类风湿性关节炎的发生发展与外周血T淋巴细胞亚群及CD4+TH1/TH2细胞功能亚型的关系

背景类风湿性关节炎作为一种自身免疫病其免疫学发病机制目前尚未完全明确.T淋巴细胞、尤其是CD4+ TH1/TH2细胞在类风湿性关节炎发生发展中可能有重要作用.目的探讨主要参与细胞免疫的CD4+ TH1细胞和辅助体液免疫应答的TH2细胞在类风湿性关节炎发生发展过程中的作用.设计病例-对照,对比观察.单位武警医学院免疫学教研室.对象选择1999-03/2000-03在天津医科大学总医院内科就诊的类风湿性关节炎患者15例为患者组,男2例,女13例,其中12例受检者类风湿因子阳性,3例为阴性.同期选取健康体检者或本单位工作人员健康者30人为对照组,男4人,女26人.纳入对象均对实验目的知情同意.方法①采用酶联免疫斑点法对两组对象的外周血单个核细胞中CD3+T细胞(总T细胞)、CD4+T细胞和CD8+T细胞进行检测,普通光学显微镜油镜下计数200～500个淋巴细胞,计算出阳性细胞的百分率.②采用酶联免疫斑点法检测活化的分泌细胞因子的TH细胞;细胞内有红色斑点的细胞为阳性细胞,分泌γ-干扰素的细胞为TH1细胞,分泌白细胞介素4的细胞为TH2细胞;普通光学显微镜油镜下计数200～500个淋巴细胞,计算出TH1细胞、TH2细胞的百分率及TH1/TH2细胞的比值.③采用t检验或x2检验比较数据间差异性.主要观察指标两组对象外周血T淋巴细胞亚群(包括CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞)及CD4+TH1/TH2细胞定量分析结果.结果类风湿性关节炎患者15例和健康者30人均进入结果分析.①两组外周血的总T细胞(即CD3+T细胞)、CD4+T细胞及CD8+T细胞的百分率差异不明显(P＞0.05).②患者组外周血的TH1细胞的百分率明显高于对照组[(24.44±5.25)%,(14.93±3.82)%,P＜0.05];而其外周血TH2细胞的百分率及TH1/TH2细胞的比值与对照组相近(P＞0.05).结论TH1细胞介导的细胞免疫可能与类风湿性关节炎的发生发展有关.     

哮喘豚鼠外周血淋细胞凋亡及白 细胞介素—5和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子mRNA表达的研究

目的 探讨哮喘豚鼠外周血淋巴细胞凋亡及白介素-5（IL-5）、粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）mRNA的表达。方法 实验分为哮喘组和对照组,各15只豚鼠,采用原位末端标记（TUNEL）法检测豚鼠外周血淋巴细胞IL-5、GM-CSFmRNA的表达。结果 哮喘组外周血淋巴细胞凋亡率为（3.50&;#177;1.00)%,对照6.80&;#177;1.50）%,哮喘组显著低于对照组（P&;lt;0.01）。哮喘组IL-5、CM-CSFmRNA表达阳性率分别为(58.00&;#177;6.00)%和（49.00&;#177;4.00)%,对照组分别为（30.00&;#177;2.00)%和（24.00&;#177;2.00）%,哮喘组显著高于对照组。结论 哮喘豚鼠外周血淋巴细胞IL-5、GM-CSFmRNA的高表达,可能与淋巴细胞被激活、凋亡受抑制,从而分泌细胞因子增加有关。     

抗原致敏外周血树突状细胞治疗脑胶质瘤的实验研究

目的 观察树突状细胞(DCs)从凋亡脑胶质瘤细胞获取抗原后,体外诱导抗肿瘤免疫应答及对胶质瘤细胞的特异性免疫杀伤效果.方法 用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)加白介素-4(IL-4)从人外周血分化、诱导DCs、γ-射线在体外诱导培养的人脑胶质瘤细胞凋亡,将DCs、T淋巴细胞和凋亡胶质瘤细胞共培养,同时设计不同类型肿瘤细胞(U937及培养胶质瘤细胞)作对照,分离、富集DCs、T淋巴细胞进行免疫应答及肿瘤细胞杀伤试验.结果 与凋亡胶质瘤细胞共培养之Dcs可以有效提呈胶质瘤细胞抗原,有强烈的免疫应答,刺激的细胞毒T淋巴细胞((CTLs)特异性杀伤胶质瘤细胞.结论 用GM-CSF加IL-4从人外周血分化、诱导的DCs能从凋亡胶质瘤细胞有效提呈肿瘤抗原并诱导出显著的杀伤胶质瘤细胞的免疫反应,可望成为有效的肿瘤特异性免疫治疗新途径.     

泛T淋巴细胞结合照射诱导的再生障碍性贫血小鼠模型的优化

目的:建立适用于研究T淋巴细胞功能的获得性再生障碍性贫血(acquired aplastic anemia,AA)动物模型以及应用于再生障碍性贫血发病机制及治疗研究的动物模型。方法:对X射线联合淋巴细胞注射诱导的获得性再生障碍性贫血小鼠模型进行优化。AA组:富集C57BL/6J小鼠的脾脏泛T细胞,按细胞数5×10⁶/只经尾静脉注射至分别经3、4和5 Gy X射线照射的CB6F1小鼠体内;单纯照射组(total body irradiation,TBI):经尾静脉注射与AA组相同体积的PBS至分别经3、4和5 Gy X射线照射的CB6F1小鼠体内;对照组:经尾静脉注射与AA组相同体积的PBS至CB6F1小鼠体内;检测外周血血常规,计数骨髓有核细胞数,骨髓病理切片检测骨髓造血,流式细胞术检测骨髓T细胞分布比例、骨髓细胞凋亡和脾脏T细胞的分化程度。结果:相较于4、5 Gy照射的AA组,3 Gy照射的AA组生存期明显延长;经3、4、5 Gy X射线照射联合泛T淋巴细胞注射均可成功诱导受体鼠外周血红细胞、白细胞、血小板数严重减少,骨髓有核细胞严重减少,骨髓造血衰竭,骨髓中T淋巴细胞占比明显增加,CD4⁺T和CD8⁺T细胞均增加但以CD8⁺T细胞为主,并促进T细胞从初始T细胞向效应记忆T细胞分化。结论:3、4和5 Gy X射线的照射联合5×10⁶泛T细胞注射均可通过引起T淋巴细胞功能亢进,成功构建AA动物模型;较4、5 Gy照射剂量,3 Gy照射组生存期明显延长,外周血血象与AA临床患者表现更接近。     

类风湿关节炎患者外周血TH17与Treg细胞的变化

目的 探讨外周血辅助性T细胞17（TH17）与调节性T细胞（Treg）在类风湿关节炎（RA）发生、发展中的变化。 方法 选取RA患者活动组25例、稳定组20例及健康人对照组25例,采用流式细胞术及定量PCR的方法,分别从蛋白质水平与mRNA水平检测其外周血CD4+T细胞IL-17及FoxP3的表达。 结果 活动组RA患者外周血CD4+T细胞IL-17蛋白质及mRNA表达水平显著高于稳定组（P<0.01）,稳定组又显著高于健康人对照组（P<0.01）。活动组RA患者外周血CD4+T细胞FoxP3蛋白质及mRNA表达水平显著低于稳定组及健康人对照组（P<0.01）,但稳定组FoxP3表达与健康人对照组差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 RA患者外周血中存在TH17/Treg细胞失衡,且这种变化与疾病的进程相关。     

哮喘豚鼠外周血淋巴细胞凋亡及白细胞介素一5和粒细胞/ 巨噬细胞集落刺激因子mRNA表达的研究

目的探讨哮喘豚鼠外周血淋巴细胞凋亡及白介素-5(IL-5)、粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)mRNA的表达。方法实验分为哮喘组和对照组,各15只豚鼠。采用原位末端标记(TUNEL)法检测豚鼠外周血淋巴细胞IL-5、GM-CSFmRNA的表达。结果哮喘组外周血淋巴细胞凋亡率为(3.50±1.00)％,对照组为(6.80±1.50)％,哮喘组显著低于对照组(P＜0.01)。哮喘组IL-5、CM-CSFmRNA表达阳性率分别为(58.00±6.00)％和(49.00±4.00)％,对照组分别为(30.00±2.00)％和(24.00±2.00)％,哮喘组显著高于对照组。结论哮喘豚鼠外周血淋巴细胞IL-5、GM-CSFmRNA的高表达,可能与淋巴细胞被激活、凋亡 受抑制,从而分泌细胞因子增加有关。     

淋巴细胞缺乏状态对白血病特异性细胞毒性T淋巴细胞体内抗白血病效应的影响

目的探讨淋巴细胞缺乏状态对白血病特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体内增殖和抗白血病作用的影响。方法采用6 Gy照射C57BL/6小鼠诱导淋巴细胞缺乏状态,分别经尾静脉注射EGFP+C57BL/6小鼠脾T淋巴细胞和白血病特异性CTL,随后皮下接种1×106FBL3白血病细胞。用流式细胞仪分析小鼠外周血EGFP+细胞及T淋巴细胞亚群比例,同时观察脾T淋巴细胞和白血病特异性CTL对随后接种的FBL3白血病细胞的杀伤作用。结果在淋巴细胞缺乏状态下输入的脾T淋巴细胞和白血病特异性CTL均可得到有效扩增(第18天输注脾T淋巴细胞组和输注CTL组外周血中EGFP+细胞比例分别为28.81%和42.24%),但脾T淋巴细胞对随后接种的白血病细胞生长无抑制作用,而白血病特异性CTL在淋巴细胞缺乏受体小鼠体内扩增速度更快,扩增的倍数更高,并具有显著增强的抗白血病作用。结论诱导受体淋巴细胞缺乏可显著增强外源性CTL输注的疗效。     

恶性肿瘤患者外周血调节性T细胞及Th1、Th2细胞的检测和临床意义

目的:通过检测恶性肿瘤患者外周血中的淋巴细胞亚群、CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)以及Th1、Th2细胞的数量,了解恶性肿瘤患者的免疫状态。方法:采用流式细胞仪检测90例恶性肿瘤患者(肿瘤组)及60例健康体检者(对照组)外周血中的淋巴细胞亚群、Treg细胞和以及Th1和Th2细胞数量。结果:肿瘤组外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞和NK细胞的数量均显著低于对照组(P<0.05),而Treg细胞显著高于对照组(P<0.05)。肿瘤组分泌IFN-γ的Th1细胞显著低于对照组(P<0.05),而分泌IL-4的Th2细胞显著高于对照组(P<0.05)。结论:恶性肿瘤患者Treg细胞数量增多,Th1细胞数量减少,Th2细胞数量增加,这可能是其免疫功能处于抑制状态的重要原因。     

慢性特发性血小板减少性紫癜患者活化T细胞CD30表达与凋亡关系

本研究检测慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血单个核细胞中CD3+数、CD3+/CD30+T细胞比值和活化后T细胞凋亡率及外周血血小板计数,探讨2组间的差异和患者活化T淋巴细胞CD30表达率与凋亡率和血小板计数的相关性。以40例慢性ITP患者为研究对象,24例健康志愿者为正常对照,体外培养刺激T细胞活化后运用流式细胞仪检测外周血单个核细胞悬液中CD3+数、CD3+/CD30+T细胞比值及CD3+T细胞凋亡率,同步检测血小板计数,分析ITP组与对照组各指标间的差异和相关性。结果表明:ITP组外周血CD3+细胞数与对照组无明显差异(p0.05)。ITP组活化T细胞表面CD30表达率明显高于对照组(p0.01)。ITP组活化T细胞凋亡率明显低于对照组(p0.01)。活化后T细胞表面CD30表达与其凋亡率呈负相关(r=-0.786,p0.01)。活化T细胞凋亡率与血小板计数呈正相关(r=0.680,p0.01)。结论:慢性ITP患者活化T细胞CD30的高表达导致了T细胞活化后凋亡受阻,在体内蓄积引起免疫功能紊乱,使血小板减少。     

核黄素光化学法对人外周血淋巴细胞灭活作用的研究

目的研究核黄素光化学法对人外周血淋巴细胞的增殖及细胞因子分泌活性的抑制作用,探讨该方法对淋巴细胞凋亡的诱导作用。方法实验分为实验组:从随机采集的全血中分离淋巴细胞,将其悬浮于核黄素终浓度为100μM的自体血浆中,注入PVC袋,在波长为420 nm的可见光下照射,总照射剂量为40 J/cm2;对照组:使用相同来源的淋巴细胞,悬浮于不含核黄素的自体血浆中,不进行光照处理。用植物凝集素(PHA)同步刺激两组淋巴细胞,用BrdU细胞增殖检测试剂盒检测淋巴细胞的增殖活性,并计算核黄素光化学法对淋巴细胞的增殖抑制率;用酶联免疫试剂盒检测淋巴细胞细胞因子的分泌量;使用Annexin V-PE细胞凋亡试剂盒和流式细胞技术检测细胞凋亡。结果与对照组比较,经过核黄素光化学法处理的实验组淋巴细胞对PHA刺激的增殖抑制率为(94.69±7.61)%;实验组淋巴细胞接受PHA刺激后,细胞因子IFN-γ、IL-10和IL-12的分泌量与对照组比较分别降低了(89.54±22.75)%、(77.83±22.3)%和(88.57±15)%,IL-4的分泌量较对照组差异不明显;流式细胞术检测结果表明,实验组绝大多数淋巴细胞发生了凋亡,其早期凋亡率和晚期凋亡或坏死率均明显高于对照组。结论核黄素光化学法能够抑制人外周血淋巴细胞的增殖和一些细胞因子的分泌,同时可诱导淋巴细胞凋亡。该方法有望成为预防TA-GvHD的新途径。     

特异性细胞因子对T辅助17细胞和T调节性细胞表达的调节作用

目的 探讨多种细胞因子包括转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素2(IL-2)对CD+4T淋巴细胞的分化调节作用.方法 将人外周血T淋巴细胞、鼠脾脏T淋巴细胞在不同的刺激条件下进行体外培养,采用流式细胞仪分析活化T淋巴细胞中CD+4IL-17+T辅助17细胞(Th17细胞)、C+4IL-17+T淋巴细胞、CD+4CD+25FOXP+3T调节性细胞(Treg细胞)的表达情况.结果 鼠脾脏T淋巴细胞培养液中有TGF-β存在时可促进Treg细胞、rh17细胞和CD+8;IL-17+T淋巴细胞分化,表达水平分别为(7.8±2.2)%、(12.6±3.1)%、(10.1±2.6)%.无细胞因子培养的同类细胞为实验对照组,表达水平分别为(4.8±0.6)%、(1.7±0.5)%、(1.0±0.4)%,差异均有统计学意义(q=4.09、8.80、9.61,P<0.05或P<0.01).TGF-β与IL-6细胞因子共同存在时可促进Th17和CD+8IL-17+T淋巴细胞分化,表达水平分别为(17.8±5.3)%、(15.0±4.2)%,而分化受抑制的Treg细胞的表达水平为(4.I±1.2)%,与TGF-β组同类细胞表达水平比较差异均有统计学意义(q=5.03、5.17、5.04,P均<0.01).在TGF-β刺激的T淋巴细胞中加入IL-2细胞因子可使Th17细胞、CD+8;IL-17+T淋巴细胞表达减少,同时伴有Treg细胞表达量的增加;在加入抗IL-2后结果相反,即Th17细胞、CD+8IL-17+T淋巴细胞表达水平增加,Treg细胞表达水平减少.人外周血T淋巴细胞上Th17、CD+8IL-17+、Treg细胞表达水平变化趋势与鼠脾脏淋巴细胞相似.结论 不同细胞因子对于调控Th17细胞和Treg细胞之间的平衡起着十分重要的作用.     

rhIL-12对恒河猴造血系统辐射防护作用的初步研究

摘要本研究旨在初步观察重组人白介素-12（rhIL-12）对急性辐射损伤猴造血系统的防护和治疗作用,为同类型病人的临床救治提供实验依据。在体外实验中,观察了不同浓度rhIL-12（0、1、5、25、125和625ng/ml）对来自人和健康成年猴骨髓造血祖细胞集落形成能力的影响。在体内实验中,用11只经3．0Gy全身照射后90d活存猴再经致死剂量^60Coγ（6．0Gy）射线全身1次照射以建立重度骨髓型急性放射病动物模型。模型动物被随机分为照射对照组（n=4）、单次给药组（n=3）和分次给药组（n=4）。单次给药组于照射后2h皮下注射rhIL-124μg／kg,分次给药组分别于照射后2h和3、6、9d皮下注射rhIL-121μg/kg,对照组于皮下注射同样体积的PBS。观察照射后动物活存情况和外周血象变化。体外培养结果显示,不同浓度rhIL-12可明显促进正常猴和人骨髓单个核细胞形成各系造血祖细胞集落,特别是CFU-E和CFU-GM最为明显。照射对照组动物于照射后22d内全部死亡,死亡动物平均活存时间为（20．3±1．2）d;rhIL-12单次给药组3只动物全部存活,rhIL-12分次给药组1只动物于照射后17d因贫血死亡。与对照组比较,rhIL-12治疗能明显提高动物存活（P=0．018）,并促进外周血白细胞数、血红蛋白水平、血小板以及网织红细胞数的恢复（P〈0．05）。结论：rhIL-12可明显促进灵长类骨髓造血祖细胞体外集落形成,并明显促进重度骨髓型急性放射病猴的造血功能恢复,提高动物存活率。     

血必净注射液对脂多糖刺激大鼠调节性T细胞凋亡及其介导效应T细胞免疫功能的影响

目的 探讨中药血必净注射液对体外脂多糖(LPS)刺激CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)凋亡及其介导效应T细胞(Teff)增殖反应、分泌白细胞介素-2(IL-2)功能的影响.方法 40只雄性清洁级Wistar大鼠,实验前禁食12 h.免疫磁珠法分选大鼠脾脏CD4+CD25+Treg,分为对照组(n=8)、抗CD3/CD28组(n=8)、抗CXB/CD28+LPS组(/1,=8)、抗CD3/CD28+血必净组(n=8)和抗CD3/CD28+LPS+血必净组(n=8).培养3 d后流式细胞术检测CD4+CD25+Treg凋亡率、叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)表达,酶联免疫吸附试验检测IL-10分泌.同时,CD4+CD25+Treg与CD4+CD25-T细胞1:1培养,刀豆素A刺激68 h后分析Treg对Teff增殖的抑制效应,并检测上清中IL-2/可溶性IL-2受体水平.结果 抗CD3/CD28诱导Treg凋亡率为(33.70±3.06%),显著高于对照组(12.84±0.84)%;抗CD3/CD28+LPS+血必净组(45.13±2.70)%凋亡率明显高于抗CD3/CD28+LPS组[(29.41±1.63)%,P＜0.01].同时,CD4+CLY25+Treg roxp3和CTLA-4表达及IL-10分泌随凋亡增加而降低.抗CD3/CD28+血必净组(31.26%)Teff增殖反应平均抑制率显著低于对照组(54.48%,P＜0.05),抗CD3/CD28+LPS+血必净组抑制率与抗CD3/CD28+LPS组比较亦明显下降(P＜0.01).此外,抗CD3/CD28+血必净组和抗CD3/CD28+LPS+血必净组IL-2分泌水平均显著高于抗CD3/CD28+LPS组(P＜0.01).结论 LPS刺激可明显上调大鼠Treg对Teff的抑制功能,血必净注射液能通过促进Treg凋亡而有效改善其对Teff的抑制效应.     

乳腺癌患者外周血T淋巴细胞及调节性T细胞的检测意义

目的 探讨乳腺癌患者外周血中T淋巴细胞亚群及调节性T细胞的变化和临床意义.方法 采用流式细胞技术检测30例乳腺癌患者外周血中T淋巴细胞亚群及调节性T细胞的变化,并与健康对照组进行比较.结果 乳腺癌患者外周血CD4+CD25+及CD4+CD25+high调节性T细胞占CD3+CD4+T细胞的比率为(15.52±1.54)%及(3.49±0.54)%,高于健康对照组(6.11±0.72)%及(1.42±0.61)%,差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌患者CD3+T淋巴细胞比率为(50.98±6.79)%、CD4+Th细胞比率为(28.37±7.58)%和Th/Ts比值为(1.05±0.38),显著低于健康对照组(67.55±5.98)%、(40.12±5.27)%和(1.59±0.65),差异有统计学意义(均P<0.05),而CD8+Ts细胞比率为(30.05±7.79)%,与健康对照组(29.97±7.14)%比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 乳腺癌患者外周血调节性T细胞水平升高,T淋巴细胞及Th细胞降低可能是乳腺癌患者细胞免疫功能受损的重要原因之一.     

类风湿性关节炎患者外周血CD3~+ CD(16、56)~+ NK T细胞百分率的变化及意义

目的探讨CD3+CD(16、56)+自然杀伤(NK)T细胞在类风湿性关节炎(RA)患者外周血中的变化及意义。方法采用流式细胞术检测RA患者(病情活动组和病情稳定组)及健康人(对照组)外周血淋巴细胞中CD3+CD(16、56)+细胞的比例及CD3+CD(16、56)+淋巴细胞CD69的表达百分率。结果 RA病情活动组外周血CD3+CD(16、56)+NK T细胞的比例及NK T细胞CD69的表达百分率明显低于RA病情稳定组及健康对照组(P均<0.01);RA病情稳定组NK T细胞的比例及NK T细胞CD69的表达百分率与健康对照组差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 RA患者外周血中CD3+CD(16、56)+NK T细胞比例减少及活性受抑制可能参与了RA的发病过程,且可能与RA的病情活动性相关。     

参芪扶正注射液对脓毒症患者免疫功能的影响

目的 观察参芪扶正注射液对脓毒症患者外周血T细胞亚群、T细胞凋亡和细胞因子的影响并探讨其意义.方法 选择天津医科大学总医院普通外科收治的40例脓毒症患者,按随机数字表法分为常规治疗组(20例,给予常规西医治疗)和参芪扶正治疗组(20例,在西医常规治疗基础上加用参芪扶正注射液 250 mL静脉滴注,每日1次),两组均以7 d为1个疗程.两组患者均于治疗1、3、7 d进行急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHE Ⅱ)评分;用流式细胞仪检测外周血T细胞亚群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和细胞凋亡情况,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素 (IL-6、IL-10)水平.结果 两组治疗后3 d APACHEⅡ评分均较治疗后1 d明显降低,并持续到治疗后7 d,且参芪扶正治疗组的降低程度较常规治疗组更显著(分:10.05±3.71比13.15±4.65,P<0.05).随着治疗时间的延长,两组外周血TNF-α、IL-6水平均逐渐下降;IL-10水平先升高,到7 d时又下降;7 d时参芪扶正治疗组TNF-α和IL-6明显低于常规治疗组〔TNF-α(ng/L):204.6±18.1比218.9±21.3,IL-6(ng/L):3.68±0.30比3.95±0.49,均P<0.05〕;而参芪扶正组与常规治疗组IL-10比较差异无统计学意义(ng/L:173.8±23.3比174.8±18.9,P>0.05).两组治疗后1、3、7 d CD4+T细胞和CD4+/CD8+先下降后上升,CD8+T细胞逐渐下降及CD4+、CD8+T细胞凋亡率先升后降,参芪扶正治疗组治疗后7 d CD4+T细胞、CD4+/CD8+及CD4+T细胞凋亡率与常规治疗组比较差异均有统计学意义〔CD4+T细胞:(38.3±4.7)%比(35.5±5.5)%,CD4+/CD8+:1.55±0.29比1.36±0.27,CD4+T细胞凋亡率:(11.2±3.8)%比(14.1±5.5)%,均P<0.05〕;两组各时间点CD8+T及其细胞凋亡率比较差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 参芪扶正注射液可有效降低脓毒症患者CD4+T细胞凋亡率,增加CD4+T细胞和CD4+/CD8+,降低炎症指标,改善脓毒症患者的免疫功能及病情严重程度.     

肺部相关疾病外周血T淋巴细胞表面标志物表达分析

目的观察肺部相关疾病外周血T淋巴细胞表面标志物的表达,从细胞免疫水平探究肺部相关疾病发病机制。方法选择2016年1-12月于浙江省绍兴市立医院呼吸科就诊的肺部疾病患者84例,根据诊断结果分为肺结核组(n=34)、肺癌组(n=25)及非结核性肺炎组(n=25),同时设立健康对照组(n=35)。检测各组外周血T细胞表面表达CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+、CD3^+CD45RA+/CD45RO^+、CD3^+HLA-DR^+、CD8^+HLA-DR^+、CD4^+CD25^+的百分比,采用t检验对结果进行统计分析。结果肺结核组、肺癌组、非结核性肺炎组外周血T淋巴细胞表面标志物CD4^+/CD8^+比值(1.01±0.48、1.17±0.39、1.35±0.55)低于健康对照组(1.48±0.52,t=2.562,t=2.341,t=2.112,P<0.05);肺结核组、肺癌组、非结核性肺炎组表达CD3^+CD45RO^+的T细胞占总淋巴细胞百分比(65.20%±12.63%、56.70%±9.98%、55.90%±9.29%)高于健康对照组(49.60%±11.52%,t=3.422,t=2.647,t=2.084,P<0.05),且肺结核组高于肺癌和非结核性肺炎组(t=2.153,t=3.112,P<0.05);肺结核组、肺癌组表达CD3^+HLA-DR^+的T细胞占总淋巴细胞百分比(19.59%±7.01%、21.7%±7.34%)高于健康对照组(11.40%±5.33%,t=2.383,t=2.533,P<0.05);肺结核组表达CD8^+HLA-DR^+T细胞占总淋巴细胞百分比(11.26%±4.88%)高于健康对照组(7.10%±3.07%,t=2.244,P<0.05);肺结核组和肺癌组表达CD4^+CD25^+的T细胞占总淋巴细胞百分比(10.70%±3.06%、10.40%±2.33%)高于健康对照组(8.20%±2.79%,t=2.647,t=2.662,P<0.05)。结论肺结核、肺癌和肺炎患者外周血T淋巴细胞表面标志表达改变,尤以肺结核患者改变最显著,可能与肺结核独特的发病机制有关。     

DNA-PK基因沉默对卵巢癌细胞细胞凋亡的影响

目的 探讨DNA-PK基因对沉默卵巢癌细胞凋亡的影响及机制.方法 DNA-PK shRNA以脂质体介导转染卵巢癌细胞株Skov3,24h后接受2Gy X射线照射,继续培养48 h.收集细胞,标记Annexin Ⅴ/PI,流式细胞术分析细胞凋亡情况,同时,RT-PCR检测p53和p21 mRNA的表达量.结果 2Gy辐射引起2.40％±1.53％ Skov3细胞凋亡,高于对照组（t=2.618,P=0.026）,而转染DNA-PK shRNA的Skov3细胞经2Gy照射,凋亡细胞为18.74％±4.15％,明显高于单纯2Gy照射组（t=9.052,P＜0.001）及DNA-PK shRNA转染组（2.77％±1.73％）（t=8.869,P＜0.001）.RT-PCR检测结果显示,2Gy照射组,Skov3细胞p53 mRNA表达量高于对照组,而DNA-PKshRNA转染的Skov3细胞接受2Gy照射,其p53 mRNA表达量降低,接近正常水平,单独转染DNA-PK shRNA组p53 mRNA表达量无明显变化.转染DNA-PK shRNA的Skov3细胞经2Gy照射,其p21 mRNA表达量低于2Gy照射组接近正常组水平,单独转染DNA-PK shRNA组Skov3细胞p21 mRNA表达水平与正常对照组相当.结论 DNA-PK shRNA可增加辐射后巢癌细胞株的细胞凋亡,其可能机制是通过下调p53和p21 mRNA表达,而启动细胞凋亡.     

血液透析患者细胞凋亡抑制基因BcL-2表达对外周血淋巴细胞凋亡的影响

目的探讨细胞凋亡抑制基因BcL-2表达对血液透析(HD)患者外周血淋巴细胞凋亡的影响.方法采用荧光双标单抗免疫标记淋巴细胞法和流式细胞术检测血液透析患者外周血淋巴细胞BcL-2表达水平.结果①血液透析患者的细胞凋亡抑制基因(BcL-2)表达较正常人明显降低(P＜0.01),HD后,BcL-2表达白细胞介素2水平有所增加,并与白细胞介素2(IL-2)浓度变化呈显著正相关,而与白细胞介素2可溶性受体(sIL-2R)水平呈负相关;②与正常对照组相比,血液透析患者活化诱导的CD3 细胞凋亡增强,且随着透析时间的延长,其凋亡率逐渐增加,呈现时间依赖性;③在体外培养的淋巴细胞上清液中,血液透析患者的sIL-2R对外源性重组白细胞介素2(rIL-2)的反应性较正常人增高,细胞表面IL-2R的自发表达亦较正常组明显升高(P＜0.01),而体内实验表明,血浆sIL-2R变化与血肌酐水平呈显著正相关,并与透析时间有关.结论BcL-2和IL-2表达异常可促使外周血淋巴细胞凋亡,并与血液透析患者免疫损伤的发生、发展相关.     

Th9、Th17、CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞在慢性淋巴细胞白血病患者外周血中的变化

目的探讨慢性淋巴细胞白血病患者外周血中Th9、Thl7和CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞及相关细胞因子的表达水平及意义。方法采用流式细胞仪检测36例CLL患者和45例健康对照组外周血Th9、Th17和Treg细胞的表达率,采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测外周血中细胞因子IL-9、IL-17、TGF-β的表达水平。结果 1)CLL组患者外周血Th9、Th17细胞比例及细胞因子IL-9、IL-17浓度均明显高于健康对照组[(1.29±0.35)%vs(0.74±0.23)%,P0.05;(2.15±0.46)%vs(1.08±0.37)%,P0.05;(24.25±7.05)%vs(16.35±5.42)%,P0.05;(11.47±3.99)%vs(7.36±2.85%),P0.05]。CD4~+CD25~+FoxP3~+细胞比例及细胞因子TGF-β浓度明显低于对照组[(4.76±0.89)%vs(7.26±1.95)%,P0.05;(3.82±1.39)%vs(6.82±2.01)%,P0.05]。2)相关性分析:患者Th9、Th17细胞比例及IL-9、IL-17浓度与淋巴细胞计数负相关(γ_s=-0.374,P=0.034;γ_s=-0.382,P=0.032;γ_s=-0.445,P=0.011;γ_s=-0.413,P=0.024);患者Treg细胞比例及TGF-β浓度与淋巴细胞计数正相关(γ_s=0.416,P=0.023;γ_s=0.403,P=0.028)。结论慢性淋巴细胞白血病患者Th9、Th17与CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞比例失衡,血清IL-9、IL-17和TGF-β水平变化,这些原因可能参与慢性淋巴细胞白血病的免疫发病过程。