JAK2/STAT3信号转导通路参与调节IL-6介导的肺腺癌细胞株中MMP-10的表达

目的研究Janus激酶2（JAK2）及信号转导和转录激活子3（STAT3）途径对IL-6介导的肺腺癌细胞（A549）中基质金属蛋白酶10（MMP-10）表达调节的作用,探讨MMP-10的调节机制。方法待生长状况良好的A549细胞融合生长至50%～70%时,分别用0,12.5,25,50ng/mlIL-6及AG490（JAK2特异性抑制剂）＋25ng/mlIL-6处理A549细胞24h后,采用实时RT-PCR技术检测JAK2、STAT3和MMP-10mRNA的表达水平;应用Westernblot检测MMP-10蛋白的表达水平。结果25ng/mlIL-6组STAT3mRNA表达水平较0ng/ml组高43.87%（P〈0.05）,AG490＋25ng/mlIL-6组较25ng/mlIL-6组低36.73%（P〈0.01）;AG490＋25ng/mlIL-6组MMP-10mRNA表达水平较25ng/mlIL-6组高43.21%（P〈0.01）;12.5,25,50ng/mlIL-6组的MMP-10蛋白水平显著高于0ng/ml组（P〈0.05）,且峰值出现在25ng/ml组;与25ng/mlIL-6组相比,MMP-10蛋白水平在AG490＋25ng/mlIL-6组明显降低（P〈0.05）。结论JAK2/STAT3信号转导途径可能参与调节IL-6介导的肺癌细胞株A549中MMP-10的表达。     

MDS-RA骨髓造血细胞JAK2/STAT5通路活化及AG490干预研究

目的探索一种非受体型酪氨酸激酶2／信号转导子和转录活化子5（JAK2／STAT5）通路特异性抑制剂——苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490对骨髓增生异常综合征-难治性贫血（MDS—RA）骨髓造血细胞细胞因子及信号转导的影响。方法建立MDS—RA骨髓造血细胞培养体系JAK2、STATS、Bcl-xL基因表达的荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测方法；粒单集落刺激因子（GM-CSF）激活10例MDS—RA骨髓单个核细胞培养液JAK2、STAT5、Bcl—xL表达，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测AG490组、空白对照组培养体系上清细胞因子自细胞介素（IL）-2、IL-3、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，FQ—PCR检测上述两组培养体系单个核细胞JAl（2、STATS、Bcl—xL基因表达拷贝数。结果AG490组IL-3、IFN-γ水平明显低于空白对照组（P〈0．01），IL-2、INF-α水平差异无显著性；AG490组JAK2、STAT5、Bcl-xL基因表达与空白对照组比较，差异有显著性（P〈0．05，P〈0．01）。结论AG490可以调整MDS-RA骨髓造血细胞培养体系上清细胞因子水平，进而影响JAK2／STAT5通路信号转导，下调Bcl-xL表达。     

MDS-RA骨髓造血细胞JAK2/STAT5通路活化及AG490干预研究

目的探索一种非受体型酪氨酸激酶2/信号转导子和转录活化子5(JAK2/STAT5)通路特异性抑制剂———苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490对骨髓增生异常综合征-难治性贫血(MDS-RA)骨髓造血细胞细胞因子及信号转导的影响。方法建立MDS-RA骨髓造血细胞培养体系JAK2、STAT5、Bc l-xL基因表达的荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测方法;粒单集落刺激因子(GM-CSF)激活10例MDS-RA骨髓单个核细胞培养液JAK2、STAT5、Bc l-xL表达,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测AG490组、空白对照组培养体系上清细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-3、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平,FQ-PCR检测上述两组培养体系单个核细胞JAK2、STAT5、Bc l-xL基因表达拷贝数。结果AG490组IL-3、IFN-γ水平明显低于空白对照组(P<0.01),IL-2、INF-α水平差异无显著性;AG490组JAK2、STAT5、Bc l-xL基因表达与空白对照组比较,差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论AG490可以调整MDS-RA骨髓造血细胞培养体系上清细胞因子水平,进而影响JAK2/STAT5通路信号转导,下调Bc l-xL表达。     

GANT61对肺癌细胞H1703和A549的活力和侵袭力的影响

【目的】观察新型Hh通路抑制剂GANT61对肺癌细胞H1703和A549的生长抑制情况。【方法】培养H1703和A549细胞,加入8．00μmol／L GANT6172h后采用MTT法检测细胞生长情况;Western blot法观察GANT61对Gli-1和Gli-2蛋白表达的影响;观察GANT61对细胞侵袭能力的影响。【结果】H1703和A549细胞培养24h、48h和72h光吸收值均明显低于H1703和A549细胞空白组（P〈0．05）;H1703和A549细胞加入GANT6124h后Gli-1和Gli-2蛋白相对表达量分别为（0．12±0．01）,（0．09±0．01）和（0．41±0．05）,（0．15±0．01）较空白组均明显减少,且差异有显著性（P〈0．05）;H1703和A549加入GANT6124h平均穿膜细胞数分别为（44．35±8．84）个和（67．12±4．71）个,明显低于H1703和A549空白组（130．12±7．83）个和（160．21±4．55）个（P〈0．05）。【结论]GANT61能明显抑制H1703和A549的细胞活力和侵袭能力,可能成为肺癌靶向治疗的新药物。     

抑制JAK/STAT通路对烫伤后金黄色葡萄球菌脓毒症大鼠肝损害的影响

目的：研究JAK激酶／信号转导和转录激活子（JAK／STAT）通路对烫伤后金黄色葡萄球菌（金葡菌）感染致严重脓毒症大鼠肝损害的影响。方法：采用烫伤后金葡菌感染致严重脓毒症的大鼠模型,60只动物随机分为正常对照组,烫伤对照组,烫伤后金葡菌感染组,JAK2激酶抑制剂AG490和STAT3抑制剂雷帕霉素（RPM）处理组,采用逆转录多聚酶链式反应和酶联免疫吸附法,分别检测肝组织中肿瘤坏死因子－α（TNF－α）基因和蛋白表达,肝功能指标的改变。结果：AG490和RPM早期干预均能显著降低烫伤脓毒症大鼠肝组织TNF－αmRNA表达峰值（P均＜0．01）,AG490处理后2小时肝组织TNF－α的蛋白水平也有所下降,同时,血清丙氨酸转氨酶,天冬氨酸转氨酶亦显著降低（P＜0．01或P＜0．05）,结论：脓毒症早期抑制JAK／STAT通路的活化有助于减轻肝组织炎症反应及急性肝损害。     

Id反义寡核苷酸对A549肺癌细胞的抑制及意义

【目的】观察Id反义寡核苷酸（IdASOD）对A549细胞中Id蛋白、mRNA表达及细胞的影响。【方法】体外培养A549细胞,并转染Id反义寡核苷酸;运用RT-PCR与Western-blot检测反义寡核苷酸对A549细胞中Id基因的抑制及蛋白表达的变化;用MTT法与细胞贴壁率检测转染反义寡核苷酸后A549细胞生物学特征的变化。【结果】转染反义寡核苷酸后A549中IdmRNA与蛋白表达水平明显低于未转染组（P〈0．05）,细胞存活率与活性明显下降（P〈0．05）。【结论】IdASOD对A549细胞及Id基因与蛋白表达有明显的抑制作用。     

血小板源性生长因子-DD对肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径的影响

目的 探讨血小板源性生长因子-DD(PDGF-DD)对肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径的影响.方法 将实验用人肾小球系膜细胞分成对照组、PDGF-DD组(20μg/L)和PDGF-DD+AG490组(20 μg/L PDGF-DD+10 μmol/L AG490).采用免疫组化、蛋白印迹法、反转录聚合酶链反应等方法观察PDGF-DD对肾小球系膜细胞p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1和SOCS3的蛋白及mRNA表达的影响.结果 PDGF-DD刺激后肾小球系膜细胞p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1和SOCS3表达增强,AG490抑制上述蛋白的表达(P＜0.05或＜0.01).结论 PDGF-DD能够激活肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径,促进系膜细胞增殖.     

雷帕霉素抑制人肾癌ACHN细胞生长及转移的实验研究

[目的]观察雷帕霉素（RPM）对人肾癌细胞株ACHN生长、周期、凋亡及转移的影响,探讨RPM抑制肾癌细胞生长、转移的可能机制及临床应用前景.[方法]体外培养肾癌ACHN细胞,用不同浓度（10 ng/mL、25 ng/mL）的RPM干预ACHN细胞.采用MTT法检测RPM对于ACHN细胞增殖的影响;流式细胞仪检测ACHN细胞周期及凋亡的变化;Transwell 小室法检测细胞体外侵袭能力的变化;动物体内荷瘤实验检测对ACHN侵袭转移的影响.[结果]RPM能显著抑制ACHN细胞生长增殖,且呈时间和浓度依赖性,差别有显著性意义（P〈0.05）,并促进肿瘤细胞的早期凋亡（P〈0.05）.[结论]RPM明显抑制人肾癌ACHN细胞的生长及迁移,以RPM为基础的肾癌治疗方案可能在临床中具有良好的应用前景.     

JAK2/STAT3信号通路在应激性溃疡大鼠胃黏膜炎症反应中的作用研究

目的：探讨Janus激酶2（JAK2）/信号转导与转录激活子3（STAT3）信号通路在应激性溃疡（SU）的胃黏膜炎症反应过程中的作用。方法：选用雄性清洁级SD大鼠96只,随机分为4组,分别为：正常对照组（NC组）、应激性溃疡组（SU组）、抑制剂组（AG490组）、二甲基亚砜组（DMSO组）。建立水浸束缚SU大鼠模型。4组大鼠分别于实验开始后2h、4h、8h、16h各取6只,测定胃黏膜血流量（GMBF）,计算溃疡指数（UI）。观察胃黏膜组织学变化,测定TNF-α、IL-1β、IL-6以及JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3的表达量。结果：SU组GMBF明显低于NC组,而UI明显高于NC组（P〈0.01）;AG490组GMBF明显高于SU组,而UI明显低于SU组（P〈0.01）。通过造模前给予抑制剂AG490,胃黏膜病理学变化明显改善。SU组TNF-a、IL-1β、IL-6以及p-JAK2、p-STAT 3表达量明显高于NC组（P〈0.01）,而AG490组较SU组显著降低（P〈0.01）。结论：JAK2/STAT 3信号通路参与了SU大鼠胃黏膜炎症反应过程,使用JAK2特异性抑制剂AG490可以减轻SU大鼠胃黏膜炎症反应。     

STCl过表达对宫颈癌CaSki细胞生物学行为的影响

【目的】研究转染STCl基因对人宫颈癌CaSki细胞生物学行为的影响。【方法】通过MTT、集落形成、划痕实验、Tranwell实验、裸鼠成瘤等方法检测STCl基因转染对宫颈癌CaSki细胞增殖、迁移、侵袭、体内成瘤能力的影响。【结果1MTT和集落形成实验表明,与空载体组相比,CaSki／STCl细胞生长受到抑制,细胞存活率和集落形成率较低（P〈0．05）。划痕实验显示CaSki／STCl较CaSki／NC组细胞迁移率降低（35±3．2％ VS 64±4．5％,P〈0．05）。TranweⅡ实验显示CaSki／NC的85±5,而CaSki／STCl组穿膜细胞数较少为54±4（P〈0．05）。裸鼠成瘤实验显示,CaSki／STCl组和CaSki／NC组的肿瘤平均质量依次为（O．285士0．057）g、（0．523±0．154）g,差异具有统计学意义（P,0．01）。【结论】sTCl过表达抑制宫颈癌细胞增殖、转移及侵袭,STCl基因可用于宫颈癌的基因治疗。     

碳酸酐酶Ⅸ和低氧诱导因子-1α在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

【目的】研究碳酸酐酶Ⅸ（CAⅨ）和低氧诱导因子1α（HIF-1α）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及意义。【方法】检测80例NSCLC手术标本中的CAⅨ和HIF-1α表达,分析其在癌组织中表达与临床、病理之间的关系。【结果】NSCLC中CAⅨ和HIF1α的表达率分别为71．25％及66．25％,均显著高于正常肺组织（P〈0．01）。CAⅨ在NSCLC的表达与患者临床特征、病理类型无关（P〉0．05）,但CAⅨ在淋巴结转移组的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组（P〈0．05）;TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的cAⅨ阳性表达率高于TNMⅠ～Ⅱ期的CAⅨ阳性表达率（P〈0．05）。而HIF-1α在NSCLC中的表达与患者临床特征、病理类型和临床分期及淋巴结转移均无关（P〉0．05）;CAⅨ和HIF-1α在非小细胞肺癌组织中的表达相关性不强（P〉0．05）。【结论】CAIX参与了NSCLC的发生、发展和侵袭转移,其可能成为抗肿瘤的新靶点。     

葡萄籽原花青素诱导人肺癌A549细胞凋亡的研究

[目的]研究葡萄籽提取物原花青素对人肺癌细胞株A549凋亡的影响.[方法]以不同浓度的原花青素与 A549细胞体外共同培养,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;Hoechst33258染色观察凋亡细胞形态学变化;TUNEL法检测细胞凋亡率.[结果]原花青素可体外抑制 A549细胞生长,在2.5~250 μmol/L的浓度范围,细胞增殖抑制率差异极为显著( P <0.01).作用24 h的IC50值达7.40 μmol/L,且呈浓度和时间依赖性;荧光染色可见不同浓度原花青素作用于细胞后,凋亡细胞增加,并可见染色质凝集、细胞核碎裂等细胞凋亡特征性变化.TUNEL法计量结果显示,随着PA作用浓度的增加,凋亡率增高,呈剂量依赖性.实验组细胞凋亡率均高于对照组( P <0.05).[结论]原花青素在体外能通过抑制人肺癌细胞株A549细胞增殖,促进细胞凋亡.