D-氨基葡萄糖衍生物通过JNK信号通路诱导Eca-109细胞凋亡

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在D-氨基葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡中的作用及机制.方法:体外培养Eca-109细胞,用COPADG及特异性JNK抑制剂SP600125对Eca-109细胞进行处理;Western印迹法检测P-JNK蛋白表达的变化;MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率;倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:Western印迹显示随着COPADG作用浓度增加P-JNK蛋白表达逐渐增强,经SP600125预处理后,COPADG诱导Eca-109细胞P-JNK蛋白表达明显减弱(P＜0.01),COPADG诱导的细胞凋亡率明显减低,细胞增殖抑制率显著下降,与COPADG单作用组之间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:JNK信号转导通路在COPADG诱导Eca-109细胞凋亡过程中发挥重要作用,COPADG通过JNK信号通路诱导Eca-109细胞凋亡.     

MAPKs通路在Leptin促人乳腺癌细胞系增殖中的机制研究

目的:探讨MAPKs信号转导通路在瘦素(Leptin)促人乳腺癌细胞MCF-7增殖中的作用机制。方法:用MTT比色法观察不同浓度瘦素促MCF-7细胞的增殖效应,以及用JNK、ERK特异性抑制剂(SP600125,PD98059)阻断MAPKs信号通路对瘦素促MCF-7细胞增殖效应的影响;Westem blot检测瘦素干预不同时间对p-JNK、JNK、p-ERK、ERK蛋白表达水平的影响;RT-PCR检测在瘦素作用下以及MAPKs信号通路阻断情况下对MCF-7细胞表达瘦素受体(Ob-R)mRNA水平的影响。结果:50 ng/ml瘦素促人乳腺癌细胞MCF-7增殖效应最强,该浓度瘦素可使MAPKs信号通路中的靶蛋白发生磷酸化激活;50 ng/ml瘦素作用于MCF-7细胞30 s后p-ERK蛋白表达即显著增加,3 min后p-JNK蛋白表达亦显著增加;分别用SP600125和PD98059阻断JNK、ERK信号通路可显著抑制瘦素促MCF-7细胞的增殖效应.亦可抑制瘦素作用下MCF-7细胞Ob-R mRNA表达水平的增加。结论:瘦素促人乳腺癌细胞MCF-7增殖效应可能与激活MAPKs信号通路有关,亦调控MCF-7细胞中瘦素受体的表达,在肿瘤细胞周围形成瘦素自分泌环,促进乳腺癌的发生发展。     

JNK与Akt通路在夏枯草抑制人淋巴瘤细胞生长中的作用

目的研究夏枯草对淋巴瘤细胞(Raji细胞)生长的影响及可能的机制。方法参考临床常用剂量,采用50g/L夏枯草(夏枯草组)、50g/L夏枯草+20μmol/LJNK特异抑制剂SP600125(SP600125组)、50g/L夏枯草+1μmol/LAkt特异抑制剂Wortmannin(Wortmannin组)处理Raji细胞,以同体积生理盐水作为对照组,应用MTT法检测各组的细胞增殖率,蛋白免疫印迹法检测各组的JNK和Akt磷酸化水平。结果夏枯草组细胞增殖率低于对照组(P0.05),SP600125组细胞增殖率比夏枯草组增高(P0.05),Wortmannin组细胞增殖率比夏枯草组降低(P0.05);JNK磷酸化水平在夏枯草组中明显升高(P0.05),SP600125可以抑制其磷酸化(P0.05),Wortmannin不能抑制其磷酸化(P0.05);Akt磷酸化水平在夏枯草组中降低(P0.05),SP60015及Wortmannin均可抑制其磷酸化(P0.05)。结论夏枯草可以明显抑制Raji细胞的生长,这种抑制作用可能是通过激活JNK信号转导通路,抑制Akt通路激活实现的。     

MAPKs通路在胰岛素促人乳腺癌细胞系增殖中的机制研究

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)信号转导通路在胰岛素促人乳腺癌细胞MCF-7增殖中的作用机制?方法:通过MTT比色法观察不同浓度(0?25?50?100?200 nmol/L)胰岛素促MCF-7细胞的增殖效应,及用JNK?ERK1/2通路特异性抑制剂(SP600125?PD98059)阻断MAPKs信号通路对胰岛素促MCF-7细胞增殖效应的影响; Western blot检测胰岛素干预对磷酸化JNK?磷酸化ERK1/2蛋白表达水平的影响以及JNK?ERK1/2?JAK2特异性抑制剂对上述蛋白表达的影响?结果:各浓度胰岛素均能不同程度促进人乳腺癌细胞MCF-7增殖,25 nmol/L胰岛素的促增殖效应最强(P < 0.01);分别用SP600125?PD98059?AG490阻断JNK?ERK1/2?JAK/STAT信号通路均可不同程度抑制胰岛素促MCF-7细胞的增殖效应;胰岛素可诱导MAPKs信号通路中靶蛋白的磷酸化激活,Western blot结果显示,100 nmol/L胰岛素作用于MCF-7细胞5 min后即可磷酸化激活JNK途径,且该活化状态可持续1hr,而ERK1/2蛋白在胰岛素作用30 min后才被磷酸化激活;10 μmol/L PD98059(ERK通路抑制剂)可显著抑制200 nmol/L 胰岛素作用30 min对ERK1/2的磷酸化激活,而20 μmol/L SP600125(JNK通路抑制剂)以及20 μmol/L AG490(JAK/STAT通路抑制剂)对ERK1/2磷酸化激活的抑制作用则不明显?结论:胰岛素可促进人乳腺癌细胞MCF-7增殖,该增殖效应可能与其激活MAPKs信号通路及下游其他信号转导有关,上述通路的激活可能促进乳腺癌的发生发展?     

JNK信号通路对胰岛βTc3细胞脂性凋亡的影响及吡格列酮的干预作用

目的：探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路对胰岛βTc3细胞脂性凋亡的影响及吡格列酮（PGZ）的干预作用.方法：采用游离脂肪酸（FFA）诱导小鼠βTc3细胞凋亡;以MTT法观察FFA对细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞化学和Western Blot法检测在FFA、特异性JNK抑制剂SP600125及PGZ作用下磷酸化JNK（p-JNK）、磷酸化c-jun（p-c-jun）的表达.结果：FFA对体外生长的βTc3细胞具有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,JNK阻断剂及PGZ可显著减少这一过程引起的凋亡;且FFA诱导βTc3细胞凋亡伴随着JNK信号通路中p-JNK和p-c-jun的升高;用SP600125预处理细胞后,可明显减少p-JNK和p-c-jun的活化;而PGZ未能抑制FFA引起的JNK活化.结论：JNK信号通路参与了FFA诱导的小鼠βTc3细胞凋亡;PGZ可明显抑制胰岛βTc3细胞凋亡,但这一过程可能没有通过JNK信号通路.     

PLA激活JNK信号通路促进NCI-H292细胞凋亡

目的 探讨多聚左旋精氨酸(PLA)诱导NCI-H292细胞凋亡的信号通路及分子机制.方法 将加入PLA 的浓度梯度分5组:0、10、20、40、60 mg/L,作用NCI-H292细胞24 h后Western blot法检测每组c-Jun氨基末端激酶( JNK)的磷酸化水平;设对照组、PLA 组(40 mg /L)、SP组(加入特异性JNK通路抑制剂SP600125)、PLA+SP组,加药24 h后流式细胞仪检测每组NCI-H292细胞凋亡率,Western blot法检测各组NCI-H292细胞内凋亡相关蛋白 Bcl-2/Bax、Caspase-3、P-JNK/JNK和β-actin蛋白的表达水平.结果 对照组、PLA组、SP组、 PLA+ SP组 NCI-H292细胞凋亡率分别为(5.13 ±1.07)%、(22.62 ± 1.66)%、(5.69 ± 0.14)%、(8.99 ± 3.73)% ;Western blot 法检测 PLA 诱导 NCI-H292 细胞内BCL-2/Bax比值降低( P＜0. 01),Caspase 3 表达升高( P＜0. 001),PLA诱导NCI-H292 细胞JNK 磷酸化水平增加(P＜0.001 ), SP600125 抑制 PLA 诱导 JNK 磷酸化( P ＜0.001).结论 PLA可能介导JNK信号通路引起NCI-H292细胞凋亡水平增加.     

丝裂原活化蛋白激酶在力达霉素抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用

目的: 研究力达霉素(LDM)对鼠骨髓瘤细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs) 信号传导通路的影响及MAPKs在LDM抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用,为LDM治疗人多发性骨髓瘤的研究提供依据。方法: 选取处于对数生长期鼠骨髓瘤细胞株SP2/0,随机分为空白对照组、4种不同浓度LDM组,采用Western blotting 方法检测各组细胞48 h后MAPK家族的三个主要成员c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)和p38 MAPK的表达水平。选取处于对数生长期SP2/0,随机分为对照组、LDM组、SP600125组(JNK抑制剂)、SB203580组(p38抑制剂)、U0126组(ERK抑制剂)、LDM+SP600125组、LDM+SB203580组和LDM+U0126组,采用MTS法和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。结果: 细胞培养48 h后,不同浓度LDM组JNK、ERK和p38 MAPK的表达水平高于空白对照组（P<0.05）;各抑制剂组细胞增殖率和细胞凋亡率与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),即对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均不明显;但LDM+SP600125组、LDM +SB203580组LDM对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均降低（P<0.05）,而LDM+U0126组LDM对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用则增强（P<0.05）。结论: LDM能够通过激活JNK、p38 MAPK抑制鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞增殖,诱导其凋亡。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过激活p-JNK信号通路诱导肾癌细胞凋亡

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（trichostatinA, TSA）和帕比司他（panobinostat, LBH589）在体外对人肾癌细胞株增殖、细胞周期分布及凋亡的影响,并进一步探讨其可能的分子机制。方法LBH589或TSA作用于经或未经SP600125预处理的人肾癌细胞株OS-RC-2,在设定的时间点用四甲基偶氮唑蓝方法（MTT）检测细胞生长抑制率并检测出最佳刺激浓度和时间;用流式细胞术检测药物作用后肾癌细胞周期变化情况及凋亡情况;用Western blotting分析药物作用后肾癌细胞内c-Jun、磷酸化c-Jun（p-c-Jun）、Bcl-2、Bax蛋白的表达变化。用JNK抑制剂SP600125阻断JNK信号通路后,观察SP600125预处理+TSA组较TSA单独处理肾癌细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白的变化情况。结果TSA和LBH589在体外均可抑制肾癌细胞生长,且具有浓度与时间依赖性;与对照组相比,TSA或LBH589可使肾癌细胞发生G2/M期周期阻滞,并均可诱导肾癌细胞发生明显凋亡。Western blotting显示TSA和LBH589均能明显促进p-c-jun蛋白的表达,同时TSA也能诱导Bax蛋白表达而抑制Bcl2蛋白表达,与对照组相比有显著统计学意义（P<0.05）;与TSA单独处理相比,JNK抑制剂SP600125预处理+TSA能部分减弱TSA对肾癌细胞的抑制效应并逆转TSA诱导的肾癌细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡,差异有统计学意义（P<0.05）。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂在体外可抑制OS-RC-2细胞增殖,阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡;TSA可通过JNK信号通路诱导OS-RC-2细胞G2/M期阻滞,调节凋亡蛋白的表达从而诱导细胞凋亡。     

白杨素通过调控MAPKs信号通路促进SMMC-7721细胞凋亡

目的探究白杨素诱导肝癌细胞系SMMC-7721细胞凋亡的效应及分子机制。方法将SMMC-7721细胞分为空白对照 组,DMSO溶剂对照组和白杨素处理组（5,10,20,40,60,80,100,150,200 μg/mL）,采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制作用;将 SMMC-7721细胞分为空白对照组,DMSO溶剂对照组和白杨素处理组（5,10,20 μg/mL）,在倒置显微镜下观察细胞形态学变 化;DAPI染色后,在荧光倒置显微镜下观察细胞核形态变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;将SMMC-7721细胞 分别用白杨素,P38特异性抑制剂SB203580（0,5,10 μmol/L）、ERK特异性抑制剂U0126（0,5,10 μmol/L）和JNK特异性抑制剂 SP600125（0,5,10 μmol/L）处理后,Western blotting技术检测凋亡相关蛋白PARP、caspase-3和凋亡相关信号通路和MAPKs的 磷酸化变化情况。结果白杨素显著抑制SMMC-7721细胞增殖,和对照组相比,DMSO组,5,10,20 μg/mL白杨素处理组细胞 抑制率分别为96%,76%,71.75%和64.29%,具有剂量依赖性。超过60 μg/mL细胞抑制率达到饱和。另外,白杨素促进细胞凋 亡,20 μg/mL 白杨素处理组细胞凋亡率为68.7%,比空白对照组增加了59.4%,PARP 和caspase-3 显著切割。白杨素激活 MAPKs信号通路,具有剂量和时间依赖性。分别用SB203580、U0126、SP600125预处理细胞,白杨素诱导的P38、ERK和JNK 的磷酸化和PARP切割被抑制。结论白杨素通过调控MAPKs信号分子的活化,抑制SMMC-7721细胞的增殖并且促进细胞凋 亡的发生。     

SP600125+奥沙利铂+卡培他滨抑制胃癌细胞SGC7901增殖的研究

目的探讨c-Jun氨基端激酶(JNK)信号转导通路在胃癌细胞增殖中的参与作用及SP600125+卡培他滨+奥沙利铂的抑制增殖机制,为抗肿瘤新药开发和临床药物治疗提供参考。方法将生长状态良好的胃癌细胞SGC7901随机分为5组:对照组、SP600125组(SP60012510μmol/L)、SP600125+卡培他滨组(SP600125 10μmol/L+卡培他滨50μmol/L)、SP600125+奥沙利铂组(SP600125 10μmol/L+奥沙利铂25μmol/L)和SP600125+卡培他滨组+奥沙利铂(SP600125 10μmol/L+卡培他滨50μmol/L+奥沙利铂25μmol/L)。噻唑蓝法分析药物对各组细胞的增殖抑制率,荧光定量聚合酶链反应及免疫印迹法检测细胞凋亡蛋白及JNK信号转导通路相关蛋白的表达。结果 12、24、48及72 h后各组对胃癌细胞SGC7901增殖的抑制率均呈上升趋势,不同时点间SP600125+卡培他滨+奥沙利铂组的抑制作用明显强于SP600125+奥沙利铂组、SP600125+卡培他滨组、SP600125组,组间、时点间、组间·时点间的交互作用比较差异有统计学意义(P<0.05)。SP600125+卡培他滨+奥沙利铂组的caspase-3、caspase-9、Bax信使RNA水平较SP600125组、SP600125+卡培他滨组、SP600125+奥沙利铂组升高,抑制凋亡蛋白Bcl-2信使RNA水平较SP600125组、SP600125+卡培他滨组、SP600125+奥沙利铂组降低(P<0.05);SP600125+卡培他滨+奥沙利铂组的caspase-3、caspase-9、Bax信使RNA水平较对照组、SP600125组、SP600125+卡培他滨组、SP600125+奥沙利铂组升高,Bcl-2信使RNA水平较对照组、SP600125组、SP600125+卡培他滨组、SP600125+奥沙利铂组降低,SP600125+卡培他滨+奥沙利铂组的caspase-3、Bax蛋白水平较对照组、SP600125组、SP600125+卡培他滨组、SP600125+奥沙利铂组升高,Bcl-2蛋白水平较对照组、SP600125组、SP600125+卡培他滨组、SP600125+奥沙利铂组降低(P<0.05)。药物处理后,SP600125+卡培他滨+奥沙利铂组的JNK1和JNK2较对照组、SP600125组、SP600125+卡培他滨组、SP600125+奥沙利铂组无明显变化(P>0.05);SP600125+卡培他滨+奥沙利铂组的pJNK1蛋白水平较对照组、SP600125组、SP600125+卡培他滨组、SP600125+奥沙利铂组降低,pJNK2蛋白水平较SP600125组升高而较对照组、SP600125+卡培他滨组、SP600125+奥沙利铂组降低(P<0.05)。SP600125+卡培他滨+奥沙利铂组的PERK、IRE1、Bip、CHOP蛋白水平较对照组、SP600125组、SP600125+卡培他滨组、SP600125+奥沙利铂组升高(P<0.05)。结论 SP600125+卡培他滨+奥沙利铂可能通过抑制胃癌细胞SGC7901中的JNK通路JNK蛋白的磷酸化过程而发挥抑制肿瘤增殖、促进其凋亡的作用。     

磷酸化JNK介导大肠杆菌诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡

目的研究大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡的机制以及特异性c-jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂SP600125的保护作用。方法分别用台盼蓝染色和P1标记流式细胞仪检测E.coli感染不同时间后U937细胞的死亡率及凋亡率；Western blot方法分析JNK信号转导通路的激活情况。结果E.coli可诱导U937细胞凋亡，并且具有时间依赖性，此凋亡过程可被JNK的阻断剂SP600125阻断；在此过程中，JNK在E.coli感染10min和20min时被激活并磷酸化。结论E.coli诱导的U937细胞凋亡依赖JNK信号转导通路；SP600125通过特异性地抑制JNK活性降低E.coli诱导的U937细胞凋亡率。     

JNK信号通路对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的: 初步探讨JNK信号通路调控乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的分子机制.方法: 体外培养大鼠HSC株,用c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)特异性阻断剂SP600125对乙醛刺激的大鼠HSC株进行处理,以MTT比色法检测细胞增殖,Western-blotting检测磷酸化JNK(p-JNK)水平的变化.结果: 乙醛刺激后HSC内p-JNK的水平升高,增殖明显;SP600125对乙醛刺激的HSC对p-JNK的水平有明显下调作用,同乙醛组相比有显著性差异.{MVI比值[(36.0±3.4),(24.2±1.8),(3.2±0.9)]vs (47.6±8.6),P<0.05},强度呈剂量依赖关系;同时具有抑制细胞增殖的作用: 空白对照组及乙醛组中吸光度(A)为(0.07±0.01)和(0.16±0.02),两者有显著性差异(P<0.01),经不同剂量的SP600125(20,60,100 μg/L)处理后吸光度值下降[分别为(0.13±0.01),(0.12±0.01),(0.12±0.01)],同乙醛组相比有显著性差异(P<0.05),细胞抑制率分别为19.3%,22.4%,28.6%.结论: JNK活性变化与乙醛刺激的大鼠HSC的增殖呈正相关,抑制JNK活性可影响HSC的增殖,提示JNK信号传导通路在调节HSC的增殖中起着重要的作用.     

ABT737通过激活JNK/c-Jun通路上调Bim诱导宫颈癌细胞凋亡

【目的】探讨JNK/c-Jun信号通路激活Bim在ABT737诱导宫颈癌细胞凋亡中的作用。【方法】用MTT法检测ABT-737对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用;用流式细胞术检测细胞凋亡率;用Western blot方法检测JNK、phospho-JNK、c-Jun、phospho-c-Jun以及Bim蛋白的表达;用RT-PCR检测Bim在mRNA水平的变化;用JNK特异性抑制剂SP600125和siRNA瞬时转染抑制JNK及c-Jun的活性。 【结果】ABT-737能抑制Hela细胞的生长,诱导HeLa细胞发生凋亡。ABT737可激活JNK激酶活性其下游靶分子c-Jun,凋亡相关基因Bim在mRNA水平和蛋白水平的表达也随之上调。应用JNK特异性抑制剂SP600125和靶向JNK及c-Jun的siRNA抑制JNK或c-Jun的活性或表达后,ABT737诱导的Bim上调及细胞凋亡亦被有效阻断。【结论】ABT737通过JNK/c-Jun信号通路上调凋亡相关基因Bim的表达,诱导HeLa细胞发生凋亡。     

JNK信号传导通路在星形胶质细胞缺氧/复氧后损伤的作用

目的 建立SD大鼠星形胶质细胞（astrocyte,AC）缺氧/复氧损伤模型,探讨JNK信号转导通路与星形胶质细胞损伤的关系.方法 体外培养新生SD大鼠星形胶质细胞,传至第3代,细胞自然纯化,实验设正常对照组（N）、SP600125组（SP组,10 μmol /L）、缺氧/复氧组（H/R组）和缺氧/复氧＋SP600125组（H/R＋SP组）.分别利用MTT法、AnnexinV/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染法、WB法检测缺氧8 h,复氧4、6、12、24 h时细胞存活率、凋亡率、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK（p-JNK）的变化.结果 ①缺氧/复氧后细胞活力出现明显下降,SP600125阻断JNK通路后细胞活力高于H/R组;②缺氧/复氧后细胞凋亡率增加,SP600125阻断JNK通路后能够减轻细胞凋亡.③各组AC的JNK水平无显著变化,缺氧/复氧干预后p-JNK表达上调,用SP600125阻断JNK通路后,H/R＋SP组较H/R组p-JNK水平降低.结论 JNK信号通路参与了星形胶质细胞缺氧/复氧损伤过程.     

JSI-124抑制STAT3通路阻滞食管癌Eca-109细胞增殖的研究

目的采用葫芦素(JSI-124)阻断信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路传导后,观察其对人食管癌Eca-109细胞增殖的影响。方法不同浓度的JSI-124(0、0.6、1.2、2.5、5.0μmol/L)处理Eca-109细胞后,利用CCK-8法检测细胞增殖水平、逆转录-聚合酶链反应法检测STAT3及下游细胞周期蛋白D1转录水平的表达、Western blot法检测食管癌Eca-109细胞中STAT3和抗凋亡因子bcl-2的表达以及使用流式细胞仪技术检测细胞的凋亡率的变化。结果在Eca-109细胞中,经JSI-124处理的Eca-109细胞中,STAT3的活化水平明显降低;同时随着JSI-124抑制浓度(0、1.2、2.5、5.0μmol/L)的增加,Eca-109细胞的总凋亡率也随之增加(3.52%、19.26%、39.89%、55.22%)(P<0.05)。结论JSI-124作为STAT3的选择性抑制剂,可显著抑制食管癌Eca-109细胞的增殖并促进细胞的凋亡。     

SAPK/JNK信号通路在鼻咽癌放疗群集耐受中的作用研究

目的 用CNE-2Z多细胞球(multicellular spheroids,MCSs)模拟实体瘤,探讨SAPK/JNK信号通路在鼻咽癌放疗群集耐受中的作用.方法 采用liquid overlay技术进行MCSs培养,Western blot法检测X射线照射后信号通路活性变化,SAPK/JNK信号通路特异阻断剂sp-600125作用前后Caspase-3蛋白表达变化;TUNEL法检测sp-600125作用前后、X射线照射后MCSs凋亡率变化.结果 X射线照射后MCSs中SAPK/JNK信号通路表现动态磷酸化过程,其中2h磷酸化水平最高;预先阻断信号通路X射线照射后,细胞凋亡率上调(P＜0.05),caspase-3蛋白表达增高(P＜0.05).结论 SAPK/JNK信号通路短暂激活可能传递生存信号而在鼻咽癌放疗群集耐受中发挥作用,特异性阻断其信号传递上调MCSs凋亡率,这可能与促进caspase-3蛋白表达有关.     

石斛碱调节JNK信号通路对白血病细胞存活和上皮间质转化的影响

【目的】探讨石斛碱对体外培养的白血病细胞存活和转移特性的影响。【方法】用不同浓度石斛碱处理HuT-78细胞,选择无明显细胞毒性的浓度进行后续实验。以细胞计数盒8(CCK8)法测定细胞存活率;流式细胞术测定细胞凋亡水平;Transwell法测定细胞侵袭能力;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞增殖、凋亡、上皮间质转化及c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路蛋白表达水平。【结果】石斛碱浓度高于5μg/mL可对HuT-78细胞产生明显的细胞毒性;石斛碱剂量依赖性地抑制HuT-78细胞克隆数、上皮间质转化能力,促进细胞凋亡,并调节增殖、凋亡和上皮间质转化相关蛋白表达水平;且石斛碱能部分逆转JNK抑制剂SP600125对细胞增殖、凋亡和上皮间质转化相关蛋白表达水平的干预作用。【结论】石斛碱对白血病细胞存活和转移的抑制作用,与促JNK通路磷酸化激活有关。     

ROS／Src／JNK信号通路在香烟诱导气道上皮细胞黏液高分泌中的作用

目的 探讨在香烟诱导气道上皮细胞黏蛋白MUC5AC表达过程中Src/JNK信号通路的作用.方法 香烟抽提物预处理的人气道上皮A549细胞,分别以活性氧(ROS)清除剂DMTU、JNK特异性抑制剂SP600125及Src激酶抑制剂PP2干预.测定各组细胞中ROS的含量,采用RT-PCR、ELISA法观察细胞黏蛋白(MUC)5AC转录水平及培养上清液中MUC5AC蛋白水平的改变,以Western blot法检测细胞表皮生长因子受体(EGFR)的蛋白表达.结果 细胞暴露于不同浓度的香烟抽提物中,ROS的量呈浓度递增;ROS清除剂DMTU显著降低香烟所致的Src磷酸化;Src特异性抑制剂PP2处理组中的JNK磷酸化水平与对照组比较有明显下降,MUC5AC的表达水平也明显降低;JNK特异性抑制剂SP600125组中MUCSAC的蛋白表达和基因转录水平较对照组均明显降低.结论 ROS-Src-JNK信号通路可能参与A549上皮细胞中MUCSAC的表达调控.     

氧化应激对肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤作用及JNK信号转导机制

目的:探讨氧化应激状态下肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar type Ⅱ epithelial cell,ATⅡ)存活、凋亡和JNK(c-jun NH2-terminal kinase)的调控机制.方法:采用过氧化氢(Hydrogen peroxide,H2O2)刺激原代大鼠ATⅡ细胞,复制活性氧(Reactive oxygen species,ROS)攻击ATⅡ细胞损伤模型.蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测ATⅡ细胞受500μmol/L H2O2刺激后磷酸化JNK的动态变化,四甲基偶氮唑盐反应比色法(MTT法)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,并观察JNK抑制剂SP600125干预前后存活率和凋亡率的变化.结果:ATⅡ细胞在受H2O2刺激后随作用时间的延长细胞存活率下降,凋亡率增加;H2O2刺激可导致JNK的磷酸化激活,使用SP600125后,细胞存活率增加,凋亡率降低.结论:H2O2以时间依赖的方式诱导ATⅡ细胞凋亡,抑制JNK信号激活对氧化应激状态下的ATⅡ细胞可能起到保护作用.     

苦参碱调控结肠癌奥沙利铂耐药性及机制研究

目的 探讨苦参碱（Ma）对人结肠癌耐奥沙利铂（Oxa）细胞株（SW480/Oxa）的逆转耐药作用及 其机制是否与抑制c-Jun 氨基末端激酶（JNK/SAPK）信号通路有关。方法 采用MTT 法检测Ma 对SW480/ Oxa 细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测Ma 对SW480/Oxa 细胞凋亡的影响,qRT-PCR 检测Ma 对SW480/ Oxa 细胞P- 糖蛋白（P-gp）、MDR1 mRNA 表达的变化,Western blot 检测Ma 对SW480/Oxa 细胞P-gp、 磷酸化c-Jun 氨基末端激酶(p-JNK) 蛋白表达的变化。结果 不同组细胞增殖活性的比较,Oxa 组细胞增殖活 性低于NC 组,Ma+Oxa 组细胞增殖活性低于Oxa 组（P<0.05）。Oxa 组细胞总凋亡率高于NC 组（P <0.05）, Ma+Oxa 组细胞总凋亡率高于Oxa 组（P <0.05）。与PPARy+Oxa 组比较,PPARy+Ma+Oxa 组中P-gp、 MDR1 mRNA 水平均下调,差异有统计学意义（P <0.05）。与SP600125+Oxa 组比较,SP600125+Ma+Oxa 组 中P-gp、MDR1 mRNA 水平均下调,差异有统计学意义（P <0.05）。与PPARy+Oxa 组比较,PPARy+Ma+ Oxa 组中P-gp、p-JNK 蛋白水平均下调,差异有统计学意义（P <0.05）。与SP600125+Oxa 组比较,SP600125+ Ma+Oxa 组中P-gp,p-JNK 蛋白水平均下调,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 Ma 具有调控人结肠癌耐 药细胞株耐药性的作用,可能与抑制JNK/SAPK 信号通路,降低P-pg 表达有关。