冲调谷物制品污染菌相的调查分析

目的 了解冲调谷物制品中的微生物污染情况及主要污染菌种类,探讨传统形态学鉴定法、分子生物学鉴定法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法（matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS）鉴定微生物的适用效果。方法 以流通领域抽取的冲调谷物制品为研究对象,采用国家标准方法对其菌落总数和霉菌进行计数,分离纯化不合格产品中的污染菌,以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS）结合16S rRNA序列分析方法对污染细菌进行鉴定,以MALDI-TOF-MS方法结合传统形态学鉴定方法对污染霉菌进行鉴定。结果 110批次冲调谷物制品的菌落总数不合格率为3.6%,霉菌计数不合格率为4.5%;分离得到的159株细菌可归于28个种,芽孢杆菌属（Bacillus）细菌为优势菌群,分离频率达到71.7%;分离得到的98株霉菌可划分至25个属,青霉属（Penicillium）和曲霉属（Aspergillus）为优势菌群,分离频率分别为12.4%和7.1%。污染菌中含有克罗诺杆菌（Cronobacter）等条件致病细菌和多种常见产毒真菌,存在一定的食品安全风险。结论 冲调谷物制品的微生物污染情况较为严重,生产企业应重视生产加工过程中的微生物污染问题,相关部门应加强对冲调谷物制品的食品安全监管。MALDI-TOF-MS方法在鉴定细菌时具有较大优势;受限于真菌数据库的不足,其用于食品来源霉菌鉴定的准确率有待提高。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法检测副溶血性弧菌

目的 建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)检测副溶血性弧菌的方法.方法 从样品预处理方法、分析菌量、培养基、培养时间方面分析各因素对MA...     

广谱拮抗菌株的筛选诱变及抗菌物质分离鉴定

分离和鉴定产生广谱抗菌活性物质的菌株,并对抗菌物质分离鉴定。通过形态学、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定菌株。采用紫外线-硫酸二乙酯化学复合诱变的方法,获得抗菌能力强、遗传稳定的高产菌株。分别用甲醇提取、凝胶过滤色谱（Sephadex G-10）和半制备高效液相色谱分离纯化抗菌物质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）技术对抗菌物质鉴定。本研究从土壤中分离出67 株芽孢杆菌。其中8 株表现出较强的抗菌作用,菌株XF32表现出显著广谱抑制活性,并鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。菌株XF32对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、铜绿假单胞菌7 种病原菌具有抗菌活性,对酿酒酵母、黑曲霉、深绿木霉和尖孢镰刀菌有抗真菌活性。经诱变筛选得到突变菌株XF32-22,对金黄色葡萄球菌的抑菌活性比原始菌株显著提高,分离纯化抗菌物质,得到单一的抗菌成分。MALDI-TOF-MS分析表明抗菌物质为Fengycin系脂肽化合物。采用复合诱变技术,可以有效地提高地衣芽孢杆菌脂肽的产量。成功分离得到对多种病原细菌具有较强抑制作用的Fengycin类脂肽,同时该菌株在拮抗植物病原真菌方面也有明显效果。XF32-22菌株在食品保鲜和农业生物防治方面具有很好的应用前景。     

三七药材中微生物污染的研究

目的:对三七药材微生物污染情况进行分析和研究,探讨三七药材微生物污染的主要种类,为灭菌工艺的进一步研究提供理论支撑。 方法: 参照2015年版《中国药典》四部通则1105、1106的方法,并结合传统生化和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对纯化的菌落进行鉴定。最后,运用SPSS 18.0软件对数据进行进一步地统计和分析。 结果: 三七药材在经过100℃、30min热处理后,需氧菌总数呈现均匀性地下降,芽孢杆菌属、水生拉恩菌为三七药材污染概率较高的菌。结论: 在三七药材灭菌工艺的考察中,应该着重杀灭芽孢杆菌,为确保安全和药效,需要结合多种灭菌方法。     

克罗诺杆菌MALDI-TOF-MS数据库的建立及应用

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionisation time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）技术建立了克罗诺杆菌MALDI-TOF-MS数据库,用于该菌属内种和亚种的高通 量鉴定及菌株分型。在优化培养条件、样品处理方法及确定MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱采集参数的基础上, 将采集的8 种参考菌株蛋白质质谱数据通过Biotyper软件构建克罗诺杆菌的MALDI-TOF-MS数据库,再用相近肠杆 菌及该属分离株验证数据库的准确性。结果表明：应用建立的克罗诺杆菌的MALDI-TOF-MS数据库对135 株克罗 诺杆菌分离株进行分析,鉴定分值均不小于2.0,达到了种水平鉴定要求,通过聚类分析,可进一步分型。构建的 MALDI-TOF-MS数据库为克罗诺杆菌高通量鉴定与分型提供了一种新的手段。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法鉴定食品中金黄色葡萄球菌

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对食源性金黄色葡萄球菌的鉴定效果。方法应用MALDI-TOF MS对210株食源性金黄色葡萄球菌进行鉴定,与传统的生化鉴定结果进行比较,并用SPSS19.0软件分析鉴定结果。结果 MALDI-TOF MS将210株金黄色葡萄球菌鉴定到种、属水平分别为98.10%和1.43%,与VITEK 2鉴定方法无差异(P0.05)。结论 MALDI-TOF MS具有简便、快速、准确等优点,适用于对食源性金黄色葡萄球菌进行高通量、低成本的快速鉴定。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术分离鉴定生鲜猪肉中沙门氏菌/大肠杆菌类似菌

目的利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术鉴别生鲜猪肉中大肠杆菌和沙门氏菌的常规检验中出现的类似菌。方法在郑州市不同地区分批次采集164份生鲜猪肉样品,按照国标方法进行增菌培养,选择性培养基HE和EMB对细菌进行分离纯化。通过MALDI-TOF-MS技术对疑似菌落进行鉴定;提取被检菌株基因组DNA,根据MALDI-TOF-MS鉴定出的细菌种类,参考Gen Bank中相关菌株的已知基因序列分别设计引物,进行PCR扩增、测序和序列比对,以验证MALDI-TOF-MS鉴定结果。结果经MALDI-TOF-MS方法鉴定,从68个疑似菌株中分别检出柠檬酸杆菌(Citrobacter)6株、奇异变形杆菌(Proteobacteria)5株、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)9株、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)1株、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)3株、不动杆菌(Acinetobacter)1株。PCR结果与MALDI-TOF-MS鉴定结果完全一致。结论 MALDI-TOF-MS可用于生鲜猪肉检验过程中大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定。本次共检出6种在HE和EMB培养基上与沙门氏菌/大肠杆菌菌落特征类似的肠杆菌科其他细菌,说明在生鲜猪肉中存在着一定程度的条件致病性肠道细菌污染,因此具有一定的食品安全风险。     

榴莲冻肉中污染微生物的分离鉴定和低温存活时间研究

建立榴莲冻肉食品的污染微生物分离鉴定方法,研究该类微生物低温保存条件。污染菌经传统的生物梅里埃生化鉴定结合基质辅助激光解析电离时间飞行质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,并通过对其低温耐受性研究。鉴定结果为50株菌株中10株为粘质沙雷氏菌,8株为阴沟肠杆菌,32株为明串珠菌属,检出率(100%)高于传统生化法(76%)。它们在榴莲冻肉介质内-20℃冷冻存活耐受时间分别为4个月、8个月和超过12个月。2℃~8℃冷藏明串珠菌呈数量级增长。榴莲冻肉污染菌为粘质沙雷氏菌、阴沟肠杆菌和明串珠菌属,保存条件适合冷冻,不宜冷藏。同时验证了MALDI-TOF-MS进行食品微生物鉴定更简便、高效。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法对环境中芽孢杆菌的鉴定及溯源

目的 使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术 (matrix assisted laser desorption lionization-time of flight mass spectrometer, MALDI-TOF MS)，对芽孢杆菌进行快速鉴定和聚类分析，用于研究MALDI-TOF MS对芽孢杆菌溯源的可行性。方法 对实验菌株纯化培养后，使用甲酸提取法提取实验菌株蛋白，并使用MALDI-TOF MS，对22株环境分离菌株和1株标准菌株(CGMCC(B)1.1086)进行鉴定。进一步采集22株实验菌株的蛋白质指纹图谱，使用SARAMIS软件，对实验菌株进行聚类分析。结果 经鉴定，标准菌株(CGMCC(B)1.1086)的鉴定结果可信度为99.9%。22株环境菌均为芽孢杆菌，其中，6株菌鉴定到属水平，16株菌鉴定到种水平。在相似水平为80%的条件下，22株芽孢杆菌分为22个分支。结论 可以使用MALDI-TOF MS对芽孢杆菌进行快速鉴定与分型，对于微生物溯源有重要意义，能够满足食品检测及溯源的需求。     

发酵乳中乳酸菌的选择性计数及分离鉴定

发酵乳产品的菌种组成与活菌数的含量是产品质量的关键。该文通过选择性培养基、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)快速鉴定技术及多相鉴定技术探究3种发酵乳中乳酸菌的活菌数及种类。研究结果表明,3种发酵乳产品中,GB 4789.35对乳酸菌总数的计数结果均高于选择性培养基,M17培养基对嗜热链球菌的计数结果均高MC培养基。MALDI-TOF MS快速鉴定表明M17、MRS(含50μg/mL的万古霉素)、双歧杆菌培养基可以选择性的分离发酵乳中的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus casei)和双歧杆菌(Bifidobacterium spp.),酸化MRS培养基对德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)的选择性较差,不能在含有双歧杆菌的发酵乳中选择性分离德氏乳杆菌。进一步通过多相鉴定确定3种发酵乳产品中乳酸菌在...     

甘草、黄芪、党参中27种重金属及微量元素含量变化的研究

目的研究甘草、黄芪、党参原药材及饮片中27种重金属及微量元素的含量变化。方法样品采用湿法消解后,经电感耦合等离子体质谱法测定,并采用PASW Statistics 18.0软件进行聚类分析。结果27种重金属及微量元素线性关系良好,线性范围为0~200μg/L(r≥0.9978),检出限为0.00147~6.252 mg/kg,精密度值在0.3%~0.7%范围内,稳定性相对标准偏差值在1.6%~5.6%范围内。9批甘草、黄芪、党参原药材及饮片中27种元素树状聚类分析可以将样本分为4类。结论该方法操作简便、分析快速、灵敏度高,适用于甘草、黄芪、党参原药材和饮片中重金属及微量元素的测定。     

高效液相色谱指纹图谱法测定广西不同产地粉葛和葛根中9种特征成分

目的建立高效液相色谱指纹图谱法测定分析广西不同产地粉葛和葛根中9种特征成分的方法。方法利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)同时测定粉葛和葛根中葛根素、3’-羟基葛根素、大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、刺芒柄花素、鹰嘴豆芽素A等9种特征成分的含量,建立广西不同产地粉葛和葛根的指纹图谱,并利用相似度分析从整体上对广西粉葛和葛根药材的质量进行评价。结果测定了8批次样品中的9种特征成分的含量。粉葛样品共标定15个共有峰,指认其中7个峰,与共有模式之间的相似度均大于0.97;葛根样品共标定34个共有峰,指认其中7个峰,与共有模式之间的相似度均大于0.99。结论广西不同产地的粉葛和葛根之间所含的化学成分具有一定的共性和差异性,该方法适合用于葛根和粉葛的质量控制。     

葛根膳食纤维对小白鼠降血糖的影响

以葛根膳食纤维(DF)为原材料,以正常小白鼠空腹血糖值、四氧嘧啶所致高血糖小白鼠的血糖值和糖耐量为评价指标,分别讨论酶法制备的葛根膳食纤维(DF1)和化学法制备的葛根膳食纤维(DF2)对小白鼠血糖调节功能的影响。结果表明:灌胃DF72h血糖值比起模型对照组均有下降,但不显著(P>0.05);灌胃6d后,中高浓度DF1以及葛根渣组的小白鼠血糖值显著下降(P<0.05);灌胃17d之后,发现除了DF2,其它组动物的血糖值均有极显著的降低(P<0.01)。由此可以说明,葛根DF可预防糖尿病,治疗由四氧嘧啶所致的糖尿病,改善由四氧嘧啶所致糖尿病小白鼠的糖耐量。     

太子参化学成分及其药理作用研究进展

太子参是大宗常用中药材之一,已有100多年的临床应用历史。本文综述了太子参的化学成分及药理作用的国内外研究进展,探讨太子参的研究现状,为太子参进一步的开发利用提供一定的参考和支持。     

葛根总黄酮的提取及抗氧化特性研究

分别考察醇提法和水提法对葛根总黄酮提取率的影响,结合对鲜豆油抗氧化性能试验,醇提法提取率是水提法提取率的2倍左右,醇提物比空白样的油脂氧化诱导期延长60%左右,比水提物的氧化诱导期延长8.3%左右,结果醇提法优于水提法。利用正交试验对醇提法的提取条件进行优化,在乙醇浓度30%、料液比1∶10,80℃下回流提取90min时,葛根总黄酮提取率达4.756%。对醇提物进行定性检识和和定性检测。对葛根总黄酮进行抑制邻苯三酚自氧化试验研究。在2.5g/L时对邻苯三酚自氧化抑制率为13.98%。葛根总黄酮抗氧化作用明显,可作为抗氧化剂应用到食品工业中。     

玄参多糖对运动小鼠组织抗氧化能力的影响

为探讨服用玄参多糖对小鼠力竭运动的影响及其机制,通过建立小鼠力竭运动模型,给小鼠灌服不同剂量的玄参多糖溶液,对小鼠的部分组织的抗氧化酶活性与脂质过氧化产物(MDA)的含量测定。结果表明：玄参多糖对疲劳运动小鼠的部分组织的抗氧化酶活性有增强作用,在一定程度上抑制组织发生脂质过氧化的损害。     

葛根、菊花、茯苓复合袋泡茶的研制

将葛根、茯苓经过浸提后,经浓缩、干燥然后粉碎,与破碎的菊花、绿茶按一定的比例混合,制成袋泡茶,口感良好,兼有保健作用。     

微波辅助提取黄芩黄酮的工艺优化

目的：利用ETHOST密闭式微波消解．萃取系统优化黄芩黄酮提取工艺。方法：通过二次旋转组合试验研究了乙醇浓度、浸提温度、浸提时问和液固比对黄芩黄酮浸提率的影响。结果：建立了黄芩黄酮浸提率与各因素之间关系的数学模型;用约束复合形法确定了优化工艺参数,即乙醇浓度为47．9％、浸提温度为88．3℃,浸提时间为3．4min,液固比为25．0ml／g,此条件下黄酮的浸提率为97．52％;利用显微分析技术研究了微波对植物细胞壁的影响,发现微波对植物样品具有生物效应。结论：微波辅助浸提具有浸提效率高、选择性强,重现性好、操作简单、节省时间和安全等优点,适合于从黄芩中浸提黄酮类化合物。     

黄芪多糖提取工艺正交试验优选与含量测定

目的优化水提醇沉法提取黄芪多糖的工艺条件,并比较不同产地黄芪药材中的多糖含量。方法在单因素考察提取黄芪药材多糖条件的基础上,采用正交试验设计法,以黄芪药材多糖含量为指标,确定多糖回流提取的最佳工艺;并采用苯酚-硫酸法测定不同产地黄芪药材的多糖含量。结果建立了黄芪药材多糖的最佳提取工艺:料液比1:20;醇沉浓度70%;回流提取3次,每次50 min。收集的9个产地黄芪药材的多糖含量为63~104 mg/g。其中,山东平邑产黄芪的多糖含量相对较高,辽宁义县产黄芪多糖含量相对较低。结论优化的提取工艺提取多糖效果好,稳定可行;不同产地黄芪药材中多糖含量有一定差异。本研究为黄芪多糖的进一步研究和黄芪药材的质量评价提供了可靠的实验依据。