重症肌无力胸腺淋巴细胞亚群表型的变化

目的　研究重症肌无力 (myastheniagravis ,MG)患者胸腺的T、B淋巴细胞亚群表型 ,并分析与其外周血的相关性。方法　应用免疫荧光标记技术 ,经流式细胞仪分析 ,检测了 59例MG患者 ,包括 30例伴胸腺病变患者外周血的淋巴细胞亚群表型。另外 ,对 8例MG患者的胸腺和外周血经体外培养后进行检测。结果　 ( 1)MG患者外周血辅助性T细胞 (Th ,CD4 )异常增高 ,病程 6个月以内、伴胸腺增生者Th细胞均明显增多 ;( 2 )MG胸腺和外周血中经乙酰胆碱受体 (AChR)刺激后活化的Th细胞 (CD4 CD2 5 )、CD5-B细胞 (CD5- CD19 )明显增多 ,且外周血CD5-B细胞与自身血清乙酰胆碱受体抗体 (AChRAb)滴度显著相关 (P <0 .0 1) ,胸腺摘除术 (Tx)后 ,MG外周血CD4 CD2 5 、CD5- CD19 细胞均有所减少。结论　MG患者胸腺存在着异常的AChR特异应答性T、B淋巴细胞亚群表型 ,尤其以活化的Th细胞为著 ;CD5-B细胞的产生可能与MG密切相关。     

重症肌无力患者外周血T淋巴细胞亚群凋亡的研究

目的探讨外周血T淋巴细胞亚群凋亡在重症肌无力(MG)免疫发病机制中的作用及临床意义。方法采用流式细胞术结合免疫荧光抗体法测定了45例MG患者和40例正常对照组外周血CD4~ T淋巴细胞、CD8~ T淋巴细胞百分数及其凋亡状况,并对24例MG患者在应用糖皮质激素治疗后外周血T淋巴细胞亚群凋亡状况进行了观察。结果MG患者组外周血CD8~ T淋巴细胞百分率较正常对照组明显降低,CD4~ /CD8~ 比值较正常对照组明显升高：MG患者组外周血CD4~ T淋巴细胞凋亡程度较正常对照组明显降低；MG患者外周血CD4~ T淋巴细胞凋亡程度与MG类型、预后密切相关：应用糖皮质激素治疗后MG患者外周血CD4~ T淋巴细胞凋亡程度明显增强。结论MG患者存在T淋巴细胞亚群的分布异常及CD4~ T淋巴细胞凋亡功能障碍,其凋亡程度可能与MG类型、预后密切相关,糖皮质激素对MG患者外周血CD4~ T淋巴细胞凋亡缺陷具有纠正作用。     

FoxP3+ CD4+ CD25+调节性T细胞在重症肌无力发病机制中的作用

目的 在细胞与分子水平检验重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tregs)的表达缺陷,探讨CD4+CD25+Tregs亚群异常与MG发病间的关系.方法 流式细胞技术检测21例MG患者(11例经胸腺切除)与20名健康对照者(healthy controls,HCs)外周血CD4+CD25+Tregs及FoxP3+CD4+CD25+Tregs含量,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)分析MG患者与HCs外周血CD4+CD25+Tregs中FoxP3 mRNA的表达.结果 MG患者外周血CD4+CD25+ Tregs占CD4+T细胞含量与HCs比较无统计学差异(P＞0.05).MG患者外周血FoxP3+CD4+CD25+ Tregs含量及FoxP3 mRNA表达量与HCs比较均显著性降低(P＜0.05);胸腺切除的MG患者与未经胸腺切除的MG患者外周血FoxP3+CD4+CD25+ Tregs含量及FoxP3mRNA表达量无统计学差异(P＞0.05).结论 MG患者外周血CD4+CD25+ Tregs数量正常,但其表面分子FoxP3的表达下调,这种CD4+CD25+ Tregs亚群的异常发现有助于深入阐明MG的免疫发病机制.     

重症肌无力患者循环T细胞受体β链3号互补决定区的研究

目的研究重症肌无力(MG)患者循环T细胞受体(TCR)β链基因亚家族的优先表达,以及β链3号互补决定区(CDR3)基因片断的长度谱型特征,以探讨MG患者体内是否存在病理性T细胞的单克隆或寡克隆增殖。方法收集64例初诊MG患者和16名健康献血者外周静脉血,通过反转录多聚酶链反应(RT PCR)扩增样本中不同亚家族含CDR3的大片段,分析TCRVβ6、8、12、15亚家族的表达,用长度谱型技术研究CDR3谱型特征。结果64例MG患者中, 41例优先表达TCRVβ6、8、12、15中1~2种亚家族,且部分为单克隆或寡克隆性T细胞增殖,另一部分为多克隆增殖;而16名健康对照外周血表达TCRVβ6、8、12、15中3 ~4种亚家族,且全部为多克隆分布。结论TCRVβ6、8、12、15亚家族在MG患者中呈优势表达、优先表达或倾斜性分布,并出现T细胞的克隆性扩增(单克隆或寡克隆),提示这些亚家族参与MG的致病。     

强的松治疗重症肌无力对TCR V β亚家族表达及CDR3谱型的影响

目的 探讨重症肌无力(MG)患者T细胞受体(TCR)β链(Vβ)亚家族优势表达及β链3号互补决定区(CDR3)的长度谱型特点；研究强的松治疗MG患者前后TCR Vβ优势表达及β链CDR3长度谱型特点的变化。方法 通过逆转录聚合酶链式反应扩增MG患者外周血循环T细胞中不同亚家族含CDR3的大片段，分析亚家族的表达，并经基因扫描(长度谱型分析)分析CDR3谱型。结果 MG患者外周血TCR Vβ6、8、12、15亚家族呈倾斜性分布，且部分亚家族T细胞呈现单克隆或寡克隆增殖；强的松治疗后症状明显改善，倾斜性分布现象在缓解期逐渐恢复正常。结论 TCR Vβ6、8、12、15亚家族可能与MG症状有关；强的松类肾上腺皮质激素药治疗MG的机制可能是通过改变TCR Vβ亚家族表达以及抑制病理性T细胞克隆增殖而发挥作用。     

负性协同刺激分子PD-1在重症肌无力患者外周血中的表达

目的 观察重症肌无力(MG)患者外周血中负性协同刺激分子programmed death-1( PD-1)的表达情况，并探讨其与MG发病的关系。方法 采用免疫荧光标记、流式细胞仪检测45例MG患者和33名健康对照者外周血单个核细胞中PD-1及其配体PD-L1的表达，用ELISA法检测各组血浆中可溶性PD-1的水平。结果 (1)MG患者表达PD-1的CD4+T淋巴细胞比例增加，CD14+PD-L1+的单核细胞比例增加，但在不同性别及眼肌型与全身型间差异无统计学意义；在胸腺异常MG患者中CD4+PD-1+T细胞增加，CD14+ PD-L1+的单核细胞比例减少；早发型MG患者（年龄＜40岁）CD4+PD-1+T淋巴细胞比例明显低于晚发型（年龄≥40岁）。(2)MG患者血浆中sPD-1浓度为(6.92 +0.72) ng/ml，明显高于健康对照组的(3.28±0.42) ng/ml，但在性别、MG眼肌型与全身型不同类型间和有无胸腺异常各组间差异无统计学意义，且sPD-1与发病年龄呈负相关(r=-0.526，P=0.000)。结论 PD-1及PD-L1途径参与了MG的发病，异常升高的sPD-1可能干扰了正常的细胞膜上PD-1与PD-L1的结合，从而促使疾病进展。     

重症肌无力患者外周血T、B淋巴细胞Bcl-2的表达

目的　探讨重症肌无力 (MG)患者外周血单个核细胞Bcl 2蛋白表达及其临床意义。方法　以流式细胞仪双标记免疫荧光方法测定 4 7例临床确诊的MG患者外周血T、B淋巴细胞Bcl 2蛋白表达和CD3 T细胞Bcl 2蛋白表达的平均荧光强度 (MFI)。结果　 ( 1)MG组外周血CD3 、CD4 、CD8 T淋巴细胞和CD19 细胞Bcl 2蛋白表达明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,CD3 T细胞蛋白表达Bcl 2的MFI( 0 .572± 0 .177)亦明显高于对照组 ( 0 .170± 0 .147) (P <0 .0 1)。 ( 2 )MG组外周血CD3 、CD4 、CD8 T淋巴细胞及CD19 细胞的Bcl 2蛋白表达与年龄无明显相关 ,而与临床严重程度绝对评分密切相关 (r=0 .63、0 .65、0 .61、0 .78,P <0 .0 5)。CD3 T细胞蛋白表达的MFI与MG患者病程相关密切 (r=0 .62 ,P <0 .0 1)。 ( 3)免疫抑制治疗后MG组临床严重程度绝对评分与淋巴细胞亚群Bcl 2蛋白表达、CD3 T细胞蛋白表达的MFI同步地较治疗前有明显下降 (P <0 .0 1)。结论　外周血淋巴细胞Bcl 2蛋白异常表达对MG发病及临床症状有重要作用。     

重症肌无力患者胸腺细胞经AChR刺激后T淋巴细胞亚群Bcl-2的表达

目的研究重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者胸腺细胞经乙酰胆碱受体(AChR)刺激后T淋巴细胞亚群Bcl-2的表达水平和临床意义。方法应用流式细胞仪测定11例MG患者胸腺T淋巴细胞亚群经AChR刺激后Bcl-2表达水平。结果经AChR刺激后,MG组增生胸腺CD4、Bcl-2双阳性细胞明显高于对照组(P<0.01),CD8、Bcl-2双阳性细胞与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论MG患者增生胸腺中AChR特异性辅助T细胞上Bcl-2表达增高,Bcl-2表达升高可能和AChR的诱导有关。     

他克莫司治疗重症肌无力临床疗效及淋巴细胞亚群变化分析

目的探讨他克莫司联合糖皮质激素治疗重症肌无力(MG)的临床疗效以及淋巴细胞亚群变化。方法将76例MG患者分为实验组(n=46)和对照组(n=30),实验组为他克莫司联合糖皮质激素治疗,对照组为糖皮质激素治疗。比较实验组与对照组许氏临床绝对评分、重症肌无力定量评分(QMGs)、淋巴细胞亚群。结果与治疗前相比,实验组治疗后1 m、3 m、6 m许氏临床绝对评分、QMGs均显著降低(P0.05),CD4~+、CD19~+治疗后3 m、6 m也降低且具有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,实验组患者治疗后1 m许氏评分、QMGs具有明显差异(P0.05),CD4~+治疗后3 m、6 m差异均有统计学意义(P0.05)。结论他克莫司联合糖皮质激素比单独使用糖皮质激素早期症状改善明显,且对CD4~+抑制也更显著。     

晚发型重症肌无力临床研究

目的探讨晚发型重症肌无力(Myasthenia gravis,MG)患者的临床特点。方法回顾性研究40例晚发型MG的临床特点并与早发型MG比较。结果晚发型MG患者男/女比例高于早发型MG,为1.22:1。晚发型MG的症状由眼肌受累演变至全身症状(占67.5%)显著高于早发型MG(占38.7%)。晚发型MG的肌无力程度较早发型MG肌无力程度严重,而且血清乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AchR)抗体阳性率及抗体水平均显著低于早发型MG低,但Titin抗体阳性率及抗体水平却显著高于早发型MG。胆碱酯酶抑制剂对晚发型MG的疗效不如早发型MG。结论晚发型MG是一个免疫异质性的MG亚群,它的临床表现以及血清免疫学特点不同于早发型MG。     

重症肌无力患者细胞免疫水平的检测及临床意义

目的 :探讨周围血中 T细胞亚群、NK细胞、细胞膜白细胞介素 - 2受体、可溶性白细胞介素 - 2受体的阳性细胞与 MG发病及临床疗效的关系。方法 :1.应用流式细胞仪检测外周围血 m IL- 2 R(CD2 5)阳性细胞、NK(CD5 6 )和T细胞亚群 (CD3 、CD4、CD8)的相对计数。 2 .用富氏双抗体夹心 EL ISA方法检测血清 s IL- 2 R。结果 :1.MG患者血清s IL- 2 R水平明显高于健康对照组 ,激素治疗后较治疗前明显下降 ;2 .NK和 CD4阳性细胞在治疗前均明显高于正常 ,治疗后明显下降 ;3.CD3 阳性细胞在激素治疗前后无明显改变 ;4.m IL- 2 R(CD2 5)阳性细胞数无明显改变。结论 :1.血清中的 s IL- 2 R,NK细胞的测定可对该病进行动态观察 ;2 .CD4增高 ,CD8下降提示免疫功能紊乱 ;3.m IL- 2 R阳性细胞百分率不能直接反映 MG的免疫功能紊乱。     

重症肌无力胸腺单个核细胞白细胞介素-2、白细胞介素-10及其mRNA水平的变化

目的　研究重症肌无力 ( myasthenia gravis,MG)患者胸腺是否存在辅助性 T细胞 ( Th)亚群的免疫活性紊乱。方法　利用亲和层析法自人腓肠肌纯化获得乙酰胆碱受体 ( ACh R)并进行了鉴定 ,然后用其作为特异性抗原 ,经体外培养刺激 5例 MG患者胸腺和外周血单个核细胞 ,酶联免疫吸附分析 ( ELISA)法检测上清液中白细胞介素 -2 ( IL-2 )、白细胞介素 -1 0 ( IL-1 0 )水平 ,狭缝印迹杂交法检测 MG胸腺及外周血 IL-1 0 m RNA的表达。结果　MG胸腺和外周血经 ACh R刺激后 ,其上清液 IL-2水平略高于对照组 ( P>0 .0 5 ) ,经 ELISA法和狭缝印迹杂交法发现 MG外周血 IL-1 0及其 m RNA表达水平均略高于对照组 ( P>0 .0 5 ) ,胸腺则明显高于对照组( P<0 .0 5 )。结论　 MG发病过程中 IL-1 0的异常增高可能发生于转录或转录以上水平 ,其异常表达的机制有待于进一步研究。     

淋巴血浆置换治疗吉兰-巴雷综合征的临床疗效及其机制

目的观察淋巴血浆置换(lymphoplasmapheresis,LPE)治疗吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)的临床疗效并探讨其治疗机制。方法 30例GBS患者进行淋巴血浆置换治疗,观察治疗前后神经功能改善状况,并检测治疗前后血液中免疫全套、血常规、凝血四项及淋巴细胞亚群的变化。结果淋巴血浆置换治疗1w后患者MRC评分、2w后MRC评分及Hughes评分均较治疗前有显著改善,2w后有效率高达90%。患者外周血免疫球白及补体、单核细胞百分比、纤维蛋白原等指标于治疗后显著降低。治疗后淋巴细胞亚群中CD8+T细胞百分率显著升高,CD4+/CD8+值显著降低,并且2w后Hughes评分提高大于1分者这种变化更为显著,而2w后Hughes评分提高小于1分者淋巴细胞亚群分布较治疗前无明显变化。结论 LPE治疗GBS疗效显著,可能与纠正GBS患者外周血淋巴细胞亚群紊乱,直接去除免疫球蛋白及补体、单核细胞、纤维蛋白原等病理性物质有关。     

重症肌无力患者造血干/祖细胞及其亚群富集纯化的研究

目的:获得高纯度造血干/祖细胞及其亚群,用于重症肌无力(MG)造血干细胞移植治疗和生物学特性的研究。方法:用免疫磁珠法(MiniMACS)从MG骨髓中富集CD34+细胞后再用荧光激活细胞分选(Fluorescent activatedcell sorter,FACS)纯化CD34+/CD38+和CD34+/CD38-细胞亚群。结果:MiniMACS分选的CD34+细胞群纯度达90％,FACS分选的CD34+/CD38-和CD34+/CD38+两细胞亚群纯度可达95％以上。结论:联合使用MiniMACS和FACS可迅速大量纯化HSC/HPC及其重要细胞亚群,可用于临床造血于细胞移植、基因治疗和研究HSC/HPC及其亚群生物学特性。     

重症肌无力患者造血干/祖细胞及其亚群富集纯化的研究

目的:获得高纯度造血干/祖细胞及其亚群,用于重症肌无力(MG)造血干细胞移植治疗和生物学特性的研究。方法:用免疫磁珠法(Mini MACS)从MG骨髓中富集CD 34+细胞后再用荧光激活细胞分选(Fluorescent activatedcell sorter,rAGS)纯化CD34+/CD38+和T CD34+/CD38-细胞亚群。结果:MiniMACS分选的CD34+细胞群纯度达90％,FACS分选的CD34+/CD38-和CD34+/CD38+两细胞亚群纯度可达95％以上。结论:联合使用MiniMACS和FACS可迅速大量纯化HSC/HPC及其重要细胞亚群,可用于临床造血干细胞移植、基因治疗和研究HSC/HPC及其亚群生物学特性。     

重症肌无力患者的心肌酶及心电图分析

目的　探讨重症肌无力 (MG)患者的心脏损害。方法　对 1 0 3例MG患者空腹取血查心肌酶 ,心电图检查。结果　 1 0 3例MG患者中心肌酶异常率 2 6 2 % (2 7/ 1 0 3) ,心电图异常率 2 3 3 % (2 4 / 1 0 3)。伴胸腺瘤的MG患者与不伴胸腺瘤的MG患者之间的心肌酶异常率及心电图异常率均有显著性差异 (P <0 0 5)。眼肌型患者与全身型患者之间的心肌酶异常率及心电图异常率均无显著性差异 (P >0 0 5)。结论　MG患者伴有心脏损害 ,尤其伴胸腺瘤的MG患者。心肌酶及心电图检查可提示MG患者的心脏损害。     

重症肌无力患者血清可溶性Fas水平变化及其临床意义

目的探讨重症肌无力(MG)患者血清可溶性Fas(sFas)水平变化及其临床意义。方法采用流式细胞术及酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定45例MG患者(MG组)及40例对照者(对照组)外周血T细胞亚群分布和血清sFas水平,并对其中24例MG患者应用糖皮质激素(GC)治疗前后的血清sFas水平进行比较。结果(1)MG组外周血中CD8 T细胞百分率为(21.50±2.21)%,明显低于对照组[(27.75±3.00)%](P<0.01);CD4 /CD8 比值(1.92±0.26)明显高于对照组(1.48±0.16)(P<0.01);血清sFas水平[(3542.06±706.23)pg/m l]显著高于对照组[(2568.18±562.48)pg/m l](P<0.01)。(2)MG组全身型血清sFas水平为(3914.23±804.81)pg/m l,极明显高于眼肌型[(2797.72±592.83)pg/m l](P<0.001);病情中、重度患者明显高于病情轻度者(均P<0.005);预后良好者[(3254.69±661.73)pg/m l]显著低于预后不良者[(4178.38±841.65)pg/m l](P<0.001)。(3)24例MG患者经GC治疗后sFas水平[(2864.59±617.43)pg/m l]较治疗前[(3539.67±705.92)pg/m l]极显著降低(P<0.001)。结论MG患者血清凋亡抑制因素sFas水平增高,并与MG类型、病情及预后相关;GC治疗可以改善MG患者的免疫功能。     

重症肌无力免疫学机制研究进展

重症肌无力(MG)是一种神经肌肉接头(NMJ)传递障碍的获得性自身免疫性疾病,发病机制主要以体液免疫为主、细胞免疫依赖及补体参与。研究表明,MG的发病与多种淋巴细胞及其亚群、抗体、补体及各种细胞因子之间复杂的相互作用有关。故了解MG的免疫学发病机制对MG的诊断及治疗有重大意义。     

自体外周血干细胞移植治疗重症肌无力的造血干细胞动员和采集初步研究

目的　探讨外周血干细胞移植 (PBSCT)治疗重症肌无力 (MG)的造血干细胞动员和采集的有效性。方法　MG患者 1例 ,用环磷酰胺 (CTX) +粒细胞集落刺激因子 (G CSF)联合动员 ,用细胞分离机采集外周血干细胞 ;用流式细胞测定动员后CD+ 3 4 细胞数和用体外半固体甲基纤维素培养法测定单核细胞集落形成单位 (GM CFU)数 ;用相对评分法评估造血干细胞移植后患者的临床疗效。结果　动员后单核细胞 (MNC)为8 0 8× 10 8/kg、GM CFU数为 7× 10 5/kg ,或集落数为 81× 10 5/MNC和CD+ 3 4 细胞数为 1 0 9× 10 6/kg。相对评分法患者的临床疗效为 7/ 8分。结论　CTX +G CSF能有效地动员外周血干细胞 ,可以为移植提供足够数量的造血干细胞数。     

免疫吸附疗法治疗重症肌无力

重症肌无力（MG）是神经肌肉接头处传递障碍的慢性自身免疫性疾病，抗胆碱酯酶剂、免疫抑制剂、胸腺切除或放疗及血浆交换疗法是目前对本病的主要治疗手段，但各有其不足之处。近年来，国外已开始尝试免疫吸附疗法，并取得了一定的经验。1免疫吸附疗法治疗MG的机理现普遍认为，MG是n一乙酸胆碱受体致敏的自身免疫性疾病，70％～90％MG患者血清中可测得乙酸胆碱受体抗体（AChRAb），主要包括lgG；亚群及很少量lgG。等其他亚群，多数患者血清中抗体水平与疾病严重程度一致’‘，”。免疫吸附疗法是利用对AChRAb有特殊亲和力的配体制备…