原始森林高产纤维素酶刺器腐霉的筛选鉴定

采用羧甲基纤维素钠(carboxyl methyl cellulose, CMC-Na)为唯一碳源,从广西罗城县原始森林腐木下的土壤中初步筛选分离出具有降解纤维素能力的菌株,结合刚果红染色,确定透明圆的直径大小,进一步判断纤维素的分解能力;并对其进行形态描述和显微观察。最后筛选分离得到4株产酶菌株,将其接种于液体发酵培养基,通过测定葡聚糖内切酶(endo-glucanase, CMCase)酶活力,经刚果红染色法证明H-2菌株在CMC-Na 筛选平板上形成的透明圈和菌落直径最大,产羧甲基纤维素酶的能力强。液体发酵粗酶活测定发现,H-2菌株羧甲基纤维素酶活力达130 U/mL 。H-2菌株形态特征和ITS序列建系统进化树鉴定为刺器腐霉(Pythium acanthophoron)。     

一株α-淀粉酶产生菌的分离、鉴定及产酶条件研究

为获得具有高产α-淀粉酶能力的菌株,从不同土壤环境中分离产酶菌株,对其进行分类鉴定和产酶条件研究。通过透明圈法初筛、3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)法复筛分离得到产α-淀粉酶能力较强的菌株,利用形态学和生理生化反应特征,结合16S rDNA序列分析,对其进行分类鉴定;通过单因素试验和正交试验确定该菌株的最佳产酶条件。结果表明:从土壤环境中分离得到一株产α-淀粉酶菌株MF04,初步鉴定为蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus),其初始产酶活力为32.5 U/mL;产酶条件试验结果显示其最适培养温度为37℃,初始pH值为6.0,培养时间为72 h,经优化后液体发酵得到的粗酶液酶活力为60.2 U/mL,是优化前的85.2%。因此分离得到菌株MF04在工业生产中具备潜在开发价值。     

芽孢杆菌TF18的鉴定以及系统发育分析

目的对一株透明质酸酶高产菌株进行鉴定及系统发育分析。方法收集本公司空气沉降菌分离得到一株产透明质酸酶细菌TF18,对此菌株进行鉴定及系统发育分析。利用细菌16S r DNA通用引物进行PCR扩增,以获得该菌株的16S rDNA基因序列,并进行序列分析及系统发育分析;结合其形态特征、培养特征、生理生化特征,确定其种属。结果菌株TF18菌体杆状、好氧、产芽孢,应属于芽孢杆菌属,生理生化实验及系统发育分析结果也表明,此菌株属于芽孢杆菌属,但又不同于该属的其他已知菌种,故判定为新种。结论从自然界筛选得到的透明质酸酶高产菌株Bacillus sp.TF18为芽孢杆菌属一新种,为开发利用此菌种生产制备透明质酸酶及寡聚透明质酸(o-HA)提供了理论基础。     

异淀粉酶产生菌的筛选

从淀粉厂附近的土壤中分离产脱枝酶的菌株,通过筛选得到了多株菌株。对其中一类产脱枝酶的菌落为黄色的菌株进行了研究,从中筛选到了一株产异淀粉酶酶活相对较高的菌株D15,依据菌株特性初步鉴定该菌株属于黄杆菌属。对菌株D15的液体发酵条件进行了初步优化,其发酵64 h时产酶活力最大,达到1.62 U/mL。     

六堡茶渥堆过程中产多酚氧化酶菌株的筛选及多酚氧化酶的分离纯化

本研究采用传统分离法从渥堆六堡茶中共分离出42株菌,然后利用平板初筛和液体发酵进行复筛,从42株微生物中筛选出10株产PPO的微生物并测定其酶活.用盐析及透析法对产酶活性最高的菌株所产的多酚氧化酶进行纯化,纯化后的酶液用SDS-PAGE及Native-PAGE电泳方法确定PPO的分子量范围和PPO种类.结果表明,渥堆六...     

天山一号冰川沉积层低温脂肪酶产生菌的筛选及初步鉴定

从新疆天山一号冰川西支尾部的底部沉积层中分离筛选出高产低温脂肪酶菌株,进行初步鉴定及产酶探讨。使用罗丹明-B、吐温80、维多利亚蓝选择培养基以及三丁酸甘油酯酶活检测板,结合棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)比色法,筛选出产低温脂肪酶酶活较高的菌株,研究其生长特性及常规生理生化实验,并根据16S rRNA基因序列初步确定其所属菌属。共分离筛选到5株产低温脂肪酶酶活较高的菌株,经初步鉴定其中4株为假单胞菌属(Pseudomonas sp.),1株为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。该芽孢杆菌属产脂肪酶的能力略高于其余菌株。分离得到的5株菌均属于耐冷菌,有较好的耐盐性,能在低温条件下发酵产酶,其中4株在36h左右达到产酶高峰,为开发冰川环境下丰富的低温酶资源奠定了基础。     

鲫鱼肠道细菌菌群初步分析

从健康鲫鱼肠道分离出62 株细菌菌株,革兰氏染色分析结果表明,其中18 株为革兰氏阳性菌株,44 株为革兰氏阴性菌株。实验分析各菌株产纤维素酶和产淀粉酶的情况。筛选到26 株产淀粉酶菌株,占筛选菌株的41.94%,没有从鲫鱼肠道内筛选到产纤维素酶菌株。使用16S rDNA 基因序列检测,确定相关菌株分别属于Aeromonas、Shewanella、Pseudomonas 等。分析产酶活性较高的菌株F2 的致病性和产酶活力,确定其不是鲫鱼致病菌,其分泌性淀粉酶在pH7、温度32℃时表现出最大酶活力。     

一株高产纤维素酶的解淀粉芽孢杆菌分离及产酶条件优化

为了分离筛选高产纤维素酶活性菌株以为食品工业所用,从发酵豆制品及土壤中分离到21株革兰氏阳性细菌,并在含羧甲基纤维素钠琼脂培养基中培养24h,经刚果红染色、盐水脱色后5株细菌菌落周围可形成透明圈,其中以豆豉源F3菌株形成的透明圈与菌落直径比值最大,即纤维素酶活性最高。F3菌株经形态学特征及16S rDNA与gyrB基因序列比对分析,鉴定为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum)。通过单因素试验及正交试验对F3菌株液体发酵产纤维素酶条件进行了优化,确定了其产纤维素酶的最佳条件:培养基初始pH为pH7.0,接种量6%,培养温度37℃,培养时间60h,纤维素酶活力可达21.14U/mL。解淀粉芽孢杆菌F3菌株的酶学性质及其对豆豉营养价值及品质的影响仍有待于进一步深入研究。     

胆固醇氧化酶出发菌株的筛选及鉴定

对从不同地点采集到的11个样品进行分离筛选,从中筛选出27株以胆固醇为唯一碳源的菌株,确定其中1株胞外胆固醇氧化酶高产菌株,其胆固醇氧化酶的酶活力为839.35 U/L。综合形态学和生理生化实验及16SrDNA序列分析结果,确定该菌株属于施氏假单胞菌(Pseudomonas.stutzeri)。     

产纤溶酶海洋枯草芽孢杆菌的发酵工艺研究

对一株产纤溶酶的海洋枯草芽孢杆菌LJ-22的固、液体发酵条件分别进行了优化,确定该菌株的最佳液体发酵条件为温度31℃,初始pH7.0,转速180r/min,接种量4%,培养时间72h,最佳固体发酵条件为温度34℃,初始pH7.0,接种量10%,装样量10g,静置培养时间72h。在上述条件下,菌株LJ-22的液体发酵产纤溶酶酶活为(830±12.5)IU/mL,是优化前的1.69倍,固体发酵产纤溶酶酶活为(4300±12.8)IU/g,是优化前的1.56倍。通过比较固、液体发酵条件及产酶酶活,得出该菌株更适合液体发酵,便于大规模工业生产。     

产壳聚糖酶海洋Paenibacillus chitinolyticus CLT08的鉴定及酶学性质研究

目前用于制备壳寡糖的壳聚糖酶具有酶活性较低、酸稳定性较差等问题.本研究从连云港海州湾泥样中筛选产壳聚糖酶菌株,并对菌株进行鉴定、酸稳定性和酶学性质研究.结果表明,通过平板透明圈初筛和摇瓶发酵复筛,获得酸稳定性较好的壳聚糖酶产生菌株CLT08,随后利用形态学特征、生理生化测定及16S rDNA序列扩增与分析,鉴定菌CLT...     

1 株产壳聚糖酶细菌的分离、鉴定和发酵条件优化

从烟台海岸带沙质土壤中分离筛选壳聚糖酶产生菌株,对其进行分类鉴定,优化其发酵条件,为酶法生产壳寡糖提供技术依据。通过透明圈法初步判断产酶能力,液体发酵复筛测定酶活力,筛选到酶活力达36.20 U/mL的菌株amyP216。通过菌体形态、菌落特征、生理生化及16S rDNA序列分析鉴定菌株amyP216为莫哈韦芽孢杆菌（Bacillus mojavensis）。通过单因素和正交试验确定最佳发酵条件为：胶体壳聚糖添加量20 g/L、酵母浸粉添加量12.5 g/L、吐温-80添加量1.0 g/L、初始发酵pH 6.0、发酵温度30 ℃。在最优条件下利用5 L自控发酵罐培养45 h壳聚糖酶活力可达到80.60 U/mL,较优化前（36.20 U/mL）提高了1.2 倍。莫哈韦芽孢杆菌amyP216是一株壳聚糖酶活力较高的生产菌株,具有潜在的研究和应用价值。     

耐高温酒精酵母菌株的筛选及发酵能力比较

采用酵母菌富集培养方法和选择性培养基从中国传统大曲酒等基质中共分离得到58株具有一定的酒精发酵能力的酵母菌株。经过初筛和复筛,从中筛选获得1株能在33℃～42℃生长良好,并具有良好酒精发酵性能的酵母菌株XG-1,经分类鉴定为酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）。40℃液体摇瓶培养条件下,XG-1菌株活菌数占总菌数的比率较安琪耐高温酿酒高活性干酵母（TRADY）高15％。将其与TRADY菌株进行木薯酒精发酵比较,33R2条件下两者的酒精发酵能力相当,但在42℃时进行酒精发酵,XG-1菌株的酒精度比TRADY菌株高20％。     

复合诱变选育壳聚糖酶高产菌种及产酶条件优化

以具有产壳聚糖酶能力的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）G10为出发菌,利用紫外和微波对菌株G10进行复合诱变,选育壳聚糖酶高产菌株,并采用正交试验设计对突变株产酶条件进行优化。结果选育出一株产酶活相对较高的突变株W1-32,优化后的产酶条件为果糖1.3%,胶体壳聚糖0.5%,酵母粉2.0%,MgSO4·7H2O 0.3%,初始pH 7.2,温度28 ℃,转速200 r/min。在此优化条件下,菌株W1-32产壳聚糖酶活为11.82 U/mL,是出发菌株G10的6.9倍。该研究为菌种的选育和进一步研究应用提供理论依据。     

产壳聚糖酶海洋真菌鉴定、寡营养培养基优化及廉价培养基研究

对筛选出的产壳聚糖酶海洋真菌进行了rDNA-ITS序列分析技术鉴定,确定该菌为Penicillium oxali-cum,这是首次报道该菌属具有产壳聚糖酶的能力。该研究旨在为工业化发酵生产壳聚糖酶提供实验指导。实验在已确定的寡营养培养基的基础上,探讨适宜碳源、氮源、耐盐性、耐酸性、摇床转速等发酵因素对产壳聚糖酶的影响,并探索不同种类的廉价培养基发酵产酶。结果显示黄豆粉培养基的产酶效果较为理想,最终确定培养基为(g/L海水):黄豆粉25 g,酶活力最高为8.5 U/mL,该培养基成本不足原发酵培养基成本的5%,为微生物工业化应用生产壳聚糖酶提供了直接的理论和实验基础。     

新疆特色食品中优良乳酸菌的筛选及分离鉴定

该研究利用传统培养法从自然发酵的新疆特色食品中分离筛选出3株菌,通过菌株形态观察、生理生化试验及16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定。结果表明,菌株L-6、L-7和L-8分别被鉴定为肠膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）及短乳杆菌（Lactobacillus brevis）。产酸试验结果表明,这3株菌均具有较强的产酸能力,发酵12 h后发酵液pH值可达4.0以下,其中菌株L-7产酸能力最强,在15 h后其发酵液pH值在3.5以下,可用于辣椒酱或其他发酵食品发酵剂的研制。     

响应面法优化复合菌种发酵葡萄玫瑰花饮品及其抗氧化能力的测定

为了制备一款新型复合菌种发酵饮品,以发酵液的菌种添加比,发酵温度,发酵时间,发酵初始pH为单因素,以总多酚含量作为响应值通过响应面法优化发酵工艺,并对发酵液进行体外抗氧化能力测定。结果表明,在葡萄汁添加量为30%、玫瑰花添加量为0.75%的条件下,选取复合菌种白地霉和乳酸菌的添加比5.5:4.5(%),发酵温度33 ℃,发酵时间48 h进行发酵,其总多酚含量达到9.92×102 mg/L,且在该条件下感官评分最高为92分。在复合菌种发酵作用下,其SOD活力5.31×103 U/L,DPPH自由基清除能力达到857 μmol/L,花青素维持在28 mg/L,因此,发酵过程中葡萄玫瑰花发酵液不仅感官评分得到了提高,其抗氧化能力也得到了提升。     

浓香型大曲中功能性酵母菌的筛选、鉴定及发酵特性研究

以浓香型大曲为研究对象,采用稀释涂布平板法从中分离酵母菌,对其形态特征进行观察;采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）显色法初筛,通过发酵力、产酒能力、耐高温、耐酒精能力实验进行复筛,筛选一株优良的功能性酵母菌,利用Biolog微生物自动分析系统对其进行鉴定,并利用顶空固相微萃取气质联用（HS-SPME-GC-MS）法对其液态发酵产物进行分析。结果表明,从浓香型大曲中共分离出9株酵母菌,其中菌株NDY-06性能最突出,可耐受42 ℃的高温,16%vol的酒精度,且具有一定的发酵产酒能力;该菌株被鉴定为产香酵母Zygosaccharomyces cidri,从其液态发酵产物中共检测到35种挥发性风味物质,包括醇类物质7种,酯类物质13种,酸类物质7种,吡嗪类物质3种,对白酒香气成分有一定的贡献。     

绿豆酸浆中淀粉絮凝菌的分离鉴定及其生长特性

以自然发酵绿豆酸浆为研究对象,采用平板分离技术从酸浆中分离出5株具有絮凝淀粉活性的产酸细菌,通过群体形态、个体形态观察、生理生化实验及16S rDNA序列分析对絮凝活性最高的菌株LLY11进行菌种鉴定,鉴定该菌株为Acetobacter indonesiensis,并命名为Acetobacter indonesiensis LLY11。通过单因素实验优化了其培养条件,其最佳培养条件为:分别以1%葡萄糖、2%牛肉膏作为绿豆汁培养基的碳源和氮源、初始pH5.0、培养温度30 ℃,在该培养条件下,测定了LLY11菌株的生长曲线,确定菌株从12 h才开始进入对数期,有二次生长,分别在24 h和42 h菌体数量达到最高值,随后进入衰亡期。     

DPP-4抑制剂高产菌株的筛选、鉴定及发酵特性

目的:高产DPP-4抑制剂发酵菌株的筛选,并对菌株进行鉴定以及发酵特性的研究。方法:采用逐级稀释法从江南传统发酵食品中,利用DPP-4抑制剂体外筛选模型,筛选具有DPP-4抑制活性的菌株,以及通过形态学、生理生化和16S rRNA基因,对菌株进行观察、分析和序列比对,确定其种属关系。在以DPP-4抑制活性为指标下,通过与其他乳酸菌的比较、不同培养介质的选择、在脱脂乳(SKM)培养基中发酵条件的优化和发酵特性等。结果:从江南传统酸豆角汁中,在分离纯化得到11株具有乳蛋白水解能力的菌株中,经形态学、生理生化特征和16S rRNA基因序列分析,筛选得到一株多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) BD3736。P.polymyxa BD3736以10%(W/V)脱脂乳(SKM)为培养基,厌氧培养2 d所得的发酵乳,对DPP-4抑制率为66.4%±2.9%,其抑制活性远大于乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属等。P.polymyxa BD3736在10%(W/V) SKM液体培养基中,在30℃、180 r/min培养条件下,培养12 h时活菌数达到峰值为1.05×109 CFU/mL,培养36 h时发酵体系的pH为5.58。在同等发酵条件下,P.polymyxa BD3736发酵2 d的发酵液上清,对DPP-4的抑制率为90.6%±2.6%,IC₅₀值为(14.2±2.0) mg/mL。本研究为后续进一步开发新型、副作用低的口服降糖药物或功能性食品配料提供理论指导和技术支持。