免疫沉淀法分离血清APO-B在慢性丙型肝炎与脂代谢研究中的应用

目的:为研究西安地区慢性丙型肝炎(HCV)感染与脂代谢关系而探讨脂质简便分离技术的可行性。方法:以羊抗人APO-B抗血清沉淀并分离HCV抗体阳性者血清APO-B,再以PCR技术进行扩增检测APO-B中HCV-RNA,并作血清HCV-RNA检测及HCV抗体阴性组对照。结果:在HCV抗体阳性者血清APO-B实验组中,检出了HCV-RNA,且拷贝数占血清中HCV-RNA的较大比率(4.74%~27%),而各对照组中没有HCV-RNA表达。结论:免疫沉淀法分离血清APO-B的实验方法是一项传统的成熟技术,操作方便稳定可靠,实验结果进一步支持和证实了HCV与LDL结合的密切关系。     

丙型肝炎患者外周血单个核细胞中HCV-RNA含量检测的临床意义

目的:了解丙型肝炎(丙肝)患者外周血单个核细胞(PBMC)中丙肝病毒核酸(HCV-RNA)的存在情况并探讨其临床意义。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,对65例丙肝患者的血清和PBMC中HCV-RNA进行检测。结果:65例丙肝患者血清和PBMC中HCV-RNA阳性分别为41例(63.1%)和35例(53.8%),其中34例急性丙肝患者血清、PBMC中HCV-RNA阳性分别为21例(61.8%)、13例(38.2%),31例慢性丙肝患者血清、PBMC中HCV-RNA阳性分别为20例(64.5%)、22例(71.0%),慢性丙肝患者PBMC中HCV-RNA检出率与急性相比,差异有统计学意义(2χ=5.74,P<0.05)。3例(2例慢性、1例急性)丙肝患者PBMC中HCV-RNA阳性,但血清HCV-RNA阴性。9例(全为急性)丙肝患者PBMC中HCV-RNA阴性,但血清HCV-RNA阳性。32例(12例急性、20例慢性)丙肝患者血清和PBMC中HCV-RNA均阳性,且PBMC中HCV-RNA的含量均低于血清,两者含量呈正相关。结论:PBMC为HCV肝外贮存场所,其HCV含量依赖血清中HCV的含量;PBMC中HCV在丙肝患者的病情慢性化过程中可能起一定作用;实验室可以通过浓聚血液中PBMC的浓度来提高其HCV-RNA的检出率,故临床医生在对丙肝患者进行血清HCV-RNA定量检测的同时开展PBMC中HCV-RNA检测可以减少漏诊,可作为慢性丙肝患者的选择治疗及预后判断的重要指标。     

慢性丙型肝炎患者血液微量元素、氧应激水平及与病毒载量的关系

目的 检测慢性丙型肝炎患者血液微量元素和氧应激水平以及评估它们与丙型肝炎病毒(HCV)载量的关系.方法 采用实时荧光定量PCR检测42例未经治疗的丙型肝炎患者血清中HCV-RNA水平.原子吸收分光光度法测定其血清微量元素(铜、铁、锌、硒)浓度.分光光度法测定其血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽氧化物酶(GPX)活性.结果 慢性丙肝患者血清锌、硒水平明显低于对照组,相反铜的水平明显高于对照组.与对照组比较,慢性丙肝患者血清MDA水平显著增加,SOD和GPX活性显著下降.血液锌、硒、铜以及MDA、SOD、GPX与HCV载量相关.结论 血液锌、硒、铜以及MDA、抗氧化酶SOD和GPX对慢性丙肝感染者有重要影响,这些参数有可能作为HCV感染的生物学标志物.     

血清冷球蛋白定量检测在丙肝肝硬化诊断中的应用研究

目的:探讨血清冷球蛋白(CG)在丙肝肝硬化诊断中的价值。方法:收集丙型肝炎病毒(HCV)感染患者45例,丙肝肝硬化23例,正常对照50例,分别检测其血清CG含量。将患者按不同年龄、性别及携带HCV病毒不同持续时间的CG含量进行统计分析;血清CG定量与透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、型前胶原(PC)及型前胶原(PC)进行相关性分析。结果:CG>293.2mg/L组中,HCV感染阳性率为77.8%,丙肝肝硬化阳性率为78.3%;丙肝肝硬化发生率为男性27.8%,女性为28.1%。在丙肝肝硬化组中,>60岁组CG定量为563.2mg/L;携带HCV病毒>15年,CG定量为575.2mg/L。在丙肝肝硬化组A、B、C三级中CG定量有显著性差异。结论:CG检测有助于慢性HCV感染及丙肝肝硬化患者的早期诊断。     

丙肝病毒核心抗原的检测在诊断丙肝中的意义

目的：通过分别检测丙肝病毒抗体（HCV-Ab）、丙肝病毒核心抗原（HCV-cAg）和定量检测HCV-RNA,探究丙肝病毒核心抗原检测对于丙型肝炎诊断的意义。方法对36例丙肝抗体阳性患者和120例丙肝抗体阴性患者同时检测HCV-Ab、HCV-cAg和HCV-RNA。丙肝抗体检测采用间接ELISA法,丙肝核心抗原检测采用双抗体夹心ELISA法,丙肝HCV-RNA检测采用荧光PCR法定量检测。结果36例丙肝抗体阳性组中,HCV-cAg阳性28例,HCV-RNA阳性25例。120例丙肝抗体阴性的门诊肝炎患者中HCV-cAg阳性有2例,HCV-RNA阳性有1例。结论 HCV-cAg检测可以缩短HCV抗体检测窗口期,特异性高,操作简便,可将二者联合起来,提高丙型肝炎病毒的检出率及准确度。     

胶体金ELISA及PCR检测丙型肝炎病毒结果分析

目的 比较胶体金法和酶联免疫吸附试验法(ELISA)对丙型肝炎抗体的检测结果,分析丙肝抗体阳性患者HCV-RNA检测结果.方法 采用ELISA法和胶体金试纸条检测1000例患者血清中丙肝抗体;用FQ-PCR检测抗体阳性者血清HCV-RNA.结果 1000例患者ELISA检测抗HCV阳性15例,胶体金检测抗HCV阳性13例,对ELISA抗HCV阳性者HCV-RNA阳性5例,胶体金抗HCV阳性者HCV-RNA阳性5例,胶体金法检测的阴性和阳性结果与ELISA法总的一致性分别为100%和86.7%.阳性标本的S/C在1以下时,试纸条的检测结果与ELISA一致性为0.0%;阳性标本的S/C在1以上时,阳性标本的检测结果一致性为100.0%.结论 胶体金法和ELISA法对HCV感染强阳性者一致性较高,对弱阳性者一致性差,对前两者阳性结果时,应进一步检查HCV-RNA,以确定进一步的治疗方案.     

慢性丙型肝炎患者体液HCV-RNA检测结果与传播途径分析

目的了解慢性丙型肝炎(丙肝)患者体液中HCV含量及分布情况,为了解HCV的传播途径和预防丙肝以及治疗方法提供依据.方法用RT-PCR方法检测200例我院抗-HCV阳性、肝功亦有改变的慢性丙肝患者的血清,以 HCV-RNA阳性患者的唾液、尿液、部分患者精液以及部分患者阴道分泌物为标本再进行RT-PCR检测.结果200例抗-HCV阳性标本中有198例HCV-RNA阳性,唾液有143例HCV-RNA阳性,尿液有156例HCV-RNA 阳性,精液、阴道分泌物均有HCV-RNA阳性结果检出.结论慢性丙肝患者体液中均含HCV,HCV可通过这些体液传播.     

HCV抗原、HCV抗体及HCV-RNA联合检测与ALT的相关性分析

目的探究分析HCV抗原、HCV抗体及HCV-RNA联合检测与ALT的相关性。方法随机选取我院在2013年2月—2015年2月期间接收的120例HCV-RNA阳性丙肝患者,采用不同的方法分别检查患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量水平、HCV抗原(HCV-c Ag)、HCV抗体(HCV-Ab)以及HCV-RNA,并对所有数据进行统计分析。结果 120例HCV-RNA阳性丙肝患者中HCV抗原的阳性率为80.0%,HCV抗体的阳性率为95.0%,ALT含量的变化和HCV-RNA载体含量之间没有明显的相关性(P>0.05),HCV-RNA载体含量越高,则HCV抗体的阳性率越高,HCV-RNA载体载体含量的升高会引起ALT异常率的升高,两者之间呈正相关(P<0.05)。结论对于HCV-RNA阳性丙肝患者中HCV抗原、HCV抗体及HCV-RNA联合检测可进一步明确丙肝病毒的感染力,对患者临床病情具有一定的评估作用,同时结合ALT可对患者治疗效果提供一定的参考,值得临床应用。     

丙型肝炎病毒1bDY株ns5a基因的克隆及其所表达融合蛋白的免疫原性分析

目的:克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)1b型地方株DY株ns5a基因,为进一步研究和应用该基因及其表达产物奠定基础。方法:采用基因重组技术完成实验。设计特异的引物,采用巢式PCR法,从含HCV 1b DY株全长cDNA的质粒HCV17中扩增出目的片段,约480bp;将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,再与原核表达载体pET-28a重组;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达。采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS5A蛋白表达水平。结果:含有HCV 1b DY株ns5a基因的重组体构建成功,并得以表达蛋白,并且NS5A蛋白具有与HCV患者阳性血清中的多克隆的结合活性,具有很好的免疫原性。结论:运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了HCV 1b DY株ns5a基因,为进一步研究HCVns5a的基因型及探讨该基因编码的NS5A蛋白的性质和生物学活性创造条件。     

HCV-RNA检测在提高HCV感染患者检出率的试验研究

目的:探讨组合检测丙肝抗体和丙肝核心抗原并联合丙肝RNA在丙肝临床诊断中的意义。方法:对13 117例患者进行HCV抗体和HCV抗原组合检测,对两种方法中的阳性标本进行HCV-RNA确证检测。结果:13 117例患者中,丙肝抗体阳性188例,丙肝核心抗原阳性52例,其中丙肝抗体和核心抗原均阳性者48例,单独核心抗原阳性4例,总阳性数192例。丙肝抗体阳性188例中HCV抗体阳性标本中有121例HCV-RNA阳性,检出率为64.4%;有48例HCV-c Ag阳性,检出率为25.5%(48/188)。丙肝抗体和核心抗原均阳性者HCVRNA阳性45例,检出率为93.75%;单独核心抗原阳性4例中有3例HCV-RNA阳性,检出率75%。结论:抗-HCV和HCV-c Ag组合作为HCV感染初筛实验联合HCV-RNA确证检测,对HCV感染患者阳性检出率更高,假阳性率更低,可作为临床对HCV感染患者早期诊断和治疗的有效检验程序。     

Hepatitis C viral infection in a Chinese hemodialysis unit

Background The prevalence of hepatitis C virus （HCV） infection among maintenance hemodialysis （MHD） patients varies among countries and among dialysis units within a single country. The present study aimed to investigate the prevalence and characteristics of HCV infection in MHD patients in a Chinese hemodialysis unit.Methods One hundred and ninety-two patients on MHD for an average of （86.1±30.0） months （range 6-181 months） were enrolled in this cross-sectional study. HCV antibody and HCV-RNA were measured in these MHD patients before hemodialysis by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and polymerase chain reaction （PCR） methods.According to the result, all the patients were then divided into two groups： GroupⅠwas positive for HCV antibody and/or HCV-RNA （n=32）, and Group Ⅱ was negative for HCV antibody and HCV-RNA （n=160）. The following information was obtained for all the patients： socio-demographic data, history of blood transfusions and kidney transplantation, and some laboratory values. The MHD patients who were positive for HCV antibody and/or HCV-RNA were followed for more than three years. The disease activities were graded into ＂asymptomatic＂ if alanine aminotransferase （ALT） was less than 40 U/L,＂low activities＂ if ALT was 40-79 U/L, and ＂high activities＂ if ALT was equal to or above 80 U/L.Results The prevalence of HCV infection in MHD patients in our dialysis unit in May 2009 was 16.7, which was significantly higher than in general population （3.2%）. Among the 32 MHD patients with HCV positive, 20 patients were positive for HCV antibody but negative for HCV-RNA, eight patients were positive both for HCV antibody and HCV-RNA,four patients were negative for HCV antibody but positive for HCV-RNA. Eleven patients had a history of kidney transplantation and 12 had a history of blood transfusion, which were significantly more than among the MHD patients without HCV. Thirty of the 32 MHD patients were asymptomatic. There were no significant differences in age, aspartate aminotransferase （AST）, ALT, or between HCV-RNA positive group and HCV-RNA negative group. But the dialysis duration in the HCV-RNA positive group was significantly longer than that in the HCV-RNA negative group. All the 20HCV-RNA negative patients were asymptomatic. Two of the 12 HCV-RNA positive patients had low activity. None of the 32 cases with HCV positive markers had cirrhosis.Conclusions A high prevalence of HCV infection in MHD patients is related to blood transfusion and kidney transplantation. Occult HCV infection is present in MHD patients. Chronic hepatitis C among MHD patients is mild in disease activity, and is not progressive, perhaps due to immunological abnormalities in these patients.     

献血员血清抗－HCV－IgM检测及其意义

目的探讨献血员血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ与ＨＣＶ感染的关联性。方法献血员血清８３６份。以ＨＣＶ混合抗原包被聚苯乙烯反应板微孔，以辣根过氧化物酶标记的羊抗人ＩｇＭ单克隆抗体为酶标抗体，建立ＥＬＩＳＡ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ。以第二代ＥＬＩＳＡ法检测抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ，以ＰＣＲ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ或抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ阳性样品中的ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果２－巯基乙醇破坏试验及ＨＣＶ抗原抑制试验结果显示，以所建立的ＥＬＩＡＳ检测到的为ＨＣＶ特异ＩｇＭ，批内变异系数为３．４７％，批间变异系数为７．０６％。８３６份献血员血清中，有２份抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ阴性而抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论本研究中建立的ＥＬＩＳＡ可较好地用于检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ、献血员筛选及防止丙型肝炎传播。     

烧伤病人输血后丙肝发生情况报告

采用酶联免疫反应（ＥＬＩＳＡ）及聚合酶反应（ＰＣＲ）方法，对２０例烧伤病人血清丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）及丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ进行了检测。结果：入院时，输血组及非输血组抗－ＨＣＶ及ＨＣＶＲＮＡ检测均为阴性。一个月后。输血组１０例病人中发现抗－ＨＣＶ阳性５例、ＨＣＶＲＮＡ阳性４例；而非输血组抗－ＨＣＶ及ＨＣＶＲＮＡ检测均为阴性。说明输血是烧伤病人感染ＨＣＶ的重要途径。本还对烧伤病人输血     

丙型肝炎病毒核酸的荧光定量检测及其临床意义

目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV-RNA含量方法的临床应用价值。方法:在HCV基因组5’非编码区(5’-UTR)设计特异性引物和一对杂交探针,PCR扩增目的片段并构建相应基因片段载体,体外转录RNA作为标准品,根据其建立的标准曲线对血清HCV RNA进行定量,同时用传统的巢式RT-PCR进行定性分析。结果:138例样本在HCV抗体阳性患者中,肝硬化和肝癌患者的HCV RNA含量显著高于慢性肝炎患者(P<0.05),而且HCV RNA含量与ALT水平呈正相关(r=0.91)。结论:RFQ-RT-PCR检测HCV-RNA含量比ELISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HCV在体内的复制情况。     

乙型肝炎病毒核心基因启动子变异对HBeAg表达及病情的影响

目的:研究乙型肝炎病毒核心基因启动子(HBVBCP)变异对HBeAg表达及病情的影响。方法:采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对176例HBV慢性感染者血清进行检测HBVBCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764G→A联合突变。采用ELISA检测技术,检测患者血清HBV标志物。结果:在176例HBV慢性感染者中检出HBVBCP区T1762A1764G变异者73例,HBVBCP变异的阳性率为41.5%,HBVBCP变异在HBeAg阴性病例的阳性率为49.4%,显著高于HBeAg阳性病例的阳性率33.3%。HBVBCP双变异在慢性乙型肝炎轻、中、重度组,肝炎肝硬化组,慢性重症肝炎组和原发性肝癌组的阳性率分别为28.0%、31.4%、34.2%、39.4%、60.0%和70.0%。各型肝病与HBVBCP变异的阳性或阴性进行相关分析,结果有显著性差异。结论:本组病例HBVBCP变异的阳性率为41.5%,变异可引起HBV感染者的HBeAg阴转。HBVBCP变异与HBV慢性感染的临床类型呈正相关,随着病情加重,BCP变异的阳性率有增高趋势。     

HCV-cAg与HCV-Ab、HCV-RNA及肝功能之间的关系探讨

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原（hepatitis C virus core antigen,HCV-cAg）与丙型肝炎病毒RNA（hepatitis C virus RNA,HCV-RNA）关系以及丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酰转肽酶（GGT）水平与HCV-RNA病毒载量之间的相关性。方法选取78例HCV抗体检测阳性的丙型肝炎或疑似丙型肝炎病人作为观察组,另选取同期健康体检者20名作为对照组。采用ELISA法和荧光定量PCR法等对2组血清样本进行HCV-cAg、HCV-RNA和ALT、AST、GGT水平测定,并比较各参数之间的关系。结果观察组HCV-cAg阳性检出率为41.0%（32/78）,HCV-RNA阳性检出率为53.8%（42/78）,差异有统计学意义（P < 0.01）,且二者之间具有较好一致性（κ=0.747）。观察组ALT、AST和GGT水平均明显高于对照组（P < 0.01）,但与HCV-RNA病毒载量均无明显相关性（P>0.05）。结论HCV-cAg和HCV-RNA在检测丙型肝炎方面有较好一致性和相关性,可为丙型肝炎的临床诊断提供有价值的依据。     

抗HCV阳性的各类肝病患者HCV-RNA、抗-GOR及其与ALT关系

目的: 观察HCV感染者抗-GOR、HCV-RNA及其与丙氨酸氨基转移酶(ALT)的关系。方法: 对69例抗-HCV阳性的慢性丙型肝炎、肝硬化、肝癌患者检测HCV-RNA、抗-GOR水平,并与ALT水平进行比较。结果: 慢性丙型肝炎、肝硬化、肝癌患者HCV-RNA阳性率分别为59.4%、61.9%和56.3%;抗-GOR的阳性率分别为71.9%、66.7%和68.8%。ALT>40 u/L组与ALT ≤ 40 u/L组抗-GOR和HCV-RNA阳性率均有显著性(P<0.005和P<0.05)。结论: 抗-GOR检测有助于HCV的诊断,抗GOR阳性率与ALT水平相关。     

丙型肝炎病毒核心抗原的检测及其临床意义

目的 探讨HCV 核心抗原在HCV 感染诊断和治疗中的作用.方法 丙肝核心总抗原检测采用酶联免疫法;丙型肝炎抗体检测采用第三代酶联免疫法.所有血清标本均进行HCV-RNA 和肝功能检测.丙肝核酸定量采用PCR- 荧光探针法;肝功能检测采用紫外连读检测法.结果 90 例中,HCV-cAg 检测阳性率为42.22%(38/90).HCV-cAg 阳性组HCV-RNA 阳性率100%(38/38),显著高于HCV-cAg 阴性组的71.15%(37/52).阳性组丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)异常率63.16%(24/38),显著高于HCV-cAg 阴性组的40.38%(21/52),两组间比较(P<0.05).HCV-cAg 阴性组中59.62% (31/52)的患者ALT 在正常范围内(ALT<40U/L),显著高于HCV-cAg 阳性组的36.84%(14/38) ;而HCV-cAg 阳性组中36.84%(14/38)ALT 值均>100U/L,明显高于HCV-cAg 阴性组的9.62%(5/52).两组间比较(P<0.05).丙肝核心抗原HCV-cAg 和HCVRNA有很好的正相关性,HCV-cAg 与ALT 水平也有一定相关性,可以反映肝功损害程度.结论 丙肝核心抗原HCV-cAg是慢性丙肝感染良好的监测指标.     

HCV核心抗原检测技术的临床应用

目的:探讨丙型肝炎病毒核心抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法的临床应用价值。方法:采用丙型肝炎病毒核心抗原ELISA试剂盒对临床丙肝感染者血清进行检测,同时用HCV抗体ELISA检测试剂盒和HCV RNA基因扩增试验作为对照进行比较。结果:以HCV RNA PCR检测为对照,HCV抗原检测试剂盒的灵敏度为95.65%,特异性为100%,23例HCV RNA PCR检测阳性血清,用HCV抗体检测法进行检测,其中有3例阴性,将这3例阴性标本用HCV核心抗原检测法进行检测,其中2例为阳性。结论:丙型肝炎核心抗原ELISA检测方法能缩短窗口期,敏感性高,特异性好,费用低廉,在临床上具有很好的推广前景。