α-淀粉酶在检验真假蜂蜜中的应用

针对蜂蜜掺假和造假的问题,对真蜂蜜及耐高温α-淀粉酶中的蛋白质含量、淀粉酶活性进行测定分析.实验结果表明:天然蜂蜜在低温条件下可长期保持其酶值基本不变,但是在高温条件下,随着储存时间延长,其酶值就会明显下降.而耐高温α-淀粉酶酶值均没有发生明显变化.通过蜂蜜样品中的α-淀粉酶与耐高温α-淀粉酶酶学性质的比较为判别真蜂蜜与掺假蜂蜜提供依据.     

高效液相色谱-二极管阵列检测法检测蜂蜜中外源性γ-淀粉酶残留量

目的利用高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)测定蜂蜜中外源性γ-淀粉酶残留量。方法选取对硝基苯-β-D-麦芽三糖作为γ-淀粉酶的酶解底物,于55℃和pH 4.50的0.10 mol/L乙酸钠缓冲液中反应90 min。采用C18柱分离底物和酶解产物对硝基苯-β-D-葡萄糖,流动相为乙腈/水(15:85,v:v)。通过测定酶解产物的含量来确定γ-淀粉酶残留量。结果本方法的线性范围为1~50 U/kg,定量限为1 U/kg,回收率在94.0%~107.2%之间,相对标准偏差在3.2%~5.1%之间。采用本方法对市售蜂蜜和淀粉类糖浆共58个样本进行考察,γ-淀粉酶检出率为79.3%。采用本方法测定一个掺入5%淀粉类糖浆的蜂蜜,测得γ-淀粉酶残留量为3.6U/kg。结论本方法能够有效地从酶学的角度快速鉴定蜂蜜中淀粉类糖浆的掺假。     

高效液相色谱-二极管阵列检测法检测蜂蜜 中外源性γ-淀粉酶残留量

目的 利用高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)测定蜂蜜中外源性γ-淀粉酶残留量。 方法 选取对硝基苯-β-D-麦芽三糖作为γ-淀粉酶的酶解底物, 于55 ℃和pH 4.50的0.10 mol/L乙酸钠缓冲液中反应90 min。采用C18柱分离底物和酶解产物对硝基苯-β-D-葡萄糖, 流动相为乙腈/水(15:85, v:v)。通过测定酶解产物的含量来确定γ-淀粉酶残留量。结果 本方法的线性范围为1~50 U/kg, 定量限为1 U/kg, 回收率在94.0%~107.2%之间, 相对标准偏差在3.2%~5.1%之间。采用本方法对市售蜂蜜和淀粉类糖浆共58个样本进行考察, γ-淀粉酶检出率为79.3%。采用本方法测定一个掺入5%淀粉类糖浆的蜂蜜, 测得γ-淀粉酶残留量为3.6 U/kg。结论 本方法能够有效地从酶学的角度快速鉴定蜂蜜中淀粉类糖浆的掺假。     

玉米淀粉生产高麦芽糖浆研究

首先研究了两种耐高温α-淀粉酶和两种真菌α-淀粉酶的酶学性质，确定了最佳酶制刑及反应条件。又以30％的玉米淀粉为原料，用耐高温α-淀粉酶N酶水解至DE值为16．5％，再用真菌α-淀粉酶B酶在最佳条件下作用21h，可得到含纯麦芽糖31．1％、葡萄糖1．7％、糊精2．7％的产品，质量达到国内同类产品的先进水平。     

瞬时高压处理对α-淀粉酶活性的影响

研究了不同条件下瞬时高压处理时α-淀粉酶活性的影响。结果表明：瞬时高压作用对α-淀粉酶具有有效的钝化作用，在pH6时，25℃、35℃、45℃下分别处理1次，80-120MPa时α-淀粉酶活性下降较慢，120MPa后活性下降变快；提高进料温度，可以增强瞬时高压对α-淀粉酶的钝化效果。pH6、25℃时，在100MPa、120MPa和140MPa下分别对α-淀粉酶处理3次，在相同的作用压力下，α-淀粉酶活性随处理次数的增加呈下降趋势：α-淀粉酶活性降低幅度随处理次数的增加而变小。常压下α-淀粉酶在pH值5．0～8．0时较为稳定，pH值低于4时严重失活；120MPa下，α-淀粉酶活性较常压下低；活性下降幅度在强酸时更大，其次为强碱，pH6时最小。     

淀粉酶在真假蜂蜜中的区别

针对蜂蜜掺假和造假的问题,文中对真、假蜂蜜中的蛋白质含量、淀粉酶活性及淀粉酶同工酶谱带差异进行测定分析。结果表明,天然蜂蜜在低温条件下可以在近1个月的时间内保持其蛋白质含量和酶值基本不变,但是在高温的条件下,随着贮存时间的延长,其蛋白质含量和酶值就会明显下降。而假蜂蜜其蛋白质含量和酶值均没有明显的变化。同工酶凝胶电泳结果也表明,真、假蜂蜜中淀粉酶同工酶谱带明显不同。因此,通过跟踪测定蜂蜜中蛋白质含量、淀粉酶值变化、淀粉同工酶谱带可以检测蜂蜜的真假及其质量变化。     

蜂蜜淀粉酶在鉴别蜂蜜掺假中的应用研究

针对蜂蜜掺假和造假的问题，本文通过测定蜂蜜粗蛋白、蛋白质含量和淀粉酶值，研究储存温度和时间对蜂蜜淀粉酶值和蛋白质含量的影响，寻找一种简单有效、客观公正的鉴别真假蜂蜜的方法。比较研究结果表明在高温(37℃、45℃)下贮存，天然蜂蜜的淀粉酶值和蛋白质的含量逐渐下降，而假蜂蜜中的淀粉酶值和蛋白质的含量基本不变。通过跟踪测定蜂蜜淀粉酶值和蛋白质含量的变化可以检测蜂蜜产品的质量，也可以鉴别真假蜂蜜。     

亚麻籽饼粕蛋白提取工艺优化及其水解物抑制α-淀粉酶活性研究

该研究以亚麻籽加工副产物-亚麻籽饼粕为原料制备α-淀粉酶抑制活性肽。采用响应面优化法对亚麻籽蛋白提取工艺进行优化,利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶对所提取亚麻籽蛋白进行酶解,采用3,5-二硝基水杨酸法（3,5-dinitro salicylic acid,DNS）来测定α-淀粉酶活性,比较不同蛋白酶酶解产物的α-淀粉酶抑制活性。根据优化结果与实际条件调整,亚麻籽蛋白的提取条件为pH 9.5,料液比为1∶20（g/mL）,温度为50℃,一次浸提时间为120 min以及二次浸提时间为60 min。测得最佳试验条件下亚麻籽饼粕蛋白的提取率为83.27%。α-淀粉酶抑制活性表明,经碱性蛋白酶酶解后得到的酶解产物具有较高的活性,其α-淀粉酶的抑制活性为27%。     

实验室模拟越夏贮藏条件对玉米籽粒中淀粉及淀粉酶活性的影响

选用2013年收获的"农大709"玉米籽粒,将其分别贮藏于室温和恒温恒湿培养箱(35℃,RH75%)中,并测定玉米籽粒淀粉酶活性、淀粉和可溶性糖含量的变化,分析了高温高湿(35℃,RH75%)条件下淀粉酶与可溶性糖代谢之间的关系。试验结果表明:常温条件下总淀粉酶和α-淀粉酶活性在贮藏初期仍继续上升,而后不再发生显著变化;除蔗糖含量降低外,总淀粉和直链淀粉以及果糖、葡萄糖、麦芽糖均无显著变化。高温高湿贮藏条件下,总淀粉酶和α-淀粉酶活性均显著下降;玉米总淀粉含量无明显变化而直链淀粉含量上升;葡萄糖和果糖变化一致,均先上升后下降;而麦芽糖和蔗糖含量均为先下降后上升。     

细菌α-淀粉酶深层培养的研究(Ⅰ)——细菌α-淀粉酶活性的测定方法

1.不同源的α-淀粉酶样品,用4种α-淀粉酶的测定方法作了比较,得出了各种方法测定值之间的比值,可以用来统一估算在工业生产和科学实验中的α-淀粉酶活性水平。2.由于α-淀粉酶的特性、作用条件以及淀粉来源不同所表现的活性全然不同,要以一种简单的统一的测定方法测定α-淀粉酶活性是不可能的。3.细菌α-淀粉酶用液化力的(JIS-K-7001)测定法;测定过程与实际应用较为接近;该法的测定温度高,能与其他酶品种相区别;该法的测定位能与比色法一致,它是一个值得推广的方法。     

茶多酚对米曲霉α-淀粉酶的回收及其特性的影响

研究绿茶中多酚类对米曲霉来源的α－淀粉酶特性的影响。从绿茶中提取茶多酚（TP），对米曲霉α－淀粉酶进行络合，沉淀及回收；以Bernfeild法测定α－淀粉酶与TP络合后，在不同温度，不同pH值，不同底物浓度的活性变化。结果表明：茶多酚对米曲霉α－淀粉酶无活性抑制作用，两者之间具有起混作用；0．3％的茶多酚浓度，获得最大α－淀粉酶活性回收率（约71％）；α－淀粉酶与TP络合后，阳适反应温度由30－50℃范围变为60－70℃；最适pH值由3．0－8．0变为5．0－6．0；在80℃下，活性变化总趋向与游离的α－淀粉酶；180min后能够保85％的酶活力，但是在前40min，酶活力下降较快；Lineweever-Burk图表明，络合后的α－淀粉酶Km由0．18％变为1．03％（可溶性淀粉底物浓度）。结论：米曲霉α－淀粉酶与TP络合后活性不受抑制并可通过这种络合回收，络合后的α－淀粉酶，最适反应温度及最达pH值变大，变窄，对底物的亲和力下降。     

嗜热古菌高温酸性淀粉酶基因合成和大肠杆菌中的表达

BD5088是来源于1种嗜热球菌Thermococcus sp.的高温酸性α-淀粉酶的人工突变体,研究中根据BD5088基因的氨基酸序列,经密码子优化,用2步PCR法合成去信号肽后的成熟肽基因。该基因全长1311bp,由436个氨基酸组成。现将其克隆到大肠杆菌的表达载体pET30a上,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达出的目的蛋白分子量约为48ku,大小与理论值一致,经过Ni+树脂纯化,得到纯化后的重组酶BD5088。重组α-淀粉酶BD5088具有α-淀粉酶的活性,最适反应温度范围为70～85°C,最适反应pH值为5.6～6.0,在100℃下酶活性半衰期约30min。活性不依赖于Ca2+。本研究为该基因在毕赤酵母中的表达和基因的定向进化改造打下了基础。     

高效液相色谱法鉴别蜂蜜中掺入蜂王浆来源的蛋白质

目的建立高效液相色谱法鉴别蜂蜜中掺入蜂王浆来源的蛋白质。方法样品经前处理后,经Diamonsil Plus C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5μm)分离,以乙腈和0.1%磷酸水溶液为流动相进行等度洗脱,外标法定量检测蜂蜜中10-羟基-2-癸烯酸(10-hydroxy-2-decanoicacid,10-HDA)的含量,确定是否掺入蜂王浆。结果基于161个各产区的纯正蜂蜜数据,提出纯正蜂蜜中10-羟基-2-癸烯酸含量应小于0.50 mg/kg。5种蜂蜜样本的回收率为96.9%～101.6%,相对标准偏差为1.6%～5.9%。对121个日常检测样品进行鉴定,其中16个有10-HAD超过判定值,被认为掺有蜂王浆来源的蛋白质。结论该方法准确可靠,适用于蜂蜜中10-羟基-2-癸烯酸含量的测定以及蜂蜜中掺入蜂王浆来源蛋白质的鉴别。     

没食子酸对猪胰α-淀粉酶和蛋白酶的抑制作用

以没食子酸为材料,通过考察酶质量浓度、反应体系中底物和酶及没食子酸添加顺序、不同反应时间、不同没食子酸质量浓度对猪胰α-淀粉酶、蛋白酶的活性影响,研究没食子酸对两种酶的抑制作用。结果表明,在底物质量浓度为1g/100mL、体系添加顺序为酶液与抑制剂没食子酸溶液37℃预温5min后加入底物溶液的条件下,没食子酸抑制猪胰α-淀粉酶活性最优条件为:α-淀粉酶质量浓度0.64mg/mL,反应时间15min,没食子酸对α-淀粉酶的最大抑制率为95.52%;在体系添加顺序为酶液与抑制剂没食子酸溶液40℃预温5min后加入底物溶液的条件下,没食子酸抑制猪胰蛋白酶活性的最优条件为:胰蛋白酶质量浓度0.63mg/mL,反应时间30min,没食子酸对胰蛋白酶的最大抑制率为99.24%。没食子酸对两种酶的抑制效果均随没食子酸质量浓度的增大而增强。     

真假蜂蜜理化指标的分析

针对蜂蜜掺假和造假问题,对所选蜂蜜的主要理化指标:还原糖含量、酸度、蔗糖含量、淀粉酶值、费氏反应等进行测定。同时研究储存温度(10、37、45℃)和时间(0、10、20、30d)对蜂蜜淀粉酶值和蛋白质含量的影响,比较真假蜂蜜的淀粉酶值和蛋白质含量的变化。并且对纯正蜂蜜进行不同浓度蔗糖与不同浓度淀粉的掺假处理,分析掺假对蜂蜜淀粉酶值的影响。从而为辨别蜂蜜掺假方法提供相关依据。     

柚皮素与α-淀粉酶相互作用的研究

本文研究了柚皮素与α-淀粉酶的相互作用。柚皮素与α-淀粉酶反应形成复合物,从而对α-淀粉酶的催化活性、荧光特性以及柚皮素的抗氧化活性产生相应的影响。采用酶动力学方法和荧光光谱法研究了柚皮素对α-淀粉酶的抑制作用。在pH6．8、37℃条件下反应20min,柚皮素（1mg／mL,0．05mL）对小淀粉酶（0．33U／mL,0．2mL）催化活性的抑制率达到36．6％。该抑制作用是以非竞争性方式进行。柚皮素对α-淀粉酶的内源性荧光产生有规律的猝灭作用,其方式以静态猝灭为主。二者主要通过疏水作用力发生结合反应形成复合物,有1个结合位点,表观结合常数约10^5L／mol。另一方面,由于与α-淀粉酶发生复合反应,柚皮素的还原力和抗亚油酸氧化的活性也有一定程度的降低,而可能导致其生物活性发生改变。     

双酶协同增加青稞慢消化淀粉含量的工艺优化

以萌芽黑青稞粉为原料,研究β-淀粉酶协同α-葡萄糖苷酶增加青稞慢消化淀粉含量及其体外降糖活性。通过单因素试验、体外模拟消化法和Box-Behnken响应面试验,确定最优工艺条件,并通过α-淀粉酶和α-葡糖苷酶抑制率的测定,评价其体外降糖活性。结果表明,双酶协同增加青稞慢消化淀粉含量的酶解最优条件为β-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶添加量150 U/g青稞粉、酶解时间8 h、酶解温度50℃、青稞粉浓度10%。此条件下青稞慢消化淀粉含量达到最高,为33.62%。体外降糖活性测定结果显示,与原粉相比酶改性青稞粉的α-淀粉酶抑制率增加了62.97%,α-葡萄糖苷酶的抑制率增加了52.46%,表明酶解粉的体外降糖活性明显提高。     

Ca2+对双酶法水解玉米淀粉的影响

考察了α-淀粉酶和β-淀粉酶的酶学性质,探讨了Ca^2＋/淀粉于50℃和pH4．5的条件下的β-淀粉酶热稳定性。研究表明,向可溶性淀粉溶液中添加30mmol／LCa^2＋,能大大提高β-淀粉酶的活性和稳定性;而液化过程中的外加Ca^2＋盐可使还原性糖的生成量略有提高。双酶法（α-淀粉酶和β-淀粉酶）水解玉米淀粉液的对照实验显示,向底物中加一定量的钙盐,可以获得更多的可发酵性还原糖。     

青稞萌发中两种淀粉酶的研究

分析研究了不同浸泡条件对青稞吸水率的影响；测定了不同发芽条件下青稞萌发过程中α-淀粉酶及β-淀粉酶活力的变化。确定了青稞萌发过程α-淀粉酶和β-淀粉酶的最大酶活力形成条件为萌发温度16℃，吸水度46％，萌发时间5d。     

航天诱变肠膜明串珠菌胞外多糖的分离纯化、结构解析及功能活性研究

以一株航天诱变的高产胞外多糖肠膜明串珠菌L21-49为对象,分离纯化其胞外多糖(exopolysaccharide, EPS),测定多糖的结构及功能活性,并分析其结构与功能活性之间的关系。首先采用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sepharose CL-6B分子筛层析纯化该菌株的胞外多糖;然后采用凝胶渗透色谱、红外光谱、液相色谱对纯化后多糖进行结构分析;随后测定纯化组分的抗致病菌生物被膜、抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的活性。结果显示,L21-49产胞外多糖经纯化得到EPS-A、EPS-B和EPS-C 3种组分,相对分子质量分别为60 629、36 959、24 714 Da。EPS-A主要含有甘露糖和葡萄糖,EPS-B主要含有甘露糖和半乳糖,EPS-C主要含有葡萄糖和半乳糖。体外功能活性研究表明,此3种胞外多糖对致病菌生物被膜均表现出较好的抑制活性;EPS-C的抗氧化能力以及对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性均高于其他组分,原因可能与其分子质量及所含官能团有关。研究结果对乳酸菌胞外多糖的综合开发利用具有积极意义。