小鼠胸腺基质细胞单抗体特性及生物功能研究

应用细胞ＥＬＩＳＡ用间接荧光染色技术，分析多种胸腺基质细胞（ＴＳＣ）单克隆抗体，结果表明不同的单抗与不同ＴＳＣ呈不同的阳性反应，其中Ｐｆ１８－３和Ｒｓ２１－Ｃ６单抗与小鼠胸腺基质细胞１－７（ＭＴＳＣ１－７）等多种细胞均呈强阳性反应，但荧光染色显示Ｐｆ１８－３和Ｒｓ２１－Ｃ６染色特征不一。将Ｐｆ１８－３或Ｒｓ２１－Ｃ６单抗加入ＴＳＣ与胸腺细胞共培养，发现两种单克隆抗体对胸腺基质细胞和胸腺细胞结合有明显抑制作用：Ｐｆ１８－３、Ｒｓ２１－Ｃ６对ＭＴＳＣ１与胸腺细胞结合的抑制率分别为６４．３％、４１．３％；对ＭＴＳＣ４与胸腺细胞结合的抑制率分别为６０．４％和３８．８％。试验表明Ｐｆ１８－３、Ｒｓ２１－Ｃ６两种单抗分别识别胸腺基质细胞表面抗原分子，且其识别的抗原分子参与了胸腺基质细胞与胸腺细胞的结合。     

一种新型表达于基质细胞和活化胸腺细胞的T细胞功能相关分子

采用流式细胞技术分析胸腺基质细胞单抗Ｐｆ１８－３,发现其识别分子表达于胸腺基质细胞以及胎肝和骨髓等不同来源的基质细胞系和腹腔巨噬细胞表面。新平仄发离的胸腺细胞Ｐｆ１８－３表达阴性,但ＣｏｎＡ活性可上调Ｐｆ１８－３的表达,即于活化后７２ｈ约２８％胸腺细胞Ｐｆ１８－３表达阳性。分析用ＣｏｎＡ活化后再经甲醇处理的胸腺细胞,支持以上结果,鉴于固相Ｐｆ１８－３单抗明显促进胸腺细胞的增殖,进一步分析固相Ｐｆ１     

大鼠抗小鼠胸腺基质细胞单克隆抗体的研制与鉴定

采用脾内免疫法，制备出两组大鼠抗小鼠胸腺基质细胞（Ｔｈｙｍｉｃｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓ，ＴＳＣ）的大－小鼠Ｂ细胞杂交瘤，已获４０个单抗分泌细胞株。小鼠胸腺切片免疫组织化学染色结果：（１）髓质ＴＳＣ反应阳性，皮质ＴＳＣ反应阴性；（２）皮、髓质ＴＳＣ反应均呈阳性且强度相似；（３）髓质ＴＳＣ反应强于皮质ＴＳＣ；（４）皮质ＴＳＣ反应强于髓质ＴＳＣ；（５）胸腺细胞的反应呈弥漫性。本实验结果不仅有利于鉴别ＴＳＣ亚群并且对研究Ｔ细胞发育有重要意义。     

何杰金病单克隆抗体免疫组化研究

应用标记Ｒ－Ｓ细胞、Ｂ淋巴细胞和Ｔ淋巴细胞的５种单克隆抗体ＬｅｕＭ１、ＢｅｒＨ２、ＬＣＡ、Ｌ２６和ＵＣＨＬ１对４３例何杰金病的石蜡标本进行了免疫组织化学染色，以Ｔ、Ｂ细胞淋巴瘤各１５例作对照研究。结果：非淋巴细胞为主型何杰金病的Ｒ－Ｓ细胞对ＬｅｕＭ１的阳性率为６４．３％，对ＬＣＡ、Ｌ２６和ＵＣＨＬ１呈阴性反应；而非何杰金淋巴瘤，ＬｅｕＭ１仅偶在Ｔ细胞淋巴瘤呈阳性（６．７％），ＬＣＡ、Ｌ２６和ＵＣＨ     

何杰金病单克隆抗体免疫组化研究

应用标记Ｒ－Ｓ细胞、Ｂ淋巴细胞和Ｔ淋巴细胞的５种单克隆抗体ＬｅｕＭ_１、ＢｅｒＨ_２、ＬＣＡ、Ｌ_（２６）和ＵＣＨＬ_１对４３例何杰金病（ＨＤ）的石蜡标本进行了免疫组织化学染色，以Ｔ、Ｂ细胞淋巴瘤各１５例作对照研究。结果：非淋巴细胞为主型何杰金病（ｎｏｎＬＰＨＤ）的Ｒ－Ｓ细胞对ＬｅｕＭ_１的阳性率为６４．３％，对ＬＣＡ、Ｌ_（２６）和ＵＣＨＬ_１呈阴性反应；而非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ），ＬｅｕＭ_１仅偶在Ｔ细胞淋巴瘤中呈阳性（６．７％），ＬＣＡ、Ｌ_（２６）和ＵＣＨＬ_１标记ＮＨＬ、Ｂ－ＮＨＬ和Ｔ－ＮＨＬ阳性率分别是８３．３％、７３．３％和６６．７％。因此，在石蜡切片上联合应用ＬｅｕＭ１、ＬＣＡ、Ｌ_（２６）和ＵＣＨＬ_１对鉴别ＨＤ与ＮＨＬ有重要的参考价值。淋巴细胞为主型何杰金病（ＬＰＨＤ）的Ｒ－Ｓ细胞对ＬＣＡ和Ｌ_（２６）的阳性率为５３．３％和６０％，ｎｏｎＬＰＨＤ中Ｒ－Ｓ细胞对ＢｅｒＨ_２的阳性率为２１．４％。提示ＬＰＨＤ的Ｒ－Ｓ细胞来源于Ｂ淋巴细胞，ｎｏｎＬＰＨＤ的Ｒ－Ｓ细胞可能与活化的淋巴细胞有关。     

大鼠抗小鼠胸腺基质细胞单克隆抗体的研制与鉴定

采用脾内免疫法，制备出两组大鼠抗小鼠胸腺基质细胞的大一小鼠Ｂ细胞杂交瘤，已获４０个单抗分泌细胞株。小鼠胸腺切片免疫组织化学染色结果：（１）髓质ＴＳＣ反应阳性，皮质ＴＳＣ反应阴性；（２）皮，髓质ＴＳＣ反应均呈阳性且强度相似；（３）髓质ＴＳＣ反应强于皮质ＴＳＣ；（４）皮质ＴＳＣ反应强于髓质ＴＳＣ；（５）胸腺细胞的反应呈弥漫性。本实验结果不仅有利于鉴别ＴＳＣ亚群并且对研究Ｔ细胞发育有重要意义。     

非鼻咽部T细胞淋巴瘤与EB病毒的相关性

探讨ＥＢ病毒感染与非鼻咽部Ｔ细胞淋巴瘤的关系。用单克隆抗体ＵＣＨＬ－１，Ｌ２６及ＥＢ病毒编码的潜在膜蛋白－１，免疫组化染色确定肿瘤的免疫表型及ＥＢ病毒转化蛋白的表达。采用原位杂交方法检测ＥＢＶ编码的ＥＢＥＲＳ。结果；２１例非鼻咽部Ｔ细胞淋巴瘤ＥＢＥＲＳ５例阳性，其中结内淋巴瘤３例，肺和胃肠淋巴瘤各１例。阳性细胞约占肿瘤细胞的１０％－７０％。５例ＥＢＥＲｓ阳性病例中仅１例表达ＬＭＰ－１，为结内淋巴瘤     

人胚胸腺组织培养及其移植恒河猴的实验研究

应用组织培养，发现人胚胸腺组织贴块法培养呈典型的３个过程，培养１周后胸腺基质细胞（ＴＳＣ）大量生长，其胞浆ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ呈弱阳性表达，电镜观察了ＴＳＣ细胞胞浆含有典型的张力微丝束，ＴＳＣ细胞培养上清液能促进肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的体外增殖和表型转化。胸腺共悬浮培养能使胸腺上皮成分集中，ＨＬＡ－ＤＲ阳性细胞比例下降，用１２号针头对恒河猴三角肌行移植实验，结果表明移植是安全的，且胸腺上皮组     

人胚胸腺组织培养及其移植恒河猴的实验研究

应用组织培养，发现人胚胸腺组织贴块法培养呈典型的３个过程。培养１周后胸腺基质细胞（ＴＳＣ）大量生长，其胞浆ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ呈弱阳性表达，电镜观察ＴＳＣ细胞胞浆含有典型的张力微丝束，ＴＳＣ细胞培养上清液能促进肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的体外增殖和表型转化。胸腺块悬浮培养能使胸腺上皮成分集中，ＨＬＡ－ＤＲ阳性细胞比例下降。用１２号针头对恒河猴三角肌行移植实验，结果表明移植是安全的，且胸腺上皮组织能在肌组织中生长，但仅维持１周，２周后呈条索样萎缩。     

人胎胸腺上皮细胞角蛋白的表达

用５种角蛋白单克隆抗体（ＲＡＥ、ＡＣ４、ＡＥ３、ＡＣ１、ＡＣ３）以免疫组化方法观察人胎胸腺上皮细胞的不同亚类和分化。在胸腺皮质和髓质的上皮细胞两种角蛋白抗体ＲＡＥ、ＡＣ４均显示阳性反应，ＲＡＥ阳性反应较ＡＣ４强。ＡＣ１ＡＥ３阳性反应仅显示在髓质的上皮细胞，在髓质内一些胞体较大的上皮细胞显示ＡＥ３阳性反应并较ＡＣ１反应强，而在胸腺小体中央分别显示阳性或阴性反应。在人胎发育不同阶段（３、４、５、６及足月）ＡＣ３反应阳性的胸腺上皮细胞其反应程度逐渐增强。结果表明，胸腺上皮细胞的异质性及其分化。     

人胎胸腺上皮细胞角蛋白的表达

用５种角蛋白单克隆抗体（ＲＡＥ、ＡＣ４、ＡＥ３、ＡＣ１、ＡＣ３）以免疫组化方法观察人胎胸腺上皮细胞的不同亚类和分化。在胸腺皮质和髓质的上皮细胞两种角蛋白抗体ＲＡＥ、ＡＣ４均显示阳性反应，ＲＡＥ阳性反应较ＡＣ４强。ＡＣ１、ＡＥ３阳性反应仅显示在髓质的上皮细胞，在髓质内一些胞体较大的上皮细胞显示ＡＥ３阳性反应并较ＡＣ１反应强，而在胸腺小体中央分别显示阳性或阴性反应。在人胎发育不同阶段（３、４、５、６及     

抗人CD3,CD7—PAPs免疫毒素对T细胞的联合杀伤效应

免疫毒素杀伤试验分８组进行。主要采用改进的ＭＴＴ法测定不同浓度的抗ＣＤ３－ＰＡＰｓ、抗ＣＤ７－ＰＡＰｓ１抗ＣＤ３－ＰＡＰｓ＋抗ＣＤ７－ＰＡＰｓ、爽抗ＡＨＴＧ－ＰＡＰｓ杀伤Ｔ细胞的效率，同时以Ｂ细胞作非靶细胞对照。结果证实，两种抗人Ｔ细胞单抗和多抗ＩＴ均具有特异性杀伤Ｔ细胞的作用。     

人类疱疹病毒7型南京株的分离及初步鉴定

从１例健康成人及３名肾病患儿唾液中分离出人类疱疹病毒７型（ＨＨＶ－７）的南京地方株（ＹＹ）。并根据其在植物血凝素（ＰＨＡ）预激活的脐带血单个核细胞上生长与细胞病变效应的特点，采用电镜观察，特异性单克隆抗体ＫＲ－４间接免疫荧光染色，对ＳＵＰＴ１、ＨＳＢ－２、ＪＪＨＡＮ３个Ｔ淋巴细胞株的不同亲嗜性及特异性套式ＰＣＲ基因扩增结果等作了初步确定     

双特异性单克隆抗体介导的单核—巨噬细胞抗肝癌作用

研究双特异性单克隆抗体介导的单核－巨噬细胞抗肝癌作用。方法采用化学交联法，用异型化学交联剂Ｎ－琥珀酰亚氨基－３－，将具有高亲和性的抗肝癌单抗ＨＡｂ１８Ｆ２与抗单核－巨噬细胞的单抗ＭＡｂ７Ｆ２联结双特异性单抗ＨＡｂ１８Ｆ２－Ｍａｂ７Ｆ２，经ＦＰＬＣ Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－２００纯化。     

ATG和抗CD3McAb对再障患者CFU—GM生长的体外影响研究

用ＣＦＵ－ＧＭ半固体琼脂培养技术研究了抗人胸腺细胞球蛋白和抗ＣＤ３单克隆抗体对１８例再生障碍性贫血患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ体外生长的影响。结果表明，１．加入１６．７μｇ／ｍｌＡＴＧ或１：５０抗ＣＤ３ＭｃＡｂ，体外均可增加ＡＡ患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的集落数，再者的作用无显著差异。     

LFA－1、LFA－2、CD44和CD45分子对T细胞的共刺激作用

为了解粘附分子（Ａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）在Ｔ细胞激活中的作用及其机制，作者采用ＴＣＲ－ＣＤ３复合物、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－２、ＣＤ４４和ＣＤ４５特异性单克隆抗体刺激，ＦｃγＲＩＩ阳性或阴性肿瘤细胞刺激，以及刺激阻断的方法，以ＩＦＮ－γ定量检测作为Ｔ细胞激活的标志，研究了ＴＣＲ－ＣＤ３复合物交联（Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ），交联的不同形式，ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－２、ＣＤ４４和ＣＤ４５分子对Ｔ细胞激活的影响及其机制。结果提示：ＴＣＲ－ＣＤ３复合物的持久性交联是Ｔ细胞体外激活的必要条件，上述４种粘附分子是Ｔ细胞激活的共刺激分子，其作用机制不仅是细胞间的粘附，而且还作为各自独立的刺激分子影响Ｔ细胞的信号传递。     

抗人凋亡相关蛋白TFAR19的单克隆抗体制备及鉴定

目的：研制鼠抗人凋亡相关蛋白ＴＦＡＲ１９的单克隆抗体,以进一步探讨ＴＦＡＲ１９蛋白的结构与功能。方法：以纯化的重组人ＴＦＡＲ１９蛋白为抗原,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,将ＴＦＡＲ１９蛋白免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行细胞融合,经克隆筛选获得鼠抗人ＴＦＡＲ１９蛋白单抗的杂交瘤细胞株,以间接ＥＬＩＳＡ、Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹分析等方法进行单克隆抗体的鉴定。结果：获得了３株稳定分泌抗人ＴＦＡＲ１９单克隆抗体的杂交瘤细胞株（Ｃ１,Ｃ１０,２Ｃ１２）,其分泌的单抗效价高,特异性好,亲和力不一,免疫球蛋白亚类均为ＩｇＧ１。Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹分析证明ＴＦＡＲ１９蛋白在调亡细胞中高表达。结论：所获单抗能特异识别原核及真核细胞表达的ＴＦＡＲ１９蛋白,为进一步探讨ＴＦＡＲ１９蛋白的生物学效应提供了条件。     

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）的单克隆抗体，并对其特性进行系统地鉴定。方法以活的ＲＳＶＬｏｎｇ株滴鼻（ＴＣＩＤ５０为１×１０－６，取１００ＴＣＩＤ５００１２５ｍｌ进行）加ＲＳＶ感染Ｈｅｐ２细胞（ＣＰＥ达～）腹腔注射免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠，用细胞融合技术制备能稳定分泌抗ＲＳＶ的单克隆抗体细胞株。结果细胞融合一次成功，融合率为９６％，抗ＲＳＶ抗体阳性孔率为６５％。鉴定１株杂交瘤细胞Ｆ３株，染色体数为９８条，抗体亚类属ＩｇＧ１，对ＲＳＶ抗原特异；在无补体存在的情况下其腹水抗体中和效价为１∶１２８，且具融合抑制活性，腹水融合抑制效价为１∶６４。结论Ｆ３株单克隆抗体为抗ＲＳＶＦ蛋白的ＭｃＡｂ。     

双特异性单克隆抗体介导的单核－巨噬细胞抗肝癌作用

目的研究双特异性单克隆抗体介导的单核－巨噬细胞抗肝癌作用。方法采用化学交联法，用异型化学交联剂Ｎ－琥珀酰亚氨基－３－（２－二硫吡啶）丙酸酯（ＳＰＤＰ），将具有高亲和性的抗肝癌单抗ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２与抗单核－巨噬细胞的单抗ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２联结成双特性单抗ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２，经ＦＰＬＣＳｅｐｈａｃｒｙ１Ｓ－２００纯化。用间接免疫荧光法鉴定其特性。结果ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２及ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２对肝癌细胞间接免疫荧光染色阳性，ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２及ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２对单个核细胞染色为阳性。而这些抗体对肺腺癌细胞均呈阴性；单纯ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２无导向单核－巨噬细胞杀伤肝癌细胞作用，ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２及ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２均可介导单核－巨噬细胞对肝癌细胞起杀伤作用，并且前者强于后者。结论ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）是一种具有双特异性的单克隆抗体，可以提高人单核－巨噬细胞杀伤肝癌细胞的作用。     

矢车菊素－３－葡萄糖苷通过降低ＳＴＡＴ３活化抑制ＴＮＦ－α诱导的小鼠血管平滑肌细胞增殖

【目的】 探讨矢车菊素－３－葡萄糖苷（Ｃ３Ｇ）对ＴＮＦ－α诱导的血管平滑肌增殖的影响及可能的机制。【方法】 Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠主动脉平滑肌细胞（ＶＳＭＣ） 购于ＡＴＣＣ,体外培养后以Ｃ３Ｇ对细胞进行预处理后观察ＴＮＦ－α的促细胞增殖作用;Ｄｉｈｙｄｒｏｅｔｈｉｄｉｕｍ （ＤＨＥ）荧光染色检测ＶＳＭＣ在ＴＮＦ－α作用下的活性氧（ＲＯＳ）生成情况;实时定量ＰＣＲ检测细胞内ＮＡＤＰＨ氧化酶活化蛋白１（ＮｏｘＡ１）的ｍＲＮＡ水平;蛋白质印迹法检测细胞内ＮｏｘＡ１、信号转导与转录激活因子３ （ＳＴＡＴ３）、磷酸化ＳＴＡＴ３及β－ａｃｔｉｎ的表达水平。统计学方法采用单因素方差分析。【结果】 Ｃ３Ｇ预处理能够抑制ＴＮＦ－α诱导的ＶＳＭＣ增殖,该作用呈现剂量、时间依赖性。联合应用５０ μｍｏｌ／Ｌ Ｃ３Ｇ及１００ μｍｏｌ／Ｌ ａｐｏｃｙｎｉｎ显著减少ＴＮＦ－α诱导ＲＯＳ的生成。Ｃ３Ｇ联合ａｐｏｃｙｎｉｎ较Ｃ３Ｇ或ａｐｏｃｙｎｉｎ单独孵育更能显著抑制ＴＮＦ－α处理下ＶＳＭＣ内ＮｏｘＡ１基因的表达及ＳＴＡＴ３蛋白的磷酸化。应用ＲＯＳ清除剂触媒（ｃａｔａｌａｓｅ ２ ０００ Ｕ／ｍＬ）能显著抑制ＴＮＦ－α诱导的ＶＳＭＣ增殖及ＳＴＡＴ３蛋白活化。【结论】 Ｃ３Ｇ对抗ＴＮＦ－α诱导ＶＳＭＣ增殖的机制很可能是通过削弱ＮｏｘＡ１导致的ＲＯＳ生成,从而抑制ＳＴＡＴ３蛋白的激活。