DPC4/SMAD4基因与结肠癌

DPC4/SMAD4是一种新的肿瘤抑制基因,定位于第18号染色体长臂18q21.1的位置.它编码的蛋白SMAD4参与了转移生长因子β(TGF-β)超家族细胞内信号传导.SMAD4是信号传递蛋白SMADS的功能活动中心.本文就DPC4/SMAD4基因及其编码的蛋白的结构、功能、在信号传导途径中的作用和在结肠癌中的改变进行了综述.     

石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4第5／6、7、9、10外显子基因改变的检测

目的研究石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4第5／6、7、9、10外显子基因的改变。方法用聚合酶链反应单链构象多态性分析(PCR-SSCP)银染技术检测46例石蜡包埋胰腺癌组织及癌旁正常胰腺组织中DPC4基因的缺失和突变。结果 5例胰腺癌未扩增出DPC4条带,DPC4基因第75／6、7、9、10外显子的纯合性缺失率为10．9％(5／46)；1例胰腺癌可见异常泳动带,基因突变率为2．2％(1／46)。结合以前实验,DPC4基因所有外显子的纯合性缺失率为39．1％(18／46),基因突变率为23．9％(11／46),总改变率为58．7％(27／46)。27例有基因改变的胰腺癌除1例外均为中、低分化腺癌,中、低分化组与高分化组之间的差异有显著性(P<0．01)。结论 DPC4作为一种抑癌基因,其改变在胰腺癌的形成中可能起重要的作用。DPC4基因改变与胰腺癌细胞分化程度密切相关。     

石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4第5/6、7、9、10外显子基因改变的检测

目的研究石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4第5/6、7、9、10外显子基因的改变.方法用聚合酶链反应单链构象多态性分析(PCR-SSCP)银染技术检测46例石蜡包埋胰腺癌组织及癌旁正常胰腺组织中DPC4基因的缺失和突变.结果 5例胰腺癌未扩增出DPC4条带,DPC4基因第5/6、7、9、10外显子的纯合性缺失率为10.9%(5/46);1例胰腺癌可见异常泳动带,基因突变率为2.2%(1/46).结合以前实验,DPC4基因所有外显子的纯合性缺失率为39.1%(18/46),基因突变率为23.9%(11/46),总改变率为58.7%(27/46).27例有基因改变的胰腺癌除1例外均为中、低分化腺癌,中、低分化组与高分化组之间的差异有显著性(P<0.01).结论 DPC4作为一种抑癌基因,其改变在胰腺癌的形成中可能起重要的作用.DPC4基因改变与胰腺癌细胞分化程度密切相关.     

急性白血病中DPC4基因的表达研究

目的:探讨胰腺癌缺失基因(DPC4)在急性白血病(AL)中的表达情况及其与临床的关系。方法:采用RT-PCR方法检测32例AL患者骨髓细胞及9例正常人骨髓细胞DPC4表达情况。结果:AL患者骨髓细胞DPC4基因表达阳性率为75.00%,正常人骨髓细胞DPC4基因表达阳性率为77.78%,二者比较差异无统计学意义。结论:DPC4基因的表达缺失未参与AL的发病。     

DPC4基因与胰腺癌关系的研究进展

DPC4是一种肿瘤抑制基因 ,其编码的蛋白是TGF β信号传递的中心分子 ,与胰腺癌的发生关系密切。约有 5 0 %的胰腺癌存在DPC4缺失 ,且它的缺失多发生在III期和浸润性生长的胰腺癌。存在DPC4突变的胰腺癌患者生存期缩短。DPC4对胰腺癌的诊治可能有较为重要的临床意义。     

DPC4基因对人胰腺癌细胞JF305增殖的影响

目的研究肿瘤抑制基因DPC4(deleted in pancreatic carcinoma)对人胰腺癌细胞系JF305增殖能力的影响。方法将携带DPC4基因的真核表达载体转入JF305细胞内,经G418筛选获得DPC4稳定表达细胞株,免疫细胞化学和RT-PCR法检测转染前后细胞内DPC4的表达。用MTT法、细胞计数法和流式细胞仪测定细胞生长曲线、细胞周期、细胞贴壁率和细胞克隆形成率。比较转染前后细胞增殖能力的变化。结果未转染及转染空质粒的JF305细胞无DPC4的表达,转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞可检测到DPC4的表达,且其细胞增殖能力较前明显下降(P<0．001),细胞倍增时间显著延长(由11．8d延长至18d),细胞贴壁率和克隆形成率均明显下降(P<0．0001),G_1期细胞所占比例明显增加(P<0．0001),G_2／M期细胞所占比例明显下降(P<0．0001)。结论无DPC4表达的胰腺癌细胞株JF305可转基因获得DPC4稳定表达,DPC4转基因后可抑制其增殖能力,细胞G_1期延长,G_2／M期缩短。DPC4有望成为胰腺癌基因治疗新的候选基因。     

DPC4基因与胰腺癌关系的研究进展

DPC4是一种肿瘤抑制基因，其编码的蛋白是TGF-β信号传递的中心分子，与胰腺癌的发生关系密切。约有50％的胰腺癌存在DPC4缺失，且它的缺失多发生在Ⅲ期和漫润性生长的胰腺癌。存在DPC4突变的胰腺癌患者生存期缩短。DPC4对胰腺癌的诊治可能有较为重要的临床意义。     

DPC4基因对人胰腺癌细胞JF305增殖的影响

目的研究肿瘤抑制基因DPC4(deleted in pancreatic carcinoma)对人胰腺癌细胞系JF305增殖能力的影响.方法将携带DPC4基因的真核表达载体转入JF305细胞内,经G418筛选获得DPC4稳定表达细胞株,免疫细胞化学和RT-PCR法检测转染前后细胞内DPC4的表达.用MTT法、细胞计数法和流式细胞仪测定细胞生长曲线、细胞周期、细胞贴壁率和细胞克隆形成率.比较转染前后细胞增殖能力的变化.结果未转染及转染空质粒的JF305细胞无DPC4的表达,转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞可检测到DPC4的表达,且其细胞增殖能力较前明显下降(P < 0.001),细胞倍增时间显著延长(由11.8 d延长至18 d),细胞贴壁率和克隆形成率均明显下降(P < 0.0001),G1期细胞所占比例明显增加(P < 0.0001),G2/M期细胞所占比例明显下降(P < 0.0001).结论无DPC4表达的胰腺癌细胞株JF305可转基因获得DPC4稳定表达,DPC4转基因后可抑制其增殖能力,细胞G1期延长,G2/M期缩短.DPC4有望成为胰腺癌基因治疗新的候选基因.     

K-ras基因、胰腺癌缺失基因4变异诊断胰腺癌的价值

胰腺癌起病隐匿，发展迅速，预后极差。本研究采用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)和PCR-单链构象多态性(SSCP)银染技术，分别对胰腺良恶性病变中K—ras基因12密码子点突变、胰腺癌缺失基因(DPC)4基因第8、11外显子变异进行检测，探索其在胰腺癌诊断中的价值。现报道如下。     

人胰腺癌组织中Smad4、VEGF的表达及微血管密度检测

胰腺癌的发生、发展伴随着包括抑癌基因DPC4基因(编码的蛋白为Smad4)在内的许多基因改变,也伴随着肿瘤血管的不断生长.本实验应用免疫组化方法分别检测胰腺癌组织中的Smad4、VEGF的表达,并计数微血管密度(MVD),以了解三者的关系.     

DPC4基因通过mTOR信号通路诱导胰腺癌细胞自噬

目的验证过表达DPC4基因对胰腺癌细胞增殖侵袭的抑制作用,探讨mTOR信号通路对其激活自噬的调控作用。方法构建DPC4过表达载体,转染胰腺癌JF305细胞,CCK-8、Transwell检测其对胰腺癌JF305细胞的增殖侵袭能力,透射电镜观察自噬小体,Western blotting法检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、mTOR、p-mTOR、4EBP1、p-4EBP1的表达。结果过表达DPC4可以抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭;激活自噬,电镜下DPC4过表达细胞中自噬颗粒明显增多;自噬相关蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ在过表达DPC4的JF305细胞中表达升高,同时下调p-mTOR和p-4EBP1的表达水平。结论 DPC4基因可以抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭能力,其作用机制与抑制mTOR信号通路、激活自噬相关。     

胰腺癌组织DPC4/Smad4 mRNA表达的临床意义

目的观察DPC4/Smad4mRNA在胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法应用原位杂交技术对23例胰腺癌组织中的DPC4/Smad4 mRNA表达进行研究.结果胰腺癌组织中DPC4/Smad4 mRNA表达率为52.2%(12/23),低于癌周组织表达率9/10.统计学分析显示,DPC4/Smad4mRNA表达与胰腺癌病理分级呈显著相关(P＜0.05),与胰腺癌临床分期及有无局部淋巴结转移间无显著相关(P＞0.05).结论DPC4/Smad4 mRNA基因表达有可能作为胰腺癌诊断与鉴别诊断的生物学指标之一.     

多基因寡核苷酸芯片在胰腺癌及胰腺良性病变标本检测中的应用

目的 建立k-ras、p16、DPC4、p53基因寡核苷酸芯片对胰腺癌基因突变/缺失的检测系统并评估胰腺癌组织及胰腺良性疾病标本中多基因突变/缺失在临床检测中的应用.方法 采用双重或单独不对称PCR扩增16例胰腺癌组织及8例胰腺良性疾病标本中的目的 DNA.扩增产物加杂交液后与芯片进行杂交、清洗、扫描.结果 16例胰腺癌组织中12例可见k-ras突变,p16、DPC4、p53基因改变分别是7例.14例标本存在至少1个基因改变,其中5例标本存在1个基因改变,2例标本同时2个基因改变,4例标本存在同时3个基因改变,3例标本存在同时4个基因改变.8例胰腺良性疾病中只有3例显示k-ras、p16、p53、DPC4突变.结论 多基因芯片系统具有高度的灵敏性和准确性、快速简便、自动化程度高等优点,可同时检测胰腺癌k-ras、p16、DPC4和p53多个热点突变基因,可以高效地应用于胰腺癌基因突变的研究.     

DPC4基因对人胰腺癌JF305细胞系生长抑制的初步研究

目的研究DPC4基因对人胰腺癌细胞系JF305的生长抑制作用,及DPC4基因与P21d的关系。方法采用脂质体介导法将pBK-CMV-DPC4质粒导入JF305中,经G418筛选培养获得稳定表达细胞株,采用流式细胞仪法,免疫印迹法检测上述3种细胞中DPC4的表达;同时检测P21在DPC4转染前后蛋白表达水平的变化,通过测定细胞生长曲线检测JF305转染DPC4前后生长、增殖等生物学行为的改变。结果转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞DPC4基因表达较前增加,而未转染及转染空质粒的细胞DPC4表达无明显改变。通过MTT法测定发现转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞增殖能力同未转染及转染空质粒的JF305细胞相比明显受到抑制。与未转染及转染空质粒的JF305细胞相比,转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞中的周期蛋白激酶抑制物P21表达明显增加。结论重组DPC4基因转染人胰腺癌细胞系JF305后,可明显的抑制其生长、增殖能力,进而使其恶性程度下降。DPC4基因可能是通过上调周期蛋白依赖性激酶抑制P21蛋白表达而抑制细胞周期,抑制胰腺癌细胞的生长。     

口腔鳞癌中DPC4、转化生长因子-β1表达及其与增殖的关系

目的应用免疫组化法检测口腔鳞癌中胰腺癌第4座位缺失(DPC4)基因和转化生长因子(TGF)-β1的表达,分析其与KI67增殖指数的关系。方法 46例口腔鳞癌术后蜡块组织及临床资料为观察组,肿瘤周围非肿瘤性牙龈鳞状上皮组织18例为对照组。应用免疫组化SP法检测两组中DPC4、TGF-β1和KI67的表达。结果两组中DPC4、TGF-β1和KI67表达的阳性率差异有统计学意义。观察组中DPC4、TGF-β1和KI67的表达均与肿瘤的最大径、有无坏死和分化程度密切相关。相关分析显示观察组中DPC4与TGF-β1、DPC4与KI67呈负相关,TGF-β1与KI67呈正相关。结论口腔鳞癌术后组织中DPC4低表达、TGF-β1和KI67高表达对病变的形成和进展有一定作用。DPC4与TGF-β1具有负向协同作用,可能与对KI67标记的增殖有明显调节作用。     

胰腺癌的基因诊断研究现状

本文综述了目前可用于胰腺癌临床诊断的相关基因,认为K-ras基因及端粒酶基因最有诊断价值。K-raS基因在胰腺癌中的突变率为75％～100％,检测端粒酶活性诊断胰腺癌有100％的敏感性及特异性。尽管p53基因在胰腺癌中有一定的突变率,但单独用于临床诊断的意义不大。DPC4基因是新近发现的一种抑癌基因,在胰腺癌中的突变率约50％,有望进一步用于临床。临床上获取用于检测的标本,主要通过经皮细针穿刺活检、ERCP下刷检及收集胰液、插管收集十二指肠液、收集粪便或血液中的脱落细胞。     

胰腺癌组织DPC4／Smad4 mRNA表达的临床意义

目的：观察DPC4／Smad4 mRNA在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用原位杂交技术对23例胰腺癌组织中的DPC4／Smad4 mRNA表达进行研究。结果：胰腺癌组织中DPC4／Smad4 mRNA表达率为52．2％（12／23），低于癌周组织表达率9／10。统计学分析显示，DPC4／Smad4 mRNA表达与胰腺癌病理分级呈显著相关（P＜0．05），与胰腺癌临床分期有无局部淋巴结转移间无显著相关（P＞0．05）。结论：DPC4／Smad4 mRNA基因表达有可能作为胰腺癌诊断与鉴别诊断的生物学指标之一。     

胰腺癌抑癌基因P16、DPC4寡核苷酸芯片点突变及缺失的应用

目的建立P16、DPC基因寡核苷酸芯片对胰腺癌基因突变的检测系统。评估16例胰腺癌组织P16、DPC基因突变和缺失。方法采用双重或单独不对称PCR扩增标本中的目的DNA。扩增产物加杂交液后与芯片进行杂交、清洗、扫描。结果16例胰腺组织标本中有7例检测出存在着P16基因的改变，4例标本为点突变，2例标本为缺失型改变，还有1例患者存在着野生型与缺失型同时存在的杂和状态。有7例标本发生了D即4基因的改变，有6例突变，1例为缺失，基因异常比例为43.75％。结论P16、DPCA基因芯片可同时检测胰腺癌多个突变位点基因。     

Loss of DPC4 expression and its correlation with clinicopathological parameters in pancreatic carcinoma

AIM: DPC4 is a tumor suppressor gene on chromosome 18q21.1 that has high mutant frequencies in pancreatic carcinogenesis. The purpose of this study was to investigate the role of DPC4 alterations in tumorigenesis and progression of pancreatic carcinomas.METHODS: We studied the immunohistochemical markers of DPC4 in 34 adenocarcinomas and 16 nonmalignant specimens from the pancreas. The 16 nonmalignant specimens from the pancreas included 8 non-neoplastic cysts and 8 normal pancreatic tissues. The relationship between DPC4 alterations and various clinicopathological parameters was evaluated by chi-square test or Fisher's exact test.Survivals were calculated using Kaplan-Meier method (by a log-rank test).RESULTS: All the 16 nonmalignant cases of the pancreas showed expression of DPC4 gene. Loss of DPC4 expression was seen in 8 of 34(23.5 %) pancreatic adenocarcinomas.The frequency of loss of DPC4 expression was higher in poorly differentiated adenocarcinoma (G3) than in well and moderately differentiated adenocarcinoma (G1 and G2)histologically (P=0.037). Loss of DPC4 expression of the patients at TNM stage Ⅳ was also higher than that of the patients at TNM stages Ⅰ, Ⅱ and Ⅲ (60.0 % at stage Ⅳ,versus14.3 % atstage Ⅰ, 18.2 % at stage Ⅱ, and 18.2 % at stage Ⅲ) (P=0.223). The mean and median survival in patients with DPC4 expression was longer than those in patients with loss of DPC4 expression. Kaplan-Meier survival analysis demonstrated patients with DPC4 expression had a higher survival rate than patients with loss of DPC4 expression, but the difference did not reach statistical significance (P =0.879).CONCLUSION: This study suggests that DPC4 is involved in the development of pancreatic carcinoma and is a late event in pancreatic carcinogenesis, DPC4 expression may be a molecular prognostic marker for pancreatic carcinoma.