siRNA沉默PI3K基因激活FoxO3a基因并抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤生长的实验研究

目的：探讨应用小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）沉默磷酸肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3 kinase，PI3K）基因对人乳腺癌细胞MCF-7中抑癌基因FoxO3a的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响。方法：构建PI3K基因siRNA质粒Psilencer1.0-U6-PI3K-siRNA；乳腺癌细胞株MCF-7裸鼠背部皮下接种，建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型，成瘤后将实验动物分3组，每组9只。1组注射Psilencer1.0-U6-PI3K-siRNA质粒、另2组分别注射Psilencer1．0-U6空质粒或0．9％的氯化钠溶液作为对照。观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间；并用Western印迹法检测瘤组织中FoxO3a和PI3K的表达。结果：PI3K-siRNA质粒治疗组裸鼠的肿瘤体积明显缩小（P〈0．01），平均生存时间显著延长（P〈0．01）；肿瘤内PI3K基因表达水平明显下降，而FoxO3a基因的表达水平明显升高。结论：PI3K基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的PI3K基因的表达，上调抑癌基因FoxO3a的表达，抑制肿瘤生长，延长荷瘤鼠的生存时间。     

siRNA沉默LKB1基因激活Hedgehog信号通路及对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长的实验研究

目的探讨应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默抑癌基因LKB1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中Hedgehog信号通路相关因子的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响。方法构建LKB1基因siRNA质粒LKB1-siRNA;建立LKB1表达抑制的MDA-MB-435细胞模型;裸鼠乳晕皮下接种,建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型;成瘤后,观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间;并用Western印迹法检测瘤组织中LKB1和Hedgehog信号通路中信号肽Shh、Sufu、膜受体Ptch、Smo、转录因子Gli1、Hip蛋白表达的变化。结果 LKB1-siRNA质粒组裸鼠的肿瘤体积明显增长(P<0.05);肿瘤内LKB1基因表达水平明显下降,而Hedgehog信号通路相关因子Shh、Gli1、Ptch、Smo的表达升高,Hedgehog信号通路抑制因子Sufu、Hip表达下降。结论 LKB1基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的LKB1基因的表达,上调Hedgehog信号通路相关因子的表达,促进肿瘤生长。LKB1基因和Hedgehog信号通路在乳腺癌细胞中呈现负相关表达。     

大黄素诱导裸鼠体内白血病K562细胞凋亡过程中PI3K/AKT通路相关分子表达的变化

目的:观察大黄素作用后裸鼠体内白血病K562细胞PI3K/AKT信号通路的分子变化,以探讨大黄素是否依赖PI3K/AKT信号通路参与K562细胞凋亡发生。方法:建立裸鼠K562细胞皮下移植瘤模型,腹腔连续给药12d后,处死裸鼠,称取瘤体质量,计算抑瘤率。采用HE染色和透射电子显微镜观察肿瘤细胞的凋亡情况。应用RT-PCR法检测肿瘤组织中PI3K、AKT和FoxO3a的mRNA表达水平。蛋白质印迹法检测肿瘤组织中PI3K、AKT和FoxO3a蛋白的表达水平。结果:低、中、高剂量组大黄素作用后肿瘤相对体积(V/V0)分别为8.90±0.24、5.62±0.17和2.06±0.31,与0.9%氯化钠溶液对照组(V/V0为11.83±0.47)相比,大黄素处理组的肿瘤体积明显缩小,差异具有统计学意义(P<0.01)。光学显微镜和电子显微镜观察发现,大黄素能够诱导K562细胞发生明显的凋亡。RT-PCR结果表明,不同剂量的大黄素能够引起PI3K和AKT mRNA的表达下调,而FoxO3a mRNA表达上调,且有剂量依赖性。蛋白质印迹法结果表明,大黄素处理组移植瘤组织中PI3K、AKT蛋白表达水平明显降低,而FoxO3a蛋白水平明显升高。结论:大黄素能够明显抑制人白血病K562细胞裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与其抑制PI3K/AKT信号转导通路有关。     

通过活体动物光学成像系统建立乳腺癌动物模型

目的: 通过活体动物光学成像系统建立稳定表达荧光素酶的乳腺癌裸鼠移植瘤模型.方法: 用脂质体包裹带有neo抗性基因及荧光素酶报告基因的真核表达质粒pGL4.17[luc2/neo],体外转染人乳腺癌细胞株MCF-7,将获得稳定表达荧光素酶的乳腺癌细胞株(MCF-7-luc)进行皮下接种BALB/c裸鼠及尾静脉接种SCID小鼠,建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型和SCID小鼠尾静脉移植瘤模型,通过活体成像系统监测体内肿瘤的生长及转移情况.结果: 经过筛选得到1个能够用于建立裸鼠皮下移植瘤模型及SCID小鼠尾静脉移植瘤模型的稳定表达荧光素酶的乳腺癌细胞株,并成功建立了乳腺癌裸鼠皮下移植瘤模型及SCID小鼠尾静脉移植瘤模型.结论: 通过活体动物光学成像系统成功获得的稳定表达荧光素酶的乳腺癌皮下移植瘤和尾静脉移植瘤模型,为人乳腺癌的相关研究提供了一个直观、方便、灵敏和可靠的平台.     

黏蛋白1基因转染DC对乳腺癌细胞MCF-7裸鼠移植瘤的免疫抑制作用

目的:探讨黏蛋白1 (mucin 1,MUC1基因转染DC对人乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤的抑制作用.方法:体外诱导培养健康成人DC,应用脂质体转染法将pcDNA3.1-MUC1转染DC,ELISA法检测转染后DC分泌细胞因子IL-12和YNF-α的能力,LDH释放法检测基因转染后DC诱导特异性CTL对乳腺癌MCF-7细胞的杀伤活性.应用MU C1基因转染DC、空质粒转染DC、及生理盐水皮下注射治疗人乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤,观测其对肿瘤生长的抑制作用.结果:转染pcDNA3.1-MUC1的DC分泌IL-12、TNF-α的能力较转染空质粒DC明显增强[IL-12:(202.52±29.61)vs(10.83±1.02)pg/ml;TNF-α:(349.07±79.42)vs(9.26±1.52)pg/ml,均P＜0.01];转染pcDNA3.1-MUC1的DC诱导产生特异性CTL,对人乳腺癌MCF-7细胞具有更明显的杀伤活性,效靶比为10∶1、5∶1和2.5∶1时的杀伤率分别达到56.2％、38.9％和25.8％,显著高于对照组CTL(均P＜0.01).MUC1基因转染DC对乳腺癌MCF-7裸鼠移植瘤生长抑制作用明显强于空质粒转染DC组(P＜0.05).结论:MUC1基因转染DC可以诱导特异性CTL,对乳腺癌MCF-7细胞具有更强的抗肿瘤免疫效应.     

RNA干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞及胆囊癌细胞株裸鼠移植瘤生长的抑制

目的:探讨Bcl-2基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠体内移植瘤生长的抑制作用.方法:分别制作人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD细胞株移植瘤模型,随机分为3组,pSilencerTM-EGFP sh515组(实验组)、pSilencerTM-EGFP shCon组(空载体阴性对照组)和对照组.实验组用Bcl-2基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体多点注射于移植瘤周围,空载体阴性对照组用空载体多点注射于移植瘤周围,对照组不作处理,观察其生长情况,计算肿瘤生长体积、生长率.6周后,处死裸鼠,剥离瘤体组织进行称重,并采用免疫组化检测Bcl-2蛋白的表达.结果:成功建立裸鼠人胆管癌细胞QBC939,胆囊癌GBC-SD细胞的动物模型.胆管癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积(mm3)分别为:801.776±59.6,1383.980±78.2,1490.235±89.0.瘤体平均瘤体重量(g)为:0.90±0.11,1.49±0.31,1.63±0.22.平均生长率为:20.558%,35.587%,38.211%.人胆囊癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积(mm3)分别为:729.736±66.6,1493.162±98.9,1548.668±101.0.瘤体平均瘤体重量(g)为:0.82±0.10,1.68±0.21,1.90±0.25.平均生长率为:18.711%,38.286%,39.709%.两组实验组分别和空载体阴性对照组、对照组比较有统计学意义(P<0.05),空载体阴性对照组和对照组比较无统计学意义(P>0.05).结论:针对Bcl-2基因siRNA真核表达载体通过局部多点注射于移植瘤周围可以有效降低Bcl-2基因的表达,该基因沉默后肿瘤细胞增殖受到抑制,体内瘤体生长减慢.     

利用荧光素酶标记的肿瘤细胞建立活体成像动物模型

目的建立稳定表达荧光素酶的人乳腺癌细胞株并构建适用于小动物活体成像系统观察的裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用脂质体将携带荧光素酶基因的质粒转染到人乳腺癌细胞株MCF-7中,G418筛选出稳定表达荧光素酶的单克隆细胞株。扩增后接种于裸鼠,建立裸鼠皮下移植瘤模型,通过活体动物成像系统监测肿瘤的生长过程。结果获得了高水平稳定表达荧光素酶的乳腺癌单克隆细胞株,该单克隆细胞株与母细胞系MCF-7具有相似的生长特性。将稳定表达荧光素酶的克隆接种于裸鼠皮下可成瘤,小动物活体成像系统能准确监测肿瘤细胞在体内的生长过程。结论成功建立了稳定表达荧光素酶的乳腺癌单克隆细胞株。采用活体动物成像系统构建的裸鼠皮下移植瘤模型是拓展肿瘤体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型。     

RNA干扰RSK4基因表达对裸鼠移植瘤生长与转移影响观察

目的：应用慢病毒干扰载体（RSK4-RNAi—LV）干扰RSK4基因在乳腺癌细胞株MCF-7中的表达,研究RSK4基因被干扰后对裸鼠移植瘤生长及转移的影响。方法：将转染了siRNA（RSK4-RNAi—LV）的MCF-7细胞组（实验组）、转染了siRNA（NC—GFP-LV）的MCF_7细胞组（阴性对照组）和未转染的MCF-7细胞组（空白对照组）分别接种至裸鼠乳腺脂肪垫下,建立裸鼠移植瘤模型,观察每纽裸鼠移植瘤生长情况;应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测3组移植瘤组织中RSK4mRNA及其蛋白的表达;HE染色观察3纽裸鼠内脏转移情况。结果：实验纽的移植瘤平均体积为（2264．08±367．47）mm2,明显大于阴性对照组（843．67±318．13）mm。及空白对照组的（720．45±241．35）mm。差异有统计学意义,F=112．425,P=0．02;实验组瘤体平均体质量为（1．44±0．25）g,明显重于阴性对照组（0．73±0．20）g及空白对照组的（0．70±0．21）g,差异有统计学意义,F=89．54,P=0．01。实验组裸鼠移植瘤肺转移6只,空白对照及阴性对照组各1只。实验组肿瘤组织RSK4mRNA的相对表达量为0．140±0．843,明显低于阴性对照组的1000±0．000（P=0．008）和空白时照组的0．878±0．689（P=0．005）。实验组、阴性对照组和空白对照组RSK4蛋白的表达量分别为0．138±0．023、0．532±0．032和0．465±0．057,3组间差异有统计学意义,F=73．1,P=0．003;实验组RSK4蛋白表达量明显低于阴性对照组（P=0．006）和空白对照组（P=0．012）。结论：慢病毒干扰MCF-7细胞中RSK4基因表达能促进MCF-7细胞裸鼠移植瘤的生长及转移。     

生存素基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长、凋亡和放射敏感性的影响

背景与目的：生存素基因是近年来肿瘤研究的焦点之一,本研究旨在观察生存素基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长、凋亡和放射敏感性的影响。方法：随机选择雌性BALB／c—nu／nu裸小鼠24只,细胞接种法建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,每天观察裸鼠一般状况及肿瘤生长情况,通过绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤生长抑制率,观察生存素基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响;通过免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中生存素蛋白表达情况,Ⅷ因子相关抗原（factor Ⅷ related antigen,FⅧRAg）表达情况并计算微血管密度（MVD）,HE染色及TUNEL染色观察生存素基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响;当肿瘤体积达0．2cm^3时予X线放射治疗观察生存素基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤放疗敏感性的影响。结果：成功建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤体积在每个检测点均明显小于接种HeLa组。观察结束时,接种HeLa—s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为（0．369&#177;0．043）g和（1．150&#177;0．136）g（P〈0．05）;接种HeLa—s2组裸鼠肿瘤生长抑制率为67．9％。免疫组化结果显示：接种HeLa-s2组裸鼠生存素蛋白表达显著下降;接种HeLa—s2组裸鼠FⅧRag表达亦显著下降,MVD值降至23．4&#177;3．1。HE染色、TUNEL染色结果显示：接种HeLa—s2组裸鼠细胞凋亡明显增多,AI值达（22．7&#177;1．4）％。X线放疗后不同检测点接种HeLa—s2组裸鼠肿瘤体积明显小于接种HeLa组,肿瘤生长明显受抑。观察结束后,接种HeLa～s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为（0．41&#177;0．06）g和（1．38&#177;0．29）g（P〈0．05）。接种HeLa—s2组裸鼠肿瘤细胞凋亡明显增多,与接种HeLa组AI比较,接种HeLa—s2组AI明显升高,分别为（30．06&#177;0．98）％和（4．17&#177;0．64）％（P〈0．05）。结论：生存素基因RNAi可通过下调移植瘤组织生存素蛋白表达降低其MVD,从而抑制移植瘤生长并促进其凋亡,并通过增加X线放射治疗诱导的细胞凋亡,增强放射治疗对移植瘤的生长抑制,进而提高移植瘤的放射敏感性。     

槲皮素对人乳腺癌裸鼠移植瘤p21WAF1/CIP1的影响

目的　研究槲皮素对人乳腺癌细胞株 MCF-7裸鼠移植瘤 p2 1W AF1/CIP1的影响。方法　采用 MCF-7细胞株移植成功的 2 4只裸鼠分为对照组、槲皮素组、阿霉素组及联合用药组 (槲皮素 +阿霉素 ) ,每组 6只。用原位杂交及免疫组化测定 p2 1W AF1/CIP1基因及蛋白的表达水平。结果　 p2 1W AF1/CIP1m RNA表达水平槲皮素组及联合用药组高于对照组 (P<0 .0 5) ,p2 1W AF1/CIP1蛋白表达水平槲皮素组及联合用药组明显高于对照组 (P<0 .0 1)。结论　槲皮素可上调 MCF-7裸鼠移植瘤细胞的 p2 1W AF1/CIP1基因及蛋白的表达水平 ,减缓肿瘤生长     

BNIP3基因增强人宫颈癌HeLa裸鼠移植瘤放射敏感性的实验研究

目的:探讨BNIP3基因对人宫颈癌的放射增敏效应的影响.方法:将6×106HeLa细胞皮下接种到裸鼠的背部,并通过尾静脉将质粒DNA注射到裸鼠体内,建立动物肿瘤模型.肿瘤体积按A×B2×0.5计算.用免疫组化的方法来检测肿瘤组织中Bnip3蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡.结果:免疫组化测得,pDsRed-BNIP3处理组的肿瘤细胞中Bnip3蛋白的表达明显较其他组高.这个凋亡调节因子在体内能明显地增加肿瘤细胞的凋亡数(P＜0.01).肿瘤生长曲线也显示BNIP3基因可以增强放射治疗的抗肿瘤效应.结论:重组质粒pDsRed-BNIP3在体内对宫颈癌HeLa细胞移植瘤有放射增敏效应.     

Survivin基因RNAi对子宫颈癌裸鼠移植瘤生长与凋亡的影响

目的：观察survivin基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长与凋亡的影响。方法：随机将BALB/c裸鼠分4组,分别注射转染携survivin RNAi重组质粒的HeLas2细胞、转染阴性对照质粒细胞HeLaNC、转染空质粒细胞HeLaU6 neo及宫颈癌HeLa细胞,建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型。观察survivin RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响;免疫组化法检测移植瘤组织中survivin蛋白的表达和微血管密度（MVD）,HE染色及TUNEL染色观察survivin RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响。结果：成功建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型, HeLas2组裸鼠瘤重明显小于其他3组（P<0.05）;肿瘤生长抑制率为67.9%。免疫组化结果显示,HeLas2组裸鼠移植瘤组织中survivin蛋白表达显著下降; MVD值也显著降低（P<0.05）;HE染色、TUNEL染色结果显示,HeLas2组裸鼠移植瘤组织细胞凋亡明显增多（P<0.05）,AI值达(22.73±137)%。结论：Survivin基因RNAi可通过下调移植瘤组织survivin蛋白表达和降低其MVD抑制移植瘤生长并促进其凋亡。     

金克对乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长转移和凋亡的影响

[目的]观察金克(槐耳清膏)对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。[方法]以MCF-7细胞复制裸鼠异种乳腺癌移植瘤模型,30只BALB/c荷瘤鼠随机分为对照组(15只)、金克组(15只)。分别用生理盐水(0.2ml/只)和金克(0.2ml/只)连续灌胃30d,观察各组的抑瘤效果及对裸鼠瘤体大小和生存时间的影响。采用光镜、Tunel法行原位凋亡检测、流式细胞术观察肿瘤凋亡的形态学变化。[结果]①金克组肿瘤体积大小明显小于对照组(4.62±1.86cm3,6.35±2.73cm3,P<0.01);②金克组生存期为明显长于对照组(116.7±28.5d,95.3±26.7d,P<0.01);③原位凋亡检测移植瘤细胞凋亡指数(AI)明显金克组高于对照组,差异有显著性(19.32%vs8.36%,P<0.01);④流式细胞术显示金克组凋亡比例与对照组差异有显著性(18.21%vs8.39%,P<0.01)。[结论]金克可抑制人乳腺癌细胞MCF-7移植瘤生长,延长生存期。     

RNAi介导的survivin基因沉默对PC-3细胞裸鼠体内成瘤能力的影响

目的:研究survivin基因表达沉默后对PC-3细胞的裸鼠体内成瘤率,瘤体生长速度,以及平均瘤重等方面产生的影响.方法:使用RNA干涉技术,用构建的pSilencer 3.1-SVV1、pSilencer 3.1-SVV2、 pSilencer 3.1-SVV3 siRNA表达质粒和阴性对照质粒pSilencer 3.1-NC转染PC-3 细胞,使PC-3 细胞的survivin 基因表达沉默,随后将细胞接种于裸鼠皮下,观察转染了各质粒的PC-3细胞在裸鼠体内成瘤率,瘤体生长速度,以及平均瘤重等方面的变化.结果:pSilencer 3.1-SVV2和pSilencer 3.1-SVV3质粒转染组的裸鼠肿瘤成瘤率明显下降,裸鼠瘤体生长速度明显慢于未转染组和pSilencer 3.1-NC质粒转染组(P＜0.01).实验终止时,肿瘤平均体积与瘤重与未转染组和pSilencer 3.1-NC质粒转染组相比减少50%-55%.结论:RNAi 介导的survivin 基因沉默可显著影响PC-3细胞裸鼠体内成瘤能力及瘤体生长速度.     

RNA干扰enolase-1基因治疗胃癌的实验研究

目的探讨RNA干扰enolase-1基因对人胃癌的治疗作用.方法根据enolase-lmRNA序列构建表达enolaae-1特异的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)真核表达质粒pMSCVU6/ENO-lsil,pMSCVU6/ENO1si2,pMSCVU6/ENO-1si3.种植人胃癌SGC-7901细胞于裸鼠皮下建立裸鼠肿瘤模型.将构建成功的三种siRNA质粒分别转染SGC-7901细胞株.pMSCVU6/ENO-1si2和pMSCVU6/ENO-1si3转染裸鼠瘤体内.MTT法检测SGC-7901细胞增殖状况;测量荷瘤裸鼠的肿瘤体积,计算抑瘤率;RT-PCR检测SGC-7901细胞enolase-1mRNA表达;分别以免疫组化SP法和Western blot检测体内外enolage-1蛋白表达.结果SGC-7901细胞株及裸鼠瘤体均被所采用的质粒成功转染.SGC-7901细胞受pMSCVU6/ENO-1si2转染后,其生长活性受到明显抑制(P＜0.01),enolabe1mRNA及蛋白表达显著降低(P＜0.01).体内抑瘤实验表明,pMSCVU6/ENO-1si2组平均瘤体积为(380±26)mm3,pMSCVU6/ENO-1si3组与空白对照组分别为(993±124)mm3和(1102±131)mm3;pMSCVU6/ENO-1si2组抑瘤率为65.52%.pMSCVU6/ENO-1si3组为9.89%;pMSCVU6/ENO-1si2组肿瘤体积明显小于pMSCVU6/ENO-1si3组和空白对照组,差异具有显著性(P＜0.01);pMSCVU6/ENO-1si3组和空白对照组之间肿瘤体积无显著差异(P＞0.05);pM-SCVU6/ENO-1si2组与pMSCVU6/ENO-1si3组和空白对照组相比,enolase-1蛋白表达减弱.结论表达siRNA的enolase-1基因特异的真核表达质粒能成功转染体内、外胃癌细胞.其中pMSCVU6/ENO-1si2可有效抑制人胃癌细胞的生长.     

RNAi抑制PI3Kp85α蛋白活性对人乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制的体外研究

目的:探讨敲低PI3Kp85α表达对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长的影响和机制.方法:用靶向PI3Kp85α的siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7,使用Real-time PCR法鉴定转染PI3Kp85α表达水平;MTT法评价PI3Kp85α siRNA对乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响;流式细胞术检测转染后细胞周期分布和凋亡;采用免疫荧光染色及Western blot方法观察IA型PI3K/AKT通路主要成员的表达.结果:Real-timePCR结果显示PI3Kp85α siR-NA转染导致PI3Kp85α表达下调;MTT结果显示PI3Kp85α siRNA转染抑制肿瘤细胞生长;流式细胞术检测可见PI3Kp85α siRNA转染组细胞周期存在G_0/G_1期阻滞而且凋亡率显著高于对照组与空载体组(F=19.255,P=0.002).结论:应用PI3Kp85α siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7细胞,可抑制其增殖和诱导细胞凋亡,因此PI3Kp85α可以作为人乳腺癌基因治疗的候选靶点.     

转染REGγ基因对乳腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的:研究转染蛋白酶体激活因子REGγ基因的乳腺癌MDA-MB-231细胞在裸鼠体内的成瘤作用及其机制.方法:以脂质体转染法将构建的重组质粒pcDNA3.1-REGγ导入MDA-MB-231细胞,以G418(600 mg/L)筛选获得稳定高表达该基因的细胞株(实验组).以转染空载体及未施加处理因素的细胞作为对照组.将此3组细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长情况并计算抑瘤率.RT-PCR检测REGγ基因在移植瘤中的表达,FCM检测移植瘤的肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)中CD16的表达以及肿瘤细胞周期和细胞凋亡,免疫组织化学法检测移植瘤中p21的表达.结果:与对照组相比,实验组的移植瘤生长速度较快、体积较大,瘤体质量明显增加(P＜0.05);REGγ基因在移植瘤中的表达增加(P＜0.01);FCM检测提示CD16阳性率明显降低(P＜0.05);G0/G1和G2/M期细胞减少,S期细胞明显增多,肿瘤细胞的凋亡率明显降低(P＜0.05);p21的表达明显降低(P＜0.05).结论:REGγ基因在体内具有促进乳腺癌发生、发展的作用,其机制可能与加速细胞周期、抑制细胞凋亡、抑制自然杀伤细胞活化以及对p21的特异性降解有关.     

慢病毒介导的RNAi沉默TLR4基因对人乙肝病毒相关肝细胞癌裸鼠移植瘤生长的影响北大核心CSCD

目的探讨TLR4基因RNA干扰(RNAi)的重组慢病毒载体对人乙肝病毒相关肝细胞癌裸鼠移植瘤TLR4基因表达和移植瘤生长的影响。方法构建4个miR-TLR4质粒和一个阴性对照质粒,选择干扰效果最明显的质粒进行慢病毒包装。建立人乙肝病毒相关肝细胞癌裸鼠移植瘤模型,随机分成实验组、阴性对照组和空白对照组。隔天1次向各组动物肿瘤内分别注射TLR4 miRNA慢病毒颗粒、携带无关序列的慢病毒颗粒或0.2 ml 0.9%氯化钠溶液,共5次,测量各组肿瘤体积的大小,绘制肿瘤生长曲线;11天后处死裸鼠,应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测移植瘤中TLR4基因的表达。结果与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的移植瘤生长速度明显减慢(P<0.05),并且实验组移植瘤细胞TLR4 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论 TLR4 miRNA慢病毒载体瘤内注射可抑制人乙肝病毒相关肝细胞癌裸鼠移植瘤的生长。     

E1A基因对裸鼠移植瘤生长抑制及其初步作用机制的实验研究

目的：探讨E1A基因对人宫颈癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其相关作用机制。方法：通过裸鼠移植瘤实验,观察E1A基因对人宫颈癌细胞裸鼠移植瘤生长的的抑制作用。采用免疫组织化学染色检测E1A基因对肿瘤细胞凋亡及Survivin基因和Caspase-3基因表达的影响。结果：裸鼠移植瘤实验结果显示：Hela-E1A细胞形成的肿瘤较Hela和Hela-vect的出瘤时间晚,生长慢,瘤重小,抑瘤率分别为83.42%和84.74%。免疫组织化学染色显示：E1A基因组细胞凋亡数量较Hela和Hela-vect组明显增多,Caspase-3基因（凋亡促进因子）呈高表达,Survivin基因（调亡抑制因子）的表达明显降低。结论：E1A基因能够明显抑制人宫颈癌细胞裸鼠移植瘤的生长,该作用可能与E1A基因激活Caspase-3基因和降低Survivin基因的表达有关。     

Survivin基因沉默抑制结肠癌生长的动物实验研究

目的 探究survivin基因沉默对人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 构建靶向survivin的shRNA载体SUR和阴性对照质粒Neg,并将其转染人结肠癌Lovo细胞,分别种植到裸鼠皮下建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型.随后观察各组裸鼠移植瘤生长情况,免疫组化方法检测移植瘤survivin蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 移植转染细胞8周,与空白对照组比较,SUR组移植瘤的体积和质量均有显著缩小(P<0.05),体积和质量抑瘤率分别为48.9%和51.2%.与空白对照组比较,SUR组移植瘤survivin表达显著下调,表达指数为31.9%;SUR组肿瘤细胞凋亡显著增加,凋亡指数18.47%(P<0.05).阴性对照Neg组的上述指标与空白对照组比较,差异均无统计学意义.结论 Survivin基因沉默能够抑制人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤的生长.