反义核酸药物抑制大鼠C6胶质瘤生长的研究

目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(AODN)作为胶质瘤辅助治疗新途径的可能性.方法：在细胞培养和大鼠皮下胶质瘤模型中给予VEGF AODN处理后,S P法检测VEGF蛋白的表达,TUNEL法和电镜技术检测瘤细胞凋亡.结果：在体外AODN可抑制C6细胞VEGF蛋白的表达,其抑制作用随AODN浓度升高而增强,对照组的浓度为1.0,2.5,5.0,10.0 μmol·L 1 AODN的VEGF阳性率分别为82.10%,73.10%,70.00%,57.85%,53.20%.体内AODN使皮下肿瘤体积缩小,瘤细胞凋亡增加,瘤内坏死区扩大;电镜表明AODN治疗组微血管基膜增厚,管径变小.结论：VEGF AODN可作为胶质瘤治疗的一种辅助手段,具有临床应用前景.     

内皮抑素基因表达产物对血管内皮细胞生长的抑制作用

目的探讨逆转录病毒介导内皮抑素基因转移的方法及其表达产物人内皮抑素对人血管内皮细胞的作用。方法以逆转录病毒为载体,转导内皮抑素基因至肺腺癌A549细胞,获得含内皮抑素基因的A549/Endo细胞。PCR方法检验外源性内皮抑素基因在宿主细胞中的整合。培养A549/Endo细胞,收集上清液。ELISA法检测上清液中内皮抑素的浓度,四唑盐比色试验(MTT)、流式细胞术(FCM)、原位细胞凋亡(TUNEL)观察该上清液对血管内皮细胞EA hy926 的抑制作用。结果PCR法证实A549/Endo细胞基因组中整合有外源性内皮抑素基因。A549/Endo细胞(1×105/ml)培养48h后,上清液中内皮抑素含量为(348±120) pg/ml,MTT法显示含内皮抑素的上清液能明显抑制EA hy926细胞的生长。FCM、TUNEL法显示内皮抑素可诱导EA hy926 凋亡。结论逆转录病毒能高效介导内皮抑素基因转移,内皮抑素基因表达产物能明显抑制人血管内皮细胞的生长,诱导其凋亡。     

重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的:观察重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织血管内皮细胞生长因子(vascular endo-thelial cell growth factor,VEGF)的表达及其作用。方法:采用弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant,CFA)诱导的佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthri-tis,AA)大鼠模型,用足容积法测量关节肿胀度;免疫组织化学法检测血管内皮细胞生长因子的表达及其对微血管密度的影响。结果:弗氏完全佐剂致炎后d 10,佐剂性关节炎大鼠出现继发性炎症,皮下注射给予不同剂量的重组人内抑素(1.25、2.5、5 mg.kg-1),连续7 d,对照组于d 10给予氨甲喋呤(Methotrexate,MTX,1.0 mg.kg-1)。重组人内抑素各剂量组能明显抑制AA大鼠的继发性足肿胀,重组人内抑素各剂量组可不同程度减少AA大鼠关节滑膜组织高表达的VEGF,还可使滑膜组织的微血管密度减少。结论:重组人内抑素可显著抑制AA大鼠滑膜组织VEGF的表达及微血管密度,该作用可能与抑制血管翳的生成及减少滑膜细胞表面VEGF的表达有关。     

外源性H2S促进大鼠恶性胶质瘤的血管新生*

目的探讨外源性硫化氢（H2S）对大鼠恶性胶质瘤内血管新生的影响。方法成年雄性SD大鼠20只,随机分成肿瘤组和肿瘤-H2S组,每组10只。2组大鼠均脑内注射C6细胞,1周后,肿瘤组腹腔注射生理盐水,肿瘤-H2S组腹腔注射外源性H2S,即硫氢化钠（NaHS）溶液。均正常饲养,3周后断头取脑。组织病理学观察瘤体结构以及瘤内微血管生成情况,免疫组化评估瘤体内CD34及基质金属蛋白酶（MMP）-2的表达情况;并计数瘤内微血管密度（MVD）。结果肿瘤组与肿瘤-H2S组大鼠脑内均可见明显的肿瘤组织;与对侧正常脑组织相比,瘤内毛细血管明显增多;肿瘤-H2S组瘤体内有更多的CD34和MMP-2表达,肿瘤-H2S组瘤内MVD明显高于肿瘤组（均P＜0.01）。结论外源性H2S能促进大鼠恶性胶质瘤内的血管新生,其机制可能与H2S促进瘤体内MMP-2的表达有关。     

榄香烯和VEGF多克隆抗体联合应用对C6胶质瘤增殖抑制作用的研究

目的：研究揽香烯和VEGF多克隆抗体联合应用对昆明小鼠皮下C6胶质瘤的抑制作用。方法：建立昆明小鼠皮下C6肢质瘤模型．将接种成瘤后的小鼠随机分成4组，每组8只，Ⅰ组给予生理盐水．Ⅱ组给予榄香烯，Ⅲ组给予VEGF多克隆抗体，Ⅳ组给予榄香烯和VEGF多克隆抗体；镜下观察肿瘤组织病理切片。流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率。结果：实验组肿瘤标本见到较多的坏死灶，其中肿瘤细胞可见较多的核破裂。对照组肿瘤标本血管数量较实验组多。血管管壁增厚。内皮细胞增生。肿瘤组织坏死程度和血管的减少量Ⅳ组多于Ⅲ组和Ⅱ组。结论：揽香烯和VEGF多克隆抗体联合应用能更好抑制肿瘤组织的生长，具协同的作用。榄香烯和VEGF多克隆抗体均可促进细胞凋亡，联合应用具有协同效应。     

脑胶质瘤手术加热化疗CT影像的病理基础探讨

目的 探讨脑胶质瘤手术加局部热化疗CT影像的病理基础。方法 回顾性分析了37例脑胶质瘤手术加局部热化疗患者的CT表现，电镜观察肿瘤细胞和微血管变化与CT密度改变间的关系；利用动物胶质瘤移植瘤进行局部热化疗，电镜观察肿瘤细胞和微血管变化。结果 CT图像呈低密度改变者，病理上表现为细胞数少，细胞间含水量增加；电镜下可见细胞电子密度也低，表现为细胞质疏松，细胞器以肿胀变性为主。CT图像呈混合密度病变者，病理上表现为细胞数多，细胞间含水量少；电镜下可见细胞电子密度相应增高，表现为细胞质含水量少，细胞器以凝集变性为主。CT随访扫描可以观察到手术后残留肿瘤组织经热化疗后肿瘤缩小、囊变乃至消失，在电镜下观察可见热化疗后C6胶质细胞变小，发生浓缩碎裂、边聚，细胞起泡，并以出芽的方式向外释放凋亡小体。肿瘤血管减少，血管外径变小，血管壁变厚，有的血管甚至只能发现完整的基膜而缺乏内皮细胞。结论随访CT扫描观察到残留肿瘤消失现象，与热化疗诱导细胞凋亡、损伤肿瘤微血管和抑制肿瘤血管再生以及直接或间接抑制肿瘤增殖等有关。     

肿瘤易感基因101的裸鼠荷瘤实验

目的探讨胃癌细胞SGC7901中高表达的肿瘤易感基因101（TSG101）对肿瘤增殖的作用及机制。方法将不同TSG101表达水平的胃癌细胞亚系接种于裸鼠体内,观察移植瘤生长状况及相关因子的表达。结果 TSG101转染组裸鼠的移植瘤体积明显高于空质粒组与未转染组（P〈0.05）。TSG101转染组瘤组织切片中血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达明显高于空质粒组和未转染组（P〈0.05）。结论 SGC7901细胞中高表达的TSG101可能通过上调VEGF的表达增强胃癌细胞增殖。     

超声辅助转基因治疗缺血性心脏病的骨髓间充质干细胞的实验研究

目的血管内皮生长因子（VEGF）基因转染骨髓间充质干细胞,探讨骨髓间充质干细胞定向分化血管内皮细胞的可行性研究。方法VEGF165基因的质粒PEGFP-C1,采用超声辅助电穿法转染骨髓间充质干细胞,转染后于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白（GFP）表达情况。结果超声辅助转染后5h可见细胞内有GFP表达,10h后出现表达高锋,持续3d左右,其后有些细胞荧光开始减退。结论VEGF基因转染骨髓间充质干细胞后,骨髓间充质干细胞内有GFP表达,提示细胞转染成功,骨髓间充质干细胞定向分化为血管内皮细胞具有可行性。     

VEGF和内皮抑素与原发性高血压病患者尿微量白蛋白的相关性

目的探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）和内皮抑素与原发性高血压病患者尿微量白蛋白（MAU）的相关性。方法采用ELISA法对80例高血压病患者无MAU组和80例高血压病患者MAU组进行血清中VEGF和内皮抑素浓度的检测,并与80例健康成人进行对照。结果MAU组血清VEGF和内皮抑素与正常对照组和无MAU组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论血管内皮细胞生长因子（VEGF）和内皮抑素与高血压病患者尿微量蛋白的升高有关。     

血管内皮生长因子165诱导人血管内皮细胞多药耐药表型

目的：研究血管内皮生长因子165（VEGF165）对血管内皮细胞药物敏感性的影响。方法：人真皮微血管内皮细胞（HDMEC）与抗癌药物和VEGF165混合培养,MTT法分析药敏变化,琼脂糖电泳检测细胞凋亡,RT-PCR、免疫印迹法分析HDMEC产生多药耐药表型的机制。结果：VEGF165体外诱导HDMEC对多种抗癌药物耐药,如表柔比星、顺铂、足叶乙甙、丝裂霉素C、长春新碱、CPT-11、泰素等,其机制与VEGF165诱导HDMEC上调表达多药耐药相关蛋白和肺耐药相关蛋以及下调表达Bax蛋白有关。结论：VEGF165诱导血管内皮细胞的多药耐药表型,提示化疗时抗癌药物的抗血管生成活性可能取决于肿瘤微环境。     

Enhancement of glucose transporter expression of brain endothelial cells by vascular endothelial growth factor derived from glioma exposed to hypoxia

Increased need for glycolysis and glucose uptake for ATP production is observed in tumor cells, particularly in cells lacking of oxygen supply. Because glucose is transported from blood to tumor, glucose molecules must be delivered across glucose transporters of the vascular endothelium and tumor cells. Here we found that glioma suffered from hypoxic insults can secrete factor(s) to regulate glucose transporter expression in brain endothelium. It was found that conditioned medium from rat C6 glioma cells under hypoxia up-regulated glucose transporter type 1 (GLUT1) expression in rat brain endothelial cells, whereas conditioned medium from C6 cells under normoxia caused no significant effect. We further investigated whether the observed potentiating effect was caused by vascular endothelial growth factor (VEGF) production from C6 cells, because secreted VEGF was markedly increased under hypoxic condition. By transfection of C6 cells with VEGF small interfering RNA, it was found that conditioned medium from transfected cells under hypoxia no longer up-regulated GLUT1 expression of endothelial cells. Moreover, the addition of VEGF-neutralizing antibody to the hypoxic conditioned medium could also exert similar inhibitory effects. Furthermore, it was found that the VEGF-induced increase of GLUT1 expression in endothelial cells was mediated by the phosphoinositide-3 kinase/Akt pathway. Our results indicate that hypoxic brain glioma may secrete VEGF to increase glucose transport across blood-brain barrier.     

血管内皮生长因子受体在胶质瘤中的表达

目的 研究人脑胶质瘤组织中血管内皮生长因子受体(KDR、Flt-1)mRNA的表达，同时分析肿瘤间质血管增生的情况，并探讨两之间的关系。方法 采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法，对49例人脑胶质瘤手术切除标本，U251等3株胶质瘤细胞、人类脐静脉内皮细胞(HUVEC)以及12例脑外伤内减压术中得到的正常脑组织检测了KDR、Flt-1 mRNA表达水平。另外，用免疫组化SP法对胶质瘤及正常脑组织的微血管密度(MVD)进行了分析。结果 胶质瘤组织中的KDR、Flt-1 mRNA表达水平明显增高，分别达59．2％、63．2％，随着病理分级的提高其表达水平有升高趋势，HUVEC及3株胶质瘤细胞亦表达水平较高。胶质瘤中的微血管密度(MVD)与胶质瘤级别有关，KDR、Flt-1 mRNA的表达同MVD呈正相关。结论 KDR、Flt-1、MVD对胶质瘤的恶性生物学行为评估有重要意义，血管内皮生长因子受体的高表达与肿瘤组织血管增生有关，在胶质瘤侵袭过程中发挥重要作用。     

重组人血管内皮抑制素对人胃癌MGC-803细胞株VEGF表达的影响

目的探讨重组人血管内皮抑制素(rhEndo)对人胃癌细胞株MGC-803血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法免疫组化法观察MGC-803细胞株VEGF的蛋白表达。rhEndo处理MGC-803后,用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白水平检测VEGF表达量的变化。结果 MGC-803细胞高表达VEGF蛋白,经rhEndo处理后VEGF mRNA和蛋白表达量明显减低(P<0.05)。结论 rhEndo能抑制MGC-803细胞中VEGF的表达。     

Prognostic role of tumor necrosis, microvessel density, vascular endothelial growth factor and hypoxia inducible factor-1alpha in patients with clear cell renal carcinoma after radical nephrectomy in a long term follow-up

Angiogenesis is a critical step in the growth, invasive progression and metastatic spread of solid tumors. We investigated the importance of tumor necrosis, and microvessel density (MVD), vascular endothelial growth factor (VEGF) and hypoxia inducible factor 1alpha (HIF-1alpha) immunohistochemical expression in a large series of clear cell renal carcinomas treated with radical nephrectomy and assessed the prognostic value of their expression in terms of patient survival at long-term followup. Fifty patients with clear cell RCC were examined. The features considered when evaluating the patients were age, tumor size and grade, intratumoral vascular and renal capsula invasion, histological necrosis, and MVD, vascular and tumoral cell VEGF, and vascular, tumoral cytoplasmic and nuclear HIF-1alpha expression on the histologic specimens. All considered parameters were correlated with patient specific survival. Mean age was 62.06 +/- 6.8 years. Median follow-up was 191.66 months; median survival was 120.86 months. Twenty-one patients developed metastases in the follow-up. Tumor necrosis, microvascular invasion and renal capsula infiltration are more likely to occur in high stage and grade RCC; cytoplasmic HIF-1alpha is highly expressed in high grade RCC. Survival is dependent upon tumor stage and grade, the presence of intratumoral vascular invasion and capsular infiltration, and tumor necrosis; MVD also resulted as being an important prognostic factor. VEGF and HIF-1alpha correlate with prognosis in high stage tumors where VEGF is the most important independent prognostic factor for cancer specific death. The histological and immunohistochemical parameters considered in our study can influence disease recurrence and survival in RCC.     

MMP-9及VEGF蛋白在胶质瘤中的表达及其临床意义

目的观察基质金属蛋白9(matrix metalloproteinase 9M MP-9)及血管内皮生长因子(vascular growth factor VEGF)蛋白在脑胶质瘤中的表达,并探讨其临床病理意义。方法利用免疫组织化学检测技术,检测63例胶质瘤组织中MMP-9及VEGF蛋白的表达,并分析其表达与病理分级之间的关系。结果①MMP-9在胶质瘤中阳性表达为76.19%,MMP-9蛋白阳性产物主要分布在胶质瘤组织的胞浆及细胞间质;低分化瘤MMP-9蛋白表达阳性率(87.87%)显著高于高分化(63.33%)(P=0.037)。②VEGF蛋白在胶质瘤中阳性表达为74.76%,VEGF蛋白阳性产物主要分布于胶质瘤组织的血管内皮细胞;低分化者VEGF蛋白表达阳性率(90.90%)显著高于低分化者(56.67%)(P=0.003)。③MMP-9及VEGF蛋白表达呈正相关。结论 MMP-9及VEGF蛋白可作为揭示胶质瘤恶性程度的指标,并在胶质瘤的浸润转移过程中发挥重要作用。     

红芪多糖对卵巢癌SKOV3细胞凋亡、生长和运动能力的影响#br# #br#

摘要：目的　探讨红芪多糖对卵巢癌SKOV3细胞凋亡、生长和运动的调控作用。方法　采用0、3、6、12.5、25、50、100、200、400、800、1 600 mg/L红芪多糖处理卵巢癌SKOV3细胞,CCK-8法筛选合适剂量,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qPCR）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、白介素-6（IL-6）mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;克隆形成实验检测细胞生长,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测血管内皮生长因子（VEGF）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）和纤维粘连蛋白（FN）表达水平。结果　选择红芪多糖剂量0、50、100和200 mg/L进行后续实验。与0 mg/L红芪多糖组相比,100 mg/L和200 mg/L红芪多糖组卵巢癌SKOV3细胞中TNF-α、iNOS和IL-6 mRNA表达水平显著下调（P＜0.05）,细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）,克隆形成率和侵袭细胞数显著降低（P＜0.05）,E-cadherin蛋白表达上调,VEGF和FN蛋白表达显著下调（P＜0.05）。结论　红芪多糖能促进卵巢癌SKOV3细胞凋亡,并抑制细胞生长和运动能力。     

血管内皮抑素与顺铂对Calu-6肺癌细胞联合作用的观察

目的:研究血管内皮抑素对人肺癌细胞的增殖抑制作用及机制,并观察其与顺铂(DDP)的联合作用。方法:经血管内皮抑素及DDP干预后,以MTT法检测其对肺癌细胞Calu-6的抑制、流式细胞术检测细胞凋亡、ELISA测定Bcl-2/Bax、sFas/sFasL的表达。结果:(1)血管内皮抑素具有抑制Calu-6细胞增殖的作用(P<0.05)并呈现时间依赖性、诱导Calu-6细胞凋亡,下调Bcl-2表达,但对Bax的表达无明显影响(P>0.05),未检测到sFas/sFasL的表达。(2)血管内皮抑素与DDP联合用药方案中,同时给药较单药DDP诱导凋亡及下调Bcl-2表达明显,序贯给药与DDP间无明显差异(P>0.05)。(3)2种血管内皮抑素(恩度、内皮抑素)的效应差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)血管内皮抑素可抑制Calu-6细胞生长、诱导其凋亡,其机制与下调Bcl-2表达有关。(2)血管内皮抑素与DDP间有增效作用,联合用药方案中以同时给药效果最著。(3)各血管内皮抑素的作用机制相似。     

川芎嗪对小鼠肺癌血管生长和VEGF表达的抑制

目的　观察川芎嗪对实体肿瘤及其血管生长的抑制作用及作用环节。方法　用C57BL小鼠接种Lewis肺癌细胞造模 ,川芎嗪注射液 5 0、10 0、2 0 0mg·kg-1·d-1腹腔注射2 1d后 ,检测肿瘤体积、重量、肺转移灶数及微血管密度 ,并用WesternBlot法和免疫组化法分析肿瘤细胞VEGF的表达。结果　川芎嗪能减少小鼠Lewis肺癌肿瘤体积、重量和肺转移灶数 ,并能降低肿瘤微血管密度 ,抑制肿瘤细胞VEGF的表达。结论　川芎嗪能抑制小鼠Lewis肺癌的生长与转移 ,其机制可能与抑制VEGF表达 ,降低肿瘤微血管密度有关。     

三氧化二砷对小鼠肝癌生物学行为的影响

目的研究三氧化二砷对HepA小鼠肝癌生长、血管生成及侵袭与转移特性的影响。方法建立皮下种植肝癌小鼠模型,用药后观察小鼠肿瘤体积变化及抑瘤率;利用免疫组织化学观察移植瘤中血管内皮生长因子（VEGF）,对移植瘤的微血管密度（MVD）进行计数。结果三氧化二砷对小鼠肝癌瘤体体积和抑瘤率均具有抑制作用;三氧化二砷能抑制肿瘤新生血管生成,降低VEGF的表达,并能降低肿瘤MVD,与未用药对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论三氧化二砷能缩小肿瘤体积、增加抑瘤率,并能降低VEGF的表达,减少微血管密度。     

咖啡酸钠诱导内皮细胞凋亡及抑制癌细胞VEGF的表达

目的研究咖啡酸钠(SCA)诱导内皮细胞凋亡以及对癌细胞表达VEGF和IV型胶原酶的影响。方法 采用流式细胞术、 DNA凝胶电泳和形态学方法检测ECV304细胞凋亡。Western blotting分析用于观察癌细胞VEGF表达。采用酶谱方法检测IV型胶原酶对底物的降解。用ELISA方法检测IV型胶原酶和相关单克隆抗体的结合。结果SCA呈时间依赖性和剂量依赖性地诱导ECV304细胞凋亡。100和250 μg·mL^-1SCA作用ECV304细胞48 h，凝胶电泳显示DNA梯带。经SCA作用的ECV304细胞形态显示核内DNA浓聚，出现凋亡小体，荧光染色检查呈现强的蓝色深染核。SCA抑制VEGF在肝癌HepG-2细胞和前列腺癌DU145细胞的表达。SCA呈剂量依赖性抑制肺癌PG细胞分泌的IV型胶原酶的降解活性；并抑制单抗3D6与IV型胶原酶的结合。结论SCA可诱导内皮细胞凋亡，并抑制癌细胞VEGF表达及IV型胶原酶的降解活性。提示SCA可影响肿瘤血管生成及其微环境。