肾癌组织中BHD、RASSF1A、SPINT2基因启动子的甲基化研究

目的：检测肾癌组织中伯特-霍格-杜贝（BHD）、Ras相关结构域家族（RASSF）1A、丝氨酸蛋白酶抑制剂（SPINT）2基因启动子的甲基化状态,探讨其在肾癌发病中的可能作用。方法：收集肾肿瘤组织标本24份,其中透明细胞癌19份、错构瘤2份、癌旁组织3份,应用甲基化特异性聚合酶链反应法分别检测其BHD、RASSF1A、SPINT2基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果：19例透明细胞癌同时检出3种抑癌基因甲基化3例,2种抑癌基因甲基化9例,1种抑癌基因甲基化7例。2例错构瘤中检出1种抑癌基因甲基化1例,3例癌旁组织中检出2种抑癌基因甲基化1例。检出BHD基因甲基化9例,均为透明细胞癌。检出RASSF1A基因甲基化8例,其中透明细胞癌7例,癌旁组织1例。检出SPINT2基因甲基化20例,其中透明细胞癌18例,错构瘤1例,癌旁组织1例。结论：肾癌组织中BHD、RASSF1A、SPINT2基因启动子区存在甲基化状态,抑癌基因甲基化可能在肾癌的发病机制中起重要作用。     

贲门腺癌组织中RASSF1A基因甲基化及其蛋白表达的研究

目的探讨RASSF1A基因甲基化及其蛋白表达与贲门腺癌的相关性。方法回顾性将33例贲门腺癌手术切除标本纳入本研究,每例标本选取癌组织,癌旁正常组织(距癌5 cm)组织各一块。采用甲基化特异性PCR检测RASSF1A基因的甲基化情况,采用免疫组织化学检测RASSF1A蛋白表达。结果 33例大体标本中共选取57块组织,其中癌组织33块,癌旁正常组织24块。贲门腺癌癌组织中RASSF1A基因甲基化的发生率为63.6%,明显高于贲门腺癌癌旁正常组织中RASSF1A基因甲基化的发生率(4.2%),两组比较差异有统计学意义(P0.05)。贲门腺癌癌组织中RASSF1A蛋白阳性表达率为45.5%,明显低于贲门腺癌癌旁正常组织中RASSF1A蛋白阳性表达率(87.5%),两组比较差异有统计学意义(P0.01)。21例RASSF1A基因甲基化阳性贲门癌组织中,15例(71.4%)蛋白表达阴性;12例RASSF1A基因甲基化阴性贲门癌组织中,9例(75%)蛋白表达阳性,3例(25%)蛋白表达阴性;经Spearman correlations相关分析发现:在贲门腺癌癌组织中RASSF1A基因甲基化与蛋白表达呈显著负相关(P0.01)。结论RASSF1A基因可能通过启动子区甲基化导致的表达失活参与了贲门腺癌的发生发展过程。     

膀胱癌和肾癌中RASSF1A和BLU的甲基化状态

目的探讨RASSF1A和BLU在膀胱癌和肾癌中启动子甲基化状态及其意义。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）技术分别在45例膀胱癌组织和相应癌周正常组织、12例肾癌组织及其相应癌周正常组织和3例非肿瘤患者正常膀胱组织中检测RASSF1A和BLU启动子区域的甲基化状态。结果膀胱癌组织中,RASSF1A和BLU甲基化率分别为55.6%和31.5%;肾癌组织中,两基因甲基化率为66.7%和33.3%。RASSF1A和BLU启动子甲基化状态与膀胱癌临床病理参数无明显相关性（P〉0.05）。在膀胱癌或肾癌中,RASSF1A和BLU启动子甲基化状态之间均无明显相关性（P〉0.05）。结论膀胱癌和肾癌中,RASSF1A和BLU频繁发生高甲基化,高甲基化可能参与膀胱癌和肾癌两类肿瘤的发生。     

胃癌组织中RASSF2A基因启动子甲基化检测及其临床意义

目的:探讨胃癌中RASSF2A基因启动子甲基化特征。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测34例胃癌患者癌组织和癌旁组织RASSF2A基因启动子甲基化情况。结果:胃癌组织RASSF2A基因甲基化发生率为24%,明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。RASSF2A基因甲基化与分化程度,转移等无明显相关。结论:RASSF2A基因甲基化是胃癌发生的频发分子事件,可能在胃癌发生起重要作用。     

胃镜活检组织RASSF1基因启动子甲基化检测及其临床意义分析

目的：探讨胃镜活检组织RAS相关结构域蛋白1（RASSF1）基因启动子甲基化水平及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测胃癌患者胃镜活检癌组织、癌旁组织及健康者正常胃组织RASSF1基因启动子甲基化状态,并比较其差异;分析胃癌患者RASSF1基因启动子甲基化与不同临床病理因素的关系。结果胃癌患者癌组织RASSF1基因启动子甲基化率为62．7％,癌旁组织甲基化率为4．0％,健康者正常胃组织甲基化率为2．7％,癌组织RASSF1基因启动子甲基化率高于癌旁组织和正常胃组织（P＜0．05）。胃癌患者癌组织RASSF1基因启动子甲基化率在不同性别、年龄、病变部位及幽门螺杆菌感染患者间比较差异无统计学意义（P＞0．05）,在不同分化程度、肿瘤最大径、淋巴结转移、远处转移和 TNM 分期患者间,比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论胃癌患者胃镜活检癌组织RASSF1基因启动子甲基化率高于癌旁组织和正常胃组织,且甲基化率与癌组织分化程度、肿瘤最大径、淋巴结转移、远处转移和TNM分期有关,可反映胃癌患者的病情及预后。     

胶质瘤患者RASSF1A基因转录表达和启动子区甲基化的研究

目的 探讨RASSF1A(RAS association domain family 1A)基因mRNA表达水平和基因启动子区CpG岛甲基化程度及其与启动子甲基化的关系。方法 用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测28份胶质瘤组织和4份正常脑组织中RASSF1A基因mRNA相对表达水平;用甲基化特异性PCR方法研究胶质瘤组织、正常脑组织和U251细胞株中,RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果 RASSF1A mRNA在4份正常脑组织中全部表达;在脑胶质瘤中表达缺失率为21.4％(6/28),且表达量低于正常脑组织,但与患者年龄、性别、肿瘤大小、恶性程度间的差异无显著意义(P>0.05)。按病理学分类,胶质母细胞瘤与少突胶质肿瘤的差异有显著意义(P=0.011)。脑胶质瘤中RASSF1A基因启动子发生甲基化的频率为39.3％(11/28),正常脑组织和U251细胞株中,RASSF1A基因启动了未发生甲基化。11份启动子区甲基化的胶质瘤标本中,5份同时伴mRNA表达缺失(P=0.022)。结论 RASSF1A基因启动了在胶质瘤中发生异常甲基化。尽管RASSF1A mRNA在脑胶质瘤中表达缺失并不广泛,但其表达普遍下调。推测启动子区CpG岛甲基化可能是导致RASSF1A基因在胶质瘤中表达缺失或表达水平下调的一种机制。     

人原发性肺癌组织中TSLC1基因甲基化检测及意义

目的探讨TSLC1基因启动子区甲基化状态与人原发性肺癌发生发展之间的关系方法采用甲基化特异性聚合酶链技术(MSP),对53例人原发性肺癌组织(肺癌组)、24例肺良性病变组织(良性病变组)、15例癌旁组织(癌旁组)及11例支气管鳞状化生组织进行TSLC1基因5’-CpG岛甲基化状态检测。结果肺癌组、癌旁组和肺良性病变组的TSLC1基因甲基化率分别为35.8%(19/53)、13.3%(2/15)、0.0%(0/24),三组相比差异有统计学意义(P<0.05);支气管鳞状化生组织的甲基化阳性率为18.2%(2/11)。TSLC1基因甲基化率肺癌吸烟者与非吸烟者差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TSLC1基因启动子区甲基化与肺癌的发生关系密切,可能出现在肺癌发生的早期阶段。     

白血病患者RASSF1A基因甲基化状态及其临床意义

目的研究白血病患者骨髓中Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子甲基化状态及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测86例白血病患者和60例非白血病患者对照组骨髓中RASSF1A基因启动子的甲基化状况,分析不同白血病类型之间的差异。结果 86例白血病患者中,有12例(13.95%)RASSF1A基因启动子甲基化,而60例非白血病患者骨髓均未检测到甲基化,二者比较差异均有统计学意义(P<0.05)。淋巴系白血病患者RASSF1A基因甲基化比例(23.1%)明显高于髓系白血病患者(6.4%)(P<0.05)。结论白血病患者骨髓中存在RASSF1A基因甲基化,淋巴系白血病甲基化比例明显高于髓系白血病。RASSF1A基因甲基化检测可能成为白血病分型的生物标志物之一。     

死亡相关蛋白激酶1基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义

目的研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测宫颈癌癌组织和癌旁正常组织中DAPK1基因启动子甲基化,比较在二者间的差异及其与临床病理因素之间的关系。结果宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率为62.5%,癌旁组织中甲基化率为5.0%,宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率显著高于宫颈癌癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌癌组织DAPK1基因启动子甲基化率在组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、器官转移、FIGO分期中的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DAPK1基因启动子在宫颈癌中呈高甲基化状态,可作为宫颈癌的病情和预后评估的生物学标志物。     

宫颈脱落细胞RASSF1A基因甲基化在宫颈癌中的临床意义

目的研究宫颈脱落细胞RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应检测宫颈癌患者和健康女性宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化,分析与病理因素间的关系。结果宫颈癌患者宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化率为64.0%,高于健康女性的1.3%(P<0.05)。宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化率在宫颈癌不同组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、器官转移、Figo分期患者间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化与宫颈癌病理因素密切相关,可作为宫颈癌病情判断和预后评估的标志物。     

结直肠癌C-erbB-2基因启动子CpG岛甲基化状态及其与C-erbB-2蛋白表达的关系

目的了解结直肠癌组织C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化状态、C-erbB-2蛋白表达水平及两者之间的关系。方法取经病理确诊的43例结直肠癌组织和相应癌旁组织,分别用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和免疫组织化学法(IHC)检测C-erbB-2启动子区CpG岛的甲基化和C-erbB-2蛋白表达水平。结果癌组织和癌旁组织中C-erbB-2启动子区CpG岛甲基化率分别为44.2%和74.4%,差异具有统计学意义(P=0.004)。癌组织和癌旁组织中C-erbB-2蛋白过度表达率分别为67.4%和27.9%,差异具有统计学意义(P=0.000)。C-erbB-2蛋白表达水平与肿瘤分期相关。结直肠癌组织C-erbB-2启动子区CpG岛甲基化状态与C-erbB-2蛋白表达水平呈显著相关(r=0.331,P=0.03)。结论结直肠癌中C-erbB-2基因启动子区CpG岛的低甲基化可能在C-erbB-2蛋白过度表达中起一定作用,有望成为有用的肿瘤分子诊断标记和治疗靶点。     

甲基化在肺癌中的意义

目的探讨基因T-钙黏蛋白(CDH13)在40例癌组织,40例的癌旁组织标本和非肺癌良性肺切除组织标本15例作为对照的表达的临床意义,进一步研究其基因异常甲基化与肺癌的相关性。方法采用特异性甲基化PCR(MSP)检测该基因在肺癌组织中异常甲基化的水平。结果 1.在肺癌组织中CDH13基因甲基化率明显高于癌旁组织和非肺癌良性肺切除组织,甲基化率分别为32.5%、7.5%、6.7%,有统计学意义(P<0.05)。2.CDH13基因异常甲基化和CDH13的表达水平呈负相关性(r=-0.520).3.CDH13基因启动子区5’CpG岛甲基化阳性率在肺癌组织中显著高于癌旁组织和非肺癌良性肺切除组织,CDH13基因启动子区5’CpG岛甲基化导致了CDH13的表达下调。结论在肺癌组织中CDH13基因异常甲基化率明显升高且有临床诊断意义,CDH13基因在癌组织中的异常甲基化水平将有望成为肺癌新的治疗靶点。     

CDH1基因甲基化与食管鳞癌的关系

目的 探对食管鳞癌组织中CDH1基因启动子区甲基化的表达状况及其与烟酒史、肿瘤家族史的关系.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测食管鳞癌中CDH1基因启动子区甲基化情况.结果 食管鳞癌、癌旁及正常组织CDH1基因的甲基化阳性率分别为51.6％(32/62)、22.6％(14/62)和0(0/18).癌与癌旁组织比较,甲基化阳性率差异有统计学意义(P＜0.01);癌和正常组织比较,甲基化阳性率差异有统计学意义(x2=15.484,P＜0.01);癌旁与正常组织间差异无统计学意义(x2 =3.487,P＞0.05).食管鳞癌CDH1基因甲基化情况与其性别、年龄、烟酒史和上消化道肿瘤家族史比较差异均无统计学意义(均P ＞0.05).结论 CDH1基因启动子区甲基化与食管鳞癌发生关系密切,在食管鳞癌中是一常见的表观遗传学事件.CDH1基因甲基化可能是一个独立的危险因素.     

乳癌组织TSLC1基因mRNA表达及启动子甲基化状态

目的探讨乳癌组织中非小细胞肺癌抑制因子（TSLC1）基因mRNA表达及其启动子甲基化状态。方法应用实时荧光定量PCR和甲基化特异性PCR,分别检测39例人乳癌组织及对应癌旁组织中TSLC1基因mRNA表达及其启动子甲基化状态,并探讨二者之间的关系。结果乳癌组织中TSLC1mRNA的表达量是癌旁组织的0.44倍。乳癌组织及癌旁组织中TSLC1基因甲基化率分别为56.4%、10.3%,乳癌组织中TSLC1基因甲基化率明显高于相应癌旁组织（χ2=16.673,P〈0.01）。甲基化的癌组织中TSLC1mRNA的表达量是非甲基化者的0.60倍,表达TSLC1mRNA的癌组织的甲基化率为50%,不表达者为100%,两者之间差异有显著性（P=0.046）。结论 TSLC1基因异常甲基化是其在乳癌组织中表达缺失或下调的原因之一,在乳癌的发生发展中起一定作用,可能成为乳癌的早期诊断及治疗靶点基因之一。     

RASSF1A基因的甲基化检测对宫颈癌和宫颈上皮内瘤变患者的临床意义

目的探讨RASSF1A基因甲基化程度对宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(CIN)患者的临床意义。方法选取2017年5月至2019年2月大同市第五人民医院的46例宫颈癌组织,30例CIN及10例正常宫颈组织作为对照组。采用甲基化特异PCR技术来检测RASSF1A启动子区的甲基化程度;分析RASSFIA基因启动子区甲基化程度与临床及病理特征(即肿瘤组织学分级、FIGO分期、淋巴结转移、宫颈间质的浸润深度及HPV感染)的关系。结果本研究检测了46例宫颈癌、30例CIN及10例正常宫颈中RASSF1A的甲基化程度,结果显示其在宫颈癌中的甲基化率为39.1%(18/46),未甲基化率为60.9%(28/46),CIN及正常宫颈组织未见有明显甲基化。RASSF1A基因的甲基化程度与宫颈癌的FIGO分期及肿瘤的组织学分级相关,而与宫颈间质侵犯深度、淋巴结是否转移及是否有HPV感染无关。结论RASSF1A的甲基化程度可能与宫颈癌的发生相关。RASSF1A基因启动子区在宫颈癌组织中高甲基化程度,其与宫颈癌的FIGO分期、肿瘤的组织学分级有关,使其有望成为宫颈癌检测的敏感标志物,并可用于早期宫颈癌的诊断及临床治疗的预后分析。     

肺癌患者血浆RASSF1A和BLU基因甲基化检测及临床意义

【目的】探讨肺癌患者外周血血浆中抑癌基因Ras相关结构域家族1A（RASSF1A）和BLU基因启动子的甲基化状态及其临床意义。【方法】利用巢式甲基化特畀性PCR（nMSP）法检测肺癌患者外周血血浆与正常人血浆中抑癌基因RASSF1A和BLU基因启动子的甲基化状态。【结果】58例肺癌患者血浆样品中分别发现22例（37．93％）RASSF1A基因启动子的异常甲基化和17例（29．31％）BLU基因启动予的异常甲基化,20例正常对照血浆中都未检测到RASSF1A和BLU基因启动子的异常甲基化,差异有显著性（P〈0．01）;但血浆中两基因甲基化检出率与患者性别、肺癌组织学分型及临床分期无明显相关性（P〉0．05）。【结论】利用nMSP法检测外周血血浆中RASSF1A和BLU基因启动子的甲基化,可为肺癌的筛查、早期诊断提供有用的信息。     

五聚素3基因甲基化在食管鳞癌中的作用

目的研究食管鳞癌组织中五聚素3(PTX3)基因的表达,以及基因启动子区甲基化状态对其表达的影响。方法应用半定量逆转录PCR(RT-PCR)、甲基化特异性PCR(MSP)、免疫组织化学的方法对癌旁食管黏膜组织和食管鳞癌组织进行检测,分析PTX3基因mRNA的表达、基因启动子区甲基化状态和PTX3蛋白阳性表达与食管癌临床病理特征的关系。结果 25%(5/20)食管鳞癌组织和90%(18/20)正常食管黏膜组织存在PTX3基因表达,PTX3mRNA在食管癌与癌旁组织之间的表达差异有统计学意义(χ2=17.289,P<0.001)。80%(16/20)食管鳞癌组织和25%(5/20)正常食管黏膜组织存在PTX3基因CpG岛超甲基化,提示PTX3基因超甲基化与食管癌发生之间有关联(χ2=12.13,P<0.001)。PTX3蛋白在食管癌组织中表达的阳性率为30.38%(24/79),癌旁食管组织PTX3蛋白阳性表达率为84.81%(67/79)(P<0.001)。随着食管癌临床分期增加,PTX3蛋白阳性表达率逐渐降低。结论 PTX3基因启动子高甲基化是PTX3表达失活的主要原因,在食管鳞癌的发生发展中起重要作用,PTX3基因启动子甲基化可作为食管鳞癌预后评估的潜在肿瘤标志物。     

抑癌基因RASSF1A与RASSF1B基因的关系

目的：研究RASSF1基因2个转录本基因在胃癌组织及相对应的癌旁组织中表达情况以及RASSF1 2个转录本基因与肿瘤发生的相关性。方法：设计特异性的引物,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）的方法检测胃癌及癌旁组织中RASSF1家族中2种不同转录本mRNA的表达情况。结果：40例胃癌组织中RASSF1A基因表达缺失率为60.2%（24/40）,RASSF1B基因表达缺失率为37.5%（15/40）。结论：RASSF1A和RASSF1B2种转录本在胃癌组织中的表达下调,RASSF1A基因在胃癌的发展中起重要的抑制作用,RASSF1B的表达还可能与细胞的分化程度有关。     

宫颈癌组织FBN1 基因甲基化状态与临床病理特征及预后的相关性研究

目的 探究宫颈癌（cervical cancer，CC）组织原纤维蛋白-1（fibrillin-1，FBN1）基因甲基化状态与患者临床病理特征及预后的关系。方法 选取2014 年6 月~2017 年4 月邯郸市第一医院诊治的98 例CC 患者为研究对象，收集经手术切除的CC 组织、癌旁组织。甲基化特异性PCR 法测定CC 组织、癌旁组织FBN1 基因甲基化状态；蛋白印迹法检测CC 组织、癌旁组织FBN1 蛋白表达水平；对CC 患者进行为期5 年的随访，记录患者生存情况；比较CC 组织和癌旁组织FBN1 基因甲基化发生率以及FBN1 基因非甲基化组和FBN1 基因甲基化组CC 组织FBN1 蛋白表达水平；分析CC 组织FBN1 基因甲基化状态与患者临床病理特征的关系、FBN1 基因甲基化状态与患者预后的关系以及CC 患者预后的影响因素。结果 CC 组织FBN1 基因甲基化发生率（60.20%）高于癌旁组织（12.24%），差异有统计学意义（χ2=48.785，P<0.05）；FBN1 基因甲基化组FBN1 蛋白表达水平（0.61±0.12）低于FBN1 基因非甲基化组（1.59±0.32），差异有统计学意义（t=21.401，P<0.05）。CC组织FBN1基因甲基化状态与患者TNM分期、高危型人乳头瘤病毒DNA（highrisk-human papillomavirus DNA，HR-HPV DNA）、淋巴结转移相关（χ2=7.578，8.140，7.814，均P<0.05）；FBN1 基因甲基化组CC 患者5 年累积生存率为38.98%，低于FBN1 基因非甲基化组（76.92%），差异有统计学意义（χ2=13.464，P<0.05）。HR-HPV DNA 阳性[OR（95%CI）: 2.534（1.577~4.072）]，有淋巴结转移[OR（95%CI）: 2.426（1.546~3.808）]，TNM 分期Ⅲ ~ Ⅳ期[OR（95%CI）: 2.702（1.633~4.471）] 和FBN1 基因甲基化[OR（95%CI）: 2.394（1.531~3.743）]是影响CC 患者预后的独立危险因素（P<0.05）。结论 CC 患者癌组织中FBN1 基因甲基化水平较高，其与TNM 分期、HR-HPV DNA 和淋巴结转移等临床病理特征及预后相关，为临床诊治CC 和评估CC 患者预后提供新方向。     

乳腺癌组织及癌旁组织HER2基因CpG岛甲基化水平及其mRNA表达的研究

目的探讨乳腺癌组织及癌旁组织人类表皮生长因子受体2(HER2)基因CpG岛甲基化率和HER2mRNA表达的差异。方法收集经病理确诊的50份乳腺癌组织和对应的癌旁组织样本,采用焦磷酸测序法、实时聚合酶链反应(PCR)和免疫组化法分别检测HER2启动子CpG岛甲基化率、HER2 mRNA表达和HER2蛋白表达。结果 HER2阳性乳腺癌组织HER2 mRNA相对表达量高于HER2阴性癌组织(P0.05),但HER2启动子CpG岛甲基化率差异无统计学意义(P0.05)。HER2阴性乳腺癌组织HER2基因启动子CpG岛甲基化率显著高于对应的癌旁组织(P0.05),而HER2 mRNA表达则低于对应的癌旁组织(P0.05)。HER2阳性的乳腺癌组织与其对应的癌旁组织之间以及HER2阳性与阴性癌旁组织之间,HER2基因启动子CpG岛甲基化率和HER2 mRNA相对表达量差异均无统计学意义(P0.05)。结论在HER2阴性的乳腺癌癌旁组织中,HER2基因启动子CpG岛的低甲基化可能是HER2 mRNA高表达的机制之一。