肾癌组织中PCDHIO基因甲基化状态的检测及临床意义的研究

目的：检测PCDH10基因在肾癌组织中的甲基化状态,并分析其临床意义。方法应用甲基化特异性PCR（MSP）技术检测PCDH10基因在5株肾癌细胞系和47例肾癌组织样本中的甲基化情况,同时分析47例患者的临床资料及病理信息,进行统计研究。结果5株肾癌细胞系中有2株检出PCDH10基因甲基化,比率为40%;47例肾癌样本中有31例检出PCDH10基因甲基化,比率为66.0%,6例癌旁组织中有1例检出PCDH10基因甲基化,比率为16.7%。PCDH10基因出现甲基化的患者与未出现甲基化的患者相比,二者在性别、年龄、肿瘤部位、大小、病理核分级等指标的差异无统计学意义（P＞0.05）,但在Ⅰ期肾癌与Ⅱ～Ⅲ期肾癌之间PCDH10基因甲基化率的差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 PCDH10基因在肾癌组织中甲基化程度较高,高分期的肾癌可能具有更高的PCDH10基因甲基化率,提示PCDH10基因甲基化可能与肾癌的发生发展有关。     

人原发性肺癌组织中TSLC1基因甲基化检测及意义

目的探讨TSLC1基因启动子区甲基化状态与人原发性肺癌发生发展之间的关系方法采用甲基化特异性聚合酶链技术(MSP),对53例人原发性肺癌组织(肺癌组)、24例肺良性病变组织(良性病变组)、15例癌旁组织(癌旁组)及11例支气管鳞状化生组织进行TSLC1基因5’-CpG岛甲基化状态检测。结果肺癌组、癌旁组和肺良性病变组的TSLC1基因甲基化率分别为35.8%(19/53)、13.3%(2/15)、0.0%(0/24),三组相比差异有统计学意义(P<0.05);支气管鳞状化生组织的甲基化阳性率为18.2%(2/11)。TSLC1基因甲基化率肺癌吸烟者与非吸烟者差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TSLC1基因启动子区甲基化与肺癌的发生关系密切,可能出现在肺癌发生的早期阶段。     

肾细胞癌患者组织中RASSF1A、hMLH1及ALU甲基化水平的分析

目的探讨错配修复基因(h MLH1)、RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)启动子区甲基化以及ALU基因甲基化水平与肾细胞癌(肾癌)的关系。方法巢式甲基化特异性PCR(n MSP)检测15例肾癌组织及其相应癌旁组织中h MLH1、RASSF1A基因启动子区的甲基化状态,联合亚硫酸氢钠限制酶分析方法(COBRA)分析ALU基因甲基化水平。结果 h MLH1基因在肾癌组织中的甲基化率(0.41±0.18)%高于癌旁组织(0.32±0.13)%,差异有统计学意义(t=2.52,P0.05);ALU基因在癌组织中的甲基化率(0.11±0.04)%低于癌旁组织(0.12±0.03)%,差异有统计学意义(t=3.82,P0.05)。而RASSF1A基因在肾癌组织和癌旁组织中的甲基化率分别为(0.75±0.11)%和(0.69±0.12)%,差异无统计学意义(t=1.35,P0.05)。结论 h MLH1基因启动子区甲基化以及ALU基因甲基化可能与肾癌的发病有关,RASSF1A基因启动子区甲基化与肾癌发病无关。     

肺癌患者癌组织和血浆p16基因甲基化的检测及其临床意义

目的研究非小细胞肺癌患者癌组织和血浆p16基因甲基化及其临床意义。方法选择120例非小细胞肺癌患者,用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测其肺癌组织、癌旁正常组织和外周血血浆p16基因的甲基化,并对120例正常对照组血浆样品进行p16基因甲基化检测,各组检测结果进行比较。结果肺癌组织p16基因甲基化率44.2%,高于癌旁组织的11.7%(P0.01);非小细胞肺癌患者血浆样品中p16基因甲基化检测率为32.5%,对照组血浆未检测到p16基因甲基化(P0.01);肺癌患者血浆样品与癌组织p16基因甲基化检出率比较差异无显著性(P0.05);患者血浆样品与癌旁组织p16基因甲基化检出率比较差异有显著性(P0.01)。结论肺癌患者癌组织和血浆样本p16基因甲基化的检测都为肺癌的早期筛查和诊断提供了有价值的参考信息。     

死亡相关蛋白激酶1基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义

目的研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测宫颈癌癌组织和癌旁正常组织中DAPK1基因启动子甲基化,比较在二者间的差异及其与临床病理因素之间的关系。结果宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率为62.5%,癌旁组织中甲基化率为5.0%,宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率显著高于宫颈癌癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌癌组织DAPK1基因启动子甲基化率在组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、器官转移、FIGO分期中的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DAPK1基因启动子在宫颈癌中呈高甲基化状态,可作为宫颈癌的病情和预后评估的生物学标志物。     

肾细胞癌中Wif-1基因的甲基化状态及表达

目的检测肾细胞癌(RCC)中Wnt抑制因子-1(Wif-1)基因的甲基化状态及表达水平,探讨其在肾细胞癌发生发展中的可能机制。方法分别应用甲基化特异性PCR(MSP)和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测56例肾细胞癌及相应癌旁正常肾组织中Wif-1基因的甲基化状态及表达水平。结果 Wif-1基因在RCC组织中的甲基化率显著高于相应癌旁正常肾组织(P<0.05)。Wif-1基因在RCC组织中的相对表达量显著低于相应癌旁正常肾组织(P<0.05)。在RCC组织中,Wif-1基因甲基化阳性组mRNA的相对表达量与甲基化阴性组mRNA的相对表达量比较无显著差异(P>0.05)。结论 Wif-1基因启动子区的高甲基化在肾细胞癌的发生中是一个频发事件。     

胃镜活检组织RASSF1基因启动子甲基化检测及其临床意义分析

目的：探讨胃镜活检组织RAS相关结构域蛋白1（RASSF1）基因启动子甲基化水平及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测胃癌患者胃镜活检癌组织、癌旁组织及健康者正常胃组织RASSF1基因启动子甲基化状态,并比较其差异;分析胃癌患者RASSF1基因启动子甲基化与不同临床病理因素的关系。结果胃癌患者癌组织RASSF1基因启动子甲基化率为62．7％,癌旁组织甲基化率为4．0％,健康者正常胃组织甲基化率为2．7％,癌组织RASSF1基因启动子甲基化率高于癌旁组织和正常胃组织（P＜0．05）。胃癌患者癌组织RASSF1基因启动子甲基化率在不同性别、年龄、病变部位及幽门螺杆菌感染患者间比较差异无统计学意义（P＞0．05）,在不同分化程度、肿瘤最大径、淋巴结转移、远处转移和 TNM 分期患者间,比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论胃癌患者胃镜活检癌组织RASSF1基因启动子甲基化率高于癌旁组织和正常胃组织,且甲基化率与癌组织分化程度、肿瘤最大径、淋巴结转移、远处转移和TNM分期有关,可反映胃癌患者的病情及预后。     

CDH1基因甲基化与食管鳞癌的关系

目的 探对食管鳞癌组织中CDH1基因启动子区甲基化的表达状况及其与烟酒史、肿瘤家族史的关系.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测食管鳞癌中CDH1基因启动子区甲基化情况.结果 食管鳞癌、癌旁及正常组织CDH1基因的甲基化阳性率分别为51.6％(32/62)、22.6％(14/62)和0(0/18).癌与癌旁组织比较,甲基化阳性率差异有统计学意义(P＜0.01);癌和正常组织比较,甲基化阳性率差异有统计学意义(x2=15.484,P＜0.01);癌旁与正常组织间差异无统计学意义(x2 =3.487,P＞0.05).食管鳞癌CDH1基因甲基化情况与其性别、年龄、烟酒史和上消化道肿瘤家族史比较差异均无统计学意义(均P ＞0.05).结论 CDH1基因启动子区甲基化与食管鳞癌发生关系密切,在食管鳞癌中是一常见的表观遗传学事件.CDH1基因甲基化可能是一个独立的危险因素.     

非小细胞肺癌p16基因甲基化及其临床诊断意义

目的 研究非小细胞肺癌癌组织p16基因甲基化及其临床诊断意义.方法 选择47例非小细胞肺癌患者,用MSP技术检测肺癌组织和癌旁正常组织p16基因甲基化.结果 肺癌组织p16基因甲基化率44.7%,高于癌旁组织的17.0%(P＜0.01);肺癌组织甲基化检出率与临床分期、临床病理分型和临床分类之间差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 提示肺癌有关组织或样本的p16基因甲基化,可能成为各种临床类型的非小细胞肺癌早期诊断的一个有效指标.但特异性、灵敏性和可行性等有待进一步研究.     

乳腺癌组织及癌旁组织HER2基因CpG岛甲基化水平及其mRNA表达的研究

目的探讨乳腺癌组织及癌旁组织人类表皮生长因子受体2(HER2)基因CpG岛甲基化率和HER2mRNA表达的差异。方法收集经病理确诊的50份乳腺癌组织和对应的癌旁组织样本,采用焦磷酸测序法、实时聚合酶链反应(PCR)和免疫组化法分别检测HER2启动子CpG岛甲基化率、HER2 mRNA表达和HER2蛋白表达。结果 HER2阳性乳腺癌组织HER2 mRNA相对表达量高于HER2阴性癌组织(P0.05),但HER2启动子CpG岛甲基化率差异无统计学意义(P0.05)。HER2阴性乳腺癌组织HER2基因启动子CpG岛甲基化率显著高于对应的癌旁组织(P0.05),而HER2 mRNA表达则低于对应的癌旁组织(P0.05)。HER2阳性的乳腺癌组织与其对应的癌旁组织之间以及HER2阳性与阴性癌旁组织之间,HER2基因启动子CpG岛甲基化率和HER2 mRNA相对表达量差异均无统计学意义(P0.05)。结论在HER2阴性的乳腺癌癌旁组织中,HER2基因启动子CpG岛的低甲基化可能是HER2 mRNA高表达的机制之一。     

p16、DAPK和ESRβ基因启动子甲基化与宫颈癌的关系

目的探讨p16、DAPK及ESRβ基因启动子区甲基化在宫颈癌发生、发展中的作用。方法利用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测宫颈癌组织及血清中p16、DAPK及ESRβ启动子区甲基化情况,分析三者与宫颈癌发生、发展及临床病理的关系。结果 100例宫颈癌组织中,p16和DAPK甲基化率分别为80%和35%,明显高于对照组(正常或慢性炎症的宫颈组织);p16和DAPK任意一个基因甲基化率为84%。30例宫颈癌患者血清中,p16和DAPK甲基化率分别为40%(12/30)和20%(6/30),而对照组中未检出甲基化;p16和DAPK任意一个基因甲基化率为46.7%(14/30)。宫颈癌组织和血清中均未检出ESRβ启动子区甲基化。进一步分析p16和DAPK基因甲基化与临床病理关系发现,二者甲基化与宫颈鳞状细胞癌关系更密切,鳞状细胞癌与腺癌比较差异显著(P<0.01)。结论 p16和DAPK基因启动子区甲基化与宫颈癌特别是宫颈鳞状细胞癌的发生、发展关系密切。ESRβ启动子区甲基化可能与宫颈癌的发生、发展无关。     

膀胱移行细胞癌A激酶锚定蛋白12基因转录表达与其启动子区甲基化状态的相关性

目的 探讨膀胱移行细胞癌组织中A激酶锚定蛋白12(A-kinase anchoring protein 12,AKAP12)基因mRNA表达水平和基因启动子区CpG岛甲基化程度及其与临床病理参数之间的关系.方法 用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)和甲基化特异性PCR(MSP)检测30份膀胱移行细胞癌组织及其癌旁组织中AKAP12基因mRNA的表达水平及其启动子区CpG岛甲基化状态.并用亚硫酸盐修饰后PCR产物进行克隆测序.结果 在30份膀胱移行细胞癌患者组织标本中,AKAP12在癌组织中表达下调比率为73.3%(22/30),在病理Ⅱ和Ⅲ级膀胱移行细胞癌中下调比率明显高于Ⅰ级(P=0.02).MSP检测结果显示,膀胱移行细胞癌甲基化比率为53.3%(16/30),且与膀胱移行细胞癌TNM分期(r=0.52,Pn=0.03)和病理分级(r=0.61,Pn=0.01)有明显的相关性.结论 AKAP12基因启动子区出现的异常甲基化可导致其在膀胱移行细胞癌中的表达沉默,且与膀胱移行细胞癌的发生有关.     

DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化状态与肝细胞癌的关系研究

目的探讨DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化状态与肝细胞癌发生的相关性。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应检测33例肝细胞癌及相应的癌旁组织和20例正常对照肝组织中DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化状态,分析上述组织中两种基因甲基化状态与临床资料的关系。结果DKK-3和WIF-1基因在癌组织中甲基化率明显高于癌旁组织和正常组织(P<0.05,P<0.05),而癌旁组织和正常组织中DKK-3和WIF-1基因甲基化率相比无明显差异;癌组织中DKK-3基因甲基化与临床资料中年龄及肝硬化有关;癌组织中WIF-1基因甲基化与临床资料中乙肝表面抗原、肝硬化有关。结论DKK-3和WIF-1基因启动子甲基化与HCC的发生相关;DKK-3和WIF-1基因致肝细胞癌的发生机制可能与肝硬化致肝细胞癌的发生机制不尽相同,两者是否有相互作用尚不清楚。     

应用BSP克隆测序检测肝细胞癌组织中Dynamin 3基因启动子区域甲基化水平

目的检测原发性肝细胞癌组织Dynamin 3(DNM3)基因启动子区域36个CpG的甲基化水平,分析其与肝细胞癌患者临床病理特征的关系,探讨DNM3基因甲基化在肝癌形成过程中的作用。方法提取30对患者肝细胞癌组织和癌旁组织DNA,经亚硫酸氢盐处理后,进行巢式PCR并联合克隆测序检测DNM3基因的甲基化水平。结果肝细胞癌患者的甲基化事件发生率为83.3%(25/30)。癌组织的DNM3基因启动子区域平均甲基化率为37.8%,癌旁组织为12.0%,两者比较差异有统计学意义(P0.05)。DNM3基因甲基化诊断肝癌的受试者工作特征曲线(ROC)曲线下面积(AUC)为0.831,对肝癌有较好的诊断价值。结论 DNM3作为肝细胞癌的一种抑癌基因,其启动子区域高度甲基化可能会促进肝细胞癌的形成。     

肾癌组织中TβRⅡ基因甲基化状态的检测及其临床意义

目的探讨转化生长因子β受体Ⅱ(TβRⅡ)在肾透明细胞癌(RCCC)中的甲基化状态及其临床意义。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测43例肾透明细胞癌组织,43例正常组织中TβRⅡ基因的甲基化状况;应用免疫组织化学P-V法检测40例肾透明细胞癌组织,28例正常组织中TβRⅡ基因的蛋白表达情况。结果 RCCC组织中TβRⅡ基因的甲基化率为58.1%(25/43),显著高于正常组织34.9%(15/43),差异有统计学意义(P0.05);肾透明细胞癌中TβRⅡ基因的甲基化率与患者年龄、性别、肿瘤的大小和肿瘤分化程度无显著相关性(P0.05)。TβRⅡ在RCCC组织中的免疫组化结果显示,基因蛋白表达在RCCC组显著低于正常组(P0.05),且其蛋白表达与肿瘤的大小和肿瘤分化程度相关(P0.05)。结论 TβRⅡ基因启动子甲基化可能与RCCC的发生有关。     

Fibulin-1基因启动子区域甲基化与食管癌的关系研究

目的:检测食管癌Fibulin-1基因启动子区域甲基化的情况,探讨其相关的临床意义。方法:选取黄石市中心医院2014年1月至2016年2月收治的食管鳞状细胞癌患者96例,另取同期黄石市中心医院因食管良性病变手术切除的食管组织40例作为对照。Fibulin-1基因启动子甲基化使用亚硫酸盐修饰后PCR检测。免疫组织化学检测显示Fibulin-1蛋白表达。结果:食管癌患者中Fibulin-1基因启动子甲基化阳性率为36.5%,显著高于对照组的15.0%(χ2=2.517,P=0.036)。免疫组织化学检测显示Fibulin-1基因启动子甲基化标本中Fibulin-1蛋白阳性表达率为90.2%。食管癌患者男女性别和不同年龄之间Fibulin-1基因启动子甲基化率无显著性差异(P0.05)。Ⅲ,Ⅳ临床分期患者Fibulin-1基因启动子甲基化率为43.1%,显著高于Ⅰ,Ⅱ临床分期患者的28.9%(χ~2=2.4 2 6,P=0.0 4 6)。肿瘤有淋巴结转移患者Fibulin-1基因启动子甲基化率为44.4%,显著高于无淋巴结转移患者的26.2%(χ2=2.438,P=0.041)。肿瘤中、低分化患者Fibulin-1基因启动子甲基化率为42.6%,显著高于高分化患者的25.7%(χ~2=2.431,P=0.043)。结论:Fibulin-1基因启动子在食管癌组织中高甲基化,Fibulin-1基因启动子高甲基化与食管癌的临床分期、肿瘤分化程度以及有无淋巴结转移密切相关。     

胃癌中多基因甲基化状态及其表达的研究

目的了解胃癌中p16、E-cadherin、Runx3、DAPK和CHFR基因启动子CpG岛的甲基化状态,并探讨基因异常甲基化与mRNA表达的关系及其意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测12例胃癌患者癌组织及其相应的癌旁正常组织中5种基因的甲基化状态,以12例胃镜活检的正常胃组织作为对照,采用RT-PCR方法相应检测了5种基因的mRNA表达水平。并分析每种基因甲基化程度与表达水平之间的关系。结果胃癌组织中,p16、E-cadherin、Runx3、DAPK和CHFR基因的甲基化率分别为41.7%、8.3%、58.3%、33.3%和58.3%,相应的癌旁正常组织中,p16、E-cadherin、Runx3、DAPK和CHFR基因的甲基化率分别为8.3%、0.0%、8.3%、8.3%和16.7%,且75%的胃癌组织中至少有一种基因甲基化,显著高于癌旁正常组织25%(P<0.05),而健康对照组织中无基因甲基化,在甲基化的胃癌组织中均无p16、E-cadherin和DAPKmRNA表达,而癌旁正常组织、非甲基化的癌组织中均有其表达。结论胃癌中多基因启动子CpG岛高甲基化是一个频繁的事件,并且基因启动子高甲基化与其mRNA表达缺失有关,这可能参与了胃癌的发生发展。     

人肝癌细胞株HepG2中原钙粘附蛋白10基因异常甲基化及其与HBx蛋白的关系

目的研究原钙粘附蛋白10(PCDH10)启动子在人肝癌细胞株HepG2中的甲基化状态及与HBx调控的相关性。方法用逆转录PCR(RT-PCR)和甲基化特异性聚合酶链反应(MSP),检测去甲基化药物5-氮-2’-脱氧胞苷(Aza)联合组蛋白乙酰化酶抑制剂TSA(trichostatin A)处理前后,HepG2细胞中PCDH10基因的表达及启动子甲基化水平;用亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)定位检测发生甲基化的CG位点。用MSP检测表达HBx基因的重组腺病毒感染HepG2细胞后PCDH10基因的表达及甲基化水平。结果 PCDH10基因在HepG2细胞株中表达沉默,其启动子发生明显甲基化,Aza可以部分去除PCDH10甲基化从而上调其mRNA表达水平。但HBx蛋白表达不影响HepG2细胞中PCDH10的甲基化程度。结论 PCDH10启动子异常甲基化使HepG2细胞内转录沉默,但其甲基化状态与HBx蛋白表达无关。     

贲门腺癌组织中RASSF1A基因甲基化及其蛋白表达的研究

目的探讨RASSF1A基因甲基化及其蛋白表达与贲门腺癌的相关性。方法回顾性将33例贲门腺癌手术切除标本纳入本研究,每例标本选取癌组织,癌旁正常组织(距癌5 cm)组织各一块。采用甲基化特异性PCR检测RASSF1A基因的甲基化情况,采用免疫组织化学检测RASSF1A蛋白表达。结果 33例大体标本中共选取57块组织,其中癌组织33块,癌旁正常组织24块。贲门腺癌癌组织中RASSF1A基因甲基化的发生率为63.6%,明显高于贲门腺癌癌旁正常组织中RASSF1A基因甲基化的发生率(4.2%),两组比较差异有统计学意义(P0.05)。贲门腺癌癌组织中RASSF1A蛋白阳性表达率为45.5%,明显低于贲门腺癌癌旁正常组织中RASSF1A蛋白阳性表达率(87.5%),两组比较差异有统计学意义(P0.01)。21例RASSF1A基因甲基化阳性贲门癌组织中,15例(71.4%)蛋白表达阴性;12例RASSF1A基因甲基化阴性贲门癌组织中,9例(75%)蛋白表达阳性,3例(25%)蛋白表达阴性;经Spearman correlations相关分析发现:在贲门腺癌癌组织中RASSF1A基因甲基化与蛋白表达呈显著负相关(P0.01)。结论RASSF1A基因可能通过启动子区甲基化导致的表达失活参与了贲门腺癌的发生发展过程。