DNA引物酶抑制剂碘化-3,3′-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青诱导人白血病HL-60细胞凋亡

目的研究DNA引物酶抑制剂碘化-3,3′-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青(DMTCCI)诱导人粒细胞性白血病HL-60细胞凋亡并探索其机制。方法分别采用不同浓度的DMTCCI处理培养于RPMI-1640培养基的HL-60细胞。采用MTT法检测DMTCCI对HL-60细胞的生长抑制作用。采用流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡。采用蛋白免疫印迹(Western blotting)法观察凋亡相关蛋白survivin， Bcl-xL， Bad， Bax， Bcl-2， caspase-9， caspase-3， caspase-6， PARP， DFF45和lamin B的表达。采用ApoAlert Caspase-3分析试剂盒检测caspase-3的活性。结果DMTCCI具有抑制人白血病HL-60细胞增殖的作用，其IC₅₀值为0.24 μmol·L^-1。流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示，DMTCCI可诱导HL-60细胞凋亡。在经DMTCCI处理的HL-60细胞中，survivin和Bcl-xL蛋白的表达水平下调，Bad和Bax蛋白的表达水平上调，Bcl-2蛋白的表达水平无变化，caspase-9，caspase-3，caspase-6，PARP，DFF45和lamin B被分别裂解，产生相应裂解产物。在HL-60细胞中，caspase-3的活性在1 μmol·L^-1 DMTCCI处理3 h时明显升高，在处理12 h时达到最高峰。结论DMTCCI可抑制人白血病HL-60细胞的增殖并诱导其发生细胞凋亡。Bcl-2家族蛋白、survivin和caspases家族蛋白可能参与了上述诱导HL-60细胞凋亡的过程。     

DNA引物酶抑制剂碘化-3,3''-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青诱导人白血病HL-60细胞凋亡

目的 研究DNA引物酶抑制剂碘化-3,3'-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青(DMTCCI)诱导人粒细胞性白血病HL-60细胞凋亡并探索其机制.方法 分别采用不同浓度的DMTCCI处理培养于RPMI-1640培养基的HL-60细胞.采用MTT法检测DMTCCI对HL-60细胞的生长抑制作用.采用流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡.采用蛋白免疫印迹(Western blotting)法观察捌亡相关蛋白survivin,Bcl-xL,Bad,Bax,Bcl-2,caspase-9,caspase-3,caspase-6,PARP,DFF45和lamin B的表达.采用ApoAlert Caspase-3分析试剂盒检测caspase-3的活性.结果 DMTCCI具有抑制人白血病HL-60细胞增殖的作用,其IC50值为0.24μmol·L-1.流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示,DMTCCI可诱导HL-60细胞凋亡.在经DMTCCI处理的HL-60细胞中,survivin和Bcl-xL蛋白的表达水平下调,Bad和Bax蛋白的表达水平上调,Bcl-2蛋白的表达水平无变化,caspase-9,caspase-3,caspase-6,PARP, DFF45和lamin B被分别裂解,产生相应裂解产物.在HL-60细胞中,caspase-3的活性在1μmol·L-1 DMTCCI处理3 h时明显升高,在处理12 h时达到最高峰.结论 DMTCCI可抑制人白血病HL-60细胞的增殖并诱导其发生细胞凋亡.Bcl-2家族蛋白、survivin和caspases家族蛋白可能参与了上述诱导HL-60细胞凋亡的过程.     

Caspases家族成员促进DADAG诱导的人白血病HL—60细胞凋亡

目的:研究caspases家族成员在二乙酰二脱水卫矛醇(DADAG)诱导人白血病HL-60细胞凋亡中的作用.方法:MTT法观察DADAG的体外抗增殖作用;透射电镜、DNA梯形条带和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡;caspase-3检测试剂盒和Western blot法分析caspases家族成员.结果:DADAG明显抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞凋亡.DADAG处理HL-60细胞24h后,caspase-3酶活性达峰值,同时聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、lamin B和DFF45蛋白开始出现断裂片段.Caspase-3抑制剂z-DEVD·fmk可部分逆转DADAG诱导的HL-60细胞凋亡,而caspases广谱抑制剂z-VAD·fmk可完全逆转此作用.结论:Caspases在DADAG诱导HL-60细胞凋亡中起重要作用,它们通过酶解底物PARP、DFF45和lamin B促进细胞凋亡.     

水飞蓟素和Fas激动性抗体CH11共同作用诱导A375-S2细胞凋亡

目的水飞蓟素和CH11共同作用诱导人黑色素瘤细胞A375-S2凋亡的分子机制。方法结晶紫法测定细胞生长抑制率;细胞凋亡的形态学观察,LDH法测定凋亡与坏死的比率;用免疫印迹法检测凋亡抑制性的去乙酰化酶SIRT1、Bc l-2家族成员(抗凋亡蛋白Bc l-2,Bc l-xL和促凋亡蛋白Bax)、细胞色素C和Caspase-3的表达。结果水飞蓟素和CH11共同作用能诱导A375-S2细胞发生凋亡;形态学观察可见凋亡小体的形成;免疫印迹法检测发现水飞蓟素和CH11共同作用的A375-S2细胞中Bax蛋白的表达增加,Bc l-2蛋白和Bc l-xL蛋白的表达降低,细胞色素C释放增加,pro-caspase-3表达量明显降低。结论水飞蓟素协同CH11能明显促进A375-S2细胞的凋亡。     

二氢青蒿素诱导HL-60细胞凋亡

目的探讨二氢青蒿素对人早幼粒白血病细胞(HL-60)的治疗作用。方法采用台盼蓝染色法和MTT法测定二氢青蒿素对HL-60细胞存活的影响,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染色、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹分析凋亡相关蛋白的表达。结果二氢青蒿素可抑制HL-60细胞存活,诱导HL-60细胞凋亡,同时降低HL-60细胞Bcl-2蛋白的表达,增加Bax蛋白和凋亡执行蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,并呈浓度依赖性。结论二氢青蒿素可诱导HL-60细胞凋亡,其机制可能是通过对线粒体凋亡通路中Bcl-2,Bax和caspase-3蛋白表达的调控而发挥作用。     

番荔枝内酯诱导白血病细胞凋亡的机理

目的　研究番荔枝内酯(squamocin)诱导白血病细胞凋亡的机理。方法　DNA凝胶电泳法、荧光染色等检测细胞凋亡。试剂盒检测caspase-3的活性。Westernblot法检测PARP和caspase-3的剪切片断和磷酸化的SAPK/JNK量的变化。结果　Squamocin处理HL-60细胞后,导致染色质浓缩、片断化,DNA梯形条带出现,完整PARP的116ku条带逐渐减少,而85ku的片断逐渐增加,caspase-3酶的活性也增加。Caspase-3的特异性抑制剂DEVD-CHO预处理HL-60细胞,可阻止squamocin诱导的DNA片断化、PARP的剪切和细胞死亡。Squamocin激活HL-60细胞中SAPK/JNK。结论　Squamocin诱导HL-60细胞凋亡依赖caspase-3途径的激活,squamocin激活caspase-3可能与SAPK/JNK的激活相关     

二乙酰二脱水卫矛醇诱导白血病HL-60细胞凋亡及其机理

目的研究二乙酰二脱水卫矛醇(DADAG)诱导人白血病HL-60细胞凋亡及其机理。方法MTT法观察DADAG的体外抗增殖作用;透射电镜、DNA梯形条带和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡;Western blotting法和caspase-3检测试剂盒分析DADAG诱导HL-60细胞凋亡与Bcl-2家族成员和caspase-3的关系。结果DADAG明显抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞发生凋亡。8 μg·mL^-1 DADAG处理HL-60细胞不同时间后,Bcl-X_L蛋白水平呈时间依赖性地下降,而Bad蛋白水平上调。DADAG处理HL-60细胞24 h后,caspase-3酶活性达峰值。Caspase-3抑制剂z-DEVD.fmk可部分逆转DADAG诱导HL-60细胞凋亡的作用,而caspases广谱抑制剂z-VAD.fmk可完全逆转此作用。结论DADAG诱导HL-60细胞凋亡依赖caspase-3途径的激活,而caspase-3的激活可能与Bcl-2家族成员密切相关。     

异十三基二乙胺诱导HL-60细胞凋亡及其作用机制

目的探讨异十三基二乙胺(D-108)体外诱导人早幼粒白血病HL-60细胞凋亡及其作用机制。方法应用生长曲线法检测D-108对HL-60细胞生长抑制作用;相差显微镜观察药物对HL-60细胞促凋亡形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期改变;DNA琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡"梯状"DNA;比色法测定caspase-3,8,9酶活性:结果D-108显著抑制HL-60细胞生长,作用呈浓度及时间依赖性。HL-60细胞经D-108处理后,呈典型凋亡形态学改变,出现亚二倍体细胞峰及DNA梯状条带。caspase-3,9酶活性显著升高(P<0.01),而对caspase-8酶活性无明显影响。结论D-108在体外能有效诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制可能通过线粒体凋亡途径。     

8-硝基白杨素诱导HL-60细胞凋亡和抑制增殖与PTEN-Akt途径的相关性研究

目的 观察8-硝基白杨素(NOChR)抑制人急性髓性白血病细胞系(HL-60)细胞增殖和诱导凋亡的作用,并探讨其作用机制.方法 体外培养HL-60细胞;MTT比色法检测增殖活性;流式细胞术定量分析细胞凋亡程度;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带.Western Blot分析HL-60细胞PTEN、P-Akt蛋白表达的影响.结果 NOChR可显著抑制HL-60细胞增殖,呈浓度依赖性,IC50为1.34 μmol;NOChR具有诱导HL-60细胞凋亡的作用,且呈浓度和时间依赖性.NOChR以浓度和时间依赖方式上调HL-60细胞PTEN蛋白的表达和抑制P-Akt蛋白的表达,其作用可被PPARγ特异性阻断剂GW9662(10μmol)预孵育拮抗.结论 NOChR诱导HL-60细胞凋亡作用与其活化PPARγ、上调PTEN蛋白表达、抑制Akt磷酸化相关.     

雷米普利对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的观察雷米普利对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法大鼠口服雷米普利(1 mg.kg-1)或等剂量生理盐水,24 h后制备心肌缺血30m in再灌注120 m in模型,用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死范围,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测心肌细胞凋亡并用免疫组化方法测定抑凋亡基因(Bc l-2)和促凋亡基因(Bax)的表达。结果与对照组相比,雷米普利组由缺血/再灌注损伤引起的心肌梗死范围缩小,细胞凋亡指数减少且DNA琼脂糖凝胶电泳呈现减弱的DNA梯形图谱,Bc l-2表达增加以及Bc l-2/Bax比值增加。结论雷米普利通过减少/缺血再灌注心肌细胞坏死和凋亡以及上调抑凋亡基因Bc l-2的表达发挥心脏保护作用。     

大萼香茶菜甲素通过线粒体途径诱导HL-60白血病细胞凋亡

目的：观察大萼香茶菜甲素（macrocalyxinA,MA）体外诱导HL-60细胞凋亡,并探讨其作用机制。方法：不同浓度的MA与HL-60细胞进行培养,采用MTT比色法观察其对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexin—V／PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析其促细胞凋亡效应;流式细胞术和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax、P53、Fas、线粒体膜蛋白（Ap02．7）、线粒体跨膜电位（AWm）与Bcl-2、Bax、P53、caspase-3 mRNA变化水平,研究其促凋亡机制。结果：MA呈现作用时间和剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖和活力;HL-60细胞经MA作用后,Wright—Giemsa染色和Hoechst荧光染色后细胞出现典型的凋亡小体,细胞阻滞于G0／G1期,DNA片段化,亚二倍体明显增高,Annexin—V／PI标记升高;MA诱导HL-60细胞凋亡过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白（Apo2．7）、caspase-3表达显著增加,Bax／Bcl-2比值升高,龇下降。结论：MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导细胞凋亡,其机制通过上调Bax基因和Bax／Bcl-2比值,使线粒体膜电位下降、膜通透性增高,最终使caspase-3激活而促进凋亡。     

熊果酸对脑胶质瘤细胞株U251凋亡及survivin和caspase-3表达的影响

目的 观察熊果酸（ursolic acid, UA）诱导脑胶质瘤细胞株U251凋亡的机制. 方法 培养人脑胶质瘤细胞株U251,以Hoechst 33258染色法及琼脂糖凝胶电泳测定UA诱导脑胶质瘤细胞株U251凋亡的作用. 免疫印记法及荧光双标法测定survivin和caspase-3表达,荧光法测定caspase-3活性. 结果 Hoechst 33258染色法和琼脂糖凝胶电泳显示UA明显诱导U251细胞凋亡,细胞核DNA呈梯状降解. 免疫沉淀法以及荧光双标法均显示UA可抑制survivin表达;同时UA上调caspase-3表达. 结论 UA诱导U251细胞凋亡与其抑制survivin表达,同时上调caspase-3表达有关.     

血竭素高氯酸盐诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制

目的研究血竭素高氯酸盐诱导HeLa细胞凋亡机制。方法MTT法测定血竭素高氯酸盐对HeLa细胞的细胞毒作用。通过显微镜，荧光染色观察细胞形态学变化，用琼脂糖凝胶电泳检测DNA片断化。用Western印迹法分析药物对蛋白质表达的影响。结果血竭素高氯酸盐明显抑制HeLa等细胞的增殖，诱导HeLa细胞调亡。Caspase-1，-3，-8，-9及家族抑制剂可明显抑制血竭素高氯酸盐诱导的凋亡。Western印迹结果显示血竭素高氯酸盐作用12 h后Bax及Bcl-X_L的表达明显改变，caspase-3，-8前体及caspase-3底物ICAD和PARP发生降解。结论血竭素高氯酸盐(60 μmol·L^-1)通过改变Bax/Bcl-X_L的表达激活caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。     

L-硝基精氨酸对大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的影响

目的观察非选择性一氧化氮合酶抑制剂L-硝基精氨酸(L-NA)对大鼠局灶性脑缺血诱导的神经元凋亡的影响,探讨L-NA对脑缺血的保护作用及其机制。方法健康♂SD大鼠,体重250~300 g,随机分为假手术组(SH组)、缺血组(IS组)、L-NA治疗组(L-NA组)。IS和L-NA组按缺血后时间分为3个亚组:2、6、12 h。每组6只大鼠。L-NA组每次按20 mg.kg-1,ip给药,每日2次,连续3 d。IS组给等容量的生理盐水。插线法制备大鼠大脑中动脉阻断模型。采用流式细胞仪(FCM)检测脑组织细胞凋亡率、W estern b lot法和免疫组化法检测caspase-3蛋白的表达、FCM和免疫组化法检测bc l-2和Bax蛋白的表达。结果大鼠脑缺血后,细胞凋亡率、caspase-3和Bax蛋白表达明显升高,bc l-2蛋白表达无差异,bc l-2/Bax降低,缺血12 h治疗3 d时,L-NA组中细胞凋亡率、caspase-3和Bax蛋白表达低于相应的IS组,bc l-2蛋白表达、bc l-2/Bax高于IS组,缺血2,6 h治疗3 dL-NA组中细胞凋亡率、caspase-3、bc l-2、Bax蛋白表达和bc l-2/Bax与IS组比差异无显著。结论缺血后期应用L-NA对脑缺血有治疗作用,与降低caspase-3、增加bc l-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、调节bc l-2蛋白/Bax蛋白平衡有关。     

一种海洋来源的ETP类化合物HDN-1诱导K562细胞凋亡作用及机制初探

目的 探讨南极土壤来源真菌的次级代谢产物HDN-1对人慢性粒细胞白血病K562细胞的增殖抑制,诱导凋亡作用及其机制。方法 采用MTT法检测HDN-1对K562细胞的增殖抑制作用;DNA结合染料Hoechst 33342染色,Western Blotting以及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的变化。结果 HDN-1能显著抑制K562细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性;HDN-1作用后,细胞核形态发生明显变化并且出现了基因组DNA的梯状剪切条带;Caspase-9、8、3逐渐被激活,Caspase3的作用底物PARP被活化裂解出现89KD的剪切条带,并且Caspase蛋白的激活可被特异性抑制剂所阻断;抑凋亡蛋白Bcl-2,Mcl-1的表达降低,促凋亡蛋白Bax的表达量增高。另外,融合蛋白Bcr-Abl的表达被HDN-1抑制并呈剂量依赖性。结论 来源于南极土壤来源真菌的次级代谢产物HDN-1可能是通过抑制Bcr-Abl融合蛋白的表达进而诱导K562细胞凋亡,并且凋亡是通过Caspase依赖的线粒体途径和死亡受体途径共同介导发生的。     

对甲氧基肉桂醛左氧氟沙星酰腙诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用

目的探讨喹诺酮酰腙类化合物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用。方法用不同浓度的对甲氧基肉桂醛左氧氟酰腙(FQ-10)与SMMC-7721细胞体外培养。MTT法检测FQ-10对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;Hoechst33258/PI双染荧光染色法、TUNEL法及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡变化;高内涵活细胞成像系统测定细胞线粒体膜电位(△ψm)变化;Western blot方法测定caspase-9、caspase-8、caspase-3、p53、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 FQ-10在0.625～10.00μmol.L-1的浓度范围能抑制细胞增殖,呈时间、浓度依赖性;作用于细胞24 h的IC50值是4.40μmol.L-1;各组FQ-10作用24 h后,细胞凋亡率高于对照组(P<0.05);琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞典型的梯状DNA条带,并伴有线粒体膜电位降低。荧光染色观察细胞形态学变化,显示凋亡细胞染色质凝集,细胞核碎裂成碎片等典型细胞凋亡特征性变化,晚期凋亡细胞可见特异性PI染色。与对照组比较,FQ-10作用后p53、Bax、caspase-9、caspase-3蛋白表达量增加,其中caspase-9、caspase-3活性裂解片段明显增加,caspase-8无变化,而Bcl-2蛋白表达水平下降。结论对甲氧基肉桂醛左氧氟酰腙能够激活线粒体凋亡通路,诱导人肝癌细胞凋亡。     

生存素在VP16诱导HL-60白血病细胞凋亡中的作用

目的探讨生存素在化疗药物足叶乙甙（VP16）诱导白血病细胞凋亡中的作用。方法用HL-60白血病细胞株进行传代培养，MTT试验检测VP16不同药物浓度对白血病细胞增殖的影响。通过光镜下观察细胞形态学变化和DNA凝胶电泳定性检测细胞凋亡，用流式细胞术（FCM）定量检测细胞凋亡及周期变化，用RT-PCR检测生存素基因表达，免疫组化检测其蛋白表达。结果各种浓度的VP16均可诱导HL-60细胞凋亡，下调生存素表达，阻滞细胞周期，具有明显时间和浓度依赖性。结论VP16诱导白血病细胞凋亡可能与其抑制生存素表达有关。     

槲皮素诱导人白血病HL-60细胞凋亡(英文)

目的:研究槲皮素是否能诱导人白血病HL-60细胞凋亡.方法:应用琼脂糖凝胶电泳法观察DNA碎片;采用流式细胞仪检测DNA断裂;电镜技术观察凋亡的形态学改变,用MTT测定法测定细胞增殖.结果:槲皮素15-120 μmol·L~(-1)诱导HL-60细胞凋亡,电镜观察到典型的形态学改变,电泳显示梯状条带,槲皮素能剂量依赖性地触发DNA降解及抑制细胞增生(IG_(50)和95％可信区间分别为43(30-61)μmol·L~(-1).结论:槲皮素诱导人白血病HL-60细胞凋亡.     

3''取代吲哚类衍生物诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的：研究3-吲哚乙基(3’-甲基-2’-酮)戊酰胺诱导HL-60细胞凋亡的作用机制。方法：用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析3-吲哚乙基(3’-甲基-2’-酮)戊酰胺对HL-60细胞的凋亡诱导作用,检测天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8和Caspase-3活性来研究其对HL-60细胞的凋亡诱导途径,并通过间接免疫荧光技术检测其对Bcl-2表达的影响。结果：1．8％DNA琼脂糖凝胶电泳可观察到清晰的“DNA ladder”,流式细胞仪检测3-吲哚乙基(3’-甲基-2’-酮)戊酰胺对HL-60细胞具有明显的凋亡诱导作用。Caspase活性检测表明,Csapase-3活性明显升高而Caspase-8活性无明显变化。流式细胞仪分析表明Bcl-2的表达随着受试物浓度的升高而下降。结论：3-吲哚乙基(3’-甲基-2’-酮)戊酰胺可诱导HL-60细胞凋亡,其诱导凋亡与Bcl-2表达及Caspase-3活性有关。     

δ-榄香烯通过线粒体途径诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的研究

目的探讨δ-榄香烯诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的作用及其机制。方法采用MTT法考察了δ-榄香烯对肿瘤细胞增殖的影响;ELISA法定量检测细胞DNA片段化;Annexin-VFITC/PI流式细胞术检测细胞PS外翻的影响;用Westernblot分析药物对蛋白质表达的影响。结果δ-榄香烯明显抑制DLD-1细胞的增殖。DNA核小体的检测、细胞PS外翻证实δ-榄香烯的抗肿瘤作用是以诱导肿瘤细胞凋亡的方式产生的;Bax蛋白转入线粒体内,细胞色素C的释放以及凋亡因子AIF从线粒体释放入胞质,δ-榄香烯激活caspase信号通路,引起pro-caspase-3蛋白水解为caspase-3,进一步发生PARP底物的断裂。结论δ-榄香烯通过线粒体途径诱导DLD-1细胞发生凋亡。