微量血清中25-羟维生素D的柱前衍生-高效液相色谱-串联质谱法的建立及其临床应用

目的 建立微量血清中25-羟维生素D2（25-(OH)D2）和25-羟维生素D3（25-(OH)D3）的高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）,并用于临床常规检验。方法 10微升血清样本中加入同位素内标,用无水乙醇沉淀蛋白再用正己烷萃取,氮气吹干后衍生,复溶后经液相色谱分离、质谱定性定量。结果 25-(OH)D2和25-(OH)D3的线性相关系数（r）分别为0.9958和0.9937;批内精密度小于13.2%,批间精密度小于11.9%,平均加样回收率均在93.6%~109.7%之间;25-(OH)D2和25-(OH)D3的LOD分别为0.1ng/ml和0.025ng/ml,LOQ分别为1.5ng/ml和5ng/ml。在所检测的213份血样中约有6%的儿童的25-羟维生素D低于15ng/ml。结论 本法满足方法学要求,可用于微量血清中25-羟维生素D2和25-羟维生素D3的测定,对儿科临床诊断治疗有重要提示意义。     

乙酰乙酸甲酯紫外衍生—高效液相色谱法测定室内空气中的甲醛

摘要:目的　建立室内空气中甲醛的乙酰乙酸甲酯紫外衍生—高效液相色谱测定方法。方法　空气中甲醛经装于多孔玻板吸收管中的乙酰乙酸甲酯-乙酸铵缓冲液吸收,于70℃水浴反应10 min后,用C18柱分离,紫外检测器检测。色谱条件:流动相为1 ml/min的甲醇∶水（80∶20,v/v）,柱温为25℃,检测波长为373 nm。结果　甲醛在0.05～2.50 μg/ml范围内线性相关系数为0.9996,方法检出限（S/N＝3）和定量限（S/N＝10）分别为0.009 μg/ml和0.015 mg/m3,方法加标回收率为89.2%～114%,方法精密度（n＝6）为1.07%。结论　本法快速、灵敏、准确,适用于室内空气中微量甲醛的快速测定。     

液相色谱-串联质谱法检测人血清25羟维生素D_3水平及条件控制分析

目的人血清25羟维生素D3[25-(OH)D3]测定对于评价体内维生素D的水平十分重要。本文拟建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血清25-(OH)D3的方法。方法人血清样本(400μl)用纯甲醇去蛋白,离心后用正己烷进行液-液萃取。采用大气压化学离子源(APCI源),正离子多反应监测模式。色谱柱:Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(50mm×2.1mm,1.7μm);流动相:100%甲醇;流速:0.2ml/min。结果 LC-MS/MS的检出限为1.0ng/ml,25-OHD3浓度在6～120ng/ml范围内,峰面积与浓度线性关系良好(r=0.999),平均回收率为99.5%(范围:97.1%～103.4%),RSD为4.7%。分别用LC-MS/MS和放射免疫法检测53例血清样本,两种方法的平均浓度分别为23.69ng/ml和20.1ng/ml,LC-MS/MS比放射免疫法(RIA)平均高17.69%(P=0.083)。二者的相关性良好,RIA=LC-MS/MS-3.57,相关系数为0.883。结论本方法具有良好的灵敏度、准确度、精确度,易于操作,与放射免疫法相关性好,可用于测定人血清中25-(OH)D3的含量。     

血清中的维生素C含量的高效液相色谱测定法

目的建立人血清中维生素C的高效液相色谱（HPLC）检测方法。方法用偏磷酸提取样品中维生素C,应用HPLC分离,PDA二级管阵列检测器检测的定性定量分析。流动相为0.1%磷酸＋甲醇=95＋5,流速为1.0ml/min,检测波长为243nm。结果在上述色谱条件下,血清中的维生素C能良好的分离,维生素C在1～25μg/ml间呈线性相关,Y=53295.31X-30545.65,r=0.9998;方法的平均相对标准偏差为1.70%,回收率为99.95%;最低检测限为0.05μg/ml。结论该方法可快速、准确、高效地检测血清中维生素C含量。     

免疫亲和柱净化-高效液相色谱荧光检测法测定儿童血清中双酚A

摘要:目的　建立免疫亲和柱净化-高效液相色谱荧光检测法（IAC-HPLC-FL）检测儿童血清中的双酚A。方法　采用乙腈沉淀血清中蛋白,IAC纯化与浓缩血清中的双酚A,C18色谱柱分离,乙腈-水（40∶60,V/V）溶液为流动相,荧光检测。结果　1 ng/ml～50 ng/ml的浓度范围内,双酚A的浓度与峰面积成良好的线性关系（r＞0.999）,检测限为0.85 ng/ml。加标回收率为77.8%～83.7%,相对标准差为 1.12%～3.27%。56份儿童血清样品中均检出双酚A,双酚A含量为2.06 ng/ml～19. 69 ng/m,均值7.39 ng/ml,标准差为4.09 ng/ml。结论　该法灵敏度高、重复性好,能够有效地分离和检测人血清中的双酚A,适用于人血清中双酚A的测定。     

HPLC法测定血清肉碱的研究

目的:建立高效液相色谱(HPLC)测定血清中肉碱浓度的方法。方法:血清样品用乙腈、甲醇沉淀蛋白,加入肉碱衍生剂,60℃恒温水浴2h后进样10μl。色谱柱为AtlantisC18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇∶异丙醇∶乙腈(35∶45∶20,v/v),流速1.0ml/min,紫外检测波长260nm。结果:在上述色谱条件下,血清肉碱分离良好,回归方程为Y=8490X-48200,r=0.9999,线性范围为12.5~400μmol/L。最低检测浓度为12.5μmol/L。日内精密度1.6%~13.2%,日间精密度(%)1.8%~12.1%,回收率98.5%。结论:通过加入肉碱衍生剂,建立了HPLC法测定血清中肉碱浓度的方法。此法操作简单,耗时少,有良好的准确度,适用于临床检测。     

血清中雷公藤甲素的液相色谱/质谱联用法测定研究

目的:建立一种新型、灵敏、准确的人血清中雷公藤甲素的液相色谱/质谱联用测定方法。方法:血清经醋酸乙酯提取后,在Waters C18反相色谱柱(150 mm×3.9 mm i.d.,5μm)上,以醋酸-醋酸铵溶液(5 mmol/L)/乙腈/甲醇(60:30:10,v/v/v)为流动相,以泼尼松龙为内标,采用大气压化学电离(APCI)离子化方式在选择离子监测(SIM)模式下进行检测,定量检测离子为m/z[M-H]-359.1。结果:血清中雷公藤甲素测定的日内与日间精密度分别小于10.7%和11.3%,其在1.0～200.0 ng/ml范围具有良好的线性,检出限为1.0 ng/ml。结论:本方法可用于血清中痕量雷公藤甲素残留的测定。     

黄体酮阴道环中有关物质检测的方法学研究

目的:建立黄体酮阴道环中有关物质的高效液相色谱(HPLC)检测方法并进行方法学研究。方法:在强酸、强碱、高温、氧化剂、强光照等条件下,对注塑成型法制备的黄体酮阴道环进行破坏试验。利用HPLC法考察阴道环的稳定性、精密度、检测限等。HPLC检测条件为色谱柱Diamonsil C8(250mm×4.6mm,5μm);流动相甲醇-乙腈-水(31:35:34,v/v);检测波长241nm;流速1.5ml/min;进样量10μl;柱温30℃。结果:黄体酮阴道环主成分与相关杂质及降解产物均分离良好,空白辅料对测定无干扰;检测限为0.5ng/ml;相对标准偏差(RSD)1.9%。结论:所建立的黄体酮阴道环中有关物质的测定方法操作简单、专属性强、重复性好。     

反相高效液相色谱法测定佛手散醇提物中川芎嗪、阿魏酸的方法学建立

目的:建立佛手散乙醇提取物中的川芎嗪、阿魏酸方法学,为该方有效部位的药效学研究提供依据。方法:采用高效液相色谱法测定,川芎嗪及阿魏酸色谱条件分别为:甲醇-水-冰醋酸(35∶65∶0.5,v∶v∶v),柱温:25℃,检测波长:290 nm;甲醇-水-冰醋酸(27∶73∶0.5,v∶v∶v),柱温:30℃,检测波长:320 nm;计算两者方法回收率,考察精密度并进行重现性、稳定性实验。结果:川芎嗪在2μg/ml～64μg/ml线性范围内呈良好线性关系(r=0.9996),RSD为3.75%;阿魏酸在0.08μg/ml～2.56μg/ml线性范围内,线性范围内呈良好线性关系(r=0.9997),RSD为4.57%。结论:RP-HPLC对佛手散醇提物中川芎嗪、阿魏酸的测定专一性强,灵敏度高,样品较稳定,精密度和回收率好,操作简便易行,方法可靠。     

食品包装纸中双三嗪氨基二苯乙烯荧光增白剂的超高效液相色谱-荧光检测法

目的 建立食品包装纸11种双三嗪氨基二苯乙烯（DSD - FWAs）荧光增白剂的超高效液相色谱 - 荧光检测方法。方法 样品的荧光增白剂经乙腈 - 水（40:60,v/v)提取,脱脂离心后,直接进样分析,用Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱分离,乙腈 - 甲醇（2∶3,V/V）作流动相A,25mmolTBA甲醇 - 水（5∶95,V/V）作流动相B进行梯度洗脱,用超高效液相色谱 - FLD检测器测定。结果 11种DSD - FWAs荧光增白剂线性范围为0.0～0.20 μg/ml,检出限范围为0.30～0.65 ng/ml,相对标准偏差为0.88%～1.92%,回收率为91.8%～94.4%。结论 方法操作简单,快速灵敏,线性范围宽,适用于食品包装用纸中11种DSD - FWAs荧光增白剂的检测。     

高效液相色谱法同时测定保健食品中6种脂溶性维生素

目的建立不同剂型保健食品中维生素A、维生素A乙酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E乙酸酯和β-胡萝卜素的液相色谱检测方法。方法油状试样经乙酸乙酯提取,片剂和颗粒状样品试样经酶解后石油醚I提取,经高效液相色谱C18柱分离,甲醇-乙腈-水作为流动相,梯度洗脱,柱温箱为35℃,二极管阵列检测器检测,外标法定量。结果方法的线性关系良好,相关系数(r)均>0.999;检出限为0.05 mg/kg^2.00 mg/kg,定量限为2.5 mg/kg^100 mg/kg。相对标准偏差在1.2%~8.3%,回收率在83.7%~103%,稳定性满足实验要求。结论本方法通过改变样品的前处理方法,实现不同保健食品中6种脂溶性维生素的提取和净化,只测定维生素原形,无需皂化。该法适用于保健食品中脂溶性维生素的快速检测,方法简便、准确、重现性好。     

食品、多维片和饮料中12种维生素的高效液相色谱法同时测定

目的建立食品、多维片和饮料中水溶性维生素C、B1,B2,B6,B12,烟酸、烟酰胺、叶酸和脂溶性维生素A、D3、E、K1的反相高效液相色谱同时测定方法。方法样品中水溶性维生素经0.01mol/LHCl超声提取,脂溶性维生素经皂化法提取。饮品直接过滤后测定。色谱条件:色谱柱为C18柱,流动相为0.05mol/LKH2PO4溶液(pH6.0)-甲醇,梯度洗脱流速1.1~1.5ml/min;柱温40℃。结果 12种维生素标准曲线的线性范围:VC为0～5μg,烟酸为0～0.5μg,其余均为0～1μg;相关系数均大于0.996;相对标准偏差均小于5.0%;方法检出限为0.073～0.193μg/ml;加标回收率为75.5%～118.0%。结论所建立的方法快速、简便、灵敏、准确,应用于复合维生素片、米粉、饮料中12种维生素的同时分析,取得了较好结果。     

超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定血清中维生素A和维生素E

目的建立一种超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定血清中维生素A(视黄醇)和4种具有活性的维生素E(α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚)含量的方法。方法血样经甲醇沉淀蛋白后,用正己烷萃取,吹干后用甲醇复溶,使用C30色谱柱(3 mm×150 mm, 2.6μm)分离,以0.1%甲酸甲醇和0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸铵水溶液作为流动相,等度洗脱分离。质谱采用正离子模式,多反应监测模式进行检测,用内标法定量。结果维生素A和4种维生素E在42 min内分离且能够区分β-生育酚和γ-生育酚。视黄醇在0.0050~2.5μg/mL、α-生育酚在0.036~20μg/mL、β-生育酚在0.042~8.0μg/mL、其余检测物在0.020~10μg/mL浓度范围内线性关系良好。方法检出限为5.76~31.6 ng/mL。加标回收率在84.4%~118.6%之间,相对标准偏差为1.22%~8.50%(n=6)。结论该方法准确、灵敏度高、前处理简单,能够检测血清中维生素A和4种活性维生素E。     

Multinutrient-Fortified Juices Improve Vitamin D and Vitamin E Status in Children: A Randomized Controlled Trial

BackgroundProvision of fortified juices may provide a convenient method to maintain and increase blood fat-soluble vitamins.ObjectiveTo determine whether children consuming orange juice fortified with calcium and combinations of vitamins D, E, and A could increase serum 25-hydroxyvitamin D [25(OH)D], α-tocopherol, and retinol levels.DesignA 12-week randomized, double-blind, controlled trial.Participants/settingOne hundred eighty participants (aged 8.04±1.42 years) were recruited at Tufts (n=70) and Boston University (n=110) during 2005-2006. Of those recruited, 176 children were randomized into three groups: CaD (700 mg calcium+200 IU vitamin D), CaDEA (700 mg calcium+200 IU vitamin D+12 IU vitamin E+2,000 IU vitamin A as beta carotene), or Ca (700 mg calcium). Children consumed two 240-mL glasses of CaD, CaDEA, or Ca fortified orange juice daily for 12 weeks.Main outcome measuresSerum 25(OH)D, α-tocopherol, and retinol concentrations.Statistical analysesChanges in 25(OH)D, α-tocopherol, retinol, and parathyroid hormone concentrations were examined. Covariates included sex, age, race/ethnicity, body mass index, and baseline 25(OH)D, α-tocopherol, retinol, or parathyroid hormone levels. Multivariate models and repeated measures analysis of variance tested for group differences with pre–post measures (n=141).ResultsBaseline 25(OH)D was 68.4±27.7 nmol/L (27.4±11.10 ng/mL) ), with 21.7% of participants having inadequate 25(OH)D (<50 nmol/L [20.03 ng/mL]). The CaD group's 25(OH)D increase was greater than that of the Ca group (12.7 nmol/L [5.09 ng/mL], 95% CI 1.3 to 24.1; P=0.029). The CaDEA group's increase in α-tocopherol concentration was greater than that in the Ca or CaD groups (3.79 μmol/L [0.16 μg/mL], 95% CI 2.5 to 5.1 and 3.09 μmol/L [0.13 μg/mL], 95% CI −1.8 to 4.3), respectively (P<0.0001). Retinol levels did not change, and body weight remained as expected for growth.ConclusionsDaily consumption of orange juice providing 200 IU vitamin D and 12 IU vitamin E increased 25(OH)D and α-tocopherol concentrations in young children within 12 weeks.     

化妆品中维生素D_2、维生素D_3的高效液相色谱测定

目的建立化妆品中维生素D2、维生素D3的高效液相色谱检测方法,用于监测化妆品中维生素D2、维生素D3的使用情况。方法通过考察不同型号液相色谱柱、不同类型流动相及配比,确定了最佳色谱条件,并进行了线性范围、检出限、精密度、准确度试验。结果在AlltimaC18(250mm×4.6mmI.D.,5μμm)色谱柱;流动相为甲醇∶乙腈=90∶10;流速为1.0ml/min;检测波长为265nm;柱温为25℃时,维生素D2、维生素D3在0.5~100mg/L浓度范围内具有良好的线性关系,检出限分别为0.12mg/L和0.06mg/L;不同浓度维生素D2、维生素D3的变异系数分别小于3.8%和3.5%;加标量为20μg/g时,维生素D2、维生素D3的加标回收率分别在94.2%~101.4%和91.6%~97.2%之间。结论该方法具有操作简便、准确、快速等特点,适于同时测定化妆品中的维生素D2、维生素D3。     

反相离子对高效液相色谱法同时测定维生素B_1、B_2和菸酸含量

本文报告反相离子对高效液相色谱法(HPLC)同时测定强化混合蛋白质中的维生素B_1、B_2和菸酸。色谱柱为C_(18),流动相是庚烷磺酸盐液与甲醇(60∶40V/V),以紫外254nm检测。B_1、B_2和菸酸的最小检出量分别为15,5和6ng。样品分析CV％为4.71,2.6和5.86;回收率为92.21,90.25和92.33％,试样中其他成份对分析干扰很小,是一种筒单,快速,灵敏和精密度较好的测定方法,可作力强化食品和维生素制剂中B_1,B_2和菸酸分析用。     

Essential fatty acid sufficiency does not preclude fat-soluble-vitamin deficiency in short-bowel syndrome

Patients with extensive small-bowel resection may experience malabsorption and nutrient deficiencies. We evaluated the ability to absorb fat and fat-soluble vitamins in a short-gut patient. For 18 wk after stopping intravenous lipid, while consuming a low-lactose, low-fat diet, he exhibited no clinical manifestations of essential fatty acid deficiency (EFAD). Serum 20:4n-6 (20:4 omega-6) and 18:2n-6 fatty acid concentrations were normal, whereas the concentration of 20:3n-9 remained less than or equal to 0.1% of total serum fatty acids. Although serum vitamin A was normal, beta-carotene was undetectable despite oral supplementation. Prothrombin time was elevated until parenteral vitamin K was given. This patient has fat absorption adequate to prevent EFAD but inadequate absorption of fat-soluble vitamins. In patients with short bowel, the requirements for parenteral lipids and fat-soluble vitamins should be determined independently.     

化妆品中维生素D2、维生素D3的高效液相色谱测定

目的建立化妆品中维生素D2、维生素D3的高效液相色谱检测方法,用于监测化妆品中维生素D2、维生素D3的使用情况.方法通过考察不同型号液相色谱柱、不同类型流动相及配比,确定了最佳色谱条件,并进行了线性范围、检出限、精密度、准确度试验.结果在Alltima C18(250mm×4.6mm I.D.,5μμm)色谱柱;流动相为甲醇乙腈=9010;流速为1.0 ml/min;检测波长为265nm;柱温为25℃时,维生素D2、维生素D3在0.5～100mg/L浓度范围内具有良好的线性关系,检出限分别为0.12mg/L和0.06mg/L;不同浓度维生素D2、维生素D3的变异系数分别小于3.8%和3.5%;加标量为20μg/g时,维生素D2、维生素D3的加标回收率分别在94.2%～101.4%和91.6%～97.2%之间.结论该方法具有操作简便、准确、快速等特点,适于同时测定化妆品中的维生素d2、维生素D3.     

妊娠期妇女脂溶性维生素水平对子痫前期的预测价值

目的探讨脂溶性维生素对妊娠期妇女子痫前期的预测价值。方法选取2017年7月-2018年11月在该院进行产前检查的妊娠期妇女189例,其中子痫前期82例(子痫前期组),妊娠期高血压疾病107例(妊娠期高血压疾病组),另选取同期的正常妊娠妇女205例(正常妊娠组)。采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定所有研究对象血清维生素A、1,25-(OH)2D3、维生素E和维生素K1的水平,比较3组上述指标的差异。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价脂溶性维生素对子痫前期的预测价值。结果 3组间妇女年龄、体质指数(BMI)、孕周、妊娠次数比较,差异均无统计学意义(均P>0. 05)。与正常妊娠组相比,妊娠期高血压疾病组和子痫前期组维生素E和维生素K1水平明显升高(均P<0. 05),妊娠期高血压疾病组和子痫前期组上述指标比较,差异均无统计学意义(均P>0. 05)。3组间维生素A和1,25-(OH)2D3水平比较,差异均无统计学意义(均P>0. 05)。维生素A、1,25-(OH)2D3、维生素E、维生素K1预测子痫前期ROC曲线下面积分别是0. 527、0. 523、0. 563和0. 618,相应的诊断临界值分别为479. 11μg/ml (灵敏度为87. 71%,特异度为30. 77%)、12. 68 ng/ml(灵敏度为20. 73%,特异度为88. 78%)、10. 46μg/ml (灵敏度为59. 76%,特异度为53. 85%)和0. 58 ng/ml (灵敏度为76. 83%,特异度为48. 29%)。结论妊娠期妇女脂溶性维生素水平尚不能用于预测子痫前期的发病。     

正相高效液相色谱检测人血清中生育酚异构体

目的:建立人血清中生育酚异构体检测方法。方法:取血清400μl,乙醇去蛋白后,正己烷-乙酸乙酯萃取,正己烷定容,进样50μl,以正己烷-叔丁基甲醚(93:7)为流动相,流速为1.5ml/min,在Inertsilsilica100-A,3μm,4.6mm×250mm硅胶柱中分离,激发波长295nm,发射波长330nm下检测定量。结果:四种生育酚异构体最低检测限分别为1.0、1.0、0.5、0.5ng/ml,在5ng/ml￣5μg/ml范围内线性良好,相关系数大于0.999,变异系数<5%,回收率在95%￣105%之间。结论:该方法分离度佳,定量准确,能满足人体血清生育酚检测需要,适于科研和临床应用。