流行性出血热病原体在A-549细胞中的繁殖及其特性检查

从黑线姬鼠肺分离并传至第8代的EHF相关抗原A9和A10,能在A-549细胞中繁殖、传代。用A-549细胞抗原检查160份血清,76份EHF恢复期血清中72份免疫荧光反应阳性,57份正常人和非EHF病人血清56份阴性,27例EHF病人双份血清抗体滴度均有4倍以上升高;KHF病毒抗血清显若阻断EHF相关抗原同EHF病人血清的阳性反应,呼肠孤病毒多价抗血清和类似环状病毒抗血清均无此阻断作用;编码血清双盲法检查获得可重复的预期结果。结果表明,EHF的A-549细胞抗原和鼠肺抗原血清学特性一致,同为EHF病毒,并与KHF病毒相近或相同。汉坦病毒在形态学上与我们分离的类似环状病毒相似,但后者与EHF病人血清无明显关系。     

广东省首次从褐家鼠分离出流行性出血热病毒

用Vero E-6纯系细胞,接种EHF病毒相关抗原阳性的褐家鼠(Rattus norvegicus)肺13份,从中分离得5株可在Vcro E-6细胞中连续传代的病原因子,分离阳性率为38.5％。通过以其中一株分离物G9感染的第五代Vero E-6细胞制作抗原片,检测EHF患者恢复期血清12份中有11份(91.7％)免疫荧光阳性,而12份非EHF病人血清全部阴性;20倒EHF惠者双相血清抗体滴度均呈4倍以上增长;与呼肠弧Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒抗血清免疫荧光阴性;G9病毒与国内已知EHF病毒16、63、S3、R1株抗血清有高滴度交叉,并且,可被16、R1株抗血清完全中和其感染性,证明G9等分离物是EHF病毒。另外,G9病毒对5-IUDR不敏感,不耐热(56℃1小时),不耐酸(pH3.0),对脂溶荆乙醚敏感,这些理化特性也与EHF病毒完全相符。     

流行性出血热病毒Vero-E6细胞病变株的分离和鉴定

从EHF患者血清中分离到8株EHF病毒,在E 6细胞中传代适应过程中,发现有5株EHF病毒分别在第4～10代出现规律的细胞病变(CPE),对其中两个CPE株(HFN-04和-19)进行了一系列特异性鉴定试验。实验结果表明:(1)病毒的CPE发展与病毒增殖动态完全一致;(2)CPE株的主要生物学和理化性状均符合EHF病毒;(3)用CPE株病毒感染细胞抗原片检测EHF患者双份血清,其恢复期血清抗体均呈4倍以上增高反应;(4)病毒的CPE可被患者血清及EHF、KHF免疫血清所中和,不能被正常兔血清和Reo病毒1—3型多价血清所中和;(5)CPE株病毒感染的E_6细胞几乎能完全吸收EHF患者血清及EHF、KHF抗血清中的特异性抗体;(6)CPE株病毒感染鼠脑悬液与EHF病毒A9株McAb25-1致敏血球呈阳性血凝反应。据此,首次证实了EHF病毒至少有部分毒株能引起E_6细胞规律性CPE。EHF病毒CPE株的发现为EHF的诊断和防治工作提供了有利条件。     

流行性出血热病毒抗原组份的分析

用免疫转印技术对流行性出血热(EHF)病毒的抗原组份进行了初步分析。发现两种不同来源的兔抗EHF兔疫血清和20份4～21病日的EHF病人血清,均可与分子量在68,000和66,000道尔顿左右的两种病毒多肽成份发生反应,正常人和非EHF病人血清以及正常兔血清则否,表明这两种多肽可能是EHF病毒引起机体抗体应答反应的主要抗原成份。     

流行性出血热患者对野、家鼠型病毒多肽抗原的抗体应答

应用兔抗流行性出血热(EHF)病毒血清及EHF病人血清对野、家鼠型EHF病毒多肽抗原进行免疫识别,发现两型病毒多肽抗原间稍有差异。不同流行地区EHF病人血清大多数可与两型病毒49.6ku(50kd)多肽反应,提示该多肽可能是EHF病毒引起机体抗体应答反应的主要抗原成分。并对EHF病人血清中针对两型病毒多肽抗原的抗体检出率与临床病程及病型的关系进行了观察。     

流行性出血热病原学研究——Ⅰ、用非疫区黑线姬鼠分离病毒及其特异性检查

在用非疫区黑线姬鼠分离EHF病毒的传代中,发现感染鼠鼠肺中存在一种可传代的EHF相关因子。用间接免疫荧光法对其特异性作了检查:101份EHF患者血清96％阳性,175份正常人及其他疾病患者血清全部阴性;20例EHF患者双份血清,18例的恢复期有4倍以上抗体滴度升高;12例EHF患者血清对KHF抗原及EHF相关因子的阴、阳性反应基本一致;抗呼肠孤病毒血清和抗类呼肠孤病毒血清等全部阴性;血清编码双盲法检查和预期结果一致;抗KHF血清对EHF患者血清的免疫荧光反应有显著阻断作用,抗呼肠孤病毒Ⅰ～Ⅲ型多价血清无此作用。上述结果可初步确定,此相关因子是流行性出血热病毒。     

首次从汉中地区褐家鼠分离出流行性出血热病毒及其抗原性鉴定

应用细胞培养技术和免疫荧光(IF)检查方法,从汉中地区褐家鼠分离出EHF 病毒R_6、R_(10)株。分离的病毒能在鼠体和细胞两个不同宿主系统连续稳定传代;检查10份确诊的EHF 病人双份血清,抗体滴度均有4倍以上增高;病毒抗原能与EHF病人阳性血清、兔抗KHFV76-118株免疫血清及多个单克隆抗体(M_cAb)反应,而不能与正常人和非出血热病人血清反应;兔抗KHFV76-118株免疫血清能阻断病毒株抗原同EHFM_cAb4E_7的阳性反应,抗呼肠弧病毒Ⅰ～Ⅲ免疫血清、抗类环状病毒免疫血清、抗CMV 免疫血清和抗HSV 免疫血清均无此阻断作用;用感染的VeroE_(-6)细胞作超薄切片,电镜下观察到大小约100nm 典型病毒颗粒;M_cAb 型别鉴定试验确定为EHFV野鼠型毒株。     

流行性出血热血清流行病学的研究——(一)患者血清与几种鼠肺抗原的特异性关系

应用间接荧光抗体技术用不同流行性出血热(EHF)疫区的三种鼠肺抗原对安徽EHF患者血清抗体进行检验,其结果如下: 1、用江西省EHF疫区的黑线姬鼠鼠肺抗原检查了25例安徽EHF病人的双清,急性期(1～7天)血清的阴性率为20％(滴度≥1:80);恢复期(19～4天)血清的阳性率为88％(滴度≥1:80),并且两期的抗体滴度有明显的动态化。一般为4倍增高。其中15例达16倍以上。可见两者具有特异的血清学关系。 2、用四川省EHF疫区褐家鼠鼠肺抗原重复检查上述双份血清,得到非常致的结果。 3、通过对另外11份恢复期血清的检查,还确定了辽宁EHF疫区棕背鼠平鼠肺抗顾与上述黑线姬鼠鼠肺抗原的血清学关系。从而证实了辽宁、四川,江西和徽四省EHF的病毒病原的抗原性相同。     

从流行性出血热患者血清中分离病毒的研究

应用Vero—E_6细胞从流行性出血热(EHF)患者血清中分离出两株病毒,经初步鉴定表明:病毒不耐酸,对脂溶剂敏感,不被5—碘脱氧脲嘧啶核苷所抑制,属RNA病毒;所分离病毒与流行性出血热病毒(EHFV)抗血清和EHF患者血清做间接免疫荧光抗体法试验(IFA)均为阳性,其感染性可被EHF恢复期病人血清中和;将该病毒感染细胞做超薄切片在电镜下查到EHF病毒颗粒。     

EHF病毒(A_9株)核蛋白血凝活性的研究

用已知抗 EHF 病毒核蛋白的 McAb A_(35)偶联于 Sepharose 4B 免疫吸咐柱进行亲和层析,纯化 EHF 病毒 A_9株抗原,再用高压液相色谱进一步分离纯化.所获纯化样品用不同特性的单克隆抗体、EHF 患者血清及正常人血清。通过 ELISA 间接法鉴定为 EHF 病毒特异性的;经 SDS-PAGE 测定其相对分子质量为49.6ku;并经 EHF 病毒 S、M 片段的 cDNA(PS86,PM 56)斑点杂交试验证实其中不含有核酸.且其比活性高于亲和层析纯化样品十几倍.HPLC 纯化 NP 仍具有血凝活性,并可被特异性抗体所抑制,将其免疫小鼠后,血清中可检出血凝抑制抗体,但无中和抗体.提示 EHF 病毒 A_9株的核蛋白上可能具有血凝活性结合位点的存在.     

流行性出血热病毒单克隆抗体在临床早期诊断中应用的研究

用IFAT检测77例临床诊断为EHF病人的外周血白细胞中的病毒抗原。阳性率为50.6％。2—5病日的早期病人阳性率为64.3％(27/42)。并发现,病日越早,病情越重,阳性率越高。试验中应用了抗EHF病毒McAb4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者对3种McAb的反应表现为5种类型。不同McAb对抗原的检出率不同,混合使用McAb可提高阳性检出率。在EHF病毒抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。若联合检测EHF病毒抗原和急性期血清IgM抗体,可提高早期诊断的阳性率和准确性。     

应用疫区鼠肺抗原检测流行性出血热特异性抗体的初步报告

<正> 目前,诊断流行性出血热(EHF)的方法仍然仪凭临床资料。如能同时检测特异性抗体,无疑对EHE的确诊更为有利。国内外均报告可用感染出血热病毒的A_(549)细胞涂片检测特异性抗体。宋氏报告过用非疫区黑线姬鼠感染EHF病毒的传代鼠肺抗原检测特异性抗体的方法。但是将疫区野生鼠肺进行组织切片,用作血清学诊断尚未见报道。本文报道用此法检测30例经临床确诊的EHF病人血清结果,初步证明该方法有一定的实用价值。     

酶联免疫吸附试验检测乙脑病毒抗原的研究Ⅰ实验方法的建立

采用ELISA双夹心法,通过对影响因素实验条件的研究,建立检测乙脑病毒抗原的方法。包被抗体(豚鼠抗乙脑病毒IgG)和第二抗体(兔抗乙脑病毒IgG),用提纯病毒免疫动物制备;以及稀释液中BSA含量提高为2％,显著地降低非特异性反应,并提高敏感性。特异性抑制试验,抗血清浓度越高OD值下降越多;两种乙脑病毒抗原分别与抗血清和正常血清中和后进行测定,阻抑百分率均>50％。敏感试验结果能测出≥5TCID_(50)组织培养病毒抗原和0.5ug/ml差速离心病毒抗原。     

流行性出血热患者尿膜胶体金免疫电镜研究

应用示踪顶扣包埋的肢体金免疫电镜技术对2例流行性出血热(EHF)患者屎膜病毒抗原进行了检测．结果2例均为阳性．尿膜中有核细胞胞浆内有特异性金颗粒存在，说明尿膜中存在流行性出血热病毒(EHFV)攻击的靶细胞。本文首次用肢体金免疫电镜对尿膜进行病毒抗原检测．为EHF的研究提供一个新的依据。     

流行性出血热病毒在细胞培养中的传代适应

作者以非疫区黑线姬鼠为实验动物,自疫区黑线姬鼠肺组织分离出三株流行性出血热(EHF)病毒,并使之在绿猴肾传代细胞(Vero,E6纯化系)及人肺癌细胞(A549) 中进行传代,均于第2～3代开始查见对EHF恢复期患者血清的免疫荧光反应,至第5代基本稳定适应。实验结果表明,E6细胞及 A549细胞对 EHF病毒的传代适应均比较敏感。E6适应株的病毒滴度均在10~5(TCID_(50)/ml)以上。用感染E6细胞及A549细胞病毒抗原检查EHF     

中国流行性出血热病毒宿主动物六种鼠肺抗原的特异性鉴定

从中国EHF疫区经初步筛选所获自然携带EHF病毒的6种鼠肺抗原,用IFAT、EHF 病人双份血清、免疫荧光阻断试验、单份EHF恢复期血清、非EHF病人及正常人血清鉴定其特异性,结果证明它们都是 EHF病毒抗原。     

RPHI和HI对EHF患者进行血清学分型的比较研究

作者应用RPHI和HI两种方法,对EHF患者进行血清学分型的比较。通过对57例不同病日的EHF患者血清与野鼠型及家鼠型病毒血凝素抗原(分别称为A-Ag及R-Ag)同时进行HI、RPHI。在EHF疾病过程中,两种抗体的效价呈平行性升降,存在明显的正相关(用A-Ag时,r=0.94;用R-Ag时r=0.98),对3,5,7,10,17病日的患者进行可分型率的统计发现,HI,RPHI的可分型符合率为58,75,96,36,100,100％;另对189份荧光阳性的患者血清检测的结果,HI,RPHI两法判别家、野鼠型的总符合率为90.5％。上述结果表明:与HI相比,RPHI用于EHF患者的血清学分型,不仅操作简便,勿需复杂费时的血清处理,并具有更高的特异性和灵敏度,可普遍应用于患者的早期诊断和血清流行病学的分型研究。     

家鼠型和野鼠型流行性出血热血清学调查

对既往流行性出血热病人的追踪调查表明:泰安、宁阳、新泰同时存在 R—EHE、A—EHF 感染,宁阳以 R—EHF 感染为主(P<0.01),其它两地区 R—EHF 和 A—EHF感染比重相当(P>0.05)。R—EHF 全年均有病例发生,流行曲线呈双峰型,即11～12月,3—5月达高峰,A—EHF 流行曲线呈单峰型,11—12月达高峰。另外,部分病人的血清与 A—血凝素抗原、R—血凝素抗原均有反应,提示可能存在着家野鼠混合型流行性出血热。     

流行性出血热白细胞病毒抗原与细胞免疫功能的关系

用淋巴细胞促凝血活性法(LPCA)动态观察流行性出血热(EHF)患者淋巴细胞对灭活EHF病毒及PHA的细胞免疫反应,同时用EHF25-1McAb-FITC检测患者白细胞病毒抗原,探讨细胞免疫功能与病毒侵犯免疫细胞间的关系。     

从病人血清中分离的一株流行性出血热病毒的鉴定

<正> 从流行性出血热(EHF)患者急性期血清中,分离出一株能传代的相关病原因子.可通过除菌滤膜,在A—549细胞中不产生病变,以感染细胞作抗原,用朝鲜出血热(KHF)抗原检查为阳性的EHF患者血清,以间接免疫荧光法作效价滴定,两种抗原测定的结果基本一致.12例EHF患者双份血清测定的结果,11例