中温α-淀粉酶基因的克隆及在枯草芽孢杆菌中的高效表达

利用高效表达载体pWB980,实现了Bacillus subtilis BF7658中温α-淀粉酶基因amy在B．subtilis DB403中的高效表达,活力达到770U／mL．经多步纯化,重组酶AMY的比活达到35．8U／mg,纯化倍数为1．7,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS—PAGE检测,重组酶AMY相对分子质量为4．8×10^4．对酶学性质进行分析,重组酶AMY的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6．0．     

木薯醇腈酶部分酶学性质研究

对利用基因重组技术获得的木薯醇腈酶（HNL）的酶学特异性进行研究，确定了其部分酶学性质。重组木薯HNL的最适温度为50℃，最适pH值为5．5。重组木薯HNL在60℃条件下，保温30min后仍具有90％的酶活力，说明温度稳定性较好；在pH4．0～6．0的条件下，获得的相对酶活仍大于80％。     

嗜热菌Geobacillus Kaustophilus HTA426磷酸三酯酶在毕赤酵母GS115中的表达

将嗜热菌Geobacillus Kaustophilus HTA426中的磷酸三酯酶基因转入毕赤酵母GS115中,整合到染色体DNA基因组上,并进行诱导表达.SDS-PAGE和Western-blot试验结果显示,重组蛋白是一个分子量约为50KD的磷酸三酯酶二聚体.酶活检测证明重组蛋白具有较高的磷酸三酯酶活性,其最适温度为70℃,最适pH为10.0.     

草菇纤维素酶系统的诱导、分布及初步定性

以蔗糖、果胶、羧甲基纤维素、木聚糖或稻草为碳源培养草菇（Volvariella volvacea），并对它所产生的纤维素酶进行初步研究，发现纤维素酶系主要是由纤维素诱导产生，纤维素酶中的β－葡萄糖苷酶和纤维二糖酶分布在胞内，内切葡聚糖酶分布在胞外。β－葡萄糖苷酶的最适反应温度为60℃,最适pH为6.6，在pH6.6-7.8时比较稳定，保温1h酶活的半衰温度是45℃，纤维二糖酶的最适反应温度为50℃、最适pH为5.8，在pH6.2最稳定，保温1h酶活的半衰温度是44℃，内切葡聚糖酶的最适反应温度为60℃，最适pH为5.4，在pH6.6-7.0时比较稳定，保温1h酶活的半衰温度是58℃。     

耐热碱性纤维素酶分离纯化及酶学特性研究

通过离子交换和凝胶过滤两步层析法,从耐碱芽孢杆菌Ⅲ-3的培养液中分离到相对分子质量约为89kD、比活力高达420U/mg的碱性纤维素酶Ⅲ-3-A.质谱分析显示:Ⅲ-3-A酶蛋白与芽孢杆菌KSM-64、KSM-S237等产生的A5家族碱性纤维素酶具有一定的同源性.酶学性质研究结果表明:Ⅲ-3-A的CMC酶反应以pH值为9.0、反应温度45℃左右为宜,在pH值为6~11和50℃以下酶活性稳定,且具有耐金属离子和表面活性剂等特性;Ca2 对酶的最适反应温度和热稳定性有显著影响,添加5mmol/LCaCl2可使最适酶反应温度和稳定性分别提高至50℃和55℃.该酶具有耐热、耐金属离子、耐碱及高比活力等特点,在棉织品的水洗整理及洗涤剂工业中具有良好应用前景.     

高温厌氧菌产纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的活性

高温厌氧菌Clostridiumthermocopriaesp.nov.JT3 3具有较高的纤维素内切酶和β葡萄糖苷酶活性。实验研究表明,纤维素内切酶和β葡萄糖苷酶均为胞外酶,相对分子质量分别为52000和48000。纤维素内切酶的最适反应温度是80℃,β葡萄糖苷酶的最适反应温度是40℃,两者的最适pH为6.5。低浓度的Ca2+和Mg2+对纤维素内切酶和β葡萄糖苷酶的酶活力没有影响,高浓度的Ca2+和Mg2+对纤维素内切酶和β葡萄糖苷酶的酶活力有较弱的抑制作用,Hg2+对纤维素内切酶和β葡萄糖苷酶的酶活力都有很强的抑制作用。     

猪心苹果酸脱氢酶酶学性质及稳定性研究

对动物组织来源的苹果酸脱氢酶——猪心肌苹果酸脱氢酶的酶学性质及稳定性进行了研究.结果表明:苹果酸脱氢酶的相对分子质量约为69 000,含有2个亚基,每个亚基的相对分子质量约为34 000;该酶的最适作用pH为8.0,最适作用温度为50℃;Km值为84.6μmol/L(草酰乙酸,pH8.3).通过对酶的稳定性研究,该酶在50℃以下具有较好的稳定性,其pH稳定范围为7.0~9.0(25℃,20 h).     

康氏木霉发酵液提取木聚糖酶的酶学性质研究

对康氏木霉（Trichoderma Koningii）发酵产木聚糖酶的酶学性质进行了研究。结果表明；该木聚糖酶的最适反应温度为65℃，酶反应最适pH为6．0；该酶在20～60℃范围内能保持87％以上的酶活，在pH3．0-9．0范围内能保持85％以上的酶活；金属离子K^＋、Ba^2＋、Pb^2＋、Fe^2＋、Fe^3＋、Al^3＋和12mmol／L的Cu^2＋对木聚糖酶的活性有抑制作用，而Ca^2＋，Zn^2＋和4mmol／L Cu^2＋等金属离子对该酶有激活作用。     

江米酒酒醪中凝乳酶酶学性质的初步研究

对江米酒中提取纯化得到的凝乳酶的酶学性质进行了研究．结果表明,该凝乳酶反应的最适反应温度为35。40℃,60℃保持20min完全失活;随着pH的降低凝乳活力提高,在pH1～7范围内稳定,最适pH为5．2;Na＋、K＋对其凝乳活力表现微弱的抑制作用,而NH4＋、Mg2＋,ca2＋、Ba2＋、Zn2＋、Mn^2＋、Al^3＋、Fe^2＋有明显的促进作用．离子型表面活性剂对凝乳酶活力有明显的抑制作用,非离子型表面活性剂对凝乳活力具有明显的促进作用．多羟基化合物、p巯基乙醇及乙二胺四乙酸（EDTA）作为酶的修饰剂对酶活力具有不同的影响．     

高温厌氧菌产纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的活性

高温厌氧菌Clostridium thermocoprius sp.nov．JT3-3具有较高的纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶活性。实验研究表明，纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶均为胞外酶，相对分子质量分别为52000和48000。纤维素内切酶的最适反应温度是80℃，β-葡萄糖苷酶的最适反应温度是40℃，两者的最适pH为6．5。低浓度的Ca^2 和Mg^2 对纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的酶活力没有影响，高浓度的Ca^2 和Mg^2 对纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的酶活力有较弱的抑制作用，Hg^2 对纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的酶活力都有很强的抑制作用。     

褐藻酸降解菌AGN12制备褐藻酸裂解酶的反应条件

新分离菌AGN12能够降解褐藻酸,具有褐藻酸裂解酶活性.褐藻酸裂解酶降解褐藻酸的最适反应条件是：温度30 ℃,pH 7.0,底物浓度8 g/L. 褐藻酸裂解酶稳定性对温度高度敏感,50 ℃保温1 h酶活力基本消失.Mn^2＋、Mg^2＋浓度高低对褐藻酸裂解酶均有激活作用,K^＋在5 mmol/L浓度下对该酶有激活作用,而Cu^2＋、Fe^3＋对该酶具有抑制作用.     

海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究．结果表明，最佳提取条件为：pH6．0的磷酸盐浸提液0．05mol／L，NaCl浓度为0．05mol／L，缓冲液体积与海参肠质量之比为4：1，硫酸铵饱和度为80％；该酶最适反应条件为：温度40℃，pH6．0；该酶在10-40℃，pH5．O～6．5酶活力稳定．Mn^2＋对酶具有一定的激活作用，Cu^2＋、Cd^2＋、Mg^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋、Bd^2＋、K^＋、Ag^＋对酶存在不同程度的抑制，其中Cu^2＋对酶的抑制作用最强．     

一株来源于酒曲的纤溶酶产生茵的鉴定及其酶学性质

从酒曲中分离到一株纤溶酶产生菌,经形态及ITS序列分析鉴定为菊芋小孢根霉（Rhizopus microsporusvar．tuberosus）．酶学性质研究表明,该纤溶酶的最适作用温度为37℃,最适作用pH为7．0．在37℃保温4h酶活力仍保存95％,57℃下保温4h后仍有一定酶活．该酶具有广泛的酸碱适应性,在pH〈3．4时仍残留部分活性;最稳定的pH范围是6～8．Zn2＋、Cu2＋对酶活有抑制作用,Na2＋、Ca2＋、Mn2＋对酶活具有明显的促进作用．该酶在人工肠液中具有较好的稳定性,37℃保温4h后残余酶活仍然保持在80％以上,有望制成注射剂应用于临床。     

纤维素外切酶CelC7的异源表达及降解黄原胶性能

为开发新型黄原胶外切酶、获得聚合度高度集中的黄原胶活性寡糖,对来自牛瘤胃真菌的纤维素酶CelC7的编码基因进行全基因合成,并在大肠杆菌中进行异源表达。该基因大小为1 032 bp,编码344个氨基酸残基,表达蛋白产物理论分子质量为40 ku,属于糖苷水解酶GH7家族。该酶在大肠杆菌中高效可溶性表达,经过Ni-NTA亲和层析纯化后,可得到纯度达90%的纯酶。酶学性质分析结果表明,该酶最适反应温度为50℃,最适pH为6.0。CelC7能够有效地对黄原胶主链进行特异性切割,将其水解为低分子质量寡糖。亚铁离子螯合活性实验结果显示,该低分子质量寡糖对亚铁离子螯合活性的半清除活性IC₅₀为3.60 mg/mL,表明成功制备黄原胶活性寡糖。     

吸附交联法和包埋法固定化混合酶研究

对从自然界分离得到的Microbacterium sp．OU01进行发酵,制得粗酶液（壳聚糖酶和伊肛氨基葡萄糖苷酶混合液）,采用吸附交联法及包埋法对其进行固定,研究其固定化的最优条件和固定化酶的酶学性质。结果表明,游离混合酶液的最佳PH为5．6,最适反应温度为50℃。吸附交联法固定化酶的最佳条件为：戊二醛体积分数5．0％,加酶量15mL（49．51U／mL）,固定化时间6h。该条件下制得的固定化酶的最适pH为4．5,最适反应温度为60℃。包埋法固定化酶的最佳条件为：海藻酸钠质量浓度10g／L,CaCl。质量浓度15g／L,加酶量为1mL（50．35U／mL）／5mL质量浓度10g／L海藻酸钠,固定化时间20min。该条件下制得的固定化酶的最适PH为5．0,最适反应温度为50℃。固定化酶酶解壳聚糖所得产物中含D-氨基葡萄糖,说明粗酶液中的壳聚糖酶和外切-β-D-氨基葡萄糖苷酶被同时固定。通过对游离酶和固定化酶稳定性的研究,表明吸附交联固定化酶更适于工业化应用生产D-氨基葡萄糖。     

一种酵母菌菊粉酶性质及其基因测序

报道了来源于毕赤酵母（Pichia)Y109菊粉酶酶学性质和该菊粉酶基因的序列分析。Y109菊粉酶最适反应pH值4．5，最适反应温度55℃，为外切型菊粉酶。PCR扩增Y109菊粉酶基因并进行核苷酸序列分析，该菊粉酶的基因全长1665bp，没有内含子，存在4个潜在的N－糖基化位点。     

基因工程重组酵母植酸酶性质研究

对基因工程重组酵母所产的植酸酶进行分离和纯化 ,并考察纯化酶的酶学性质。该植酸酶酶蛋白分子量为 85 .2kD ;有 2个pH活力峰 :pH 2 .0和 pH 5 .0 ;最适温度为 5 0℃ ;在 3 7℃下以植酸钠为底物的反应初速度为 3 3 .5 μmol/(min·mL) ,米氏常数Km 为 0 .71mmol/L ;Ca2 +对此酶有较强的激活作用 ,Zn2 +、Fe2 +、Cu2 +、Al3+和Fe2 +对其有较强的抑制作用 ,而K+、Na+和Mg2 +对酶活性影响不大。     

海洋细菌Vibrio agarivorans-1产琼胶酶培养基优化及其酶学性质

以琼胶酶的酶活力为指标,对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养基组分进行优化,并研究琼胶酶粗酶液的酶学性质。通过单因素和正交试验对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养条件进行优化,结果表明最佳营养组分为:酵母膏的质量浓度为12g/L,琼脂粉质量浓度为3g/L,NaCl质量浓度为45g/L,在该条件下酶活力达到7.689U/g。其粗酶液的最适反应温度为40℃,最适反应pH为7,在pH范围为6~8的内酶活性较稳定,温度在20~40℃时酶的稳定性较好,但温度达到80℃基本失活。     

一种新型α-甘露糖苷酶的异源表达及酶学性质表征

从一株性能优良的黄原胶降解菌Microbacteriumsp.XT11中克隆出α-甘露糖苷酶的编码基因MiMan。该基因大小为3 042bp,编码理论分子质量为112.4ku的蛋白质,该酶204~1 006aa为糖苷水解酶GH38家族催化域。融合His亲和纯化标签的MiMan能够在大肠杆菌中高水平可溶性表达,纯化回收率达8.96%。酶学性质分析结果表明,该酶最适反应温度为40℃,最适反应pH为7.0。该酶在碱性环境具有很强的耐受力,能够耐受的最高pH达12.0。     

基因工程重组酵母植酸酶性质研究

对基因工程重组酵母所产的植酸酶进行分离和纯化 ,并考察纯化酶的酶学性质。该植酸酶酶蛋白分子量为 85 .2kD ;有 2个pH活力峰 :pH 2 .0和 pH 5 .0 ;最适温度为 5 0℃ ;在 3 7℃下以植酸钠为底物的反应初速度为 3 3 .5 μmol/(min·mL) ,米氏常数Km 为 0 .71mmol/L ;Ca2 +对此酶有较强的激活作用 ,Zn2 +、Fe2 +、Cu2 +、Al3+和Fe2 +对其有较强的抑制作用 ,而K+、Na+和Mg2 +对酶活性影响不大。