运用UPLC-BCD方法快速筛选中草药中凝血酶抑制剂

目的：建立超高相液相色谱-生物化学检测（UPLC-BCD）分析方法快速筛选丹参、远志、蕲艾药材中凝血酶抑制剂,为中草药中生物活性成分的辨识提供一种便捷的技术手段。方法：运用UPLC分析技术,采用Xtimate UHPLC C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.8 μm）,柱温30 ℃,流动相为甲醇（B）-0.1%甲酸水溶液（A）,梯度洗脱,检测波长256 nm,体积流量0.2 mL·min^-1。以比伐卢定作为阳性对照,考察酶反应条件,建立UPLC-BCD分析方法检测3种药材提取物与凝血酶反应前后色谱特征图谱及酶反应产物的差异,评价3种药材凝血酶抑制作用、快速筛选所含酶抑制剂,采用超高效液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱（UHPLC-LTQ/Orbitrap MS）方法鉴定酶抑成分。结果：丹参、远志和蕲艾均具有较好的凝血酶抑制作用,检出丹参和远志中7种酶抑制剂,初步鉴定为丹酚酸A、迷迭香酸、丹酚酸B、西伯利亚远志呫吨酮B、远志山酮Ⅲ、3,6’-二芥子酰基蔗糖、细叶远志苷A。蕲艾色谱峰在反应前后无明显变化,其酶抑制活性可能来源于色谱图未显示的其他成分。结论：建立的UPLC-BCD方法能够快速辨别复杂基质的酶抑制作用及酶抑制剂,为中草药中生物活性成分的快速筛选提供了快速、便捷的分析手段。     

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术分析四花青皮的成分

目的：采用超高效液相色谱串联四极杆轨道阱高分辨率质谱技术（UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS）对四花青皮的成分进行定性分析。方法：分析采用ZORBAX Rclipse Plus C₁₈色谱柱（2.1 mm×50 mm,1.8 μm）,以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^-1,柱温40℃。结果：在正离子模式下,从四花青皮中共鉴定了32个成分,包括18个黄酮类化合物,7个有机酸类化合物,2个生物碱类成分和5个其他成分,其中14个成分为四花青皮中首次报道。结论：本方法适用于四花青皮中成分的快速鉴定,可为四花青皮的质量控制和进一步应用开发提供参考依据。     

不同比例黄连-吴茱萸配方颗粒/单/合煎对比分析

目的： 通过考察不同比例的黄连与吴茱萸药对,其配方颗粒与单煎液、合煎液的关键成分含量差异,探索药对配方颗粒与传统煎法的等效性。方法： 采用高效液相色谱法测定不同制法下6种生物碱含量,并利用SPSS18.0进行统计检验。结果： 与单煎相比,配方颗粒中4种黄连生物碱和吴茱萸次碱含量均与合煎中没有明显差异（小檗碱P=0.881;表小檗碱P=0.810;黄连碱P=0.961;巴马汀P=0.220;吴茱萸次碱P=0.137）,单煎中黄连生物碱含量平均值约为配方颗粒或合煎的2倍（P<0.01）,吴茱萸次碱单煎含量明显降低（配方颗粒/合煎平均值为单煎的3倍以上,P<0.01）,而吴茱萸碱在配方颗粒与单煎中的差异小（P=0.314）,平均值均在合煎液含量的40%以下（P<0.01）。另外,随着吴茱萸占比提高,合煎液中4种黄连生物碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量明显降低,但比例对配方颗粒和单煎影响不大。结论： 在黄连和吴茱萸药对中,黄连生物碱配方颗粒与合煎差异不显著,吴茱萸生物碱在配方颗粒中可能发生转变,导致与合煎有差异,而且配方颗粒并不能重现合煎中药对比例对成分含量的影响趋势。     

产ESBL大肠埃希菌致血流感染的临床特征及危险因素分析

目的： 探讨产ESBLs大肠埃希菌血流感染的临床特征及危险因素。方法： 回顾性分析2016年01月-2018年12月某院发生的大肠埃希菌血流感染住院患者临床特征、产超广谱β内酰胺酶（extended spectrum β-lactamase,ESBL）情况及药敏结果等。结果： 共纳入大肠埃希菌血流感染患者170例,ESBLs菌株98例;重症医学科占比最高（50例,29.4%）,其中ESBLs菌株30例（30.6%）,非ESBLs菌株20例（27.8%）。ESBLs菌株对头孢唑林、头孢噻肟、氨苄西林、哌拉西林全部耐药;对阿莫西林克拉维酸钾、氨苄西林舒巴坦、哌拉西林他唑巴坦的敏感率为70.6%、20.2%、80.2%。ESBLs组WBC、NEU计数、NEU%、PCT水平高于非ESBLs组,差异有显著性（Z=-2.149,P=0.032;Z=-2.521,P=0.012;Z=-2.990,P=0.003;Z=-2.149,P=0.032;Z=-2.543,P=0.011）。单因素分析示慢性肺部疾病、泌尿道梗阻、慢性肝胆疾病、高血压、碳青霉烯类抗菌药用药史、β-内酰胺酶抑制剂复合制剂在2组间差异有显著性（χ²=4.891,P=0.027;χ²=6.746,P=0.009;χ²=7.934,P=0.005;χ²=6.041,P=0.014;χ²=36.862,P< 0.001;χ²=15.178,P<0.001）,Logistics多因素回归分析显示慢性肺部感染、泌尿道梗阻、碳青霉烯类抗菌药物、β-内酰胺/酶抑制剂类抗菌药物是ESBLs菌株血流感染的独立危险因素（χ²=6.515,P=0.011;χ²=3.709,P=0.050;χ²=39.237,P<0.001;χ²=16.922,P<0.001）。ESBLs菌株致病变多见左肺或同时累及双肺（χ²=9.042,P=0.002;χ²=6.541,P=0.013）。结论： 该院血流感染大肠埃希菌ESBLs检出率较高,耐药率高,炎症程度更明显。经验性治疗应结合患者危险因素考虑合理使用β内酰胺酶抑制剂复合制剂或碳青霉烯类抗菌药物。     

不同品牌蛋白沉淀板对人血浆中霉酚酸含量测定结果比较

目的： 利用超高效液相色谱-串联质谱法,比较不同品牌（赛默飞和岛津）的蛋白沉淀板测定人血浆霉酚酸的效果。方法： 含霉酚酸的血浆样本经分别2种蛋白沉淀板进行前处理,以霉酚酸-d3为内标,采用Acquity UPLC^© BEH-C₁₈柱（2.1 mm×50 mm,1.7 μm）分离,流动相包括水（含0.1%甲酸,2 mmol·L^-1醋酸铵,V/V）和乙腈（含0.1%甲酸,V/V）,梯度洗脱,流速0.2 mL·min^-1。正离子检测模式（+ESI）下,采用多离子反应监测（MRM）模式进行分析,霉酚酸的离子对为m/z 321.2-207.1,内标的离子对为324.0-210.0。比较各蛋白沉淀板的准确度、精密度、基质效应、提取回收率等指标。结果： 霉酚酸的线性范围为0.312 5~20 μg·mL^-1,定量下限为0.312 5 μg·mL^-1。各品牌的蛋白沉淀板所获得的准确度、精密度、基质效应和提取回收率均符合要求。结论： 这2种蛋白沉淀板操作简便、快速、准确、且精密度良好,方法学考察结果没有显著性差异,均适用于人血浆中霉酚酸的分析,可用于临床治疗药物监测。     

超高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中沙丁胺醇浓度

目的：建立测定人血浆中沙丁胺醇浓度的超高效液相色谱-质谱联用方法。方法：内标选用沙丁胺醇-d9,以甲醇沉淀血浆中蛋白,取上清液吹干复溶;采用Welch Ultimate XS-C₁₈色谱柱（3.0 mm×100 mm,3 μm）,预柱选用Welch Ultimate XB-C₁₈柱（2.1 mm×5 mm,5 μm）,以含0.1%甲酸5 mmol·L^-1乙酸铵的5%乙腈和纯乙腈为流动相,梯度洗脱;应用电喷雾离子化,正离子模式下进行多反应监测沙丁胺醇（m/z 240.2→m/z 147.9）和内标沙丁胺醇-d9（m/z 249.1→m/z 149.1）的浓度。结果：沙丁胺醇的线性范围为5~2 000 pg·mL^-1,定量下限为5 pg·mL^-1,日内、日间准确度为101.93%~109.03%,精密度RSD为1.45%~8.50%。结论：本方法简便、准确、灵敏、稳健且经济,适用于硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂的临床药动学研究和生物等效性评价。     

基于灰色关联分析的藤茶提取物体外抗炎作用的谱-效关系研究

目的： 研究藤茶不同极性部位高效液相色谱（HPLC）图谱与其体外抗炎作用的谱效关系。方法： 建立藤茶不同极性部位的HPLC图谱;采用脂多糖（LPS）刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7模型,检测藤茶不同提取部位对一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）释放的影响,考察其抗炎活性;采用灰色关联度法分析不同极性部位HPLC特征峰与其抗炎药效之间的谱效关系。结果： 藤茶不同极性部位HPLC图谱有明显差异,共确定了5个共有峰。谱-效分析结果显示,5个共有峰对药效贡献均较大。结论： 建立了藤茶不同极性部位的HPLC图谱及其体外抗炎活性的谱-效关系,为该药材的抗炎药效物质基础研究提供参考。     

中药注射剂治疗心律失常的系统评价再评价

目的：对中药注射剂治疗心律失常的Meta分析或系统评价进行再评价。方法：计算机检索PubMed、EMbase、the Cochrane Library、知网、万方、维普、CBMdisc等中英文数据库,检索中药注射剂治疗心律失常的系统评价,时间为建库至2019年6月。2位评价者独立进行文献筛选以及资料提取工作,应用AMSTAR2量表以及GRADE评估工具进行评价。结果：最终纳入7篇Meta分析或系统评价,包含25个结局指标,涉及4种中药注射剂。AMSTAR2量表评价结果中"是否提供前期设计方案"、"是否提供排除文献清单"、"纳入标准中是否考虑发表文献,如灰色文献"、"是否说明相关利益冲突"4项为导致方法学质量降低的主要因素。GRADE评估工具的评价结局中,纳入系统评价的局限性以及发表偏倚为引起结局指标证据质量降低的原因。对纳入文献再进行Meta分析显示,中药注射剂治疗心律失常,可提高治疗总有效率[Z=10.99,RR=1.45,95% CI （1.36,1.55）,P<0.01]、血管再通率[Z=2.29,OR=1.34,95% CI （1.04,1.72）,P=0.02],改善心率[Z=21.52,MD=4.80,95% CI （10.12,12.15）,P<0.01],降低心律失常发生率[Z=4.38,RR=0.53,95% CI （0.40,0.70）,P<0.01]、病死率[Z=5.94,RR=0.49,95% CI （0.39,0.62）,P<0.01]。结论：中药注射剂在治疗心律失常中发挥重要作用,但现今关于中药注射剂治疗心律失常的Meta分析或系统评价的评价方法尚不规范,证据质量偏低,对此次评价结论可靠性产生了影响。     

超高效液相色谱法测定风湿骨痛丸中5种成分的含量

目的： 采用超高效液相色谱法（UPLC）测定风湿骨痛丸中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、麻黄碱、伪麻黄碱5种成分的含量。方法： （1）乌头碱、次乌头碱、新乌头碱检测方法：色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3柱（100 mm×2.1 mm,1.8 μm）,ACQUITY UPLC HSS T3预柱（5 mm×2.1 mm,1.8 μm）,流动相为甲醇-0.3 mol·L^-1三乙胺（65∶35,V/V）,流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长235 nm,进样量10 μL;（2）麻黄碱、伪麻黄碱检测方法：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C₁₈柱（100 mm×2.1 mm,1.7 μm）,流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）,采用梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长210 nm,进样量10 μL。结果： 乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、麻黄碱、伪麻黄碱分离度良好;线性范围依次为4.00~80.04 μg·mL^-1（r=0.999 4）,4.00~80.02 μg·mL^-1（r=0.999 3）,4.03~80.57 μg·mL^-1（r=0.999 6）,6.40~640.25 μg·mL^-1（r=0.999 6）,6.41~641.34 μg·mL^-1（r=0.999 7）;检出限依次为2.03,1.98,1.93,3.67,3.73 μg·mL^-1;定量限依次为3.98,3.87,4.03,6.37,6.41 μg·mL^-1;平均回收率依次为99.06%,98.87%,99.95%,99.92%,100.54%,RSD依次为0.95%,1.55%,1.58%,1.18%,0.91%;风湿骨痛丸中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、麻黄碱、伪麻黄碱的平均含量依次为0.001%,0.004%,0.004%,0.041%,0.027%。结论： 本研究UPLC方法准确,重复性良好,可测定风湿骨痛丸中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、麻黄碱、伪麻黄碱的含量,为风湿骨痛丸的质量控制提供参考。     

基于Meta分析的黄芪注射液与丹参注射液联用及单用对冠心病心绞痛临床疗效比较评价

目的：基于Meta分析比较评价黄芪注射液与丹参注射液联用及其单用治疗冠心病心绞痛的临床疗效。方法：采用计算机检索Cochrane图书馆、EMbase、PubMed、中国知网（CNKI）、维普中文科技期刊数据库（VIP）和万方数据库，筛选纳入采用随机对照试验（RCT）比较评价黄芪注射液与丹参注射液联合使用及其单用治疗冠心病心绞痛的文献研究，采用Cochrane手册"对随机对照试验偏倚风险的评估工具（Version 5.1.0）"对纳入的研究进行方法学质量评价，采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果：共9篇随机对照试验满足纳入标准，治疗患者620例。Meta分析结果显示，与黄芪注射液相比，黄芪注射液与丹参注射液联用在总有效率（RR=1.22，95%CI[1.11，1.33]，Z=4.21，P<0.000 1）、心绞痛发作次数 （WMD=-4.32，95%CI[-4.70，-3.93]，Z=21.83，P<0.000 01）和心绞痛发作持续时间（WMD=-4.06，95%CI[-4.16，-3.96]，Z=80.22，P<0.000 01）的改善作用更显著；与丹参注射液相比，黄芪注射液与丹参注射液联用在总有效率（RR =1.22，95%CI[1.14，1.31]，Z=5.77，P<0.000 01）、心绞痛发作次数（WMD=-4.11，95%CI[-4.54，-3.68]，Z=18.90，P<0.000 01）和心绞痛发作持续时间（WMD=-3.99，95%CI[-4.12，-3.87]，Z=61.34，P<0.000 01）的改善作用更显著。结论：黄芪注射液与丹参注射液联合使用较其单独使用可以显著提高对冠心病心绞痛的治疗效果，但由于纳入研究样本量小且文献质量较低，上述结论尚需高质量RCTs予以证实。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS和网络药理学研究连翘治疗急性肺损伤的作用机制

目的: 基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析连翘的入血成分,并结合网络药理学研究连翘治疗急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的作用机制。方法: 使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立ALI大鼠模型,采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术鉴定连翘的入血成分,结合PharmMapper、GeneCards和Disgenet数据库筛选连翘入血成分治疗ALI的潜在作用靶点,String平台绘制蛋白互作(PPI)网络图,Cytoscape软件做网络拓扑分析并筛选核心靶点,通过David数据库对核心靶点富集分析,使用Autodock Vina和PyMol软件对相关入血成分与核心靶点进行分子对接。结果: 肺组织切片结果显示ALI大鼠模型制备成功;得到37个连翘入血成分;连翘治疗ALI核心靶点70个,涉及PI3K/Akt、MAPK和Ras等152个相关通路;agatholic acid、无梗五加苷B、连翘苷、连翘酯苷A和芦丁5个入血成分与核心靶点JAK2和JAK3分子对接的结合能均小于-4.25 kJ·mol^-1,对接结果良好。结论: 该研究明确了连翘的入血成分,网络药理学预测agatholic acid、无梗五加苷B、连翘苷、连翘酯苷A和芦丁可能为连翘防治ALI的主要成分,其作用机制可能与靶向JAK2和JAK3调控PI3K/Akt信号通路有关。     

A new amide from Asarum forbesii Maxim

A highly unsaturated new amide, (2E,4Z,8Z,10Z)-N-isobutyl-2,4,8,10-dodecatetraenamide (1), was isolated in very small quantities from the whole plant of Asarum forbesii Maxim. together with four known compounds, (2E,4E,8Z,10E)-N-isobutyl-2,4,8,10-dodecatetraenamide (2), (-)-sesamin (3), (-)-asarinin (4) andE)-asarone5). The Z/E isomers, 1 and 2, were separated successfully by developed silver-ion medium-pressure liquid chromatography (SIMPLC). Compound 2 and the two diastereoisomers, 3 and 4, were isolated from this plant for the first time. The characterization of these compounds was achieved by various spectroscopic methods.     

基于文献数据挖掘中医药治疗心肌纤维化异病同治规律研究

目的：探索以心肌纤维化为病理基础的心系疾病的组方用药规律,诠释"异病同治"的内涵。方法：通过检索中国期刊全文数据库（CNKI）、万方数据库（WanFang）、中文科技期刊全文数据库（VIP）、中国生物医学文献数据库（SinoMed）,纳入中药复方治疗高血压合并左心室肥厚、心肌梗死后心室重构、扩张型心肌病的临床文献。构建方药数据库,采用频次统计分析高频中药及其功效,将高频药物进行关联规则和系统聚类分析,运用Liquorice软件分析核心复方的配伍规律,获得组方用药规律及特点。结果：共纳入226篇文献,其中治疗高血压合并左心室肥厚（left ventricular hypertrophy,LVH）及心肌梗死后心室重构（ventricular remodeling after myocardial infarction,VRMI）的中药处方各62首,扩张型心肌病（dilated cardiomyopathy,DCM）中药处方142首。治疗前5位药物及功效,LVH：丹参、钩藤、天麻、黄芪、牛膝,功效为活血祛瘀、平肝熄风、补益肝肾、补气、利水渗湿;VRMI：丹参、黄芪、川芎、当归、人参,功效为活血祛瘀、补气、补血、补阴、化痰;DCM：黄芪、丹参、茯苓、甘草、人参,功效为补气、活血祛瘀、温阳、利水渗湿、补阴。支持度最高的前3位药对组合,LVH："黄芪→丹参"、"茯苓→丹参"、"石决明→天麻",VRMI："黄芪→丹参"、"川芎→丹参"、"当归→黄芪",DCM："黄芪→丹参"、"茯苓→黄芪"、"甘草→黄芪"。治疗LVH、VRMI、DCM的高频药物可以分别聚类为4方、2方、4方,运用复杂网络分析后各获得1个核心处方。结论：以心肌纤维化为病理基础的心系疾病核心证候为气虚血瘀证,关键治法为益气活血,代表用药为丹参、黄芪。其中,LVH侧重于肝肾亏虚、肝阳上亢,多用滋补肝肾、平肝熄风;VRMI常伴血虚、痰结,多辅以补血、化痰药;DCM常伴阳虚水泛,多配伍温阳、利水渗湿药。     

山豆根不同组分发挥抗炎作用的安全范围研究

目的研究山豆根不同组分发挥抗炎作用的治疗指数和安全范围。方法通过建立巴豆致小鼠耳肿胀模型和琼脂致小鼠肉芽肿胀模型探究山豆根不同组分抗急、慢性炎症作用,并进行山豆根不同组分急性致死量实验。计算各组分发挥抗炎药效的ED50和急性毒性试验的LD50和LD5,求得不同组分发挥抗炎作用的治疗指数(TI),安全系数(SF)。结果山豆根不同组分对炎症模型有明显的抗炎作用,并呈现一定的量效关系,且水提组分抗炎作用大于醇提组分。山豆根水提、醇提组分对耳肿胀模型小鼠的抗炎TI、SF分别为34.0185、8.9965和52.8432、16.3049;山豆根水提、醇提组分对肉芽肿模型小鼠的抗炎TI、SF分别为34.4115、8.5146和53.8510、18.1641。结论山豆根水提组分对炎症模型的抗炎效果大于醇提组分,但山豆根醇提组分发挥抗炎作用的安全范围大于水提组分。因此,在应用山豆根水提组分时更应密切注意不良反应的发生并加强用药监测。     

肤乐宁洗剂中4味药材的薄层色谱鉴别

目的鉴别肤乐宁洗剂中苦参、紫苏叶、花椒和蛇床子。方法采用薄层色谱法进行鉴别。结果建立了4味药材简便、灵敏、可靠的薄层色谱鉴别法。结论此方法适用于肤乐宁洗剂的质量控制。     

UPLC法快速测定山豆根中氧化苦参碱和苦参碱的含量

目的 探讨一种快速同时测定山豆根药材中氧化苦参碱和苦参碱含量的方法.方法 采用超高效液相色谱法,色谱柱为WatersACQUITY uplcHSS T3柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流速0.5 ml/min,进样量5μl;以水-0.1％的三乙胺乙腈溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长220 nm.结果 氧化苦参碱在20.16～201.6 μg/ml、苦参碱在20.88～ 208.8 μg/ml范围内,浓度与峰面积线性关系良好,相关系数(r)均为0.9999;2种成分的平均回收率分别为99.1％、99.5％,RSD分别为1.27％、1.40％(n=9).结论 UPLC法快速、准确,可用于山豆根药材的质量控制.特别适合于成分较复杂的中药材的快速分析.     

High performance liquid chromatographic fingerprint evaluation of the quinolizidine alkaloids from commercial Radix Sophorae Flavescentis

Fifteen commercial samples of Radix Sophorae Flavescentis were collected from different parts of China. HPLC analysis showed that the commercial samples all contained quinolizidine alkaloids and a total of nine chromatographic peaks were identified by referring to standard compounds, HPLC/MS analysis and comparison of the physicochemical data of the isolated peak with the literature. The contents of the major alkaloids were determined and the ratio of the major alkaloids contents was shown to be correlated with their source of origin. The commercial samples from China gave a distinct HPLC pattern showing the main alkaloids contents. The sample preparations were researched and the extraction conditions of the alkaloids were optimized. Reproducible HPLC fingerprints can be obtained for the quinolizidine alkaloids under the well-controlled extraction conditions. The HPLC fingerprint analysis method is suitable for the quality control of the Radix Sophorae Flavescentis and the standardization of phytomedicines.     

山豆根水提物抗炎作用研究

目的:研究山豆根水提物的抗炎作用。方法:复制二甲苯致小鼠耳肿胀测定各组鼠耳肿胀度;复制小鼠实验性腹膜炎及大鼠皮肤炎症模型,测定各组动物腹腔渗出液吸收度值;比较山豆根水提物与正常对照、氢化可的松组的模型动物耳肿胀度、毛细血管通透性。结果:山豆根水提物高、中剂量组能降低二甲苯致小鼠耳肿胀度;对小鼠实验性腹膜炎及大鼠实验性皮肤炎症有显著的抑制作用(P<0.01);山豆根水提物高、中剂量组与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:山豆根水提取物具有抗炎作用。