丙型肝炎病毒NS5b区与5'-非编码区不同基因区RNA检测结果的比较

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５ｂ区与５’－非编码区（５’－ＮＣＲ）不同基因区ＲＮＡ检测结果的区别及临床应用价值。利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测１４８例肝炎患者血清ＨＣＶ ＮＳ ５ｂ基因的ｃＤＮＡ,并与５’－ＮＣＲ基因区ｃＤＮＡ检测技术进行了比较。结果 ＨＣＶ ＮＳ ５ｂ基因区ＲＮＡ检出率为２４．３％（３４／１４８）,５’－ＮＣＲ基因区ＲＮＡ检出率为３１．１％（４７／１４８）。Ｈ     

同步检测HCV RNA与HGV RNA的RT-PCR技术的建立与应用

我们建立了一种同步检测ＨＣＶＲＮＡ与ＨＧＶＲＮＡ的逆转录一桌式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），适用于临床诊断与分子流行病学调查。一、材料与方法１．主要试剂：ＴａｇＤＮＡ聚合酶由华美公司提供，ｄＮＴＰｓ、ＡＭＶ-ＲＴ、ＲＮａ－ｓｉｎ均为Ｐｒｏｍｅｇｓ公司产品。２．引物台成：分别在ＨＣＶ与ＨＧＶＳＪ端非编码区（５'ＵＴＲ）设计两对套式引物，委托上海Ｓａｎｇｏｎ生物公司合成。３．同步检测ＨＣＶＲＮＡ与ＨＧＶＲＮＡ的ＲＴ一ＰＣＲ反应：采用异硫氰酸肌一步法提取血清中ＨＣＶＲＮＡ与ＨＧＶＲＮＡ。以ＨＣＶ与ＨＧＶ…     

静脉药瘤者HCV感染与基因分型

静脉药瘤者ＨＣＶ感染与基因分型顾秀华，高连相，刘芳华，潘常忠，李成芸，杨永梅本文作者对６０例静脉药瘾者ＨＣＶＲＮＡ阳性血清５＇非编码区（５＇ＮＣ）逆转录─套式─聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）产物，用限制性内切酶技术进行基因分型，现将结果报...     

逆转录—套式—聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞…

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５′－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链，用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ，结果发现，５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性，１例三者均阴性，１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性     

庚型肝炎病毒（GBV—C／HGV）与HBV和HCV联合或重叠感染的初步研究

目的 研究庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）与ＨＢＶ和ＨＣＶ联合或重叠感染的情况，方法 采用ＥＬＩＳＡ的方法检测血液制剂和血源乙肝疫苗原料血浆中的ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＣＶ；并用５′非编码区的引物，用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ。结果 ＨＢｓＡｇ和抗ＨＣＶ均阴性血浆的ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ阳性率为１８．８％（１５／８０）；ＨＢｓＡｇ阳性而抗ＨＣＶ阴性血浆的ＧＢＶ－     

不同HCV感染者各区段抗HCV抗体的反应性及HCV-RNA检测结果分析

利用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）不同区段抗原的单片段酶免疫（ＥＩＡ）试剂及反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,对不同ＨＣＶ感染者血清不同区段抗ＨＣＶ抗体及丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶ－ＲＮＡ）进行检测。结果显示,慢性肝炎患者各抗体检出率及Ｓ／Ｃｏ（Ｓ为样品光密度值,Ｃｏ为临界值）值均高,肝癌患者各抗体检出率及ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性率均较低;ＡＬＴ正常而抗ＨＣＶ阳性者各区段抗体阳性率低于急、慢性肝炎患者,而其ＨＣＶ－ＲＮＡ的阳性率高于其他各组;抗－ＮＳ３和抗－Ｃ抗体在各组的检出率和反应性均强。表明抗－Ｃ和抗－ＮＳ３抗体的检测对ＨＣＶ感染最有诊断价值,同时用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测血清ＨＣＶ－ＲＮＡ有助于ＨＣＶ感染的早期诊断     

66例慢性非甲非乙型肝炎患者的丙型肝炎病毒感染研究

以ＨＣＶ－Ｔ３序列为引物，结合ＲＴ－ＰＣＲ和寡聚核甘酸探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，检测６６例慢性非甲非乙型肝炎（ＮＡＮＢＨ）患者的血浆ＨＣＶ－ＲＮＡ，阳性４２例（６３．６％）。同样病例以相当于ＨＣＶＣ区基因编码和ＮＳ３区编码的人工合成肽抗原检测抗ＨＣＶ，阳性４９例（７４．２％）。这６６例慢性ＮＡＮＢＨ病例，抗ＨＣＶ和ＨＣＶ－ＲＮＡ双阳性者３８例（５７．６％）；抗ＨＣＶ阴性而ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性者４例（６．１％）；抗ＨＣＶ阳性而ＨＣＶ－ＲＮＡ阴性者１１例（１６．７％）。其中诊断为散发型ＮＡＮＢＨ者３５例，检出ＨＣＶ－ＲＮＡ者１７例（４８．６％），为输血后ＮＡＮＢＨ者３１例，检出ＨＣＶ－ＲＮＡ者２５例（８０．７％）。     

地高辛标记探针原位杂交检测肝组织中丙型肝炎病毒RNA

用地高辛标记ＨＣＶ５′－ＮＣ区ｃＤＮＡ探针原位杂交检测了２４例ＨＣＶ感染的慢性肝病患者肝组织中ＨＣＶＲＮＡ。结果：１７例同时血清抗ＨＣＶ（ⅡＥＬＩＳＡ法）和ＨＶＣＲＮＡ（套式ＰＣＲ法）均阳性病人中，１４例（８２．３％），肝组织检出了ＨＣＶＲＮＡ。７例仅有抗ＨＣＶ阳性病人，肝组织中没有检出ＨＣＶＲＮＡ。ＨＣＶＲＮＡ特异性信号主要位于肝细胞浆。感染ＨＣＶ的肝细胞呈散在，灶状或弥漫形式分布，与ＡＬＴ水平     

中国南方株庚型肝炎病毒5′端非翻译区基因的分子克隆及序列…

目的：分析我国华南地区庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）５′端非翻译区（５′ＵＴＲ）基因序列及非甲一戊型肝炎病人中ＨＧＶ感染情况。方法：在ＨＧＶ ５′ＵＴＲ设计引物，采用逆转录一套式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ，对扩增产物进行分子克隆，以荧光法（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）测序。结果：６３例非甲一戊型肝炎病中６例ＨＧＶＲＮＡ阳性（９．５％）对其中一株输血后ＨＧＶ（Ｃｈ－Ｓ）５′ＵＴＲ核     

肝癌组织中三种糖基转移酶基因表达水平

一、资料与方法 １．标本：１３例正常肝组织来自尸检标本；１５例ＨＣＣ组织和１５例ＨＣＣ癌旁组织取自手术患者。 ２．方法：Ｎ－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ｖ（ＧｌｃＮＡｃＴ－Ｖ）、Ｎ－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ（ＧｌｃＮＡｃＴ－Ⅲ）、（１，６核心岩藻糖转移酶（α１－６ＦｕｃＴ）和β－肌动蛋白（β－ａｃｔｉｎ）四种扩增基因引物由Ｐｒｉｍｅｒ３引物设计程序设计。以β－ａｃｔｉｎ为内标，采用ＲＴ－ＰＣＲ法检测以上三种基因ｍＲＮＡ的表达情况。ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳后用ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒ ＶＤＳ图像分析系统处理并…     

慢性HCV感染者IFN治疗前后血清HCV RNA水平

目的评价ＩＦＮ对丙肝患者病毒血症水平的作用．方法竞争性逆转录聚合酶链反应（ＣＲＴＰＣＲ）法定量检测１２例慢性ＨＣＶ感染者（男８例，女４例，ＨＣＶＲＮＡ阳性，ＡＬＴ异常持续６个月以上）ＩＦＮ治疗（ＩＦＮａ２ｂ３ＭＵ，肌注，３次／周，疗程３个月）前后（随访６个月）血清ＨＣＶＲＮＡ水平．结果慢性ＨＣＶ感染者１２例，３例呈完全反应，６例呈部分反应，另外３例无反应．９例有反应者中４例复发，有反应者治疗结束时血清ＨＣＶＲＮＡ水平明显下降（５１７±０４０８ｖｓ２０６±１５５，１０ｃｏｐｉｅｓ／５０μｌｓｅｒｕｍ，ｘ±ｓ，Ｐ＜００５），无反应者血清ＨＣＶＲＮＡ水平未见明显下降（５６７±０５８ｖｓ４５±０８７，ｘ±ｓ，Ｐ＞００５）．３例完全反应者仅１例血清ＨＣＶＲＮＡ持续阴性，３例无反应者２例血清ＨＣＶＲＮＡ水平略有下降．结论ＩＦＮ治疗丙肝有效，但ＩＦＮ不能有效清除病毒，仅抑制病毒复制，未见治疗前血清ＨＣＶＲＮＡ水平与复发与否有关．     

山东地区输血后丙肝患者HGV感染状况及HGV部分核酸序列测定

应用ＲＴ－ＰＣＲ法检测庚肝病毒（ＨＧＶ）ＲＮＡ,并对阳性扩增的产物采用ＰＣＲ片段直接克隆法测定。结果从８６例输血后丙型肝炎（ＰＴＨ－Ｃ）患者血清中检出ＨＧＶＲＮＡ阳性者３１例（３６．０％）,其中１例ＨＧＶＮＳ５区部分核苷酸序列与美国原始株和另１例日本株核苷酸同源性比较分别为８６．０％和８４．０％。证实山东地区ＰＴＨ－Ｃ２存在着ＨＧＶ感染和ＨＧＶ／ＨＣＶ混合感染,但是否存在不同亚型或ＨＧＶＲＮＡ阳性     

HCV 5′NCR和结构蛋白编码序列的克隆及对PA317细胞的转染

目的进一步研究丙型肝炎病毒５′ＮＣＲ对结构蛋白编码基因的表达调控。方法以拼接好的ＨＣＶ５′ＮＣＲ，Ｃ，Ｅ１和Ｅ２／ＮＳ１区基因共长２５４７个核苷酸片段克隆于逆转录病毒载体ＬＮＳＸ得重组体ｐＬＨＣ２５４７，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及核苷酸序列分析等方法对重组体进行鉴定。通过磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法把经鉴定的重组体转染入ＰＡ３１７细胞，用Ｇ４１８进行克隆筛选，以ＮＩＨ３Ｔ３细胞测其病毒滴度。提取转染细胞ＤＮＡ及培养上清ＲＮＡ分别用ＰＣＲ和逆转录ＰＣＲ进行鉴定。结果培养上清的病毒滴度为２×１０５ＣＦＵ／ｍｌ，ＰＣＲ及逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）分别可以从转染的细胞ＤＮＡ及培养上清中扩增出ＨＣＶ的基因片段。结论目的基因已整合到细胞的基因组中并得以表达     

丙型肝炎患者中各型肝炎病毒混合感染状况研究

１资料与方法：用ＲＴ－ＰＣＲ和ＥＩＡ（ＥＬＩＳＡ）方法对昆明地区８２例丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的肝炎患者血清中ＨＣＶＲＮＡ和抗一ＨＣＶ,并对甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）,乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）,丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）,戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）和庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的感染标志物进行了检测分析研究。２．结果：其它５型肝炎病毒均可同ＨＣＶ混合感染,并且同一患者可混合感染３种或４种其它型肝炎病毒。在这８２例患者中,２６．８％为单一ＨＣＶ感染,３２．９％为ＨＣＶ同ＨＡＶ混合感染,４５．ｌ０为ＨＣＶ同ＨＢＶ混合…     

丙型肝炎病毒感染及其性传播途径的研究

目的 探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）经性传播的可能性和ＨＣＶ感染的危险因素。方法 采用ＥＩＡ－Ⅱ检测抗－ＨＣＶ阳性者及其配偶、性病门诊就医者、暗娼及嫖客及嫖客、ＨＩＶ『／ＡＤＩＳ患者的血清抗－ＨＣＶ,并用逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测 述血标本的ＨＣＶ ＲＮＡ。另设抗－ＨＣＶ及ＨＣＶ ＲＮＡ阴性的健康者及其配偶（２０对）作为对照。结果 （１）８４例ＨＣＶ感染者及丙肝患者中ＨＣＦ ＲＮＡ阳     

血清抗—HCV与HCV RNA检测结果比较

采用逆转录一大一聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅ－ＰＣＲ）及ＥＬＩＳＡ（Ａｂｂｏｔｔ）对一组经第二代抗－ＨＣＶ ＥＬＩＳＡ（上海科华生物技术有限公司，科华）试剂筛选的抗－ＨＣＶ阳性血清及抗－ＨＣＶ阴性的非甲非乙型肝炎患者清，进行了ＨＣＶＲＮＡ与抗－ＨＣＶ检测。对两者检测结果表明相互关系进行了分析与比较。结果显示：Ａｂｂｏｔｔ与科华ＥＬＩＳＡ试剂两者抗－ＨＣＶ检测的阳性符合率及总符合率为７７．７％及７     

散发性戊型肝炎的病原学和血清学研究

目的 研究散发性戊型肝炎（ＨＥ）患者病毒血症,粪便排病毒及抗体消长规律。方法 采用逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）动态检测血清和粪便ＨＥＶＲＮＡ,采用ＨＥＶＯＲＦ２,ＯＲＦ３合成多肽单独和联合ＥＩＡ法动态检测血清抗－Ｈ。结果 血清ＨＥＶＲＮＡ阳性患者占７１％（４４／６２）平均持续时间为病后２０．６天（全程随访３２例）粪便ＨＥＶＲＮＡ阳性标本中有９６．２％（２５／２６）出现在     

多重聚合酶链反应检测乙型肝炎和丙型肝炎病毒

在同一反应体系中同时快速检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ），探讨多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）在临床中的应用价值。方法自行设计了ＨＢＶ和ＨＣＶ各一对引物，应用多重ＰＣＲ对临床标本进行检测。结果５例ＨＢｓＡｇ和ＨＣＶ抗体均阳性者，其ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阳性；２０例单ＨＢｓＡｇ阳性标本，１１例单ＨＢＶＤＮＡ阳性，５例ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阳性；２０份单ＨＣＶ抗体阳性者，ＨＣＶＲＮＡ均阳性，３例合并ＨＢＶＤＮＡ阳性；１０例慢性非甲非乙型肝炎（ＮＡＮＢ）抗ＨＣＶ阴性肝炎标本８份ＨＣＶＲＮＡ阳性，１例ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ阳性。结论多重ＰＣＲ一次反应即可完成多次常规ＰＣＲ检测，是一种值得临床应用的方法。     

应用长片段PCR扩增全长HIV— 1DNA的研究

目的 探讨长征段ＰＣＲ（ＬＤ－ＰＣＲ）扩增特点,并将它用于对全长ＨＩＶ ＤＮＡ的研究。方法 应用ＬＴＤ（Ｕ５）／ＬＴＤ（Ｒ）,ＣＬ－ＮＳＣ／ＣＬ－ＮＥＦ和ｇａｇＡｌ／ｇａｇＡ２等不同引物,＾３２Ｐｇａｇ,ｐｏｌ,ｎｅｆ和ｔａｔ等为片段探针,对克隆有ＨＩＶ－１完整基因片段,部分基因片段的质粒和ＨＶＩ感染者外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）中的ＨＩＶ－１ ＤＮＡ进行扩增。结果 ＬＤ－ＰＣＲ对０．４－９ｋｂ的第     

逆转录－套式－聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞癌的关系

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链；用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ。结果发现：５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性；１例三者均阴性；１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性的癌组织和癌旁组织均检出了ＨＣＶＲＮＡ负链，但血清中未检出负链。在２２例ＨＣＣ中１３例血清、８例癌组织和１５例癌旁组织中检出ＨＢＶＤＮＡ。５例有ＨＣＶＲＮＡ和／或抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者血清、和／或癌组织、和／或癌旁组织中均伴随ＨＢＶＤＮＡ和／或ＨＢ－ＶＭ阳性。提示ＨＣＶ可在癌旁肝细胞或肝癌细胞中感染并复制；ＨＢＶ感染与肝癌发生的关系比ＨＣＶ感染更密切。