同种特异T细胞疫苗诱导移植物存活期延长的研究：Ⅰ.同种特异T…

在体外实验中观察了同种特异Ｔ细胞疫苗免疫鼠Ｔ淋巴细胞对同种抗原和丝分裂原的反应能力，Ｂ６同种抗原特异ＴＣＶ免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠对Ｂ６同种抗原的反应能力明显受抑制。对无关第三者同种抗原ＡＫＢ的反应能力也显著下降，表明存在抗原非特异性的抑制作用。     

T细胞疫苗诱导同种移植物存活期延长

以同种细胞体内免疫小鼠，取免疫脾细胞经体外低剂量ＣｏｎＡ培养扩增后，用戊二醛来活法制备了Ｔ细胞疫苗，然后以此免疫同系正常小鼠，观察小鼠同种心肌移植物存活时间的改变，Ｔ细胞疫苗免疫组移植存活时间显著延长，与正常对照组比较Ｐ〈０．００１；但发现在Ｔ细胞疫苗免疫中，与用于免疫制备Ｔ细胞凋苗同一来源的移植物存活期又比无关来源的同种移植物存活期显著延长，而后者与抗原非特异活化Ｔ细胞免疫组比较无显著差异，结果     

T细胞疫苗抗同种移植排斥反应的研究

应用Ｔ细胞疫苗于同种心脏移植的研究，用Ｃｏｎ Ａ和ＣＤ３单抗诱导受同种特异性抗原（Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２＾ｂ）小鼠脾细胞）免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ（Ｈ－２＾ｄ）小鼠，取后者脾细胞所制备的Ｔ细胞疫苗具有延长同种心脏移植物的存活期。受Ｔ细胞疫苗接种的ＢＡＬＢ／Ｃ（Ｈ－２＾ｄ）鼠脾细胞对经Ｃｏｎ Ａ激活或未激活的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾细胞皆表现出特异的强烈的增殖反应，而对同系脾细胞呈低的反应。Ｔ细胞疫苗表型分析     

同种特异T细胞疫苗诱导移植物存活期延长的研究——Ⅰ.同种特异T细胞疫苗诱导的细胞免疫水平低下

在体外实验中观察了同种特异T细胞疫苗（TCV）免疫鼠T淋巴细胞对同种抗原和有丝分裂原（ConA）的反应能力。B6同种抗原特异TCV免疫的BALB/c小鼠对B6同种抗原的反应（MLR）能力明显变抑制,对无关第三者同种抗原AKR的反应能力也显著下降,表明存在抗原非特异性的抑制作用。在BALB/c同种抗原特异TCV免疫的B6小鼠中,获得一致的结果。在观察两组TCV免疫动物T细胞对Cond诱导的淋巴细胞增殖实验中,与正常小鼠 T细胞反应性比较,TCV免疫动物 T细胞的增殖能力显著下降,表现为抗原非特异作用。此与MLR中ConA-T细胞免疫动物的结果相一致。在CML实验里,同种抗原特异TCV免疫小鼠的脾细胞体外诱导同种CTL活性明显受到抑制,CTL 活性十分低下。体外实验结果表明:同种特异TCV免疫小鼠可诱发同种抗原反应和对ConA诱发的增殖反应能力显著低下,表现为抗原非特异性作用。     

同种特异T细胞疫苗诱导移植物存活期延长的研究：Ⅲ.抗T细胞抗…

本文观察了ＴＣＶ免疫小鼠血清对同种抗原和非特异抗原刺激的淋巴细胞反应性的影响，结果显示，ＴＣＶ免疫小鼠血清能显著抑制ＣｏｎＡ诱导的淋巴细胞增殖和同种ＭＬＲ，表明该血清中存在有抑制Ｔ细胞功能的“抑制因子”实验还发现ＴＣＶ免疫小鼠血清中存在针对多种不同抗原决策簇抗体，包括有ＴＣＶ特异的，活化Ｔ细胞的和正常淋巴细胞的，ＴＣＶ呼吸实验证明ＴＣＶ免疫小鼠血清中能特异地与ＴＣＶ结合的抗体不能与其它活化了Ｔ细胞     

活化脾细胞免疫诱导同系小鼠低反应性——抑制细胞作用的分析

用ConA活化脾细胞主动免疫同系小鼠,观察了免疫鼠脾细胞在体内外对细胞免疫反应的影响。结果表明,免疫小鼠脾细胞对有丝分裂原以及同种抗原的应答能力比正常小鼠脾细胞弱;它既能抑制抗原非特异性的淋巴细胞转化,又能显著抑制MLR中反应细胞的增生,并且通过过继转输给受者可引起同种移植物存活期延长。提示:免疫小鼠的免疫低反应性形成与体内抑制细胞的诱生有关。     

CD4+T细胞在痢疾疫苗诱导小鼠肠粘膜免疫应答中的作用

以本室构建的双价痢疾候选疫苗株ＦＳ５４１６ 作为口服免疫原,检测了小鼠ＰＰ 结（Ｐｅｙｅｒ ,ｓ ｐａｔｃｈｅｓ） 中Ｔ 淋巴细胞的体外增殖反应, 观察了腹腔注射抗Ｌ３Ｔ４ ｍ Ａｂ 对小鼠肠粘膜部位产生特异性Ｉｇ 分泌细胞的影响。结果表明：①小鼠口服免疫后,ＰＰ 结中的ＣＤ４ ＋ Ｔ 细胞可产生明显的特异性增殖反应：②选择性地删除ＣＤ４ ＋ Ｔ 细胞后,小鼠肠粘膜无抗原特异性Ｉｇ 分泌细胞产生。以上提示,小鼠肠粘膜对痢疾疫苗的免疫应答需要ＣＤ４ ＋ Ｔ 细胞的参与。     

同种特异T细胞疫苗诱导移植物存活期延长的研究——Ⅱ.抗独特型T细胞免疫反应

同种特异T细胞疫苗(TCV)免疫诱导出同种免疫反应低下,同种移植物存活时间显著延长,推测其作用机制可能是同种特异TCV免疫诱导机体抗同种特异TCV(独特型)T细胞的上调.实验证实了“抗TCV-T细胞”的存在.以同种特异TCV免疫动物可诱导出对TCV特异的细胞增殖反应.TCV免疫小鼠淋巴细胞能特异杀伤TCV细胞.将TCV免疫小鼠脾细胞作为调节细胞,观察到它能显著地抑制同种MLR,表明它是一“抑制性T细胞”.这些结果提示,同种特异TCV免疫可诱导机体免疫网络中独特型-抗独特型的上调,产生了同种反应T细胞的独特型T细胞,从而保护同种移植物免受同种反应性T细胞的攻击使同种移植物存活时间显著延长.     

同种特异T细胞疫苗诱导移植物存活期延长的研究：Ⅱ.抗独特型T…

同种特异Ｔ细胞疫苗免疫诱导出同种免疫反应低下，同种移植物存活时间显著延长，推测其作用机制可能是同种特异ＴＣＶ免疫诱导机体抗同种特异ＴＣＶＴ细胞的上调。实验证实了“抗ＴＣＶ－Ｔ细胞”的存在。     

pcDNA3.1+/MAGE-3 DNA疫苗诱导特异性抗肿瘤免疫应答的实验研究

目的：构建pcDNA3.1+/MAGE-3 DNA疫苗，观察其在小鼠体内诱导特异性抗肿瘤免疫应答的能力。方法： 通过RT-PCR构建重组表达质粒pcDNA3.1+/MAGE-3；以pcDNA3.1+/MAGE-3 DNA疫苗免疫已接种肿瘤细胞的小鼠，每10 d重复免疫1次，共3次，以pcDNA3.1+、PBS为对照。末次免疫后5 d检测血清中MAGE-3抗体滴度、小鼠脾淋巴细胞的细胞毒T细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）杀伤活性、细胞因子IL-2和IFN-γ的浓度，同时计算抑瘤率。结果： 成功构建了pcDNA3.1+/MAGE-3 DNA疫苗，用此疫苗免疫已接种B16/MAGE-3细胞的小鼠后，能诱导小鼠脾淋巴细胞MAGE-3特异性的杀伤活性，脾细胞培养上清中细胞因子IL-2和IFN-γ的浓度明显增高，血清中抗MAGE-3抗体在1∶20滴度时阳性，肿瘤生长被显著抑制，与pcDNA3.1+组、PBS组相比，差异显著（P＜0.01）。结论： 成功构建了pcDNA3.1+/MAGE-3 DNA疫苗，该疫苗在小鼠体内既能激活CTL杀伤活性和CD4+ T细胞活性，又能激活体液免疫反应，从而诱导出特异性的抗肿瘤免疫应答。     

同种特异T细胞疫苗诱导移植物存活期延长的研究——Ⅲ.抗T细胞抗体的活性分析

本文观察了TCV免疫小鼠血清对同种抗原和非特异抗原刺激的淋巴细胞反应性的影响,结果显示,TCV免疫小鼠血清能显著抑制ConA诱导的淋巴细胞增殖和同种MLR,表明该血清中存在有抑制T细胞功能的“抑制因子”。实验还发现TCV免疫小鼠血清中存在针对多种不同抗原决定簇的抗体,包括有TCV特异的、活化T细胞的和正常淋巴细胞的。TCV吸收实验证明TCV免疫小鼠血清中能特异地与TCV结合的抗体不能与其它活化T细胞结合。经细胞膜分子SDS-PAGE和免疫印迹分析,TCV免疫小鼠血清中的抗体所识别的细胞膜抗原分子量大约为15kD,35/38kD左右。     

灭活自体T细胞增强小鼠免疫功能作用机制的研究

接种灭活自身反应性T细胞用于治疗自身免疫性疾病已获初步成效。本研究采用辐射方法灭活ConA活化自体T细胞,经皮下和腹腔免疫正常的C57BL/6J小鼠,结果发现,该免疫方案可明显上调T细胞功能,表现为:免疫小鼠体内活化T细胞增多且Th1型细胞因子分泌增加,淋巴细胞体外增殖能力增强且凋亡细胞明显减少。进一步研究结果提示,接种灭活自体T细胞可能通过上调Fas、GADD45β及下调FasL基因表达而促进T细胞的活化和存活,并增加其生物学功能。这些结果表明,自体T细胞免疫具有增强机体的细胞免疫功能,为其抗肿瘤免疫作用提供了一定的实验依据。     

凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义

目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义。方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。用流式细胞术检测CD3、CD25、Survivin的表达及细胞凋亡。给BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠脾细胞后第 4~7天, 观察肝脏内T细胞浸润和survivin的表达。结果: ConA刺激后培养的脾细胞可表达survivin(表达不局限于G2 /M期 )。survivin 细胞为T细胞, T淋巴母细胞可同时表达CD25和survivin。survivin 细胞中仅部分细胞表达CD25。ConA刺激淋巴细胞后第 6天, 凋亡细胞的百分率明显增加 ( 22. 90% vs5. 23%P<0. 001)。于BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠的脾细胞后,于第 4~7天, 在BALB/c裸鼠肝脏中可观察到T细胞浸润并表达Survivin。结论: T细胞激活后可表达survivin, 故可作为活化T细胞的标志。T细胞持续表达survivin, 需要在体内与抗原持续接触。     

CD28:B7 interaction is necessary for the protective effect of T cell vaccination in EAE

The mechanisms of T cell vaccination (TCV) are still unclear, especially the molecular interactions for recognition of autoreactive T cells by the immune system. Here we investigated the role of CD28:B7 interaction in TCV-induced protection in the murine EAE model. We demonstrate that there is increased expression of both B7-1 and B7-2 on autoreactive Th1 cells compared to Th2 cells. Blockade of B7 on the vaccinating autoreactive T cell surface or blockade of CD28 in recipient mice reduced the protective effect of TCV. Furthermore, we showed that TCV significantly inhibited Ag-specific CD4 and CD8 T cell proliferation and decreased Ag-specific IFN-gamma production by CD4 T cells in mice undergoing TCV, and blocking of B7 on the surface of vaccinating T cells reduced this inhibition on Ag-specific CD4 and CD8 T cell proliferation, more significantly on Ag-specific CD4 T cell proliferation. These data indicated that B7 expression on autoreactive T cells is necessary for the recognition of autoreactive T cells by the immune system and subsequent protection from EAE in mice undergoing TCV.     

树突状细胞在榄香烯复合瘤苗主动免疫效应中的作用

本实验以HCa F或L6 1 5榄香烯复合瘤苗 (H TCV或L TCV )、H TCV溶解物 (TH )、短小棒状菌 (CP )免疫小鼠 ,分离制备其脾脏DC ,在体外分别用相应瘤细胞溶解物 (H或L )和瘤苗溶解物 (TH或TL )冲激后 ,以MTT法检测其诱导同系小鼠脾不粘附细胞增殖的能力。结果表明用榄香烯复合瘤苗或其溶解物免疫DC供鼠和体外冲激DC ,可增强其诱导同系小鼠脾不粘附细胞增殖的作用 ,给DC供鼠注射CP可进一步增强DC的这一作用     

细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫BALB／c小鼠后脾T淋巴细胞增殖的动态观察

目的动态观察细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫小鼠后脾T淋巴细胞的增殖情况。方法热絮凝法提取转基因苜蓿疫苗叶蛋白,配成浓度为20μg／μL。88只BALB／c小鼠随机分为两组,用100μl（约含1μg融合抗原）口服灌胃和10μl（约含0．1μg融合抗原）鼻腔黏膜接种分别免疫小鼠,每3天1次,连续免疫2月。在末次免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、i8和20周各组随机剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞．体外经Eg粗抗原（EgAg）或刀豆素A（ConA）刺激培养,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测免疫小鼠脾T淋巴细胞增殖情况。结果口服灌胃组的脾T淋巴细胞增殖水平在末次免疫后4～10周升高,在末次免疫后6周达最高水平;鼻腔黏膜接种组的脾T淋巴细胞增殖水平在末次免疫后4～12周升高,在末次免疫后6周达最高水平;鼻腔黏膜接种组脾T淋巴细胞增殖水平高于口服灌胃组。EgAg或ConA刺激组脾T淋巴细胞增殖水平高于相应原液组,且ConA刺激组高于相应EgAg刺激组（P〈0．01或P〈0．05）。结论细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗能诱导免疫鼠产生脾T淋巴细胞增殖反应,鼻腔黏膜接种途径优于口服灌胃途径。     

小鼠胸腺基质细胞单抗对胸腺细胞及脾细胞增殖的抑制作用

试验两种大鼠抗小鼠胸腺基质细胞（ＭＴＳＣ）ＭｃＡｂｓＰｆ１８－３、Ｒｓ２１－Ｃ６的生物作用。Ｐｆ１８－３ＭｃＡｂ识别分子表达于胸腺细胞、脾脏Ｔ及Ｂ细胞；Ｒｓ２１－Ｃ６只表达于ＭＴＳＣ。加Ｐｆ１８－３或Ｒｓ２１－Ｃ６于ＭＴＥＣＩ与胸腺细胞或脾细胞的体外培养中，在ＣｏｎＡ存在及不存在下，均可抑制ＭＴＥＣ１诱导胸腺细胞及脾细胞的增殖作用。ＣｏｎＡ活化下，其对胸腺细胞增殖的抑制率Ｐｆ１８－３为９６％；Ｒｓ２１－Ｃ６为９１％。对脾细胞的抑制率Ｐｆ１８－３为７５％；Ｒｓ２１－Ｃ６为５１％。Ｐｆ１８－３对单纯ＣｏｎＡ活化的胸腺细胞增殖也有显著的抑制作用，而Ｒｓ２１－Ｃ６无此作用。包被于平皿的固相Ｐｆ１８－３ＭｃＡｂ，对胸腺细胞、脾细胞均有轻度但显著的促增殖作用。故Ｐｆ１８－３ＭｃＡｂ识别的抗原分子（及其配基）参与Ｔ细胞的活化过程。鉴于Ｐｆ１８－３＋细胞的分布有其特异性，分析此抗原分子的功能有重要的意义。     

胚芽乳杆菌胞壁肽聚糖对细胞免疫的作用

用体外刺激、~8H-TdR掺入测定淋巴细胞增殖的方法观察到胚芽乳杆菌的胞壁肽聚糖(PG)可以直接诱导小鼠脾淋巴细胞的增殖反应,在所采用剂量范围内细胞增殖的倍数与PG剂量呈线性关系;但对胸腺细胞和分纯的脾T淋巴细胞则无直接作用。还观察到PG有协同ConA诱导小鼠脾细胞和胸腺细胞增殖作用。可见PG具有B细胞的丝裂原性,并有增强T细胞丝裂原的作用。