰老的小鼠模型DNA氧化损伤的情况。方法通过给2月龄小鼠吸入一定量的O3,建立O3衰老小鼠模型;然后以单细胞凝胶电泳试验检测O3衰老小鼠模型、自然衰老小鼠和正常青年小鼠(阴性对照组)的脾淋巴细胞DNA氧化损伤情况。结果与阴性对照组相比,O3衰老小鼠模型的脾淋巴细胞DNA受到较显著的氧化损伤(P<0.05);其损伤程度与自然衰老小鼠相近(P>0.05)。结论O3衰老动物模型与自然衰老近似,在衰老的研究和抗衰老药物的药理实验中具有一定应用价值。