Ghrelin通过JNK信号通路抑制LPS诱导的肺泡巨噬细胞凋亡

【目的】观察体外条件下加入外源性ghrelin对内毒素(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞NR8383凋亡以及吞噬能力的影响,并探讨JNK(c-Jun N-terminal kinase)信号通路在其中所起的作用。【方法】用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测加入LPS或者ghrelin与LPS共孵育后NR8383的细胞毒性;流式细胞技术、原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;Western blot检测JNK、phospho-JNK信号通路蛋白以及cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2凋亡相关分子蛋白的表达;激光共聚焦技术检测巨噬细胞的吞噬能力;使用ghrelin受体拮抗剂[D-Lys-3]-GHRP-6、JNK特异性抑制剂SP600125分别抑制ghrelin受体及JNK激酶的激活。【结果】CCK-8检测结果显示LPS可显著抑制NR8383增殖,而ghrelin可呈浓度依赖性地阻断这种抑制作用;流式和TUNEL检测进一步证实ghrelin可显著降低LPS所致NR8383凋亡作用(P<0.05),而应用ghrelin受体拮抗剂[D-Lys-3]-GHRP-6可以减弱ghrelin的抗凋亡效果(P<0.05);LPS可以激活JNK激酶活性,并改变其下游凋亡相关蛋白的表达,其中促凋亡蛋白Bax以及cleaved caspase-3表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,应用ghrelin可以逆转LPS对JNK激酶的激活,继而下调Bax以及cleaved caspase-3的表达,上调Bcl-2的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05);ghrelin还可以维持LPS持续刺激下NR8383的吞噬能力(P<0.05)。【结论】ghrelin通过下调JNK信号通路的激活抑制LPS诱导的NR8383的凋亡,并维持其吞噬能力。     

淫羊藿苷激活抑制鼻咽癌CNE-2细胞存活、侵袭、迁移的体内外研究

【目的】探讨淫羊藿苷对鼻咽癌CNE-2细胞存活和侵袭迁移特性的影响。【方法】(1)体外研究:用不同浓度淫羊藿苷处理鼻咽癌CNE-2细胞,采用细胞计数试剂盒8(CCK8)测定细胞增殖能力以选择合适的剂量进行后续实验。采用Transwell实验观察细胞侵袭能力;划痕实验观察细胞迁移能力;蛋白免疫印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)、上皮钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达情况及信号通路蛋白Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化情况。并进一步观察单独或联合JNK抑制剂SP600125对JNK活化程度的影响,采用蛋白免疫印迹法检测细胞JNK磷酸化水平。(2)体内研究:建立鼻咽癌CNE-2荷瘤裸鼠模型,测定裸鼠移植瘤质量、细胞凋亡和移植瘤组织VEGF表达情况、MVD值。【结果】选择低细胞毒性10、20、50μmol/L剂量的淫羊藿苷进行后续实验。与空白对照组(淫羊藿苷0μmol/L)比较,淫羊藿苷10、20、50μmol/L组CNE-2细胞侵袭细胞数、划痕愈合率降低,细胞VEGF、N-cadherin、Vimentin表达水平明显降低(P 0.05),E-cadherin表达水平与CaMKⅡ、JNK的磷酸化水平升高(P 0.05),均呈剂量依赖性。淫羊藿苷(10μmol/L)可减弱JNK抑制剂SP600125对JNK磷酸化的抑制作用。与模型组比较,淫羊藿苷组鼻咽癌裸鼠存活率升高,移植瘤质量减小,移植瘤组织细胞凋亡率升高,VEGF表达水平、MVD值明显下降(P 0.05)。【结论】淫羊藿苷可促进CaMKⅡ/JNK通路激活来抑制鼻咽癌CNE-2细胞的存活、侵袭和迁移能力。     

ABT737通过激活JNK/c-Jun通路上调Bim诱导宫颈癌细胞凋亡

【目的】探讨JNK/c-Jun信号通路激活Bim在ABT737诱导宫颈癌细胞凋亡中的作用。【方法】用MTT法检测ABT-737对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用;用流式细胞术检测细胞凋亡率;用Western blot方法检测JNK、phospho-JNK、c-Jun、phospho-c-Jun以及Bim蛋白的表达;用RT-PCR检测Bim在mRNA水平的变化;用JNK特异性抑制剂SP600125和siRNA瞬时转染抑制JNK及c-Jun的活性。 【结果】ABT-737能抑制Hela细胞的生长,诱导HeLa细胞发生凋亡。ABT737可激活JNK激酶活性其下游靶分子c-Jun,凋亡相关基因Bim在mRNA水平和蛋白水平的表达也随之上调。应用JNK特异性抑制剂SP600125和靶向JNK及c-Jun的siRNA抑制JNK或c-Jun的活性或表达后,ABT737诱导的Bim上调及细胞凋亡亦被有效阻断。【结论】ABT737通过JNK/c-Jun信号通路上调凋亡相关基因Bim的表达,诱导HeLa细胞发生凋亡。     

光甘草定对结直肠癌细胞RKO增殖和凋亡的影响

目的 研究光甘草定(Gla)对人结直肠癌细胞株RKO增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法 选取RKO细胞为研究对象,采用MTT比色法测定Gla对RKO细胞增殖的影响,通过Hoechst 33258染色检测RKO细胞凋亡情况;Western blot法检测RKO细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白以及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)、半胱天冬氨酸蛋白酶-9前体(Procaspase-9)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平.结果 Gla抑制RKO细胞的增殖,并呈浓度与时间依赖性(P<0.05);Gla能调节MAPK信号通路JNK1/2,p38磷酸化的水平;Gla可诱导RKO细胞凋亡,下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Procaspase-9的表达水平(P<0.05),上调Bax、Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),而Caspase-8蛋白水平在各组变化均不明显.结论 Gla能抑制结直肠癌RKO细胞的增殖,并通过下调Bcl-2/Bax的比值诱导凋亡,其可能与MAPK信号通路的激活有关.     

黄芩苷通过激活JNK/p38 MAPK通路诱导ALL Reh细胞凋亡

目的探究黄芩苷对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞株Reh增殖和凋亡的影响及c-Jun氨基蛋白激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路在其机制中的作用。 方法黄芩苷处理或联合活性氧(ROS)清除剂NAC共处理Reh细胞；流式细胞术检测细胞凋亡、胞内ROS水平和线粒体膜功能(MMP)；免疫荧光实验观察凋亡细胞的数目及其形态变化。Western blotting免疫印迹检测Reh细胞内凋亡蛋白和信号通路蛋白的表达水平。 结果与对照组比较,黄芩苷组Reh细胞增殖被抑制,细胞凋亡率、促凋亡蛋白、ROS、JNK和p38磷酸化水平显著上升,抗凋亡蛋白表达下调,MMP明显受损(P＜0.01)。NAC清除ROS后明显恢复细胞增殖,JNK和p38磷酸化水平明显下降,Survivin表达恢复(P＜0.01)。 结论黄芩苷经激活JNK/p38 MAPK通路活化Caspase3/7,诱导Reh细胞凋亡。     

PYK2介导H460肺肿瘤细胞失巢凋亡抗性的机制

【目的】研究蛋白激酶PYK2对悬浮状态下的肺癌细胞H460失巢凋亡抗性的作用和PYK2的下游通路蛋白。【方法】RNA干扰实验采用逆转录病毒载体介导的稳定表达系统降低PYK2蛋白的表达;细胞悬浮培养实验用polyHEMA培养方法;用PARP 断裂带和DAPI荧光染色检测细胞凋亡情况;细胞侵袭能力用侵袭小室实验;磷酸化蛋白激酶水平用免疫印记实验检测。【结果】用RNA干扰沉默能够降低H460细胞中PYK2蛋白的表达。抑制PYK2的表达能够降低悬浮培养H460细胞增殖能力和促进细胞凋亡增加。此外,沉默PYK2的表达能使肿瘤细胞侵袭能力下降, 并降低磷酸化Paxillin和Src的水平,但不能降低磷酸化JNK、AKT和ERK的水平。【结论】 PYK2信号通路在H460肺癌细胞失巢凋亡抗性中起重要作用,Paxillin和Src可能是PYK2的下游通路蛋白。     

槐耳清膏对人结肠癌HCT116干细胞增殖及迁移的影响

【目的】观察槐耳清膏对人结肠癌HCT116干细胞增殖及迁移的影响,探讨其可能的相关分子机制。【方法】采用无血清培养基培养刺激人结肠癌HCT116原代细胞向干细胞转化的方法来获取人结肠癌HCT116干细胞。不同质量浓度(0、0.5、8、64 g·L-1)槐耳清膏作用HCT116干细胞72 h后,采用CCK-8法、Transwell侵袭实验、流式细胞术及蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测HCT116干细胞增殖、侵袭能力的变化及上皮—间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志蛋白E-cadherin和Hippo信号通路核心蛋白Yes相关蛋白(YAP)的表达情况。【结果】槐耳清膏可明显升高HCT116干细胞增殖抑制率,减少迁移细胞数,上调EMT过程中E-cadherin蛋白表达率,并且能够下调Hippo信号通路YAP蛋白的表达水平,且具有剂量依赖性。【结论】槐耳清膏可抑制结肠癌干细胞增殖和侵袭能力,其作用机制可能与抑制EMT进展和降低Hippo信号通路中核心蛋白YAP的表达有关。     

SHP2/Hook1通过上皮间质转化调控肺肿瘤转移的机制研究

【立论依据】 肿瘤转移是肿瘤患者死亡的最主要原因,而上皮间质转化在肿瘤转移的起始过程中发挥重要作用。原癌基因ptpn11表达的蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2在多种肿瘤中存在突变或高表达现象,提示SHP2参与肿瘤的发生与进展。本项目的前期研究发现SHP2促进上皮间质转化过程,且需要其酶活性的参与;新发现的SHP2相互作用蛋白Hook1在上皮间质转化中具有相反的抑制作用,而Hook1与SHP2的催化结构域结合。 【设计思路】 本项目对Hook1是SHP2的内源酶抑制剂这一假设进行研究,并探究SHP2与Hook1形成的蛋白复合物通过调节上皮间质转化过程影响肺肿瘤转移的可能性。 【实验内容】 (1)原核表达与纯化带有His标签的SHP2和Hook1蛋白,通过测定SHP2蛋白磷酸酶的活性探讨Hook1能否抑制SHP2的酶活性;(2)定量PCR、蛋白质印迹方法比较侵袭能力不同的肺上皮细胞中SHP2和Hook1在mRNA与蛋白水平上的差异;(3)miRNA干扰或过表达方法改变两种蛋白的表达水平,观察其对肿瘤细胞的迁移及侵袭能力的影响;(4)构建破坏SHP2与Hook1相互作用的截短或点突变质粒,探究Hook1对上皮间质转化以及细胞侵袭的影响是否需要SHP2的参与;(5)体内实验验证改变SHP2或Hook1的表达是否影响肿瘤细胞在小鼠体内的成瘤能力。 【材料】 原核表达质粒PET21a,His亲和纯化树脂,非小细胞性肺癌细胞株A549,SHP2siRNA,pCDNA3.1-SHP2及突变体表达载体,Hook1siRNA,pCDNA3.1-Hook1及突变体表达载体,抗SHP2、Hook1抗体,4组(每组9只,共36只)NOD/SCID小鼠。 【可行性】 前期研究发现SHP2的蛋白酪氨酸磷酸酶活性能够促进肺上皮细胞的上皮间质转化过程;SHP2的催化结构域相互作用蛋白Hook1则抑制上皮间质转化过程。在此基础上我们推测SHP2和Hook1通过上皮间质转化从而对肿瘤的转移产生影响,并且Hook1的作用需要SHP2的参与。故本研究具有较强的可行性。 【创新性】 新发现的与SHP2催化结构域相互作用的Hook1有可能成为首个SHP2的内源抑制蛋白。明确SHP2/Hook1复合物在上皮间质转化以及肿瘤转移中的作用,有助于认识SHP2与肿瘤转移的关系,所揭示的分子机制有望为肿瘤转移的早期诊断及临床治疗提供新的潜在靶点。     

粉防己碱对人结直肠癌HCT116细胞株生物功能的影响及其机制

目的: 探究粉防己碱对人结直肠癌HCT116细胞株生物功能的影响及其可能机制。方法: 采用CCK-8检测粉防己碱对HCT116细胞活力的影响及其半数抑制浓度;用不同浓度粉防己碱(0、2.5、5和10 μmol/L)处理细胞,细胞集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞术、线粒体膜电位检测技术和Hoechst 33342细胞核染色技术检测细胞凋亡;细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白印迹技术检测细胞上皮间质转化标志蛋白表达水平及PI3K/AKT/NF-κB信号通路中关键分子活化程度。结果： HCT116细胞活力随粉防己碱处理浓度增加而降低,粉防己碱半数抑制浓度为9.441 μmol/L;与0 μmol/L组相比,2.5、5和10 μmol/L粉防己碱组细胞形成集落数明显减少(P均<0.05);5、10 μmol/L粉防己碱组G0/G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例下降,凋亡细胞比例增加(P均<0.05);2.5、5、10 μmol/L粉防己碱组细胞线粒体膜电位降低,细胞核荧光增强,迁移能力降低(P均<0.05);与0 μmol/L组相比,10 μmol/L粉防己碱组细胞多呈圆形,有更多上皮细胞形态;2.5、5和10 μmol/L粉防己碱组细胞上皮标志蛋白E-钙黏蛋白表达增加,而间充质标志物N-钙黏蛋白和波形蛋白表达减少,且PI3K/AKT/NF-κB信号通路中关键分子AKT和NF κB 的磷酸化水平降低(P均<0.05)。结论： 粉防己碱可能通过抑制PI3K/AKT/NF-κB 信号途径逆转HCT116细胞上皮间质转化,进而降低细胞增殖迁移能力,诱导其凋亡。     

JNK信号通路对葡萄籽提取物抑制Eca-109细胞增殖的调控作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路对葡萄籽提取物抑制Eca-109细胞增殖过程的调控作用。方法体外培养Eca-109细胞,用不同浓度葡萄籽提取物、JNK特异性抑制剂SP600125对Eca-109细胞进行处理,应用噻唑蓝比色法检测细胞增殖,倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变,annexinV/碘化丙锭双标记观察细胞凋亡;Western印迹检测磷酸化JNK蛋白表达的变化。结果葡萄籽提取物作用于Eca-109细胞后,细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高,具有时间和剂量依赖性,并伴随磷酸化-JNK蛋白水平上调;加入SP600125能下调磷酸化-JNK的水平,显著降低葡萄籽提取物对Eca-109细胞的增殖抑制率和凋亡率。结论 JNK信号通路参与葡萄籽提取物抑制Eca-109细胞增殖过程的调控,抑制JNK活性可降低葡萄籽提取物对Eca-109细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用。     

苦参碱对K-ras基因突变型结肠癌细胞株增殖的抑制作用及机制研究

【目的】观察苦参碱对K-ras基因突变型结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用及机制。【方法】以不同浓度苦参碱干预K-ras基因突变型人结肠癌SW480细胞,采用新型四唑氮盐(MTS)做比色分析测定细胞增殖,流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡,细胞划痕法观察细胞侵袭转移能力的变化,Western blotting方法检测细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路下游关键激酶MEK1/2蛋白的表达。【结果】与空白对照组比较,0.125~1 mg/m L浓度的苦参碱能显著抑制SW480细胞增殖,促进细胞凋亡,有效抑制结肠癌细胞的移行,降低MEK1/2蛋白的表达(P0.05),其作用强度随药物浓度增加有升高的趋势。【结论】苦参碱可能通过下调MAPK信号通路下游MEK1/2蛋白的表达,有效抑制SW480细胞的增殖和移行,并促进其凋亡。     

TGF-β1/Smad7信号通路在哈萨克族食管癌上皮间质转化中的作用

[目的]探讨TGF-β1/Smad7信号通路在哈萨克族食管鳞癌上皮间质转化(EMT)中的作用及其机制.[方法]运用免疫组织化学方法检测50例哈萨克族食管鳞癌组织及远端对应癌旁组织中TGF-β1与Smad7蛋白的表达.进一步在细胞水平,针对食管鳞癌细胞系Ec9706,基于RNA干扰技术,使用LipofectamineTM 2000试剂转染TGF-β1 siRNA.采用qRT-PCR技术检测TGF-β1及Smad7 mRNA表达水平;Western blot技术检测转染后各组TGF-β1、Smad7以及EMT相关蛋白表达水平;MTT、划痕及流式细胞术等方法检测各组细胞转染后的增殖、迁移、凋亡及周期的变化.[结果]免疫组化检测结果显示,哈萨克族食管鳞癌组织中TGF-β1蛋白表达明显高于癌旁组织(P＜ 0.05);Smad7蛋白在食管鳞癌组织中的表达低于癌旁组织(P＜0.05).转染TGF-β1 siRNA后,Ec9706细胞中TGF-β1 mRNA和蛋白表达量均降低,Smad7 mRNA和蛋白表达量增加;上皮标志物E-cadherin表达量增加,间质标志物Vimentin表达量降低,同时Ec9706细胞增殖、迁移受到抑制,细胞凋亡增加,细胞周期发生G0/G1期阻滞.[结论]哈族食管鳞癌中存在TGF-β1/Smad7信号通路的激活,食管癌中TGF-β1高表达,抑制了Smad7的表达,从而促进了上皮间质转化过程,进一步促进了食管癌细胞的增殖和迁移,并抑制细胞凋亡,影响细胞周期中的G0/G1期.     

p38 MAPK抑制剂通过抑制JNK活性抑制培养的小脑颗粒神经元凋亡

【目的】研究特异性p38分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）抑制剂SB203580对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用。【方法】把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子（KCl25mmol*L-1）的培养基中转移至低钾培养基（KCl5mmol*L-1）中诱导神经元凋亡。凝胶电泳分析DNA片段,SAPK/JNK分析盒测定c-JunN-末端蛋白激酶(JNK)活性。【结果】低钾诱导小脑颗粒神经元的具有典型形态学和生化特征的凋亡。特异性的p38MAPK抑制剂SB203580通过抑制细胞凋亡,促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元存活。这种保护作用具有浓度依赖性。培养于低钾环境中的颗粒神经元,c-Jun表达和磷酸化水平升高了,且激活了JNK活性。当小脑颗粒神经元生长在含SB20358025μmol*L-1的低钾培养基中,c-Jun表达、磷酸化水平和JNK活性都明显降低。【结论】SB203580抑制JNK活性,降低c-Jun的磷酸化而对低钾培养的小脑颗粒神经元具有保护作用。     

丹皮酚通过内质网应激和线粒体损伤途径促进卵巢癌细胞凋亡

【目的】探讨丹皮酚对卵巢癌细胞凋亡的影响及其机制。【方法】用不同剂量(0、1、2、3、4、5、6、7、8 mmol/L)丹皮酚处理人正常卵巢表面上皮细胞HOSEpiC和人类卵巢癌细胞SKOV3。应用细胞计数试剂盒8(CCK8)测定丹皮酚对HOSEpiC和SKOV3细胞的毒副作用,选择低剂量丹皮酚(1、2、5 mmol/L)进行后续实验。用丹皮酚(1、2、5 mmol/L)处理SKOV3细胞,溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)染色法观察SKOV3细胞的增殖能力,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测SKOV3细胞Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、Bax、葡萄糖调控蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源(CHOP)、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3、细胞色素c(Cyto-c)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、细胞色素c氧化酶4(COX IV)、cleaved Caspase-9的表达,流式细胞术检测细胞SKOV3凋亡和Ca2+水平。【结果】丹皮酚(2、5 mmol/L)对正常细胞无害,可剂量依赖性地降低SKOV3细胞存活率。丹皮酚(2、5 mmol/L)抑制SKOV3细胞增殖,促进SKOV3细胞凋亡。与空白对照组比较,丹皮酚(2、5 mmol/L)均升高内质网应激相关的凋亡通路蛋白GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3表达水平及Ca~(2+)含量(均P 0.05)。与空白对照组比较,丹皮酚2、5 mmol/L均降低线粒体损伤相关的凋亡通路Cyto-c、AIF(线粒体内)水平,升高Cyto-c、AIF(胞质)的表达水平,升高cleaved Caspase-9表达水平,下调Bcl-2及上调Bax表达水平(均P 0.05),且呈剂量依赖性。【结论】丹皮酚剂量依赖性地调控SKOV3细胞中内质网应激和线粒体损伤相关的凋亡通路蛋白,可促进卵巢癌细胞凋亡。     

ERK5对人肺成纤维细胞自噬、凋亡和增殖的调控

目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶-5(ERK5)对人肺成纤维细胞系(HLFs)自噬、凋亡和增殖的调控及对成纤维细胞表型转化的影响.方法 转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HLFs建立肺纤维化细胞模型,过表达ERK5基因(ERK5)后通过Western blot检测自噬、凋亡、增殖相关因子和表型转化标志因子α-SMA的表达,通过细胞增殖/毒性检测(CCK8)试剂盒检测细胞增殖率.结果 经TGF-β1处理后,与对照组相比,ERK5组细胞α-SMA、P62蛋白表达水平升高,LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平降低;促凋亡蛋白Cleaved-Caspase-3表达水平降低,抗凋亡蛋白Bcl-2和增殖细胞核抗原PCNA表达水平升高,CCK8检测到细胞增殖率升高.结论 在TGF-β1诱导的HLFs表型转化过程中,ERK5高表达促进细胞增殖、抑制细胞自噬和凋亡.     

莪术醇对非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的:观察莪术醇对非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及潜在的作用机制。方法:细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测莪术醇对A549细胞活性的影响;EdU检测细胞增殖;体外侵袭实验(Transwell)检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹检测上皮间质转化和Wnt通路相关蛋白的表达水平,细胞免疫荧光检测vimentin光点的水平。结果:莪术醇浓度低于60μmol·L~(-1)时对A549细胞的活性无显著影响;不同浓度莪术醇作用于A549细胞后,细胞增殖倍数显著降低;侵袭细胞数目显著减少;划痕闭合率显著降低;细胞中上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的表达水平显著升高,而Vimentin、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、snail、β-连环蛋白(β-catenin)、T细胞因子4(T-cell factor 4,TCF4)和细胞周期蛋白1(Cyclin-D1)的表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞中vimentin光点水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:莪术醇可抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移和上皮间质转化,其作用机制与Wnt/β-catenin通路相关。     

基于PI3K/AKT信号通路探讨中医药治疗肺癌研究进展

磷脂酰肌3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路是生物体内重要的信号转导系统之一,具有调节细胞生长、分化、凋亡等多种功能,与肺癌细胞的增殖、凋亡、自噬、侵袭转移、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)等细胞活动密切相关。中医药可以通过干预PI3K/AKT通路及其相关靶点蛋白调节细胞周期蛋白与凋亡相关蛋白的表达,从而抑制增殖、诱导凋亡;通过上调自噬相关蛋白的表达,促进肺癌细胞自噬;通过下调基质金属蛋白酶(matrix-metalloproteinase, MMP)的表达,降低肺癌细胞侵袭转移能力;通过多靶点、多机制逆转EMT和耐药。但是,中医药基于PI3K/AKT信号通路治疗肺癌的研究也存在许多不足：(1)PI3K/AKT信号通路与多条通路纵横交错,许多研究发现,中医药可以同时影响多条信号通路的表达,但各条通路之间的相互影响与相互作用尚未阐明。(2)PI3K/AKT信号通路作用广泛,多数研究仅证实中医药的抗肺癌作用与通路...     

miR-122通过AXL/HIF-1α通路抑制子宫内膜癌细胞增殖和上皮间质转化

【摘要】 目的 探讨miR-122对子宫内膜癌细胞（RL-952）增殖、上皮间质转化(EMT)及受体酪氨酸激酶(AXL)/缺氧诱导因-1α(HIF-1α)信号通路的影响。方法 体外培养人子宫内膜癌细胞株RL-952,将细胞分为空白对照组(仅用培养基)、阴性对照组(转染miR-122 NC)、miR-122 mimics组(转染miR-122 mimics),采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组细胞miR-122水平,利用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白印迹（WB）法检测AXL、HIF-1α蛋白以及EMT相关蛋白E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin的表达变化。结果 与空白对照组、阴性对照组相比,miR-122 mimics组RL-952细胞转染后48小时细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、AXL、HIF-1α、N-cadherin和Vimentin蛋白表达均显著下降（P＜0.05）,E-cadherin、α-catenin蛋白表达、细胞凋亡率均明显升高（P＜0.05）,空白对照组与阴性对照组比较,细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、细胞凋亡率、细胞AXL、HIF-1α、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论 过表达miR-122可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化,促进细胞凋亡,可能是通过抑制AXL/HIF-1α通路而实现。     

芸香诱导K562细胞凋亡时细胞色素C表达变化

【目的】研究芸香诱导白血病K562细胞凋亡过程中细胞色素C的表达。【方法】体外培养K562细胞,Hoechst33342/PI双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,分离细胞线粒体和胞浆,经SDS-PAGE电泳分离蛋白,Western Bloting检测线粒体、细胞浆细胞色素C表达。【结果】芸香浓度为2×10-5、4×10-5、8×10-5mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;Hoechest33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现,Western Bloting检测4×10-5mol/L药物处理细胞后线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带。【结论】芸香诱导白血病细胞发生凋亡,可能与线粒体途径有关。     

华蟾素诱导L1210细胞凋亡及作用机制的研究

目的:探讨华蟾素对离体小鼠急性淋巴细胞白血病L1210细胞的作用。方法:将L1210细胞分为对照组及药物处理组。MTT实验检测细胞活性及增殖抑制情况;DNA亲和染料Hoechst33258荧光染色观察细胞核变化;WesternBlot检测细胞凋亡通路相关蛋白表达水平的改变。结果:华蟾素在0.25~1.0μM浓度范围内即表现出显著的细胞生长增殖抑制,而且有时间和浓度依赖性;Hoechst33258染色发现高浓度的华蟾素作用48h,L1210细胞即表现出凋亡形态改变;WesternBlot实验表明,细胞凋亡通路相关蛋白Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9表达明显高于对照组。结论:华蟾素有诱导L1210细胞凋亡的作用。