福多司坦对肺癌细胞黏蛋白MUC1和MUC5AC的抑制作用研究

目的 探讨黏痰溶解剂福多司坦对肺癌细胞高表达的黏蛋白MUC1和MUC5AC的调控作用。方法 首先采用分子对接技术将福多司坦、原配体和阳性药与MUC1和MUC5AC蛋白进行对接，初步得到福多司坦、原配体及阳性药与靶蛋白的结合能与分子-蛋白相互作用活性对接口袋。然后采用体外PCR与ELISA从细胞层面探讨不同浓度福多司坦对TNF-a诱导的高表达MUC1和MUC5AC的调控作用。结果 分子对接结果显示福多司坦与MUC1和MUC5AC均能自发结合，并且福多司坦与MUC1的结合比MUC5AC更为紧密。细胞试验表明，不同浓度福多司坦(1~10 mmol·L^–1)可以降低肺癌A549细胞在TNF-a刺激下引起的MUC1和MUC5AC的高表达，也可降低NCI-H292细胞在TNF-a刺激下引起的MUC1的高表达。首次发现福多司坦能阻断肺癌细胞A549的MUC1蛋白表达，并且对MUC1蛋白的抑制呈现浓度依赖性。结论 福多司坦可抑制A549细胞黏蛋白MUC5AC和MUC1的表达，也可抑制NCI-H292细胞黏蛋白MUC1的表达，为进一步研究对肺癌细胞转移和侵袭的干预作用以及辅助肺黏液型肺癌患者的临床治疗提供理论依据。     

基于代谢组学的柠檬烯抗非小细胞肺癌作用机制研究

目的 采用非靶向代谢组学等方法，探究柠檬烯抑制非小细胞肺癌增殖的作用机制。方法 以肺癌A549细胞为研究对象，通过CCK-8法测定柠檬烯抑制A549细胞活力及IC₅₀；通过集落形成、流式细胞检测、铁含量测定及线粒体染色等实验，分别评价柠檬烯的体外抗肺癌及诱导铁死亡作用；代谢组学分析发现柠檬烯的潜在作用通路；最后采用Western blotting对相关通路主要蛋白进行验证。结果 与对照组相比，柠檬烯给药组可以显著抑制A549细胞的增殖及集落的形成，且呈剂量依赖性；光学显微镜观察发现，柠檬烯给药后A549细胞出现脱落现象，并可显著改变其形态；同时柠檬烯具有诱导A549细胞凋亡作用，并阻滞在G₀-G₁期；共聚焦显微镜发现柠檬烯作用后，A549细胞线粒体荧光减弱，同时细胞内铁含量亦显著增加，呈现典型的铁死亡表现；代谢组学研究发现谷胱甘肽(glutathione，GSH)代谢、精氨酸生物合成、D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢及半胱氨酸和蛋氨酸代谢等多条差异代谢通路，这些通路与细胞内GSH合成密切相关；Western blotting实验发现，柠檬烯给药后细胞中SLC40A1、SLC7A11(xCT)及GPX4蛋白含量显著减少。结论 柠檬烯抗肺癌作用机制可能与降低肺癌细胞中GSH合成及增加Fe²⁺含量诱导其铁死亡有关。     

右美托咪啶预处理脂多糖诱导的巨噬细胞代谢物研究

摘要：目的:应用代谢组学方法,研究右美托咪啶(DEX)预处理LPS(脂多糖)诱导的巨噬细胞炎症模型代谢物的变化,探讨其抗炎机制可能性代谢途径。方法:DEX预处理LPS诱导的巨噬细胞炎症模型,利用超高效液相色谱-三重四级杆-线性离子阱质谱(UPLC-Q-TRAP-MS/MS)采集细胞代谢物信息,并采用多元变量统计方法:主成分分析法、正交偏最小二乘法判别分析法筛选细胞差异代谢物。结果:与对照组相比,DEX干预后筛选出甜菜碱、胆碱、乳酸、谷氨酰胺、蛋氨酸、S-腺苷L-甲硫氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、瓜氨酸、脯氨酸、二磷酸腺苷(ADP)、环磷酸腺苷(c AMP)、丙酮酸等22种差异代谢物。结论:代谢组学方法显示DEX预处理炎症细胞特征性代谢物分子,为DEX抗炎生物机制奠定基础。     

福多司坦片健康人体药动学研究

福多司坦是一种新型祛痰药,为L-半胱氨酸衍生物,具有抑制炎症、修复黏膜、促进气管分泌的作用[1]。临床广泛用于呼吸道疾病的祛痰治疗[2]。基于福多司坦广泛的临床应用,对其药动学特点的了解很有必要。本研究应用建立的LC-MS/MS法测定血浆中福多司坦药物浓度,考察单次口服给药后,福多司坦在健康志愿者体内的药动学特征,为临床应用确定给药剂量和给药方案提供依据。     

基于代谢组学技术研究党参干预小鼠血清代谢物规律

目的基于代谢组学技术研究党参对正常小鼠血清内源性代谢产物的影响。方法采用基于代谢组学技术氢核磁共振谱(1H-NMR)结合多元统计分析及单变量分析手段,比较党参干预小鼠与正常小鼠的血清内源性代谢物的变化。结果给予党参后小鼠机体内源性代谢物发生了明显变化。党参干预后小鼠血清与空白对照组比较有8种代谢物含量发生变化,胆碱、肌酸、谷氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺含量升高,乳酸、磷酰胆碱、甘油磷酰胆碱含量下降。结论党参对正常小鼠机体代谢的影响可能与其改变内源性代谢物的能量代谢、氨基酸代谢等途径相关,为党参机制研究提供参考依据。     

基于活血化瘀功效的川芎酚酸组分治疗大鼠偏头痛作用机制研究

目的探讨川芎酚酸组分通过活血化瘀功效治疗大鼠偏头痛的机制。方法采用代谢组学方法,获得正常组、模型组以及川芎酚酸给药组的血浆代谢物谱,结合主成分分析、聚类分析方法分析其血浆中代谢物的变化并鉴定差异化合物,分析相关代谢通路,并采用ELISA法加以验证。结果在负离子模式下共发现了9个与偏头痛疾病相关的代谢物,包括1-磷酸鞘氨醇、花生四烯酸等重要川芎酚酸组分敏感内源性差异代谢物,主要调节炎症代谢发挥活血化瘀的功效从而起到对偏头痛的治疗作用。结论川芎酚酸组分可通过改善血管舒缩、减少炎症介质释放等多种途径产生活血化瘀功效缓解并治疗偏头痛疾病。     

代谢组学技术在抗结核新药研发中的应用研究进展

目的:了解代谢组学技术应用于结核分枝杆菌(MTB)代谢物及代谢途径检测的研究情况,为开发治疗耐药MTB感染的安全新药提供参考。方法:以"结核分枝杆菌""代谢组学""药物靶点""药物研发"等的中英文为关键词,在PubMed、中国知网、维普等数据库中组合检索2012年-2018年6月发表的相关文献,并从抗结核药物的新靶点(包括MTB脂代谢、能量代谢、氨基酸代谢、miRNA等途径)、新抗菌化合物的筛选(主要是抑制MTB呼吸链的抗菌化合物)及抗结核新药的临床前评价等3个方面总结代谢组学技术应用于抗结核新药研发的研究进展。结果与结论:共获得相关文献948篇,其中有效文献40篇。应用代谢组学技术研究发现,干扰脂代谢途径的相关酶或基因等(如分枝菌酸、乙酰辅酶A羧化酶、脂酰辅酶A合成酶、泛酸等),干扰能量代谢的异柠檬酸裂解酶,抑制氨基酸代谢途径中的色氨酸合成代谢途径、β-碳酸酐酶合成途径、丙酮酸激酶相关途径,抑制miRNA调控途径等均可作为抗结核药物研发的新作用靶点。通过代谢组学技术已经发现细胞色素bc1复合物QcrB的抑制剂Q203、QOAS,腺苷三磷酸合酶FoF1-ATP抑制剂,细胞色素AtpE抑制剂BDQ,二芳基喹啉(DARQS)等呼吸链抑制化合物,以及腺苷酸合成酶MbtA抑制剂、还原型辅酶Ⅰ脱氢酶Ⅱ抑制剂、蛋白酶ClpP和膜蛋白复合体3的抑制剂、脂肪酰基-腺苷一磷酸(AMP)连接酶FadD32和聚酮合成酶的抑制剂等抗菌化合物。应用代谢组学技术分析药物作用后机体的代谢变化,可为抗结核药物的毒性、安全性、疗效等评价提供技术手段。但目前对于代谢组学技术所获数据的处理方法尚不完善,数据分析模型尚需进一步完善与优化;此外,国内对代谢组学技术应用于抗结核药物研发的研究范围较窄,且易漏掉对不稳定的小分子和大分子代谢物的分析,因此需结合蛋白质组学或转录组学以更高效、准确地为抗结核新药研发提供支持。     

低剂量卡铂诱导人肺癌细胞A549过早性衰老的作用研究

目的考察低剂量卡铂诱导人肺癌细胞A549过早性衰老的作用。方法 A549细胞经不同浓度卡铂处理,采用MTT法和克隆形成率试验检测卡铂对细胞增生的抑制作用;β-半乳糖苷酶染色试验检测卡铂诱导细胞衰老情况;FCM法检测卡铂对细胞凋亡和细胞周期分布的影响;全波长荧光酶标仪检测细胞内活性氧自由基(ROS)水平变化。结果低剂量卡铂能诱导细胞衰老;不同浓度卡铂作用细胞48 h后,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞显著增多;细胞周期多停滞于G0/G1期,S期显著减少,且细胞内ROS水平明显升高(P<0.05)。结论低剂量卡铂能诱导人肺癌细胞A549过早性衰老。     

基于GC-TOF-MS代谢组学研究栝楼桂枝汤对脑缺血大鼠的作用机制

目的 研究栝楼桂枝汤对脑缺血MCAO模型大鼠的神经保护作用机制。方法 运用气相色谱-飞行时间质谱联用的代谢组学技术及多元统计分析方法分析正常组、模型组和栝楼桂枝汤给药组大鼠血清中内源性代谢物的变化,筛选差异代谢物,并分析差异代谢物代谢途径。结果 代谢组学研究结果显示各组间大鼠代谢谱出现显著差异,在大鼠血清质谱图中共筛选鉴定得吲哚乙酸、丙二酸、乙醇胺、肉豆蔻酸、鸟氨酸等13个差异代谢物,涉及的相关的代谢途径包括糖-葡萄糖醛酸相互转化途径,色氨酸代谢途径,嘧啶代谢和甘油磷脂代谢途径。结论 栝楼桂枝汤可使造模后大鼠的体内代谢物有不同程度的恢复,其对缺血性脑卒中的保护作用主要反映在能量代谢、脂质代谢、氨基酸代谢等代谢途径的变化,改善大鼠脑缺血再灌注损伤症状。     

姜黄素对肺癌A549细胞bcl-2、bax表达与生长的影响研究

目的:研究姜黄素对肺癌A549细胞的抑制作用机制。方法:采用MTT法测定不同浓度姜黄素作用于肺癌细胞A549后的吸光值以计算其抑制率,并用半定量逆转录聚合酶链反应法测定其bcl-2、bax表达量。结果:不同浓度姜黄素对肺癌A549细胞均有抑制作用,且呈浓度、时间依赖性,并可升高细胞bax及降低bcl-2的表达量。结论:姜黄素可能通过激活bax及抑制bcl-2的表达,从而抑制肺癌A549细胞的生长。     

阿瑞匹坦对恶性肿瘤神经激肽-1受体和P物质表达的影响北大核心CSCD

目的研究P物质及神经激肽-1受体(NK-1R)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及人肺腺癌细胞系A549细胞系中的表达特点,探讨NK-1R拮抗药阿瑞匹坦对NK-1 R、P物质表达的影响。方法收集临床NSCLC患者原发瘤组织,相应癌旁组织和相对正常肺组织标本,用免疫组织化学法检测P物质和NK-1R的表达情况,用免疫细胞化学染色检测二者在A549细胞系的表达特点。用MTT比色法检测不同浓度阿瑞匹坦作用后A549细胞生长增殖的变化情况。结果非小细胞肺癌组织中P物质、NK-1R表达阳性率明显高于癌旁组织和正常肺组织(P<0.05)。NSCLC组织中,P物质表达阳性部位主要位于肺肿瘤细胞胞浆,而NK-1R在肿瘤细胞胞浆和胞膜均有表达。肺癌A549细胞系中绝大多数细胞均有P物质、NK-1R表达。加入阿瑞匹坦培养的A549细胞P物质、NK-1R表达明显下降(P<0.05)。阿瑞匹坦在浓度为1×10-6mol·L-1时对A549细胞生长增殖的抑制作用最明显。结论 P物质和NK-1R在NSCLC组织和A549细胞系中高表达,提示神经内分泌机制参与了NSCLC的发生和发展过程。NK-1受体拮抗药可抑制P物质和NK-1R的阳性表达,且能抑制A549细胞生长增殖,NK-1受体可成为治疗NSCLC的新靶点。     

枸杞多糖对人肺癌A_(549)细胞影响的研究

目的:探讨枸杞多糖(LBP)对人肺癌A549细胞的影响及作用机制。方法:将LBP作用于肺癌A549细胞,应用M TT法、电镜和钙离子测定等技术测定LBP的抗肿瘤作用及作用机理。结果:LBP呈剂量依赖性(100m g/L~2000m g/L)地抑制人肺癌A549细胞的增殖,诱导其凋亡,并可使细胞内钙离子浓度升高。结论:LBP可诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与细胞内钙离子浓度升高有关。     

AZIN-1小分子抑制剂抗非小细胞肺癌活性研究

目的研究鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(AZIN-1)小分子抑制剂对非小细胞肺癌的抑制作用及机制。方法通过CCK-8法检测A549细胞增殖;流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染)分析A549细胞凋亡;蛋白质免疫印迹实验检测A549细胞内鸟氨酸脱羧酶(ODC)、鸟氨酸脱羧酶抗酶-1(AZ-1)和AZIN-1的表达;流式细胞术(PI单染)分析A549细胞周期;高效液相色谱法检测A549细胞内总多胺含量。结果AZIN-1小分子抑制剂能够显著抑制A549细胞的增殖,使细胞发生G0/G1周期阻滞,并诱导A549细胞发生凋亡,显著抑制AZIN-1和ODC的表达,干扰细胞内多胺代谢,降低细胞内总多胺含量。结论AZIN-1小分子抑制剂对A549细胞具有显著的生长抑制作用,其作用机制可能与诱导细胞凋亡和干扰多胺代谢有关。     

苦参碱对人肺癌A549细胞增殖、侵袭和血管生成的抑制作用及其机制研究

目的探讨苦参碱对肺癌A549细胞增殖、侵袭和血管生成抑制作用以及其作用机制。方法不同浓度苦参碱组加入到A549人肺癌细胞株中,利用ELISA法研究了苦参碱对EGFR-TPK的抑制作用,利用MTT法测定苦参碱对A549细胞的抑制作用,Transwell法检测苦参碱对肺癌A549细胞侵袭的抑制作用,酶标仪法检测苦参碱对细胞凋亡蛋白caspase 3活性的影响,Western blotting法检测苦参碱存在下A549中VEGF、HIF-1α的表达。结果苦参碱对EGFR-TPK半数抑制率为11.26±1.02μmol/L,对肺癌A549细胞生长IC50为30.45±3.02μmol/L,都具有良好的抑制能力,但对于MRC-5细胞表现了较低的毒性;苦参碱与对照组相比能够诱导肿瘤细胞穿过人工基底膜的数量减少,差异有显著性(P0.05);与对照组比较,苦参碱能显著提高A549中凋亡蛋白caspase 3活性(P0.05);苦参碱能够下调HIF-1α和VEGF的表达。结论苦参碱可降低EGFR-TPK活性和HIF-1α、VEGF的表达,激活caspase 3活性,对肺癌肿瘤A549细细胞的侵袭、增殖和血管生成产生抑制作用。     

双氢青蒿素对肝癌细胞氨基酸代谢的影响及机制研究

目的:考察双氢青蒿素(DHA)对人肝癌细胞Huh7、BEL-7402中氨基酸类代谢产物的影响,为阐明DHA参与肝癌细胞代谢的调控机制提供理论基础。方法:采用CCK-8法,测定不同浓度DHA(12.5、25、50、100μmol/L)作用24、48、72 h后对两种细胞活性的影响。将两种细胞分别分为对照组和给药组(DHA,25μmol/L),加入不含药或含药培养基后培养24 h,均平行操作3份。对各组细胞样品进行衍生化处理后,采用气相色谱联用质谱(GC-MS)法检测细胞中氨基酸代谢物含量变化,结合SIMCA-P软件分析和化合物谱库的比对,筛选出两种细胞中的差异代谢物;采用Metaboanalyst 4.0软件对差异代谢物进行通路富集分析。结果:与对照组比较,给药组Huh7细胞或BEL-7402细胞中谷氨酰胺、谷胱甘肽、苯丙氨酸、富马酸、牛磺酸等含量均呈下降趋势。上述两种细胞中分别筛选获得28、29个差异代谢物,两者的共同差异代谢物有10个,包括谷氨酰胺、谷胱甘肽、牛磺酸、富马酸、苯丙氨酸等;两者的差异代谢物分别富集到8、6条通路上,其共同富集通路为氨基酸-tRNA生物合成、天冬氨酸-丙氨酸-谷氨酸代谢、氮代谢、苯丙氨酸代谢、戊糖磷酸途径。结论:DHA能明显降低Huh7细胞和BEL-7402细胞的活性,并能显著降低细胞中谷氨酰胺、谷氨酸、谷胱甘肽、苯丙氨酸等的含量;其可能通过影响天冬氨酸-丙氨酸-谷氨酸代谢通路等机制来调控两种细胞的生长。     

MicroRNA在山楂酸诱导A549细胞凋亡中的作用研究

目的探讨MicroRNA在山楂酸诱导肺癌细胞A549凋亡过程中发挥的生物学作用。方法将人的肺癌细胞系A549经过山楂酸干预,并提取处理后A549细胞的总RNA,通过AFFX miRNA表达谱芯片,检测山楂酸作用前后A549细胞中miRNA表达差异情况。通过生物信息学,分析预测miRNA作用的靶蛋白。结果山楂酸作用前后肺癌细胞A549中59个miRNA表达差异显著,其中23个miRNA的表达上调,36个miRNA的表达下调。生物信息学分析预测,由miRNA调控的细胞增殖相关靶蛋白400余个,细胞凋亡相关靶蛋白300余个,其中XIAP是miR-630下游调控的靶蛋白。结论山楂酸可能通过调控miRNA的表达发挥对A549细胞的抑制作用。     

鸦胆子油乳对肺癌细胞A549的抑制作用及其机制

目的研究鸦胆子油乳对肺癌细胞A549的抑制作用,并初步探讨其相关作用机制。方法以不同终质量浓度的鸦胆子油乳(0.50,1.25,2.50 g·L^-1)作用于肺癌细胞A549,并将其作为低、中、高3个质量浓度实验组,同时设置对照组(给予等量0.9%NaCl)。用4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法检测各组肺癌细胞A549凋亡的形态学变化,用噻唑蓝(MTT)法和免疫印迹法检测各组肺癌细胞A549增殖抑制情况及凋亡抑制蛋白Survivin表达情况。结果干预24 h后,对照组及低、中、高3个质量实验组肺癌细胞A549增殖抑制率分别为(0.31±0.19)%,(37.24±6.21)%,(49.33±5.96)%,(61.25±6.23)%,干预48 h后,增殖抑制率分别为(0.32±0.21)%,(58.14±6.33)%,(65.28±5.79)%,(73.46±5.37)%,干预72 h后,增殖抑制率分别为(0.38±0.23)%,(68.58±5.87)%,(76.35±6.02)%,(83.97±5.64)%。与对照组比较,实验组肺癌细胞A549增殖抑制率显著升高(P<0.01),且随着鸦胆子油乳质量浓度增大和作用时间延长,肺癌细胞A549增殖抑制率呈逐渐升高趋势(P<0.05或P<0.01)。对照组和低、中、高3个质量浓度实验组Survivin蛋白灰度值分别为0.95±0.07,0.83±0.10,0.66±0.12,0.51±0.09;对照组和实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01),且随鸦胆子油乳质量浓度增加,Survivin蛋白表达量呈逐渐降低趋势(P<0.01)。结论鸦胆子油乳可显著抑制肺癌细胞A549增殖,并诱导其凋亡,相关作用机制可能是其可有效抑制肺癌细胞A549中凋亡抑制蛋白Survivin的表达。     

基于核磁共振的益母草碱抗急性心肌缺血的代谢组学研究

目的应用核磁共振(NMR)代谢组学技术研究急性心肌缺血以及益母草碱给药大鼠血浆中代谢物组的变化,探讨益母草碱抗心肌缺血作用的机制。方法应用1H NMR分析假手术组、模型组、益母草碱给药组大鼠血浆代谢物组,应用模式识别多变量统计方法研究模型组与假手术组及给药组之间的代谢物组差异。结果正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)结果显示,模型组与假手术组相比有6个代谢物(丙氨酸、赖氨酸、甘氨酸、肌酸、N-乙酰化及O-乙酰化糖蛋白)水平明显增加,而益母草碱干预治疗能明显降低模型组丙氨酸、赖氨酸、甘氨酸水平,并增加胆碱、磷酸胆碱、鲨肌醇含量。结论益母草碱能通过纠正急性心肌缺血氨基酸代谢紊乱,上调胆碱以及肌醇代谢通路发挥心肌保护作用。该研究为评价益母草碱抗心肌缺血作用提供了有力分析手段,并为研究其作用机制提供新的思路。     

成纤维样滑膜细胞能量代谢异常关键分子在类风湿关节炎中的研究进展

代谢组学研究显示类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者代谢紊乱。然而,与RA相关单个类型细胞的代谢特征却很少被报道。成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)是关节滑膜处主要的细胞类型,通过侵袭关节软骨,导致关节破坏。在炎症组织微环境中,RA-FLS葡萄糖、脂质、氨基酸等关键营养素的代谢发生改变,这些代谢变化参与了FLS异常活化和滑膜炎症。该文总结了近年来关于RA-FLS能量代谢异常关键分子的研究进展,为阐明RA病理机制及发现新的药物靶点提供依据。     

中药治疗溃疡性结肠炎的代谢组学研究进展

溃疡性结肠炎（UC）作为临床消化系统的常见病、难治病，一直是医学研究的热点和难点。中医药在治疗UC方面具有疗效显著、安全性高、停药后不易反复等优势，但作用机制尚未完全阐明。代谢组学从整个机体内源性动态代谢角度出发，寻找潜在的生物标志物及代谢途径，有助于评价药物治疗效果和探索相关作用机制。中药治疗UC的代谢组学研究显示，中药复方、单味中药以及中药单体可通过调控机体内源性代谢物，作用于氨基酸代谢、脂质代谢、能量代谢等诸多相关通路，从而抑制免疫炎症反应、改善氧化应激、降低肠道敏感性、调节肠道菌群、修复肠道黏膜损伤，使机体恢复正常的代谢活动。但相关代谢标志物还需进一步筛选与验证。