阻断STAT3信号转导通路抑制人非小细胞肺癌细胞侵袭转移的体外研究

【目的】观察JAK2激酶特异性抑制剂AG490对非小细胞肺癌A549细胞侵袭的影响,探讨通过药物阻断STAT3信号转导通路在治疗非小细胞肺癌中的作用。【方法】应用AG490处理非小细胞肺癌A549细胞。噻唑蓝法检测各组细胞的增殖情况;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成率;利用B0yden小室体外侵袭模型检测A549细胞体外粘附和侵袭力;Westernblot检测STAT3信号转导通路成员的表达。【结果】AG490明显抑制非小细胞肺癌细胞增殖和细胞克隆形成（P〈0．05）,降低细胞粘附力和体外侵袭力（P〈0．05）,并可抑制JAK2／STAT3信号转导通路活化,使STAT3、CyclinE1蛋白的表达水平明显下降（P〈0．05）。[结论]STAT3信号转导通路参与癌细胞侵袭调控,阻断STAT3通路活化可以抑制非小细胞肺癌细胞侵袭。     

JAK2/STAT3信号通路在应激性溃疡大鼠胃黏膜炎症反应中的作用研究

目的：探讨Janus激酶2（JAK2）/信号转导与转录激活子3（STAT3）信号通路在应激性溃疡（SU）的胃黏膜炎症反应过程中的作用。方法：选用雄性清洁级SD大鼠96只,随机分为4组,分别为：正常对照组（NC组）、应激性溃疡组（SU组）、抑制剂组（AG490组）、二甲基亚砜组（DMSO组）。建立水浸束缚SU大鼠模型。4组大鼠分别于实验开始后2h、4h、8h、16h各取6只,测定胃黏膜血流量（GMBF）,计算溃疡指数（UI）。观察胃黏膜组织学变化,测定TNF-α、IL-1β、IL-6以及JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3的表达量。结果：SU组GMBF明显低于NC组,而UI明显高于NC组（P〈0.01）;AG490组GMBF明显高于SU组,而UI明显低于SU组（P〈0.01）。通过造模前给予抑制剂AG490,胃黏膜病理学变化明显改善。SU组TNF-a、IL-1β、IL-6以及p-JAK2、p-STAT 3表达量明显高于NC组（P〈0.01）,而AG490组较SU组显著降低（P〈0.01）。结论：JAK2/STAT 3信号通路参与了SU大鼠胃黏膜炎症反应过程,使用JAK2特异性抑制剂AG490可以减轻SU大鼠胃黏膜炎症反应。     

MDS-RA骨髓造血细胞JAK2/STAT5通路活化及AG490干预研究

目的探索一种非受体型酪氨酸激酶2／信号转导子和转录活化子5（JAK2／STAT5）通路特异性抑制剂——苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490对骨髓增生异常综合征-难治性贫血（MDS—RA）骨髓造血细胞细胞因子及信号转导的影响。方法建立MDS—RA骨髓造血细胞培养体系JAK2、STATS、Bcl-xL基因表达的荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测方法；粒单集落刺激因子（GM-CSF）激活10例MDS—RA骨髓单个核细胞培养液JAK2、STAT5、Bcl—xL表达，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测AG490组、空白对照组培养体系上清细胞因子自细胞介素（IL）-2、IL-3、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，FQ—PCR检测上述两组培养体系单个核细胞JAl（2、STATS、Bcl—xL基因表达拷贝数。结果AG490组IL-3、IFN-γ水平明显低于空白对照组（P〈0．01），IL-2、INF-α水平差异无显著性；AG490组JAK2、STAT5、Bcl-xL基因表达与空白对照组比较，差异有显著性（P〈0．05，P〈0．01）。结论AG490可以调整MDS-RA骨髓造血细胞培养体系上清细胞因子水平，进而影响JAK2／STAT5通路信号转导，下调Bcl-xL表达。     

HMGB1在内毒素血症小鼠肝损伤中的作用

目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在内毒素血症小鼠肝损伤中的作用。方法BALB/c小鼠随机分为正常对照组0、.2 mg/kg脂多糖组、1 mg/kg脂多糖组5、mg/kg脂多糖组、AG 490处理组和氟达拉宾处理组,AG 490和氟达拉宾的使用剂量分别为20 mg/kg和10 mg/kg。于腹腔注射后不同时间观察肝组织HMGB1 mRNA表达、血清HMGB1水平和丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活力的变化。HMGB1 mRNA表达和HMGB1含量分别采用RT-PCR方法和ELISA检测。结果小鼠注射脂多糖后,肝组织HMGB1 mRNA表达、血清HMGB1水平和丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活力均呈剂量相关性升高,而使用JAK/STAT通路抑制剂AG 490和氟达拉宾处理后,以上指标均明显下降（P〈0.05）。结论脂多糖诱导的HMGB1释放与胞内JAK/STAT信号通路有关,HMGB1在内毒素血症小鼠肝损伤中具有作用。     

腹腔感染性脓毒症可溶性髓样细胞触发受体(sTREM-1)与Janus激酶-信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路的关系

目的 通过动物脓毒症模型探讨可溶性髓样细胞触发受体(sTREM-1)与Janus激酶-信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路的关系.方法 采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制作大鼠脓毒症模型,大鼠随机(随机数字法)分为正常对照组(n=6)、假手术组(n=24)、CLP组(n=48)、JAK 2抑制剂(AG 490)组(n=48)和STAT3抑制剂(雷帕霉素,RPM)组(n=48).留取外周血行流式细胞仪分析CD4+ CD25+ Treg细胞/CD4+T细胞比值.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)测定肝组织sTREM-1 mRNA表达水平.结果 CLP后6h肝sTREM-1 mRNA表达即高于对照组和假手术组,且随时间变化逐渐升高.AG490组肝组织sTREM-1 mRNA的表达在术后6h、24 h(1.572±0.051,2.063±0.025)较同时间点CLP组(1.592±0.036,2.082±0.021)差异无统计学意义(P＜0.05),而在48 h和72 h AG490组肝组织sTREM-1 mRNA的表达(2.522±0.083,3.153±0.021)低于同时间点CLP组(2.592±0.055,3.204±0.013) (P＜0.05).术后6 h RPM组肝组织sTREM-1mRNA的表达(1.581±0.017)较CLP组差异无统计学意义(P＜0.05),而在术后24、48、72 h RPM组肝组织sTREM-1 mRNA的表达(1.486±0.019,1.263±0.011,1.115±0.022)显著低于同时间点CLP组肝组织sTREM-1 mRNA的表达(P＜0.05).结论 sTREM-1因子与JAK/STAT通路有关,阻断JAK/STAT通路能够抑制sTREM-1 mRNA的表达,减缓脓毒症炎症反应的进展.     

JAK/STAT通路介导脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1 mRNA表达的研究

目的：探讨Janusk激酶／信号转导和转录激活子（JAK／STAT）通路对盲肠结扎穿孔术（CLP）所致脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）mRNA表达和急性肝损害的影响。方法：采用CLP模型，大鼠随机分为正常对照组、CLP脓毒症组、JAK2激酶抑制剂AG490和STAT抑制剂雷帕霉素（RPM）处理组。采用逆转录多聚酶链式反应测定肝HMGB1 mRNA，全自动生化分析仪测定肝功能指标。结果：与正常对照组相比，CLP后6－48h HMGB1 mRNA表达显著升高（P＜0．01）；血清天冬氨酸转氨酶（AST）在6－48h增高明显（P＜0．05），丙氨酸转氨酶（ALT）、AST在24h升高非常显著（P＜0．01）。与CLP组相比，AG490预处理组24h HMGB1 mRNA和ALT水平显著下降（P均＜0．01），24h和48h AST亦明显降低（P均＜0．01）；同样，RPM干预后HMGB1 mRNA表达在6h 和24h显著抑制（P＜0．05和P＜0．01），ALT、AST在24h和48h均不同程度下降（P＜0．01和P＜0．05）。结论：抑制JAK／STAT通路活化可明显下调肝组织HMGB1 mRNA表达，并有助于减轻CLP所致急性肝损伤。     

血小板源性生长因子-DD对肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径的影响

目的 探讨血小板源性生长因子-DD(PDGF-DD)对肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径的影响.方法 将实验用人肾小球系膜细胞分成对照组、PDGF-DD组(20μg/L)和PDGF-DD+AG490组(20 μg/L PDGF-DD+10 μmol/L AG490).采用免疫组化、蛋白印迹法、反转录聚合酶链反应等方法观察PDGF-DD对肾小球系膜细胞p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1和SOCS3的蛋白及mRNA表达的影响.结果 PDGF-DD刺激后肾小球系膜细胞p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1和SOCS3表达增强,AG490抑制上述蛋白的表达(P＜0.05或＜0.01).结论 PDGF-DD能够激活肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径,促进系膜细胞增殖.     

抑制JAK/STAT通路对烫伤后金黄色葡萄球菌脓毒症大鼠肝损害的影响

目的：研究JAK激酶／信号转导和转录激活子（JAK／STAT）通路对烫伤后金黄色葡萄球菌（金葡菌）感染致严重脓毒症大鼠肝损害的影响。方法：采用烫伤后金葡菌感染致严重脓毒症的大鼠模型,60只动物随机分为正常对照组,烫伤对照组,烫伤后金葡菌感染组,JAK2激酶抑制剂AG490和STAT3抑制剂雷帕霉素（RPM）处理组,采用逆转录多聚酶链式反应和酶联免疫吸附法,分别检测肝组织中肿瘤坏死因子－α（TNF－α）基因和蛋白表达,肝功能指标的改变。结果：AG490和RPM早期干预均能显著降低烫伤脓毒症大鼠肝组织TNF－αmRNA表达峰值（P均＜0．01）,AG490处理后2小时肝组织TNF－α的蛋白水平也有所下降,同时,血清丙氨酸转氨酶,天冬氨酸转氨酶亦显著降低（P＜0．01或P＜0．05）,结论：脓毒症早期抑制JAK／STAT通路的活化有助于减轻肝组织炎症反应及急性肝损害。     

雷公藤内酯醇抑制小鼠肾小球系膜细胞表达CXCL10的实验研究

目的探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)对γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)诱导的小鼠肾小球系膜细胞(SV40MES13)表达趋化因子CXCL10 m RNA的影响及其可能机制。方法将对数生长期SV40MES13随机分为空白组、刺激组、干预组,用不同浓度的IFN-γ(0U/ml~2000U/ml)刺激细胞不同时间(0h~48h)后,观察细胞表达CXCL10 m RNA的变化;用CCK-8法检测不同浓度(2ng/ml~20ng/ml)TPL对SV40MES13生存率的影响,选用细胞生存率大于90%的TPL用于后续实验,观察TPL对SV40MES13表达CXCL10 m RNA的影响;选用JAK/STAT信号通路特异性抑制剂AG490干预细胞,探讨IFN-γ是否通过JAK/STAT信号通路诱导CXCL10表达;收集以上细胞,用Real-Time PCR技术检测各组CXCL10 m RNA表达水平。结果 IFN-γ能诱导SV40MES13表达CXCL10 m RNA,并呈时间、剂量依赖性;AG490具有抑制IFN-γ诱导的SV40MES13表达CXCL10 m RNA;TPL具有抑制IFN-γ诱导的SV40MES13表达CXCL10 m RNA的作用。结论 IFN-γ可能通过激活JAK/STAT信号通路,诱导SV40MES13表达CXCL10 m RNA;TPL具有抑制IFN-γ诱导的SV40MES13表达CXCL10的作用。     

窒息新生儿干预前后血清细胞因子的变化及对缺氧缺血性脑病发病的影响

目的 探讨窒息新生儿干预前后血清白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)对新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)发病的临床意义.方法 选择我院出生的正常新生儿40名(健康对照组)、窒息新生儿70例(窒息组),将窒息组随机分为两组,常规治疗组30例,维持良好的通气与换气功能,维持心率、血压在正常范围,维持血糖在正常高值,控制惊厥,降低颅内压,消除脑干症状等；1,6-二磷酸果糖组(FDP组)40例,在常规治疗基础上于出生6h内静脉注射FDP注射剂250mg/(kg·d),疗程10 d.健康对照组无特殊处理,已出院者于出生10 d返院回访.监测3组新生儿出生6h、3d、10 d血清IL-6、IL-8、TNF-α浓度,观察窒息新生儿72 h内HIE的发生率.结果 窒息组出生6h内IL-6、IL-8、TNF-α与健康对照组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05),出生3 d IL-6低于健康对照组[(2.22±1.26)、(3.04±0.98) ng/L,P＜0.05],IL-8、TNF-α高于健康对照组[(18.62±14.56)、( 15.65±11.25) ng/L,(50.28±18.74)、(42.02±12.25) ng/L,P均＜0.05].出生3 d FDP组IL-6高于常规治疗组[(2.65±1.13)、( 1.24±1.06) ng/L,P＜0.05],IL-8、TNF-α明显低于常规治疗组[(17.24±12.48)、(22.46±10.88) ng/L,(44.62±18.27)、( 54.25±17.28) ng/L,P均＜0.01]；3组间IL-6于出生10 d时差异均无统计学意义(P均＞0.05),而FDP组IL-8、TNF-α明显低于常规治疗组[(14.25±12.75)、(17.23±11.33) ng/L,(37.41 ±17.55)、(48.21±16.54) ng/L,P均＜0.01]；FDP组HIE的发生率[22.5％ (9/40)]及中、重度HIE的发生率[5.0％(2/40)]明显低于常规治疗组[46.7％ (14/30)与26.7％ (8/30)],差异均有统计学意义(x2=4.53,P＜0.05;x2=4.59,P＜0.05).结论 围产期窒息患儿外周血IL-6降低,IL-8、TNF-α升高,其可能参与HIE的发病过程.早期干预能降低HIE的发生率及中、重度HIE的发生率.     

AG490对重症急性胰腺炎大鼠 IL-6、IL-18表达的影响

目的探讨AG490对重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）大鼠血清白介素-6（IL-6）、白介素-18（IL-18）的表达影响。方法以4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导大鼠 SAP 模型。56只 SD大鼠随机分为正常对照组（NC组）、SAP组和 AG490组（JAK2抑制剂组）。检测并比较三组血清淀粉酶（AMY）、IL-6、IL-18含量,光镜下观察胰腺组织病理变化。结果与 NC 组比较,SAP 组各时间点血清 AMY 水平均明显升高,在SAP发展的6~18 h 内,血清 IL-6、IL-18的表达明显增加,但与 AG490组同时间点血清 IL-6、IL-18的表达比较明显降低。结论 SAP时 IL-6、IL-18表达明显升高,升高程度与病情严重程度呈正相关;抑制JAK/STAT通路的活化可下调血清 IL-6、IL-18的表达,可能减轻 SAP时急性炎症反应。