储粮主要危害性霉菌过氧化氢酶特性研究

从不同来源的储粮样品中分离了4株灰绿曲霉、3株白曲霉,将培养后菌体破碎得到的粗酶液分别经硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析纯化得到过氧化氢酶.对分离酶的主要特性研究结果表明,这些过氧化氢酶的最适温度均为35℃左右,在水溶液中对热不稳定.酶催化适宜的pH范围为4～9,最适pH均在7 0左右,酶的Km值在33.3～41.7mmol/L范围,金属离子及化合物对酶活力的影响基本相同;1mmol/L浓度的Cu2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+对酶活力有激活作用,1mmol/L浓度的巯基乙醇、Fe3+、Ca2+对酶活力有抑制作用,1mmol/L的NaN3、Hg2+可使酶完全失活.该特性研究为酶学方法测定储粮霉菌的应用奠定了基础.     

褐藻酸降解菌AGN12制备褐藻酸裂解酶的反应条件

新分离菌AGN12能够降解褐藻酸,具有褐藻酸裂解酶活性.褐藻酸裂解酶降解褐藻酸的最适反应条件是：温度30 ℃,pH 7.0,底物浓度8 g/L. 褐藻酸裂解酶稳定性对温度高度敏感,50 ℃保温1 h酶活力基本消失.Mn^2＋、Mg^2＋浓度高低对褐藻酸裂解酶均有激活作用,K^＋在5 mmol/L浓度下对该酶有激活作用,而Cu^2＋、Fe^3＋对该酶具有抑制作用.     

曲霉CJ22—326内切壳聚糖酶的分离纯化和性质

使用75％乙醇沉淀、CM-Sepharose FF离子交换色谱、Sephacryl S-200凝胶过滤色谱和Phenyl Sepharose CL-4B疏水色谱分离纯化技术，对曲霉CJ22-326发酵液中的内切壳聚糖酶进行分离纯化和性质研究．结果表明，纯化后的内切壳聚糖酶ChiB经SDS-PAGE凝胶电泳鉴定为单带，其相对分子质量为27 700．采用Sephacryl S-200凝胶过滤色谱测定的相对分子质量为27 800．ChiB作用最适温度为65℃，最适PH值为6．0，75℃保温1h还残留40％酶活．1mmol／L Mn^2 对ChiB有强烈激活作用，2mmol／L Cu^2 ，Ag^ ，Hg^2 ，Cd^2 ，Fe^3 有强烈抑制作用．ChiB作用的最适底物为脱乙酰度95%的胶体壳聚糖．     

康氏木霉发酵液提取木聚糖酶的酶学性质研究

对康氏木霉（Trichoderma Koningii）发酵产木聚糖酶的酶学性质进行了研究。结果表明；该木聚糖酶的最适反应温度为65℃，酶反应最适pH为6．0；该酶在20～60℃范围内能保持87％以上的酶活，在pH3．0-9．0范围内能保持85％以上的酶活；金属离子K^＋、Ba^2＋、Pb^2＋、Fe^2＋、Fe^3＋、Al^3＋和12mmol／L的Cu^2＋对木聚糖酶的活性有抑制作用，而Ca^2＋，Zn^2＋和4mmol／L Cu^2＋等金属离子对该酶有激活作用。     

海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究．结果表明，最佳提取条件为：pH6．0的磷酸盐浸提液0．05mol／L，NaCl浓度为0．05mol／L，缓冲液体积与海参肠质量之比为4：1，硫酸铵饱和度为80％；该酶最适反应条件为：温度40℃，pH6．0；该酶在10-40℃，pH5．O～6．5酶活力稳定．Mn^2＋对酶具有一定的激活作用，Cu^2＋、Cd^2＋、Mg^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋、Bd^2＋、K^＋、Ag^＋对酶存在不同程度的抑制，其中Cu^2＋对酶的抑制作用最强．     

褐藻酸降解菌AGN12制备褐藻酸裂解酶的反应条件

新分离菌AGN12能够降解褐藻酸,具有褐藻酸裂解酶活性。褐藻酸裂解酶降解褐藻酸的最适反应条件是:温度30℃,pH 7.0,底物浓度8 g/L。褐藻酸裂解酶稳定性对温度高度敏感,50℃保温1 h酶活力基本消失。Mn2+、Mg2+浓度高低对褐藻酸裂解酶均有激活作用,K+在5 mmol/L浓度下对该酶有激活作用,而Cu2+、Fe3+对该酶具有抑制作用。     

米曲霉β-半乳糖苷酶的纯化与性质研究

以40％饱和度的硫酸铵溶液去除杂蛋白，用80％饱和度的硫酸铵和75％的丙酮纯化米曲霉β-半乳糖苷酶，其比活力为147．7U／mg，回收率为38．1％。该酶最适反应温度和pH分别为50～55℃和4．0～6．0，作用于乳糖的米氏常数Km为16．7mmol／L，最大反应速度Vmax为5．56μmol／min。     

黄原胶液化酶的反应条件

XT11菌种经过发酵能够产生黄原胶液化酶,该酶能够分解黄原胶生成寡糖。实验结果说明,黄原胶液化酶的最适温度为40℃,以磷酸盐缓冲液为最佳缓冲液的酶反应的最适pH值为6.0;酶反应最适底物质量浓度为3 g/L,Km=1.68,Vmax=0.203 7 g.mL-1·min^-1。Ca^2＋在浓度较低时对黄原胶液化酶有激活作用,而其他离子在10和30 mmol/L时对黄原胶液化酶有不同程度的抑制作用,并且Fe^3＋和Cr^3＋的抑制作用表现最为突出。     

萝卜CBPs的分离及部分酶学特性研究

通过脱氨再生几丁质凝胶亲和层析和CM-纤维素离子交换层析从萝卜中分离出一组CBPs，并对CBP1和CBP2溶菌酶酶学特性作了研究。活力分析表明：CBP1和CBP2均为溶菌酶／几丁质酶双功能酶；CBP3和CBP4只有几丁质酶活力。SDS—PAGE纯度分析表明：CBP1和CBP2已达到电泳纯，相对分子质量分别为26900和24800；CBP3仍具有两个组分，CBP4则由于含量过低，在凝胶上无蛋白带。CBP1和CBP2部分酶学特性分析表明：CBP1的最适反应条件为PH5．8，55C，0．4g／L溶壁微球菌；CBP2的最适反应条件为pH6．8，45℃，0．4g／L溶壁微球菌；CBP1在pH3．4～10．6，0～55℃较稳定，CBP2在pH2．0～10．6，0～60℃较稳定。     

异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶性质

采用分子筛及离子交换法对微生物Absidia sp.R42g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并研究其酶学性质。结果表明,异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分子质量为62ku,最适温度为40℃,最适pH为5.0。在50℃以下,pH 4.0~6.0,相对酶活力较稳定,Na~+、K~+、Ca~(2+) 3种金属离子对相对酶活力无影响;而在Fe~(3+)、Cu~(2+)两种金属离子存在的情况下,相对酶活力为零;酶反应结果显示该酶的最大反应速度和米氏常数分别为6.711mmol/(L·h)和18.89mmol/L。     

麦冬多糖糖苷酶的分离纯化及其酶性质

分离纯化了Absidia sp.O84s菌产的麦冬多糖糖苷酶,并对其酶性质进行了研究。结果表明,酶蛋白的分子质量为72 ku,最适pH为5.0,在pH 4.0~8.0范围内稳定。最适反应温度为40℃,在20~55℃范围内稳定。Ca+、K+、Na+、Fe3+、Mg2+Zn2+对该酶活性没有影响,Cu2+对酶活力具有抑制作用。酶反应动力学参数Vmax=0.131 5 mmol/(h.L),Km=2.375 mmol/L。     

麦冬多糖糖苷酶的分离纯化及其酶性质

分离纯化了Absidia sp.O84s菌产的麦冬多糖糖苷酶,并对其酶性质进行了研究。结果表明,酶蛋白的分子质量为72 ku,最适pH为5.0,在pH 4.0~8.0范围内稳定。最适反应温度为40℃,在20~55℃范围内稳定。Ca+、K+、Na+、Fe3+、Mg2+Zn2+对该酶活性没有影响,Cu2+对酶活力具有抑制作用。酶反应动力学参数Vmax=0.131 5 mmol/(h.L),Km=2.375 mmol/L。     

海洋细菌Vibrio agarivorans-1产琼胶酶培养基优化及其酶学性质

以琼胶酶的酶活力为指标,对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养基组分进行优化,并研究琼胶酶粗酶液的酶学性质。通过单因素和正交试验对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养条件进行优化,结果表明最佳营养组分为:酵母膏的质量浓度为12g/L,琼脂粉质量浓度为3g/L,NaCl质量浓度为45g/L,在该条件下酶活力达到7.689U/g。其粗酶液的最适反应温度为40℃,最适反应pH为7,在pH范围为6~8的内酶活性较稳定,温度在20~40℃时酶的稳定性较好,但温度达到80℃基本失活。     

豆壳过氧化物酶的酶学性质研究

豆壳过氧化物酶(Soybean Hull Peroxidase,SHP)是从大豆豆壳分离得到的一类重要的氧化还原酶,试验通过缓冲溶液抽提法提纯豆壳过氧化物酶,采用愈创木酚法测定酶活力。结果表明,豆壳过氧化物酶是一种耐高温、耐酸碱的酶,其酶作用的最适温度为35℃,最适pH值为5.2,对愈创木酚和过氧化氢的表观Km值分别为1.53 mmol/L和0.36 mmol/L。常见化合物对豆壳过氧化物酶活性的影响也不尽相同,Fe3+对酶的抑制作用明显,而Mg2+对酶反应有一定的激活作用。     

新型D-氨基酰化酶的特性及固定化酶的研究

本文研究了一株具有N-酰基酰化酶（DAA）生产能力的细菌,通过对其酶学特性及固定化酶用于D-氨基酸的生产进行了研究。显示此酶的最适温度为37℃,最适pH7.4,1mmol/L以下的CaCl2,CdCl2,CoCl2,CuCl2,FeCl2,HgCl2, MnCl2,ZnCl2对酶的活性没有影响,在20mmol/L的EDTA条件下仍可保持65%的酶活性。底物特异性显示酶的最佳底物是N-乙酰-D-苯丙氨酸,50mmol/L以上的N-乙酰-D-苯丙氨酸显著抑制酶的活性。利用海藻酸钠固定酶后,在30℃条件下,使用50mmol/L的N-酰基-D-苯丙氨酸底物进行的降解实验显示水解率可以达到84%,转化批次达到6次以上,活性保持达到70小时以上。     

一株高产细胞表面植酸酶酵母的产酶性质

对一株高产细胞表面植酸酶酵母突变株WZ 4菌的细胞植酸酶性质进行了研究,结果表明:该酶的最适pH为5,最适温度为50℃,Km为0.666mmol/L。此外,WZ 4菌产植酸酶受控于培养基中的磷的质量浓度,最大产酶磷的质量浓度为50mg/L,当磷的质量浓度大于0.1g/L时产酶被完全阻遏。     

PVA固定化细菌ZG-4株生产L-苹果酸的研究

从60余份土样中筛选得到一株富马酸酶活力较高的细菌ZG－4株，以改性PVA为载体，制得固定化细胞，其较佳转化条件：基质为1mol/L Na2Fu，转化液PH7．0，转化温度40度，固定化细胞经质量浓度为0．4％的胆酸或0．06％的TPC预处理，可有效抑制琥珀酸副产物的生成，添加质量浓度为0．1％没食子单宁，可使富马酸酶比活力达1．95mmol.h^-1g^-1，同时比较了固定化细胞与游离细胞的富马酸酶特性。     

江米酒酒醪中凝乳酶酶学性质的初步研究

对江米酒中提取纯化得到的凝乳酶的酶学性质进行了研究．结果表明,该凝乳酶反应的最适反应温度为35。40℃,60℃保持20min完全失活;随着pH的降低凝乳活力提高,在pH1～7范围内稳定,最适pH为5．2;Na＋、K＋对其凝乳活力表现微弱的抑制作用,而NH4＋、Mg2＋,ca2＋、Ba2＋、Zn2＋、Mn^2＋、Al^3＋、Fe^2＋有明显的促进作用．离子型表面活性剂对凝乳酶活力有明显的抑制作用,非离子型表面活性剂对凝乳活力具有明显的促进作用．多羟基化合物、p巯基乙醇及乙二胺四乙酸（EDTA）作为酶的修饰剂对酶活力具有不同的影响．     

两种菌产皂苷糖苷酶的性质比较

对微生物Absidiasp.D0d菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)和微生物Absidiasp.A3r菌产的黄芪皂苷糖苷酶(RhaA)进行了分离纯化,并对它们的酶性质做了比较。RhaD的分子质量是59 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~8.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定。金属离子Na+、K+对酶反应基本没有影响,Mg2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Fe3+对酶反应有抑制作用。酶反应动力学参数Km为19.26 mmol/L,Vmax为1.23 mmol/(L.h)。RhaA的分子质量是54 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~6.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定,Mg2+和Ca2+对RhaA的酶反应没有影响,Fe3+、Cu2+的抑制作用较为明显。酶反应动力学参数Km为17.86 mmol/L,Vmax为1.18 mmol/(L.h)。RhaD只能水解与穿山龙薯蓣皂苷母环结构相似的异螺甾烷醇型的皂苷上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。RhaA仅水解四环三萜环阿屯烷型的黄芪皂苷16上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。     

两种菌产皂苷糖苷酶的性质比较

对微生物Absidiasp.D0d菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)和微生物Absidiasp.A3r菌产的黄芪皂苷糖苷酶(RhaA)进行了分离纯化,并对它们的酶性质做了比较。RhaD的分子质量是59 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~8.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定。金属离子Na+、K+对酶反应基本没有影响,Mg2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Fe3+对酶反应有抑制作用。酶反应动力学参数Km为19.26 mmol/L,Vmax为1.23 mmol/(L.h)。RhaA的分子质量是54 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~6.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定,Mg2+和Ca2+对RhaA的酶反应没有影响,Fe3+、Cu2+的抑制作用较为明显。酶反应动力学参数Km为17.86 mmol/L,Vmax为1.18 mmol/(L.h)。RhaD只能水解与穿山龙薯蓣皂苷母环结构相似的异螺甾烷醇型的皂苷上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。RhaA仅水解四环三萜环阿屯烷型的黄芪皂苷16上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。