丹参滴注液对人张氏肝细胞毒性实验研究

目的 研究丹参滴注液是否具有肝毒性,为药品的安全性评价提供参考依据.方法 对人张氏肝细胞加样培养,然后收集24、36、48 h细胞上清液,分别进行丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)检测,将所得的各种酶活力与中国药典规定的酶活力范围进行比较,若在范围之内表示无毒性或毒性较小;若超过范围,则表示毒性较大.结果 3种细胞株的ALT、AST、LDH检测结果均在中国药典规定的安全范围之内.结论 临床用量50倍以内的丹参滴注液的肝毒性较小,而导致不良反应的具体因素有待后期实验进一步研究.     

三种输液器对丹参滴注液含量、pH值和不溶性微粒影响的研究

目的：考查三种输液器对丹参滴注液质量的影响。方法：利用高效液相色谱仪、精密pH计和智能微粒检测仪,比较不同温度、不同输注速度下,三种输液器对丹参滴注液指纹图谱、pH值和不溶性微粒的影响。结果：丹参滴注液经过三种输液器后,指纹图谱相似度均在0.99以上,可认为输液器的材质和滤膜对丹参滴注液无影响和吸附;pH值基本不变,可认为三种输液器对丹参滴注液的pH无影响;不溶性微粒虽然都在《中国药典》规定的合格范围内,但≥4μm的微粒有显著性差异,可认为三种输液器对丹参滴注液中不溶性微粒有显著的影响。结论：模拟输液的结果发现,在不同温度、不同输注速度下,三种输液器对丹参滴注液的指纹图谱和pH值无显著性影响,但对不溶性微粒有显著性影响。     

牛磺酸对原代培养大鼠肝细胞的毒性作用

目的用原代培养正常大鼠肝细胞研究牛磺酸(β氨基酸)对肝细胞的毒性作用。方法用2步灌注法分离原代大鼠肝细胞;用MTT法测定细胞活力并计算IC50,观察药物作用后,培养液上清中AST、ALT和LDH活性及培养液中GSH和细胞内GSH的含量。结果细胞生长抑制率与剂量成正相关性,牛磺酸的IC50为24.23g.L-1。高浓度牛磺酸组培养液上清中AST、ALT和LDH活性显著升高,GSH含量显著减少。结论高浓度的牛磺酸对体外培养的肝细胞有一定损伤。     

齐墩果酸抗环磷酰胺所致大鼠肝细胞损伤作用

目的研究齐墩果酸（OA）对环磷酰胺所致大鼠肝细胞损伤的保护作用。方法分离大鼠肝细胞，进行原代培养。检测实验大鼠肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）和肝细胞MTT值。结果环磷酰胺可使肝细胞上清液ALT、AST及LDH活力升高，肝细胞MTT值减小，齐墩果酸能抑制上述变化。结论齐墩果酸可抗环磷酰胺所致肝细胞损伤。     

丹参注射液对大鼠脑缺血再灌注肝损伤影响的实验研究

目的研究丹参注射液对大鼠缺血再灌注肝损伤的影响。方法采用Pulsinelli方法建立大鼠急性全脑缺血再灌注模型。将Wistar大鼠随机分为3组,分别为对照组(A组)、缺血再灌注组(B组)、丹参+缺血再灌注组(C组),每组各9例。分别测定3组的血清ALT、AST、LDH的含量及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),观察肝细胞形态学变化。结果治疗组血清ALT、AST、LDH含量及肝组织MDA含量明显低于缺血再灌注组(P<0.01);肝组织SOD含量明显高于缺血再灌注组(P<0.01);肝细胞形态学变化明显减轻。结论丹参可以减轻大鼠脑缺血再灌注所致的肝脏损伤,对肝细胞有一定的保护作用。     

牛磺酸对原代培养大鼠肝细胞的毒性作用研究

目的利用原代培养正常大鼠肝细胞研究牛磺酸对肝细胞的毒性作用。方法用两步灌注法分离原代大鼠肝细胞;观察牛磺酸对原代大鼠肝细胞的毒性作用：MTT法测直接加牛磺酸的培养液和含牛磺酸大鼠血清的培养液对细胞生长抑制率的影响,计算IC50,并测定药物作用后培养液上清中AST、ALT和LDH活性及培养液中GSH和细胞内GSH的含量。结果MTT实验中细胞生长抑制率与剂量成正相关性,牛磺酸的IC50为24.23g/L。高浓度牛磺酸组培养液上清AST、ALT和LDH活性显著升高,培养液上清和细胞内GSH含量显著减少。结论高浓度的牛磺酸对体外培养的肝细胞有一定损伤。     

大鼠原代培养肝细胞作为早期肝毒性筛选模型的研究

目的研究大鼠原代培养肝细胞作为早期肝毒性的筛选模型的生物学特征。方法采用二步灌流法分离提取大鼠肝细胞进行培养;采用荧光倒置显微镜观察原代培养肝细胞的生长情况;采用MTT法绘制肝细胞生长曲线;采用全自动生化分析仪检测细胞上清液的ALT、AST、ALP、CK、LDH、TP、ALB、GGT值;采用爬片技术进行HE检查;采用Elisa法检测细胞上清液中细胞色素P450(CYP450)的总量,并采用肝细胞毒性药物对乙酰氨基酚对肝细胞作为早期肝毒性筛选模型进行验证。结果肝细胞培养4 h后开始贴壁,24 h后绝大多数肝细胞贴壁,体积明显增大;48 h后肝细胞贴壁牢固,维持至第8日,细胞开始逐渐脱落。肝细胞的对数生长期为第2至第3日,ALT、AST、LDH、CK在提取4 h后增高,第1日大幅降低后趋于平稳至第7日。TP、ALB、GGT、ALP提取4 h降低,后趋于平稳至第7日,肝细胞CYP450第1日至第5日分泌呈上升趋势,第6⁷日,轻微下降。HE结果显示提取的肝细胞与肝组织的HE涂片基本一致。对乙酰氨基酚对肝细胞的生长具有抑制作用,IC50为20.5 mmol·L-1,能使肝细胞肿胀,细胞核萎缩,使肝细胞分泌ALT、ALP、LDH增多,对肝细胞分泌CYP450的功能具有抑制作用。结论系统全面的阐述肝细胞的生物学特征及在早期毒性评价中的应用,肝细胞作为肝早期毒性筛选模型敏感的评价指标,对于原代培养肝细胞用于药物的早期毒性筛选研究起到了一个示范作用。     

不同浓度瑞芬太尼预处理对人肝细胞缺氧复氧损伤保护作用的影响

目的研究不同浓度瑞芬太尼预处理对人肝细胞缺氧复氧损伤保护作用的影响,探讨瑞芬太尼预处理的适宜浓度。方法将培养的人肝细胞按瑞芬太尼的浓度梯度分为11组:正常对照组(N组),缺氧复氧组(IR组),瑞芬太尼预处理组(RE1~RE8组):瑞芬太尼终浓度分别为0.5,1,5,10,20,30,40,50 ng.mL 1预处理1 h后建立缺氧复氧模型,生理盐水组(NS组)。N组正常条件下培养,其他组缺氧8 h,复氧4 h。复氧结束即刻,MTT法检测肝细胞活力;全自动生化仪检测细胞培养液中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;MDA试剂盒检测肝细胞内丙二醛(MDA)含量。结果与N组比较,其他各组细胞活力降低,AST,LDH水平和细胞内MDA含量升高(P<0.05)。与IR组和NS组比较,RE2~RE6组细胞活力升高,AST、LDH水平和细胞内MDA含量降低(P<0.05);而RE1、RE7和RE8组各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论临床有效血药浓度(1~30 ng.mL 1)瑞芬太尼预处理对肝细胞缺氧复氧损伤具有保护作用,而低浓度(0.5 ng.mL 1)和高浓度(≥40 ng.mL 1)瑞芬太尼预处理则无此作用。     

加味茵陈汤含药血清制备及其对体外肝细胞损伤模型的作用

目的：探索加味茵陈汤含药血清的制备方法及其对体外培养大鼠肝细胞损伤模型的作用。方法：制备加味茵陈汤（茵陈、栀子、大黄、三七、丹参、赤芍、生地、丹皮、白芍、柴胡）汤剂（2 g生药/ml）;大鼠中药灌胃（30 g/kg,2次/d,连续3 d）制备药物血清;改进Seglen胶原酶原位灌注分离大鼠肝细胞,培养体系中加入D-氨基半乳糖（25μg/ml）诱导肝细胞损伤模型,以不同浓度（5%、10%1、5%）加入药物血清培养24 h,于培养1、36、1、2和24 h取上清液测定ALT、AST和LDH,同步测定肝细胞的MTT反应,并于倒置相差显微镜下观察肝细胞形态变化。结果：从各时间点观察,随含中药血清浓度的增加,肝细胞培养上清液ALT、AST、LDH水平逐渐下降,10%药物血清与15%药物血清剂量组之间在各时间点比较无统计学差异（P〉0.05）,其余各组比较统计学差异均有显著性（P〈0.05）,培养肝细胞增殖活性则呈升高趋势。结论：大鼠的含中药血清可以降低肝细胞损伤模型AST、ALT及LDH等指标,增加细胞活性指标,随浓度增加而作用增强。     

玄参中苯丙素苷对肝细胞损伤保护作用的研究

目的：研究苯丙素苷对肝细胞损伤的保护作用。方法：通过D－氨基半乳糖造成体外和体内肝组织损伤，观察苯丙素苷对肝细胞存活率、LDH、ALT和AST的影响。结果：苯丙素苷在体外能提高肝原代培养细胞的存活率，降低LDH水平。在体内能降低衰竭大鼠ALT和AST水平。结论：苯丙素苷对D－氨基半乳糖造成肝细胞损伤具有明显的保护作用。     

人肝癌细胞和肝细胞放射敏感性的体外研究

目的 观察人肝癌细胞株HepG2及人肝细胞株QSG-7701对高能X线照射的敏感性和时相差异.方法 用吸收剂量为5 Gy的6 MV X线单次照射体外培养的HepG2细胞及QSG-7701细胞,以MTT比色法测定细胞在受照后不同时间的存活率,分别采用流式细胞术和激光共聚焦显微镜观测细胞凋亡率和形态变化.结果 高能X线照射后6h HepG2细胞凋亡率达到高峰(32%),存活率最低(62%),而QSG-7701细胞在照射后24h凋亡率和存活率才分别达高峰(17%)和低谷(82%).两株细胞单次照射后6h的凋亡率和存活率差异最大.结论 高能X线能够诱导人肝癌细胞株HepG2及人肝细胞株QSG-7701发生凋亡,两株细胞存在不同的敏感性和时相差异,HepG2细胞对射线敏感性比QSG-7701细胞高,HepG2细胞凋亡高峰明显早于QSG-7701细胞.     

苦参碱对人肝癌细胞及正常肝细胞增殖和粘附功能影响的比较

目的观察苦参碱对人肝癌细胞BEL-7404及正常肝细胞QSG-7701增殖和粘附能力的影响。方法采用MTT法测定苦参碱对BEL-7404和QSG-7701的增殖;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;粘附实验检测细胞粘附率。结果苦参碱1.0～4.0g/L能有效抑制BEL-7404细胞的增殖。0.5～1.0g/L浓度的苦参碱能有效地诱导BEL-7404分化。当苦参碱的浓度低于0.5g/L时,其对QSG-7701细胞的增殖有一定的促进作用。0.25、0.5、0.75、1.0g/L苦参碱处理72h后,BEL-7404细胞黏附抑制率分别为18.6%、24.4%、30.3%、44.7%,与对照组比较差异均有显著性（P〈0.01）;而QSG-7701细胞黏附抑制率分别为1.7%、3.5%、6.1%、37.8%,只有1.0g/L浓度的苦参碱与对照组比较有差异显著性（P〈0.01）。结论苦参碱能有效抑制肝癌细胞BEL-7404的增殖,且抑制作用具有时间、剂量依赖性;低浓度能有效地诱导肝癌细胞分化;高浓度的苦参碱有较强的抑制人正常肝细胞增殖作用,低浓度具有一定的生长刺激作用;苦参碱抑制BEL-7404细胞粘附。     

丹参注射液小鼠单次给药毒性试验研究

目的 观察单次静脉和腹腔注射给予丹参注射液后对小鼠产生的毒性。方法 采用经典半数致死量（LD₅₀）法进行小鼠单次给药毒性试验,动物分组后以不同的剂量静脉或腹腔注射给药1次,药后观察小鼠反应,检测体重和死亡率,连续观察14 d后剖检,观察主要脏器的病变。结果 丹参注射液小鼠单次静脉和腹腔注射给药半数致死量分别为：3.2 g·kg^-1和6.3 g·kg^-1。死亡小鼠毒性症状主要表现为俯卧不动、抽搐、呼吸困难,昏迷、尿失禁继而死亡。结论 丹参注射液大剂量腹腔和静脉注射可致小鼠全部死亡,但其半数致死量分别为临床用药剂量的65和129倍,安全范围较大。     

复方丹参滴丸对华法林在人体内药动学和药效学的影响

目的研究复方丹参滴丸对华法林在人体内药动学和药效学的影响,以及单独服用复方丹参滴丸4周后对凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)的影响。方法采用随机、单盲、双周期交叉、安慰剂对照试验设计。12名男性健康志愿者随机分为2组(6人/组),连续5周每日分别服用复方丹参滴丸(10片,每天3次)或安慰剂(10片,每天3次);d29口服单剂量华法林5 m g;第2周期2组交叉服用安慰剂或复方丹参滴丸,其余给药方案不变。按要求收集志愿者血样,分别以高效液相色谱法(H PLC)测定华法林的血药浓度以及半自动血凝仪测定常见凝血指标。结果合用复方丹参滴丸后,华法林的药动学参数cmax、AUC0~144、AUC0~∞、t1/2显著增加(P<0.05),CL/F显著减小(P<0.05),tmax和V/F没有显著变化;华法林的药效学参数发生显著变化。单独服用复方丹参滴丸4周后,PT和APTT均发生显著变化。结论复方丹参滴丸可影响华法林的药动学和药效学;单独服用复方丹参滴丸4周对凝血功能有显著影响。     

Enhanced sensitivity of hepatocellular carcinoma cells to chemotherapy with a Smac-armed oncolytic adenovirus

Aim： The aim of the present study was to further improve the therapeutic effects for human hepatocellular carcinoma （HCC） and reduce the damage in normal cells using a novel chemo-gene-virotherapeutic strategy. Methods： An oncolytic adenoviral vector （ZD55） similar to the typical oncolytic adenovirus ONYX-015, with a deletion of E1B-55K gene, was employed to express the second mitochon- dria-derived activator of caspases （Smac） protein by constructing a recombinant virus ZD55-Smac. The enhanced cytotoxicity of the combined treatment of ZD55- Smac with cisplatin or 5-fluorouracil （5-FU） was evaluated in several HCC cell lines. Moreover, the negative effects on normal cells have been tested in human normal liver cell lines L-02 and QSG-7701 cell lines by 3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）- 2,5-diphenyltetrazolium bromide assay and apoptotic cell staining. Results： According to our observation, ZD55-Smac is superior to ONYX-015 in sensitizing chemotherapy, ZD55-Smac used in conjunction with chemotherapy was found to exhibit obviously enhanced cytotoxicity in HCC cells, yet significantly abolished the negative toxicity in normal cells by utilizing the tumor selective replication vector and reducing the dosage. Conclusion： This chemo-gene-virotherapeutic （cisplatin or 5-FU＋ZD55-Smac） strategy is superior to the conventional chemo- gene or chemo-viro approach.     

复方丹参滴丸对急性心肌梗死大鼠基因表达谱的影响

目的：利用基因芯片技术对复方丹参滴丸对心肌梗死大鼠基因表达的影响进行评价和研究。方法：使用冠脉结扎法造成大鼠心肌缺血模型,并提取给药组和模型组大鼠心肌缺血区组织的总RNA,用大鼠全基因组芯片分析其基因组表达谱变化。结果：基因芯片结果显示,与模型组相比,给药组表达量发生变化的基因（Ratio〉2或〈0．5）有49条,其中表达下调的有39条,主要有Ppp3r1、Rhoa和Nppa,表达上调的有10条,包括H2,T24、RT1-CE15、Ptprb和Hcst等。结论：复方丹参滴丸可通过调节Wnt信号通路等多个基因和信号途径来减小心肌梗死模型大鼠心脏缺血区的心肌损伤。     

复方丹参滴丸治疗糖尿病视网膜病变的临床效果及安全性评价

目的 探讨复方丹参滴丸对糖尿病视网膜病变的临床治疗效果.方法 整理我院86例糖尿病视网膜病变患者的临床资料,在治疗当中随机分为治疗组和对照组各43例,治疗组患者使用复方丹参滴丸,对照组使用羟苯磺酸钙胶囊进行治疗,完成治疗后对患者的临床治疗效果进行比较分析,观察不同药物情况下患者的治疗疗效差异.结果 治疗组患者的临床效果明显高于对照组,(P<0.05),在患者的临床检查结果当中,患者的症状情况改善明显.结论 在糖尿病视网膜病变患者的治疗过程中,可以使用复方丹参滴丸治疗,临床治疗效果明显,且患者的药物使用安全性较高,在临床当中可以推广使用.     

复方丹参联合依那普利治疗老年冠心病心力衰竭66例

目的 观察复方丹参滴丸联合依那普利治疗老年冠心病心力衰竭的临床疗效.方法 选择符合我国冠心病慢性心力衰竭标准的患者66例,采用复方丹参滴丸联合依那普利治疗,疗程15周,治疗前后分剐用超声心动图测定左室射血分数(LVEF)、心排血量(CO)、E/A比值、左室舒张朱期内径(LVEDD),6 min步行耐量试验(6MWT)以及24 h动态血压检测等指标.结果 66例患者治疗后,心功能和运动耐量、动态血压实验检测均有明显改善,治疗前后血脂指标各参数间比较差异有明显统计学意义(P＜0.05＝.结论 该中西结合方案在治疗老年冠心病心力衰竭上能显著改善心功能、提高患者生活质量,适合老年患者应用.     

萘酰亚胺-多胺缀合物的合成及体外抗癌活性

合成了6个萘酰亚胺-多胺缀合物, 化合物的结构经元素分析、¹H NMR、¹³C NMR和MS确证。经MTT法对白血病细胞 (K562)、人乳腺癌细胞 (MB-231) 和前列腺癌细胞 (Ln cap cell) 进行了体外活性测试, 结果表明大多数化合物的体外抗肿瘤活性优于对照品氨萘非特 (amonafide), 其中化合物6d、6e和6f对正常人肝上皮细胞 (QSG-7701) 和肝癌细胞 (BEL-7402) 具有良好的选择性。