ERK信号通路对钛合金诱导成骨细胞RANKL、OPG表达的作用

目的 探讨钛合金颗粒对体外培养的小鼠成骨细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)及骨保护素(OPG)基因表达和蛋白分泌的影响,以及细胞外信号调控激酶1/2(ERK1/2)信号通路在其中的作用.方法 体外培养成骨细胞.实验分3组:对照组(A组);钛合金组(B组):给予浓度为0.1 g/L钛合金颗粒干预;抑制剂组(C组):给予钛合金颗粒+ERK信号通路抑制剂PD98059,每组6个样本.采用RT-PCR和ELISA法分别检测成骨细胞RANKL、OPG基因和蛋白表达.结果 3组各个时间点均可见RANKL、OPG的表达;但B组RANKL、OPG mRNA的表达和蛋白分泌量以及RANKL/OPG比值显著高于A组(P<0.01);而C组RANKL、OPG mRNA的表达和蛋白分泌水平以及RANKL/OPG比值的增幅显著小于B组(P<0.01).结论 钛合金颗粒可刺激成骨细胞RANKL mRNA、OPG mRNA的表达并促进RANKL、OPG蛋白的分泌,增加RANKL/OPG比值;ERK信号通路抑制剂PD98059可一定程度抑制RANKL和OPG的表达,降低RANKL/OPG比值,对减少假体周围骨溶解的发生可能起重要作用.     

黄芪激活ERK1/2信号转导通路抗心肌细胞再灌注损伤作用

目的研究黄芪注射液调节ERK1/2信号转导通路抗培养乳鼠心肌细胞再灌注损伤的作用。方法采用培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧模型,实验分为五组：A组为正常对照组,B、C、D、E组均为缺氧/复氧组,其中各组培养液组成为：B组缺氧液,C组缺氧液加黄芪,D组缺氧液加PD98059,E组缺氧液加黄芪和PD98059。缺氧4h,复氧2 h。比较缺氧/复氧前后培养液中心肌酶含量,并进行心肌细胞外信号调节激酶（ERK）蛋白表达检测。结果缺氧/复氧后对各组细胞培养液中心肌酶含量进行比较,结果显示各缺氧组与正常对照组比较,心肌谷草转氨酶（GOT）,乳酸脱氢酶（LDH）,肌酸激酶（CK）均有升高（P〈0.05）。黄芪缺氧组与缺氧对照组比较,GOT升高减轻（P〈0.05）。ERK抑制剂PD98059对黄芪的保护作用有一定削弱,但没有统计学意义。黄芪可使缺氧/复氧引起的心肌细胞ERK表达增加,PD98059对黄芪引起的ERK表达增加没有明显抑制作用。结论黄芪能够减轻缺血再灌注损伤,其机制涉及了ERK1/2信号途径。     

松果菊苷通过激活ERK/BMP-2信号通路促进大鼠的成骨细胞增殖观察

目的：考察松果菊苷对大鼠成骨细胞增殖的影响及作用机制。方法将不同浓度的松果菊苷（0.01,0.1,1.0,10.0,100 nmol/L）及MAPK/ERK信号通路抑制剂PD98059（20μmol/L）与成骨细胞共培养12,24,36,48,60 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况。酶联免疫吸附法（ELISA）和qRT-PCR法检测细胞上清中和成骨细胞中骨钙素（BGP）和骨形态发生蛋白（BMP-2）的表达水平。Western blotting检测成骨细胞中Smad4、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表达水平。结果松果菊苷能够促进大鼠成骨细胞的增殖,而且能诱导ERK 的磷酸化从而激活 MAPK/ERK 信号通路,并提高成骨细胞中 BMP-2和 Smad4的表达而激活BMP/Smad信号通路。加入PD98059后,松果菊苷诱导的BMP-2和Smad4表达及成骨细胞增殖均受到抑制。结论松果菊苷可通过激活ERK/BMP-2信号通路促进大鼠的成骨细胞增殖。     

PDGF对哮喘大鼠气道平滑肌细胞中ERK通路的影响研究

目的：研究血小板源性生长因子（PDGF）对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）中ERK信号通路的调控作用。方法建立哮喘大鼠模型,原代分离培养ASMC,设未干预组（A组）、ERK阻断剂组（B组）、PDGF组（C组）和PDGF＋ERK阻断剂组（D组）。A组不加干预;B组又分为B1、B2、B3、B4组,分别加入浓度为0.1、1、5、10μmol/L的ERK阻断剂U0126;C组又分为C1、C2、C3、C4组,分别加入浓度为1、10、25、50μg/L的PDGF同二聚体PDGF- BB;D组加入10μmol/L的U0126和50μg/L的PDGF- BB。以RT- PCR法检测各组ERK1和TGF-β1的mRNA表达,免疫组化法检测A、B4、C4和D组中以上蛋白的表达。结果 RT- PCR提示B1、B2、B3、B4组ERK1 mRNA表达均显著低于A组（均P＜0.01）,U0126以浓度依赖的方式抑制PDGF诱导的ASMC中ERK的活化,C1、C2、C3、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（均P＜0.01）,ERK1 mRNA的表达与PDGF- BB存在明显的浓度依赖关系,D组与A组比较无统计学差异（P＞0.05）。免疫组化提示B4组ASMC中ERK1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）;B4组TGF-β1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组,同时C4组显著高于B4组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）。结论 PDGF可剂量依赖性激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路,同时伴随TGF-β1信号通路的活化。ERK通路参与了ASMC增殖的细胞内信号转导过程,PDGF可能经ERK环节促进TGF-β1通路活化。     

金属颗粒对MG63细胞骨保护素/核因子-κB受体活化因子配体表达影响的研究

目的:探讨金属钴、铬颗粒对人成骨细胞系MG63细胞骨保护素(OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达水平的影响。方法:将金属钴、铬颗粒与人成骨细胞系MG63细胞共培养,ELISA法检测细胞培养上清中OPG、RANKL水平,采用荧光定量PCR法检测OPG、RANKLmRNA表达水平。结果:培养后24、48h实验组RANKL蛋白与mRNA水平显著增加,与对照组相比差异有统计学意义;但OPG蛋白与mRNA水平虽然增加,但与对照组相比差异没有统计学意义;RANKL/OPG比值显著增加,与正常对照组相比差异有统计学意义。结论:金属钴、铬颗粒可以促进RANKL蛋白及RANKL mRNA表达,使RANKL/OPG比率增高,促进破骨细胞分化,从而使骨吸收增强。     

ERK通路在单核巨噬细胞集落刺激因子调控成纤维细胞血管内皮生长因子表达中的作用

目的研究单核巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF）对成纤维细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,初步探讨细胞外信号调节激酶（ERK）通路对此过程的调控作用。方法在对数生长期人皮肤成纤维细胞培养液中添加GMCSF和（或）ERK通路特异性抑制剂（PD98059）进行干预,实验分为空白对照组、PD98059组、GMCSF组及PD98059＋GMCSF组。收集各组细胞及培养上清液,采用RT-PCR技术和Western blotting方法分别检测各组人皮肤成纤维细胞内VEGFmRNA和蛋白表达;ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白分泌水平。结果与空白对照组和PD98059组比较,GMCSF组人皮肤成纤维细胞内VEGFmRNA和蛋白相对表达量以及细胞培养上清液中VEGF蛋白质量体积浓度明显升高（P〈0.05）;而在GMCSF＋PD98059组中,人皮肤成纤维细胞内和细胞培养上清液中相应指标表达水平均显著低于GMCSF组（P〈0.05）。结论 GMCSF可促进人皮肤成纤维细胞VEGF表达,ERK通路在此过程中发挥重要作用。     

全脑缺血再灌注后磷酸化ERK蛋白的表达及应用PD98059后对其表达的影响

目的：全脑缺血再灌注后磷酸化ERK（p-ERK）蛋白的表达与细胞凋亡的关系及应用ERK通路抑制剂PD98059后对其表达的影响，以探讨ERK通路在脑缺血再灌注损伤中的作用。方法：健康雄性SD大鼠90只，随机分为三组：缺血再灌注组（IR，n=30）：采用4-VO法建立全脑缺血再灌注模型，6min缺血后给予再灌注。假手术组（PO，n=30）：只暴露血管而不夹闭，PD98059组（PD，n=30）：缺血前20min经尾静脉注入PD98059，另两组予以生理盐水行干预。各组动物于再灌注后2h、6h、12h、24h、48h、72h处死，将脑组织切片进行HE染色、免疫组化染色和TUNEL检测。结果：HE染色结果PD组变化显著，细胞破坏更严重，于各时间点细胞形态变化较IR组更为明显；IR组p-ERK在海马CA1区锥体细胞未见表达，CA3区于再灌注后2h有弱表达，于再灌注6h达高峰后逐渐下降，至再灌注后48h未见表达，PD组表达弱于IR组（P〈0．05）；IR组中CA1区2h即有散在的凋亡细胞，24h～48h达峰值，PD组各时点于各区凋亡细胞计数多于IR组（P〈0．05）。结论：ERK信号转导通路在脑缺血再灌注中参与了缺血后神经元的保护，发挥抗凋亡作用。     

阿仑膦酸盐对成骨细胞相关基因RANKL、OPG表达的影响

目的研究阿仑膦酸盐（ALN）对体外培养小鼠成骨细胞相关基因OPG、RANKL表达的影响。方法体外培养小鼠成骨细
胞,应用碱性磷酸酶染色（ALP）检测成骨细胞ALP染色情况,免疫荧光化学检测成骨细胞RANKL、OPG表达。将第二代成骨
细胞分为A、B、C、D、E五组。A组(对照组),用DMEM培养基培养;B、C、D、E组除加入上述培养基外,加入不同浓度ALN,分别
为：B组,加入10-4mol/L ALN;C组,加入10-5mol/L ALN;D组,加入10-6mol/L ALN;E组,加入10-7mol/L ALN。培养48h后应
用Real time PCR、Western blot检测各组成骨细胞基因RANKL、OPG表达情况。结果成骨细胞ALP染色呈阳性,免疫荧光化
学检测RANKL、OPG表达阳性。Real time PCR、Western Blot检测各组OPG、RANKL mRNA及蛋白表达水平与ALN浓度密
切相关,10-4mol/L ALN时OPG、RANKL表达最低,10-7~10-5mol/L ALN时OPG、RANKL表达依次增高,10-5mol/L ALN时表达
量最高。结论ALN对小鼠成骨细胞RANKL、OPG的表达产生作用：10-4mol/L时明显抑制成骨细胞RANKL、OPG的表达;浓
度10-5、10-6、10-7mol/L ALN促进成骨细胞RANKL、OPG的表达,其中10-5mol/L ALN促进作用最强。
     

PAI-1对气道平滑肌增殖和ERK表达的影响

目的探讨纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）对气道平滑肌增殖的调控作用,以及对细胞外调节蛋白激酶（ERK）表达的影响。方法体外培养小鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）并分为7 组：空白对照组、PAI-15 μg/L组、PAI-1 10 μg/L组、PAI-1 20 μg/L 组、PAI-1 40 μg/L组、PAI-1 80 μg/L 组、PAI-1 100 μg/L组。放入37℃培养箱分别培养12、24 和48 h,采用CCK-8 检测ASMCs的A 值,计算增殖率。以增殖率最高的实验组的浓度和作用时间作为PAI-1 作用最适浓度和最适作用时间,进一步分6 组：A组（空白对照）;B 组（PAI-1 20 μg/L）;C 组（PAI-1 40 μg/L）;D 组（PAI-1 80 μg/L）;E 组（PAI-1 100 μg/L）;F 组（PAI-1 最适浓度+ERK 通道抑制剂PD98059 10 μmol/L）,用CCK-8 检测ASMCs 的增殖,Western blot检测ERK 蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测ERK mRNA 的表达。结果5～100 μg/L PAI-1 作用ASMCs 12、24 和48 h后细胞增殖率结果显示,在相同浓度下,不同时间各组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,以48 h时ASMCs增殖率最高;在相同时间下,不同浓度各组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,80μg/L PAI-1的ASMCs增殖率最高;故选取48 h为最适作用时间,80μg/L为最适浓度进行后续实验。再次分组的实验结果表明,B、C、D、E组的ERK 磷酸化水平和ERK mRNA 的相对表达量与A 组比较,差异有统计学意义P <0.05）,B、C、D、E组增高;B、C、D、E组两两比较结果显示,除B 组与E 组比较,差异无统计学意义（P >0.05）外,其余各组两两 比较,差异有统计学意义（P <0.05）,当PAI-1 浓度波动于20～80 μg/L 时,ERK 磷酸化水平和ERK mRNA相对表达量随浓度升高而增高,>80 μg/L 后则不再增高;加入PD98059 的F 组与D 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,ERK 磷酸化水平和ERK mRNA表达降低。结论外源性PAI-1 可以通过促进ERK 通路的表达,进而促进ASMCs 的增殖。     

微囊蛋白1对哮喘气道平滑肌细胞增殖的抑制机制及罗红霉素的调控作用

目的 探讨微囊蛋白1抑制气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的可能机制以及罗红霉素的调控作用.方法 复制哮喘大鼠模型,光镜观察肺组织病理学变化,透射电镜观察各组ASMCs上微囊的结构及变化,用组织贴壁法体外培养ASMCs,实验设对照组(A组:含2.5％胎牛血清的高糖培养液处理1h)、哮喘组(B组:处理同A组)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路阻断剂PD98059组(C组:10×10-6mol/L的PD98059处理1h)、罗红霉素组(D组:100 mg/L的罗红霉素处理1h)、β-甲基环糊精组(E组:5μmol/L的β甲基环糊精处理1h);用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞的增殖情况,Western印迹检测各组微囊蛋白1表达;逆转录(RT)-PCR和Western印迹分别检测ERK1/2mRNA、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA和磷酸化ERK1/2、MCP-1蛋白的表达.结果 C、D组ASMCs增殖显著低于B组(0.68±0.15、0.63 ±0.13比0.96 ±0.14,均P＜0.05);E组(1.26±0.11) ASMCs增殖强于B组(P＜0.05).C、D组微囊蛋白1表达均显著高于B组(0.332±0.057、0.392±0.064比0.237±0.032,均P＜0.05);C、D组ERK1/2蛋白表达均显著低于B组(0.241±0.017、0.268±0.007比0.346±0.009,均P＜0.01),E组(0.441±0.011) ERK1/2蛋白表达高于B组;C、D组ERK1/2 mRNA表达均显著低于B组(0.277±0.043、0.338±0.026比0.591±0.022,均P＜0.01).C、D组MCP-1蛋白表达均显著低于B组(0.198±0.015、0.286±0.019比0.482±0.026,均P＜0.01),E组(0.521±0.023) MCP-1蛋白表达较B有升高趋势;C、D组MCP-1mRNA表达均显著低于B组(0.212 ±0.042、0.249±0.032比0.676±0.053,均P＜0.01).结论 微囊蛋白1可能通过ERK信号通路抑制MCP-1表达,从而抑制哮喘ASMCs的增殖.罗红霉素可能上调微囊蛋白1的表达,抑制MCP-1 mRNA表达和翻译,进而抑制哮喘ASMCs的增殖.     

含利塞膦酸骨水泥对SD大鼠成骨细胞OPG、RANKL和OC表达的影响

目的 利用大鼠胎鼠分离提取成骨细胞,观察含15％磷酸二氢钙＋0.5％利塞膦酸骨水泥和1％利塞膦酸骨水泥对体外培养的大鼠成骨细胞OPG、RANKL和OC基因表达的作用.方法 实验分成空白对照组、15％磷酸二氢钙＋0.5％利塞膦酸骨水泥浸提液组和1％利塞膦酸骨水泥浸提液组.实验组细胞培养基中加入相对应的磷硅酸钙骨水泥的PBS浸提液,浸提液以1：7与DMEM培养基混合作为细胞培养基;空白对照组成分以无菌PBS与DMEM培养基混合作为细胞培养基,每组6个平行,培养72 h后,提取细胞总RNA,应用RT·PCR法检测细胞中OPG、RANKL和OC的mRNA表达.结果 实验组成骨细胞中OPG和OC的mRNA表达较对照组的表达明显升高,RANKL的表达明显低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 含15％磷酸二氢钙的0.5％利塞膦酸骨水泥和1％利塞膦酸骨水泥浸提液对SD大鼠胎鼠成骨细胞OPG和OC的表达具有促进作用,同时降低了RANKL的表达.     

蕨麻正丁醇提取物对急性卵巢缺血再灌注损伤大鼠肿瘤坏死因子-α的影响

目的探讨蕨麻正丁醇(Pa)提取物对卵巢缺血再灌注损伤大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法 60只Wistar大鼠随机分为对照组(C组)、缺血24 h组(I24 h组)、缺血+再灌注24 h组(R24 h组)、缺血+再灌注48 h组(R48 h组)、Pa提取物预处理+缺血再灌注24 h组(Pa+R24 h组)和Pa提取物预处理+缺血再灌注48 h组(Pa+R48 h组),每组10只。放射免疫法检测各组大鼠血清TNF-α水平;反转录聚合酶链反应、蛋白质印迹法检测各组大鼠卵巢组织中TNF-αmRNA和蛋白的表达水平。结果与C组比较,I24 h组、R24 h组、R48 h组大鼠血清TNF-α水平、卵巢组织TNF-αmRNA和蛋白水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与I24 h组比较,R24 h组、R48 h组大鼠血清TNF-α水平、卵巢组织TNF-αmRNA和蛋白表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);Pa干预后,Pa+R24 h组和Pa+R48 h组大鼠血清TNF-α水平、卵巢组织TNF-αmRNA和蛋白表达水平与R24 h组、R48 h组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TNF-α在大鼠卵巢缺血再灌注损伤过程中表达上调,用Pa提取物进行干预可降低TNF-α的表达水平。     

阿仑膦酸钠对骨质疏松大鼠骨量及微观结构的影响

目的探讨阿仑膦酸钠对骨质疏松大鼠骨量及微观结构的影响及其可能的作用机制。方法3月龄雌性SD大鼠30只,随机分为三组,每组10只：A组,假手术组;B组,模型组;C组,阿仑膦酸钠治疗组。B、C组接受双侧卵巢切除术,A组接受假手术。术后6周检测股骨骨密度确认骨质疏松造模成功,同时C组给予阿仑膦酸钠治疗（15μg／kg,2次／周）,B组给予等量生理盐水作为对照。12周后处死所有大鼠,检测左侧股骨骨密度,取左侧胫骨做硬组织切片,骨形态计量学分析松质骨骨量、微观结构,提取右侧股骨和胫骨骨髓基质干细胞体外培养,Realtime PCR检测第三代细胞RANKL表达。结果①卵巢切除术后8周,大鼠骨密度显著低于对照组。②A、C组骨密度显著高于B组,c组显著低于A组（P〈0．05）。③胫骨近端骨小梁相对体积、骨小梁厚度,A组显著高于B、C组,C组显著高于B组（P〈0．05）,A、C组破骨细胞数、骨小粱分离度、骨吸收长度比均显著低于B组（P〈0．05）。④13组RANKL表达显著高于A、C组（P〈0．05）。结论阿仑膦酸钠可通过抑制骨吸收、改善其微观结构部分阻止骨质疏松大鼠骨质量的下降,其机制可能与抑制成骨分化的骨髓基质千细胞RNAKL的表达有关。     

趋化因子FKN对人外周血单个核细胞IL-8表达的影响及ERK、PI3K和NF-κB在其中的作用

目的：通过研究趋化因子Fractalkine（FKN）对人外周血单个核细胞IL-8表达的影响,以及信号分子细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）、磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K）、核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）在其中的作用,探讨FKN促进动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的机制。方法利用密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞;将提取的单个核细胞分为：空白对照组、FKN组、PD98059（ERK阻断剂）组、LY294002（PI3K阻断剂）组、PDTC（NF-κB阻断剂）组、FKN＋PD98059组、FKN＋LY294002组、FKN＋PDTC组;分别于培养12 h和24 h后收集细胞培养上清,应用ELISA检测各组单个核细胞中IL-8的表达情况。结果（1）细胞培养12 h或24 h后,PD98059组、LY294002组和PDTC组与空白组比较,IL-8表达有减少趋势,但差异无显著性意义（P＞0.05）。（2）FKN组较空白组IL-8表达明显减少（P＜0.05）,FKN＋PD98059组和FKN＋LY294002组较FKN组IL-8表达明显增加（P＜0.05）,FKN＋PDTC组较FKN组、FKN＋PD98059组和FKN＋LY294002组IL-8表达均明显减少（P＜0.05）。（3）细胞培养24 h后,各组IL-8表达均较12 h明显减少（P＜0.05）。结论趋化因子FKN可能通过ERK、PI3K信号途径抑制单个核细胞IL-8的表达,而通过NF-κB途径促进IL-8的表达,FKN对单个核细胞IL-8的表达具有双向调节作用,但以抑制作用为主。     

内毒素对原代大鼠肝星状细胞表达结缔组织生长因子影响机制的研究

目的研究内毒素（LPS）与其刺激的Kupffer细胞（KCs）培养上清（KCCM）及NF—κB通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对大鼠原代肝星状细胞（HSCs）表达结缔组织生长因子（CTGF）的影响,探讨LPS刺激HSCs表达CTGF的机制。方法分离培养原代大鼠HSCs、KCs。培养72h的KCs经1mg／LLPS刺激48h后收集上清标记为KCCM1。未经LPS刺激的上清标记为KCCM0。将培养72h的HSCs随机分为空白对照组、KC—CM0组、LPS组、KCCM1组、PDTC组、（PDTC＋LPS）组、（PDTC＋KCCM1）组。各组HSCs经相应的处理48h后,Westernblot检测各组HSCs表达CTGF水平,ELISA检测培养上清中I型胶原含量。结果各组HSCs中CTGF蛋白表达水平为：空白对照组（1．95-±0．67）、KCCM0组（2．15±1．10）、LPS组（4．56±4．16）、KCCM1组（5．21±3．23）、PDTC组（0．06±0．02）、（PDTC＋LPS）组（0．10±0．08）、（PDTC＋KCCM1）组（2．77±4．08）。LPS与KCCM1作用于HSCs后CTGF表达增加（P〈0．05）;PDTC几乎可以完全阻断正常及LPS刺激的HSCs表达CTGF（P〈0．01）,但只能降低KCCM1组CTGF的表达（P〈0．05）：KCCM1组HSCs上清中I型胶原的含量增加（P〈0．05）。结论LPS可直接通过HSCs内的NF—κB通路使其表达CTGF水平上调,LPS刺激的KCs还可能通过其他途经使HSCs表达CTGF水平上调。     

蕨麻正丁醇提取物对卵巢缺血再灌注损伤大鼠内皮素-1的影响

目的探讨蕨麻正丁醇(Pa)对急性卵巢缺血再灌注损伤大鼠血清及卵巢组织中内皮素-1(ET-1)的影响。方法 Wistar雌性大鼠60只,随机分为6组:假手术组(C组)、缺血24 h组(I24h)、缺血再灌注24 h组(R24h组)、缺血再灌注48 h组(R48h组)、给予Pa提取物预处理+缺血再灌注24 h组(Pa+R24h组)和Pa提取物预处理+缺血再灌注48 h组(Pa+R48h组)。酶联免疫吸附试验测定法检测各组血清ET-1水平;反转录聚合酶链反应、Western blot法检测各组大鼠卵巢组织中ET-1 mRNA和蛋白的表达。结果与C组比较,I24h组、R24h组和R48h组大鼠血清ET-1水平、卵巢组织中ET-1 mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.05);与I24h组比较,R24h组、R48h组大鼠血清ET-1水平、卵巢组织中ET-1 mRNA和蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。而Pa+R24h组和Pa+R48h组大鼠血清ET-1水平、卵巢组织中ET-1 mRNA和蛋白表达与R24h组、R48h组比较显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ET-1在大鼠卵巢缺血再灌注损伤过程中表达上调,Pa提取物进行干预可降低ET-1的表达。     

辛伐他汀对大鼠成骨细胞经典Wnt信号通路相关因子表达的影响

目的观察不同浓度、不同时间辛伐他汀对体外培养的大鼠成骨细胞经典Wnt通路Wnt3a、LRP5和β-catenin的m RNA表达的影响,探讨辛伐他汀抗骨质疏松的可能机制。方法用酶消化法培养大鼠颅骨成骨细胞,采用倒置相差显微镜及碱性磷酸酶染色和茜素红染色观察和鉴定成骨细胞。用浓度分别为10^-8mol/L、10-7mol/L、10^-6mol/L和10^-5mol/L的辛伐他汀干预大鼠成骨细胞24 h、48 h和72 h,并设无辛伐他汀为对照组,采用RT-PCR检测经典Wnt信号通路Wnt3a、LRP5和β-catenin的m RNA表达情况。结果镜下观察及染色结果均显示具有成骨细胞典型特征。RT-PCR结果显示：10^-5mol/L辛伐他汀组干预24 h后较对照组Wnt3a[（2.09±0.12）vs（1.82±0.09）]、LRP5[（1.42±0.07）vs（1.29±0.07）]和β-catenin[（1.10±0.06）vs（0.95±0.06）]的m RNA表达显著增加;干预48 h和72 h后各组Wnt3a（F=37.78和96.52,P=0.000）、LRP5（F=10.32,P=0.001和F=22.02,P=0.000）的m RNA表达随着辛伐他汀浓度的增大而显著增加,β-catenin的m RNA表达较对照组显著增加（F=6.67和21.90,P〈0.05）;10^-8-10^-5mol/L辛伐他汀各组中分别干预24 h、48 h和72 h,随着干预时间延长Wnt3a和LRP5的m RNA表达均增加;干预48 h与24 h比较,β-catenin的m RNA表达差异无统计学意义[（1.08±0.09）vs（1.02±0.06）,P〉0.05],而干预72 h较24 h显著增加[（1.23±0.10）vs（1.02±0.06）,P〈0.05],且辛伐他汀浓度为10^-6mol/L和10^-5mol/L干预72 h较48 h显著增加[（1.32±0.07）vs（1.11±0.05）和（1.47±0.08）vs（1.19±0.04）,P〈0.05]。结论辛伐他汀可促进体外培养大鼠成骨细胞经典Wnt信号通路Wnt3a、LRP5和β-catenin的m RNA表达。     

白藜三醇抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用机制

目的 探讨植物雌激素白藜三醇（RV）对大鼠血管平滑肌细胞增殖的调控及可能机制.方法 用植块贴壁法体外培养大鼠血管平滑肌细胞,使用Western blotting检测各组雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）、P38、P-P38、C-myc蛋白的表达水平.实验分为6组（每组n=6）：正常对照组（NC组）,含10% 胎牛血清（FBS）的DMEM; RV干预组（RV组）,50 μmol/L RV干预24 h; 血管紧张素Ⅱ组（AngⅡ组）,1 μmol/L AngⅡ干预12 h;RV＋ AngⅡ组,1 μmol/L AngⅡ干预12 h,然后加入50 μmol/L RV干预24 h;RV＋ICI182780组,1 μmol/L ICI182780干预2 h,然后加入50 μmol/L RV干预24 h;RV＋ICI182780＋AngⅡ组,1 μmol/L ICI182780干预2 h,然后加入1 μmol/L AngⅡ干预12 h,最后加入50 μmol/L RV干预24 h.结果 各组P38蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）;ERα、ERβ蛋白的表达：RV组ERα、ERβ蛋白的表达水平较正常对照组增高（P＜0.01）,而RV＋ICI182780组与RV组比较表达降低（P＜0.01）;C-myc蛋白的表达：RV组与NC组比较表达降低（P＜0.01）,AngⅡ组与NC组比较表达增高（P＜0.01）,AngⅡ组与RV组比较表达增高（P＜0.01）,RV＋AngⅡ组与RV组比较表达增高（P＜0.01）,RV＋ICI182780＋AngⅡ组与RV＋AngⅡ组比较表达降低（P＜0.05）;P-P38蛋白的表达：RV组与NC组比较表达降低（P＜0.01）,AngⅡ组与NC组比较表达增高（P＜0.01）,AngⅡ组与RV组比较表达增高（P＜0.01）,RV＋AngⅡ组与RV组比较表达增高（P＜0.01）,RV＋ICI182780＋AngⅡ组与RV＋AngⅡ组比较表达降低（P＜0.01）.结论 白藜三醇可以抑制C-myc的表达,抑制P38的磷酸化,此作用可被ICI182780阻断,说明白藜三醇可能是通过ER进而抑制C-myc的表达和P38的磷酸化发挥抗平滑肌细胞增殖的作用.     

HO-1对氧糖剥夺海马神经元的保护作用及机制的研究

目的研究HO-1对氧糖剥夺海马神经元的影响及其机制.方法将培养7d的大鼠海马神经元随机分为4组：正常培养组（C组）、正常培养＋血晶素组（C＋H组）、氧糖剥夺组（D组）、氧糖剥夺＋血晶素组（D＋H组）.C组正常培养方法培养.C＋H组在正常培养的神经元培养液中加入血晶素使其终浓度为10μmol/L后按正常培养24h.D组神经元进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D＋H组神经元用10μmol/L血晶素处理24h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.进行神经元纯度鉴定,细胞存活率,HO-1-mRNA表达,HO-1、Apaf-1、Caspase3蛋白表达,细胞色素C和神经元凋亡的检测.结果C＋H组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于C组（P〈0.01）,Apaf-1、Caspase3、细胞色素C、神经元存活率和神经元凋亡率变化无统计学意义（P〉0.05）;D组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于C组（P〈0.01）,Apaf-1、Caspase3、细胞色素C高于C组（P〈0.01）,神经元存活率低于C组（P〈0.01）,神经元凋亡率高于C组（P〈0.01）;D＋H组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于D组（P〈0.01）,Apaf-1、Caspase3、细胞色素C低于D组（P〈0.01）,神经元存活率高于D组（P〈0.01）,神经元凋亡率低于D组（P〈0.01）.结论HO-1降低细胞色素C的释放和Apaf-1、Caspase3的表达,抑制神经元的凋亡.     

23价肺炎球菌多糖疫苗体外诱导人气道上皮细胞hBD-2表达的机制

目的探讨23价肺炎球菌多糖疫苗在体外诱导人气道上皮细胞人防御素2（human β-defensin2,hBD-2）表达的机制。方法0．5μg/ml的23价肺炎球茵多糖疫苗刺激原代人气道上皮细胞12h,电泳迁移率变动分析法（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）检测原代人气道上皮细胞中NF-KB的活性。激光扫描共聚焦显微镜技术检测原代人气道上皮细胞内钙离子浓度的变化情况。结果23价肺炎球菌多糖疫苗刺激原代人气道上皮细胞24h后．细胞内NF-KB活性增高;静息状态下人气道上皮细胞内钙离子浓度为（38．4±1．21）nmol／L,随着刺激时间的延长,钙离子的浓度逐渐上升,20、30、40min分别为（50．5±3．26）、（51±2．83）、（48±3．47）nmol／L,与对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论23价肺炎球菌多糖疫苗诱导hBD-2表达上调是通过激活NF-κB信号通路介导的,细胞内钙离子浓度增高可能是NF-κB激活的重要因素之-。