Notch信号通路相关基因的表达与涎腺腺样囊性癌转移的关系

目的筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的Notch信号通路基因。方法对已构建的涎腺腺样囊性癌高低转移细胞株ACC-M、ACC-2基因表达谱进行生物信息学分析,在与Notch信号通路基因进行比对后,筛选出差异基因,通过荧光实时定量PCR技术对相关基因的表达差异进行初步验证。结果涎腺腺样囊性癌的表达谱中有46个基因与Notch信号通路有关。验证发现,Notch-1,Notch-2,Notch-4,CHUK,FOXC1,FZD2,FZD3,GBP2和RUNX1在2个细胞株中的表达差别有统计学意义（P〈0．05）,同时Notch-1在发生转移的涎腺腺样囊性癌中的表达明显高于未发生转移的涎腺腺样囊性癌（P〈0．05）。结论Notch信号通路中的多个基因可能参与了涎腺腺样囊性癌的发生和发展;Notch-1的表达与涎腺腺样囊性癌的发生、转移密切相关。     

基于转录组学数据对肝细胞癌的研究

目的通过对肝细胞癌的转录组学数据进行分析,为肝细胞癌分子机制研究提供新的证据和思路。方法基于转录组学的肝细胞癌数据,通过t-检验和差异倍数筛选差异表达基因。应用差异表达基因进行基因本体学和信号通路的富集分析,以揭示肝细胞癌发生发展过程中所参与的生物过程及信号通路。结果通过差异表达基因的筛选,共鉴定出486个差异表达基因(其中包括157个上调基因和329个下调基因)。经基因本体学分析和KEGG富集分析,发现肝细胞癌的发病机制主要集中在细胞周期、细胞分裂等生物功能和视黄醇代谢、药物代谢-细胞色素P450、p53等信号通路。结论本研究对探索肝细胞癌的分子标记物和发生发展机制等研究提供了重要的参考信息。     

Med19在人胆管癌中的表达及意义

目的研究Med19基因在人胆管癌组织中的表达及其意义。方法应用免疫组化和R T-PCR检测Med19基因在胆管癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达。结果胆管癌组织中的Med19表达显著高于癌旁组织和正常组织,而癌旁组织和正常组织间Med19表达无明显差异。Med19表达高低与肿瘤分化程度相关,但在不同性别、年龄、TNM分期、淋巴结转移之间无明显差异。结论 Med19参与了胆管癌的发生、发展过程,有可能成为胆管癌的诊断指标和治疗靶点。     

长必安干预大肠癌转移的基因芯片研究

目的：探讨中药长必安抑制大肠癌转移的机制。方法：应用含227个靶基因芯片分析长必安干预后的大肠癌裸鼠转移模型的基因表达谱差异。结果：发现p47LBC、DKPZP434A2322与syn-thetase-like protein mRNA等3个基因在肠癌转移模型发生转移和未发生转移的癌组织中存在表达差异，长必安对后两个基因产生上调作用。结论：中药长必安对多个癌转移相关基因可能有调控作用。     

胆管癌的K-ras和p53基因研究进展

近年来胆管癌的发病率呈逐年上升趋势,与其他肿瘤一样,胆管癌的发生发展与癌基因和抑癌基因的改变有关,癌基因K-ras和抑癌基因p53的突变、缺失或过表达与胆管癌的发生发展密切相关。     

肺腺癌相关基因及其与代谢通路关系的研究

目的利用基因芯片技术研究肺腺癌、转移淋巴结、癌旁正常及胚胎肺组织中的基因表达差异,并利用代谢通路数据库分析这些基因与代谢通路相关性信息。方法分别抽取肺腺癌、转移淋巴结、癌旁正常和胚胎肺组织的总RNA并纯化mRNA,用逆转录的方法,将各mRNA的两种荧光Cy5和Cy3标记的cDNA链做探针,并与含有1152条人类全长基因芯片上进行杂交。用计算机处理和分析。将实验所得基因映射到（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路数据库的基因表达调控通路上,检测同一基因表达调控通路内基因的共表达趋势。结果4例肺腺癌组织和癌旁正常组织比较共表达差异基因25个;3例肺腺癌组织和转移淋巴结组织比较共表达差异基因8个;1例胚胎肺组织和癌旁正常组织比较差异表达基因316个,且与肺腺癌组织和癌旁正常组织比较16个基因有共同表达差异。在β-丙氨酸代谢通路和丁酸代谢通路中的基因与疾病组织中的基因显著相关（P〈0.05）,而与癌旁组织和淋巴结组织中的基因无关（P〉0.05）。结论肺腺癌组织与癌旁正常组织比较、肺腺癌组织和转移淋巴结组织比较均存在共表达差异基因,这些基因可能与肺腺癌的发生、发展有关。代谢通路分析结果提示,在β-丙氨酸代谢通路和丁酸代谢通路中存在着肺腺癌疾病相关的基因,且在同一通路中的基因有共表达趋势。     

c-myc基因与胆管癌关系的研究

目的:探讨c-myc基因与胆管癌的关系.方法:原位杂交方法检测c-myc mRNA在30例胆管癌中的表达,同期胰头癌切除之胆管10例做正常对照.结果:c-myc mRNA在胆管癌中的表达率为53.3%,对照组中无表达,差异极显著(P＜0.01).c-myc mRNA阳性率与胆管癌细胞分化程度、原发癌的浸润程度、淋巴结转移有关.结论:c-myc基因与胆管癌的发生、发展密切相关,有望成为与胆管癌有关的一项生物学指标.     

Survivin蛋白和mRNA在胆管癌中的表达和意义

目的检测胆管癌和癌旁胆管组织中Survivin蛋白和mRNA的表达,探讨其在胆管癌发生发展中的作用。方法应用免疫组化SP法检测48例胆管癌和其中30例癌旁胆管组织中Survivin蛋白的表达,同时应用RT-PCR技术检测这些组织标本中Survivin mRNA的表达,并与临床病理资料进行相关性分析。结果48例胆管癌组织中,Survivin蛋白阳性表达率为79.2%(38/48),在癌旁胆管组织中Survivin蛋白阳性表达率6.7%(2/30),两者比较差异有显著性意义(P<0.05)。48例胆管癌组织中,有30例Survivin mRNA的表达高于配对正常组织,胆管癌组织中Survivin mR-NA的表达水平(2.18±1.21)明显高于正常对照组织(1.01±1.03)(P<0.05)。临床病理资料的相关性分析显示,胆管癌组织中Survivin蛋白和mRNA的表达分布与临床病理特征无相关性。结论Survivin基因转录和蛋白表达可能参与胆管癌的发生发展过程,检测Survivin表达可能有助于阐明胆管癌的发生机制。     

基于线性微分方程模型和k-means聚类研究乳腺癌转移相关基因调控通路

目的通过线性微分方程模型和k-means聚类方法初步探索性研究乳腺癌转移相关基因表达调控通路和预测其生物学意义。方法选择30例伴有淋巴结转移的乳腺癌组织及其相应淋巴结转移癌组织的基因表达谱芯片的比较结果,通过线性微分方程模型和k-means聚类分析乳腺癌转移相关基因表达调控通路。结果比较伴有淋巴结转移的乳腺癌组织和其相应淋巴结转移癌组织,分析筛选了27个表达差异基因,提出GRP基因、BPAG1基因、SFRP2基因间的乳腺癌转移相关调控通路存在的假设。结论初步表明乳腺癌转移的形成是与多基因异常引起基因调控通路异常致使细胞恶性转化相关,利用多种生物信息学手段分析乳腺癌转移相关基因表达调控通路及其生物学意义具有一定的应用价值。     

肾透明细胞癌hsa-miR-193a的生物信息学分析及靶基因预测

目的：分析肾癌组织中miR-193a的表达情况,预测其靶基因,探讨其参与恶性肿瘤调控的分子机制。方法：利用癌症基因组图谱（TCGA）数据库,分析miR-193a在肾透明细胞癌组织与正常组织之间的表达差异。利用Kaplan-Meier plotter数据库,对存在差异表达miR-193a的肾透明细胞癌患者进行生存分析。采用TargetScan7.2、miRDB、PicTar和miRTarBase进行靶基因预测,利用metascape网络在线分析数据库对hsa-miR-193a-3p的靶基因集合进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。结果：miR-193a在肾透明细胞癌等多种肿瘤中表达上调,且其表达量与患者总生存时间存在显著负相关。hsa-miR-193a-3p靶基因GO功能主要包括发育过程、细胞成分组织或生物发生、生物过程的正负调节、节律过程等,KEGG信号通路主要富集在肾细胞癌、PI3K-Akt信号通路等方面。结论：hsa-miR-193a-3p可能通过调控多个靶基因参与肾透明细胞癌发生发展相关信号通路的调节,是一个非常具有研究价值的生物学靶标。     

胆管癌细胞中氧自由基对P53蛋白过度表达的影响

目的 观察胆管癌细胞内氧自由基对P53蛋白过度表达的影响。探索胆管癌细胞内氧自由基与肿瘤病因学的关系。方法 通过细胞增养,采用紫外可见分光光度仪等先进设备检测体外培养胆管癌细胞QB中氧自由基中间产物MDA含量,应用免疫组化技术,检测不同浓度的氧自由基对QB细胞P53蛋白过度表达的影响。结果 胆管癌细胞中P53蛋白过度表达呈阳性,高浓度的氧自由基可明显增加胆管癌细胞中P53蛋白的表达。结论 胆管癌细胞内氧自由基的水平可影响胆管癌细胞P53蛋白表达。     

β-catenin与cyclinD1在胆道肿瘤中的表达及临床意义

目的通过观察胆道肿瘤组织中β-连环素（β-catenin）与细胞周期素D1（cyclinD1）的表达，探讨它们和胆道肿瘤发生、预后的关系。方法应用免疫组织化学法研究33例胆囊癌，35例胆管癌中β-catenin与cyclinD1的表达特点，并结合临床资料进行统计学分析。结果10例正常的胆囊和胆管标本中β-catenin与cyclinD1均呈正常表达。而在33例胆囊癌组织中有16例（48．5％）β-caterfin的异常表达和18例（54．5％）cyclinD1的过度表达；35例胆管癌组织中存在18例（51．4％）β-catenin的异常表达和16例（45，7％）cyclinD1的过度表达。在胆道恶性肿瘤中。β-catenin的表达异常和cyclinD1的过度表达与TNM分期和／或肿瘤的分化相关，而且β-catenin的异常表达与cyclinD1的过度表达相关（P〈0．05）。结论在胆道恶性肿瘤组织中存在β-catenin的异常表达与cyclinD1的过度表达。β-catenin的异常表达与cyclinD1的过度表达之间的相关性提示，β-catenin／Wnt信号转导途径参与了胆道肿瘤的发生和发展。     

过表达miR-29b可抑制胆管癌细胞的增殖和诱导细胞凋亡

目的研究miR-29b在胆管癌中的表达情况,及其对胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响。方法Real-time PCR检测 miR-29b在胆管癌细胞QBC939与良性胆管细胞株H-69中的表达;及胆管癌组织与正常胆管组织中的表达。将对数生长期的 QBC939细胞分为3组,空白对照组,阴性对照组,miR-29b过表达组。MTT和细胞克隆形成实验分别检测过表达miR-29b对细 胞增殖和克隆形成率的影响;流式细胞术检测过表达miR-29b对细胞周期和凋亡的影响。结果miR-29b在胆管癌细胞及胆管 癌组织中表达较正常胆管细胞和组织中均显著降低（P<0.01）。miR-29b过表达组QBC939细胞的miR-29b较阴性对照组表达 明显升高（P<0.01）。在QBC939细胞中,过表达miR-29b可以显著抑制细胞的增殖和克隆形成（P<0.01和P<0.05）;过表达miR- 29b可阻滞细胞在S期（P<0.05）,并且导致细胞凋亡明显增加（P<0.01）。结论miR-29b作为一种抑癌microRNA,在胆管癌中 低表达,过表达miR-29b可以抑制胆管癌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

nm23-H1基因转染对人胆管癌细胞系QBC939体外浸润能力的影响

目的：探讨nm23-H1基因转染对人胆管癌细胞系QBC939体外浸润能力的影响。方法：将含有全长nm23-H1 cDNA的真核表达载体通过脂腩体法转染人胆管癌细胞系。结果：转染成功的QBC939细胞，其nm23-Hl基因的mRNA、蛋白表达明显增加，转染nm23-H1基因的胆管癌细胞体外浸润能力下降，穿越matrigel的细胞数明显低于亲本QBC939细胞，代表浸润能力的IV型胶原酶（MMP-9）分泌量下降。结论：nm23-Hl基因可以抑制胆管癌细胞的体外浸润能力。     

LOXL2及Snail蛋白表达水平与胆管癌患者术后生存率的关系

  目的  探讨赖氨酰氧化酶样蛋白2（LOXL2）及Snail在胆管癌（CCA）组织中的表达及其与患者临床病理特征和术后生存预后的关系。  方法  收集云南省第一人民医院2014年1月至2021年4月期间行手术切除的31例胆管癌病例及随访资料,应用免疫组织化学染色检测患者癌组织及癌旁正常组织标本中LOXL2及Snail的表达情况,分析2种蛋白表达与临床病理资料及预后的关系。  结果  肿瘤组织中LOXL2及Snail蛋白表达量均明显高于癌旁组织,且LOXL2表达与Snail表达存在着一定的正相关关系（r = 0.430,P = 0.016）,Snail表达与淋巴结转移（P = 0.025）有关,与LOXL2及Snail高表达患者比较,LOXL2及Snail低表达患者术后总生存率较高（P < 0.05）,单因素生存分析显示:Snail高表达、存在淋巴结转移与预后更差的胆管癌患者相关（P < 0.05）。Cox多因素生存分析结果表明:淋巴结转移可能是影响胆管癌患者预后的独立因素（P = 0.017）。  结论  LOXL2、Snail在胆管癌组织中表达增加,LOXL2与Snail 2种蛋白的表达密切相关,Snail的过表达可能更易出现淋巴结的转移,促进肿瘤细胞的侵袭性行为,并且淋巴结转移可能是影响胆管癌患者预后的独立因素。LOXL2及Snail过表达的患者其术后生存率相对较低。因此临床联合检测LOXL2及Snail对胆管细胞癌患者的预后判断具有重要意义。     

PTEN and PDCD4 are bona fide targets of microRNA-21 in human cholangiocarcinoma

Objective To investigate the expression profile of microRNA-21 in human cholangiocarcinoma tissues and to validate its bona fide targets in human cholangiocarcinoma cells. Methods The expression profile of microRNA-21 in human cholangiocarcinoma tissues and cholangiocarcinoma cell line, QBC939, was evaluated by using real-time PCR analysis. The bona fide targets of microRNA-21 were analyzed and confirmed by dual luciferase reporter gene assay and western blot, respectively. The expressional correlation of microRNA-21 and its targets was probed in human cholangiocarcinoma tissues by using real-time PCR, locked nucleic acid in situ hybridization (LNA-ISH), and immunohistochemistry analysis. Results Real-time PCR analysis revealed that microRNA-21 expression depicted a significant up-regulation in human cholangiocarcinoma tissues about 5.6-fold as compared to the matched normal bileduct tissues (P<0.05). The dual luciferase reporter gene assay revealed endogenous microRNA-21 in cholangiocarcinoma cell line, QBC939, inhibited the luciferase reporter activities of wild-type PTEN (P<0.01) and PDCD4 (P<0.05) and had no this effect on mutated PTEN and PDCD4. Moreover, loss of microRNA-21 function led to a significant increase of PTEN and PDCD4 protein levels in QBC939 cells. Elevated microRNA-21 levels were accompanied by marked reductions of PTEN and PDCD4 expression in the same cholangiocarcinoma tissue. Conclusion microRNA-21 expression is up-regulated in human cholangiocarcinoma and PTEN, PDCD4 are direct effectors of microRNA-21.     

胆管癌中垂体肿瘤转化基因和碱性成纤维细胞生长因子的表达及意义

目的：探讨垂体肿瘤转化基因（PTTG）和碱性成纤维细胞生长因子（b－FGF）与胆管癌发生发展的关系,进而为胆管癌的诊断以及早期治疗奠定坚实的基础。方法选择58例胆管癌组织和20例正常胆管组织（取自胆结石临床患者）,应用免疫组织化学方法对这两种组织PTTG以及b－FGF的表达水平进行检测。结果胆管癌组织的PTTG以及b－FGF的阳性表达率分别为81．03％、74．14％,高于正常胆管组织（ P＜0．05）。 PTTG与b－FGF在胆管癌组织中的表达呈正相关。结论 PTTG在胆管癌组织中的高表达诱导了多肽生长因子b－FGF的细胞外分泌与高表达,b－FGF又诱导PTTG的表达,两者的高表达与胆管癌的生物学行为密切相关;PTTG与b－FGF在胆管癌组织中的表达呈正相关,两者联合检测对胆管癌的恶性程度、治疗及预后判断具有指导意义。     

Expression of RECK Gene and MMP-9 in Hilar Cholangiocarcinoma and Its Clinical Significance

Theincidence of pri mary hilar cholangiocarci-noma has anincreasingtrend year by year.The di-agnosis and prognosis of hilar cholangiocarcinomasare poor due to its special location,invasivegrowth,difficulty of early discovery and difficultsurgical operation.At present,some scholars dis-covered a reversion-inducing-cysteine-rich proteinwith Kazal motifs(RECK),which possesses thefunctions uniquelyinhibitingthe expression and ac-tivity of matrix metalloproteinases(MMPs).Thestructure of RECKge…     

PCNA和bcl-2在金仓鼠胆管癌和胆管细胞增生中的表达

目的 建立肝内胆管癌（ICC）动物模型,观察增殖细胞核抗原（PCNA）和bcl-2在肝内胆管癌发生发展的病理过程中的表达。方法 60只6周龄雄性金仓鼠,随机分为正常对照组、单纯结扎胆总管组和二异丙醇亚硝胺（DIPN）组,分别在实验的5、10及15周分扎处死动物,观察其形态学变化。免疫组化SABC法检测胆管癌组织和胆管上皮细胞增生中PCNA和bcl-2的表达。结果 PCNA标记指数（PCNA LI）在胆管腺癌中最高（78.5%）,不典型增生（51.6%）、腺瘤样增生（50.3%0、胆管肠上皮化生（40.3%）、小胆管囊性增生（25.5%）和小胆管增生（23.6%）次之,正常胆管上皮（3.1%）最低（P＜0.01）。bcl-2在胆管组织癌变过程中的阳性表达率分别是：正常胆管上皮30％（3／10）、量管增生20％（2／10）、肠上皮化生20％（2／10）、腺瘤样增生40％（4／10）、不典型增生40％（4／10）、腺癌最高,为80％（8／10）（P＜0.05）。结论 PCNA标记指数在肝内胆管癌和胆管上皮细胞增生中明显高于正常胆管组织,提示胆管癌的发生有是从正常胆管组织到间变,再发展为胆管癌;抑制细胞凋亡的bcl-2的过表达可能是DIPN诱发的肝内胆管癌发生的重要机制。     

利用核酶技术下调人胆管癌细胞bcl-2表达水平

目的 研究切割bcl-2mRNA核酶降低人胆管癌细胞bcl-2表达水平的作用。方法 将合成的切割bcl-2 mR—NA核酶基因与真核细胞表达载体重组，并用重组后的载体转染人胆管癌细胞，通过免疫细胞化学、流式细胞仪等手段，观察转染后的胆管癌细胞bcl-2的表达水平。结果 转染切割bcl-2mRNA核酶基因的胆管癌细胞内bcl-2的表达水平较对照组明显下降；部分细胞出现自发性凋亡现象。结论 切割bcl—2mRNA核酶可明显降低胆管癌细胞内bcl-2的表达水平，并能够诱导其出现自发性凋亡。