卵巢和卵巢肿瘤中Hedgehog 信号通路的表达

目的 探讨正常卵巢和卵巢肿瘤中Hedgehog信号通路的表达.方法 采用RT-PCR和免疫组织、细胞化学染色检测26例卵巢肿瘤组织、3例卵巢癌细胞株(SKOV3、A2780和COC1)和7例正常卵巢组织中Hedgehog信号通路的信号分子SHH、IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA和蛋白表达情况;通过实时定量RT-PCR对随机抽取的11例卵巢肿瘤组织和5例正常卵巢组织进行PTCH和GLI1 mRNA水平的比较.结果 SHH、IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA在卵巢肿瘤组织中均有表达;SHH mRNA在正常卵巢组织中不表达,而IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA在正常卵巢组织中有表达;在卵巢肿瘤组织中,PTCH和GLI1的mRNA表达水平高于正常组织(P＜0.05).SHH、IHH、PTCH、SMO和GLI1蛋白在卵巢肿瘤组织中均呈阳性表达,在正常卵巢组织中不表达.卵巢癌细胞株SKOV3、A2780和COC1均有IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA和蛋白的表达;SHH仅在SKOV3和A2780中表达. 结论 卵巢肿瘤中存在Hedgehog信号通路,在部分卵巢肿瘤中有Hedgehog信号通路过度激活的现象.     

骨肉瘤组织中 Hedgehog 信号通路的表达及意义

目的：研究Hedgehog信号通路在骨肉瘤组织中的表达情况及临床意义。方法采用免疫组化法分别检测31例骨肉瘤、21例骨良性肿瘤（13例骨软骨瘤、8例骨样骨瘤）组织中IHH、PTCH、SMO和Gli1蛋白的表达情况,分析此4种蛋白相关关系以及其表达水平与骨肉瘤临床特征的关系。结果骨肉瘤中IHH、PTCH、SMO和Gli1蛋白在骨肉瘤组织中的阳性率分别为70．97％、72．73％、70．97％、70．97％,与骨良性肿瘤（19．05％、14．28％、14．28％、9．5％）比较,差异均有统计学意义（ P＜0．001）。 IHH、PTCH、SMO和Gli1蛋白表达与患者年龄、性别、临床分期、肿瘤部位、肿瘤大小及是否肺转移无关;相关分析显示IHH和PTCH、SMO、Gli1蛋白在骨肉瘤组织中的表达呈正相关。结论 Hedgehog信号通路中的IHH、PTCH、SMO和Gli1蛋白异常高表达,提示Hedgehog信号通路可能在骨肉瘤的发生和发展中起重要作用。     

Hedgehog信号通路相关基因在大肠癌的表达及其临床意义

目的：研究Hedgehog信号通路相关基因SHH、SMO、GLI1在大肠癌中的表达及其临床意义。方法：用RT-PCR检测43例大肠癌切除标本的癌组织和距离癌10cm以上的癌旁组织的SHH、SMO、GLI1 mRNA表达的阳性率,并与20例非肠癌患者的正常大肠组织对照,分析其与大肠癌患者临床和病理各变量的相关性。结果：大肠癌组织SHH mRNA表达阳性率为27．9％,与癌旁组织的18．6％比较,差异无显著性（P〉0．05）,但显著高于正常组织的0％（P〈0．05）。大肠癌组织SMO、GLI1 mRNA表达阳性率分别为83．7％、34．9％,显著高于癌旁组织的58．1％、16．3％及正常组织的0％、0％（P〈0．05）。SHH、SMO、GLI1 mRNA表达阳性率之间并无相关性,阳性率与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤部位、肿瘤浸润深度、病理分型等变量均无相关性（P〉0．05）。结论：Hedgehog信号通路相关基因SHH、SMO、GLI1 mRNA在大肠癌组织中表达阳性率显著增高,其表达与临床和病理各变量不相关。     

卵巢癌中抑癌因子SUFU的表达变化及意义

目的：探讨卵巢癌中抑癌因子SUFU（suppressor of Fused）表达变化及其意义。方法：通过免疫组化检测人卵巢癌和癌旁组织样本中SUFU的表达量，并在数据库大样本和细胞水平上进行验证。同时在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80和卵巢癌细胞系SKOV3分别抑制和过表达SUFU后，运用MTT、EdU、流式细胞术、Western blot、Transwell、平板克隆形成实验等方法分别检测细胞的增殖、凋亡、上皮间充质转化（epithelial?mesenchymal transition，EMT）、迁移与侵袭的情况，并随后用Western blot和实时定量PCR（quantitative real?time PCR，qPCR）检测Sonic Hedgehog（SHH）信号通路的下游靶基因GLI1蛋白和mRNA水平。结果：在3例卵巢癌组织样本中，相比于癌旁组织，癌组织中SUFU蛋白表达有一定下调，而这个结果在TCGA数据库大样本中也得到验证；此外在细胞水平上，人正常卵巢上皮细胞IOSE80中SUFU蛋白和mRNA表达水平明显高于卵巢癌细胞SKOV3。进一步在SKOV3细胞中过表达SUFU能够有效抑制其增殖、EMT、克隆形成、迁移和侵袭，促进凋亡；相反，在IOSE80细胞中下调SUFU则能够促进细胞EMT、迁移和侵袭能力。同时，相比正常卵巢上皮细胞，卵巢癌细胞中GLI1 mRNA和蛋白水平明显上升；当在卵巢癌细胞中上调SUFU时，SHH信号通路的下游靶基因GLI1的表达则明显下调。结论：SUFU能够抑制卵巢癌的发生发展，其作用机制与SHH信号通路相关。     

Hedgehog信号通路中SHH蛋白及其下游转录因子GLI1在Peutz-Jeghers综合征中的表达及意义

目的检测Hedgehog信号通路中SHH蛋白及其下游转录因子GLI1蛋白在人Peutz-Jeghers综合征(PJS)息肉中的表达,探讨其在PJS发生及恶变中的作用。方法采用免疫组织化学方法检测PJS息肉(20例)、正常肠黏膜组织(20例)、大肠腺瘤性息肉(25例)、大肠腺癌(25例)组织中SHH和GLI1蛋白的表达和分布,并比较表达程度的差异。结果免疫组织化学检测SHH蛋白和GLI1蛋白的阳性着色主要分布于胞膜和胞质,腺癌中GLI1蛋白的胞质和核染色增加。SHH蛋白和GLI1蛋白在正常肠黏膜组织、PJS息肉组织、腺瘤组织及腺癌组织中的阳性表达率和表达强度依次增高,差异具有统计学意义(Kruskal-Wallis H test,P<0.001)。SHH与GLI1的蛋白表达在PJS中经Spearman等级相关分析呈正相关(rp=0.503,P=0.024)。结论 SHH/GLI1在正常肠黏膜组织、PJS息肉组织、腺瘤组织及腺癌组织中均有表达,且表达水平依次增高,提示SHH-GLI1信号通路可能与PJS息肉的发生及恶变有关。     

Hedgehog信号分子在视网膜母细胞瘤中的表达

[目的]探讨Hedgehog(HH)信号通路相关因子在视网膜母细胞瘤(Rb)发生发展过程中的作用,寻找治疗Rb的特异性的靶向治疗途径。[方法]选取2004年4月～2004年8月因视网膜母细胞瘤于我院行患眼摘除的8例含较多活性肿瘤组织的标本。男性5例,女性3例;双眼1例,单眼7例。用RT-PCR方法检测Hedgehog信号通路相关因子SHH、PTC、SMO、GLI1蛋白基因在Rb组织中的表达情况。[结果]8份标本中4份表达SHH,3份表达PTC,5份表达SMO,4份表达GLI1。表达产物分别为233、144、140、412 bp。Hedgehog信号分子阳性标本外观上均呈灰白色半透明胶状,几乎无钙化灶。病理上7例为眼内期,1例为眼外期。[结论]HH信号通路可能参与了Rb的发生,在抑制Rb细胞分化、维持Rb细胞活性、促进Rb发展中有一定的作用。     

HHIP基因启动子区甲基化在食管癌细胞系中的研究

目的 探索人食管癌细胞系Hedgehog信号通路相关基因的表达状况、HHIP基因启动子区甲基化状态与HHIP表达的关系.方法 采用RT-PCR方法检测5个食管癌细胞系Hedgehog信号通路SHH、PTCH1、SMO、HHIP和Gli的表达情况.用基于甲基化敏感酶和甲基化依赖酶酶切、并结合荧光定量PCR方法分析食管癌细...     

卵巢肿瘤组织中抑癌基因ARHI的表达及组蛋白去乙酰化酶抑制剂对其的影响

目的：检测卵巢肿瘤组织中ARHI的表达,探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲谷抑菌素(TSA)对恶性卵巢肿瘤细胞生长抑制作用和基因表达的影响。方法：利用RT PCR技术检测正常卵巢组织和卵巢肿瘤组织中ARHI mRNA的表达,比较ARHI基因表达与肿瘤良恶性、恶性肿瘤临床分期、组织分型的关系。利用MTT和RT PCR检测组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对4种卵巢癌细胞珠(SKOV3、A2780、COC1、OC3)的生长和ARHI基因表达的影响。结果：①正常卵巢组织中ARHI表达均为阳性（100％）,卵巢良性肿瘤组织、交界性、恶性组织中不同程度表达缺失;②ARHI的表达与卵巢肿瘤的良恶性有关（P＜0.05）,与恶性肿瘤的组织学分型无关（P＞0.05）,与卵巢肿瘤临床分期有关（P＜0.05）;③4种卵巢癌细胞系中均未见ARHI表达,组蛋白去乙酰化酶抑制剂作用后仅SKOV3细胞系 ARHI表达增强;④组蛋白去乙酰化酶抑制剂对卵巢肿瘤细胞生长有较明显抑制率且与浓度和时间有关(P＜0.05),与顺铂比较,两者对4种细胞系的抑制率无明显差异（P＞0.05）。结论：ARHI基因在卵巢肿瘤组织中有不同程度的低表达甚至缺失,与卵巢肿瘤的恶性程度有关。组蛋白去乙酰化酶抑制剂能有效抑制卵巢肿瘤细胞活性,是治疗肿瘤的新靶点。     

Hedgehog通路关键基因在脑胶质瘤中表达模式的相关研究

目的 分析Hedgehog(Hh)通路的关键基因CDO兄弟同源物(BOC)、SMO、CDON、PTCH1、GAS1、HHIP、脑胶质瘤相关癌基因同源物(GLI)、SHH在脑胶质瘤中表达模式的相关性.方法 按照常春藤胶质瘤数据库提供的数据指标及相关下载流程,结合脑胶质瘤组织学结构、临床参数和基因组数据等变量对目的基因的表...     

卵巢癌组织及细胞株中肿瘤特异性抗原MAGE、GAGE、BAGE基因表达的研究

目的：观察卵巢上皮性癌组织及细胞株中肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE 基因的表达,以探讨基因表达与诊断、治疗及预后的关系,评价基因产物作为卵巢癌标志物以及卵巢癌免疫治疗靶位的可行性。方法：采用 RT PCR分析10例正常卵巢、20例卵巢良性肿瘤、47例卵巢上皮性癌组织及3种卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、COC1中MAGE-1、MAGE-3、GAGE-1/2及BAGE基因mRNA水平的表达。结果：正常卵巢组织中MAGE、GAGE、BAGE基因无表达,良性肿瘤中仅有MAGE-1基因表达,阳性率为15％（3/20）。卵巢癌组织MAGE-1、MAGE-3的表达率较高,分别为51.1％（25/47）、34％（16/47）,GAGE-1/2及BAGE基因在卵巢癌组织中的表达率分别为25.5％（12/47）和14.9％（7/47）。卵巢癌转移灶仅有MAGE-1、BAGE基因表达,阳性表达率分别为28.6％（2/7）、14.3％（1/7）。浆液性囊腺癌MAGE-1、MAGE-3基因阳性表达率明显高于其它类型卵巢恶性肿瘤(P＜0.05)。结论：肿瘤特异性抗原MAGE、GAGE、BAGE基因在卵巢癌中有较高表达,其表达与有无淋巴结转移无关,MAGE-1、MAGE-3基因的阳性表达与肿瘤分化程度及临床分期密切相关,伴有腹水的卵巢癌患者BAGE表达的阳性率较高。卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、COC1的表达谱不尽相同,但至少有一种基因表达,其可作为卵巢癌免疫治疗的特异性靶点。     

GLI1基因在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨胰腺癌组织中Hedgehog信号通路成员GLI1 mRNA的表达情况及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测25例胰腺癌组织及其相应近癌旁组织、癌旁正常组织GLI1 mRNA的表达,并分析胰腺癌组织中GLI1 mRNA表达与肿瘤大小、分化程度及转移的关系。结果GLI1 mRNA在胰腺癌组织、近癌旁组织及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为68．0％（17／25）、24．0％（6／25）、0;胰腺癌组织GLI1 mRNA阳性表达率显著高于近癌旁组织及癌旁正常组织（均P〈0．01）;GLI1 mRNA阳性表达率与肿瘤分化程度相关（P=O．014）,与肿瘤大小、有无淋巴结及远处转移无关（P〉0．05）。结论GLI1 mRNA在胰腺癌组织中有较高的阳性表达率,且其表达率与肿瘤分化程度相关。检测GLI1表达有助于胰腺癌的诊断,可能作为判断胰腺癌恶性程度及预后的指标。     

卵巢肿瘤中基质金属蛋白酶-7及其组织抑制剂-3基因的表达

目的研究卵巢肿瘤组织中基质金属蛋白酶MMP-7及组织抑制剂TIMP-3基因的表达及与卵巢恶性肿瘤临床病理特征和预后的关系.方法应用RT-PCR方法检测48例恶性卵巢肿瘤、21例良性肿瘤及22例正常卵巢组织中MMP-7及TIMP-3mRNA的表达情况,进行阳性率及半定量的比较,并将其结果与临床及病理学资料进行统计学分析.结果 MMP-7及TIMP-3在正常卵巢组织中阳性率仅为9.09%与4.50%,在卵巢恶性及良性肿瘤中阳性表达率分别为83.3%、66.7%、68.7%、81.0%,明显高于正常卵巢(P＜0.000),其半定量表达亦明显高于正常卵巢(P＜0.000).它们在卵巢恶性肿瘤中的表达水平与患者的临床病理特征及预后无相关性.结论 MMP-7及TIMP-3可能与卵巢肿瘤的发生、发展有关.     

ZNF217基因在卵巢癌中的表达及意义

目的 检测ZNF217基因在卵巢囊腺癌、卵巢囊腺瘤及正常卵巢组织中的表达,初步探讨其与卵巢癌发生发展的关系.方法 用免疫组织化学法及实时RT-PCR方法检测卵巢囊腺癌、卵巢囊腺瘤及正常卵巢组织中ZNF217基因在蛋白及转录水平的表达情况.结果 ZNF217基因在卵巢囊腺癌中的蛋白表达高于卵巢囊腺瘤及正常卵巢组织中的(P<0.05),而且ZNF217基因的蛋白高表达与卵巢癌的发生显著相关(r=0.627),卵巢囊腺瘤组织与正常的卵巢组织相比差异则无显著性(P0.05),在mRNA水平的检测与上述结果一致.结论 ZNF217基因的表达与卵巢癌的发生高度相关,且与卵巢癌的临床分期相关.ZNF217基因可能是导致卵巢癌发生发展的重要候选基因之一.     

卵巢癌组织中PI3K的表达及意义

目的：研究卵巢癌组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的表达,探讨PI3K在卵巢癌发生及发展中的作用。方法： 应用RT-PCR检测10例卵巢癌组织、10例卵巢良性肿瘤组织及10例正常卵巢组织中PI3K mRNA表达。应用免疫组化方法检测PI3K蛋白在60例卵巢癌、24例卵巢良性肿瘤及24例正常卵巢组织中的表达。结果： PI3K mRNA在卵巢癌组织中表达量高于正常卵巢及卵巢良性肿瘤（P<0.01）,在卵巢良性肿瘤组织中表达量与正常卵巢组织表达量比较差异无显著性（P>0.05）。PI3K 蛋白表达主要定位于细胞质和(或)胞核。PI3K 蛋白在卵巢癌组的阳性表达率明显高于正常卵巢组和卵巢良性肿瘤组（P<0.01）;PI3K蛋白的表达强度与病理分级及临床分期有关,卵巢癌分化越差PI3K 蛋白表达越强（P<0.05）,临床分期越晚,其PI3K 蛋白阳性表达率也越高（P<0.05)。结论： PI3K mRNA和蛋白在卵巢癌组织表达明显增强,PI3K基因在卵巢癌发生及发展中起促进作用。     

人参皂苷Rg1联合奈达铂通过Hedgehog通路抑制卵巢癌细胞OVCAR-3的增殖及机制探究

目的 探究人参皂苷Rg1联合奈达铂对卵巢癌细胞OVCAR-3增殖的影响、可能的机制以及二者的协同作用。 方法 CCK-8法检测人参皂苷Rg1、奈达铂以及两者联合对OVCAR-3细胞增殖的影响;Western blotting检测3组药物干预后Hedgehog通路关键蛋白PTCH1、SMO、Gli1表达的改变;流式细胞仪检测3组药物干预后OVCAR-3细胞周期的变化。 结果 与未进行药物干预的对照组相比,人参皂苷Rg1组、奈达铂组、联合药物组均对OVCAR-3细胞的增殖产生了抑制作用,差异有统计学意义（P < 0.05）,人参皂苷Rg1与奈达铂表现出协同增效作用;与对照组相比,奈达铂组、人参皂苷Rg1组、联合药物组降低了PTCH1、SMO、Gli1蛋白的表达,差异有统计学意义（P < 0.05）,人参皂苷Rg1与奈达铂表现出协同增效作用;与对照组相比,仅有联合药物组将细胞周期阻滞在G₂期（P < 0.05）。 结论 人参皂苷Rg1联合奈达铂可能通过调低Hedgehog通路相关蛋白将OVCAR-3细胞的周期阻滞在G₂期从而抑制其增殖,人参皂苷Rg1对奈达铂表现出协同增效作用。     

转化生长因子TGF—β1在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义

目的：研究转化生长因子TGF－β1在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其临床意义。方法：通过免疫组织化学SABC法，用抗TGF－β1抗体检测77例卵巢上皮性肿瘤（其中良性21例，交界性7例，恶性49例）中TGF－β1的表达及定位，并以正常卵巢组织14例作对照。结果：正常卵巢组织和良性肿瘤组织中TGF－β1表达明显高于交界性和恶性肿瘤组织；TGF－β1的表达，粘液性癌高于浆液性癌，病理分级1级高于3级，临床分期Ⅰ-Ⅱ期高于Ⅲ－Ⅳ期（均P＜0.05）。结论：TGF－β1在卵巢上皮性癌的发生发展过程中起着一定作用；TGF－β1可能与卵巢上皮性癌的预后有关。     

EFFECTS OF MUTATION AND EXPRESSION OF PTEN GENE mRNA ON TUMORIGENESIS AND PROGRESSION OF EPITHELIAL OVARIAN CANCER

PTEN/MMAC1/TEP1phosphotaseandtensinho-mologuedeletedonchromosome10/mutatedinmultipleadvancedcancers/TGF-βregulatedandepit-helialcellenrichedphosphatase1mapstohumanchro-mosomesubband10q32.3andencodesadualspecificproteinphospholipidphosphatasethatisinvolvedinavarietyofsignaltransductionpathways.1PTENin-hibitsshc'sphosphorylationandthereforeblockstheactivationoftheRas/MAP-kinaseMAPKpathwayhe-nceexplainingthetumorsuppressiveeffectofPTEN.2AnothermechanismofPTENisdephosphorylationandina…     

PTCH蛋白在宫颈癌中的表达

目的 观察宫颈癌及正常宫颈组织中PTCH蛋白的表达,探讨宫颈癌中PTCH的异常激活与宫颈癌之间的关系.方法 采用免疫组化技术检测宫颈癌及正常宫颈组织PTCH蛋白的表达.结果 PTCH 在正常宫颈组织中不表达或低表达,而在癌组织中的表达明显高于正常宫颈组织,且其表达与患者的年龄、肿瘤大小无显著相关,而与其分化程度密切相关,随着分化程度的降低,表达显著增强.结论 Hedgehog信号通路中PTCH蛋白表达上调可能参与了宫颈癌的发病,其在宫颈癌的发生、发展等方面可能具有重要作用.