基于UPLC指纹图谱及多成分含量测定的火草质量控制研究

火草灸是彝族医用于治疗寒湿性病症的特色适宜技术,火草作为火草灸的施灸材料,临床用药混乱,无质量控制相关研究。该文针对火草的非挥发性成分,采用UPLC建立火草非挥发性成分化学指纹图谱及绿原酸等8个酚酸类成分的含量测定方法,采用多元统计分析方法寻找火草药材质量评价指标性成分,建立火草质量的综合评价体系。建立了49批火草药材UPLC指纹图谱,标定了20个共有峰,指认了新绿原酸、绿原酸等8个酚酸类成分。除3批药材外,火草药材的相似度均高于0.89,表明所建立的指纹图谱方法可用于火草药材的整体质量控制;火草中8个成分含量熵权得分与指纹图谱综合得分的相关系数为0.875(P<0.01),表明所测的8个成分可作为指标性成分对火草进行质量评价。进一步,结合指纹图谱共有峰与8个酚酸类成分的含量,进行多元统计分析,筛选得到绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C为火草质量评价指标。结果表明,所建立的方法简便、准确,可实现基于UPLC指纹图谱和多成分含量测定的火草药材质量控制,该结果可为火草的质量标准建立提供数据支撑。     

基于UPLC指纹图谱和多成分定量的苍术质量评价研究

目的建立苍术超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,并同时测定苍术中绿原酸和苍术素的含量,为苍术的质量控制提供依据。方法建立15批苍术药材样品UPLC指纹图谱,同时测定苍术素、绿原酸的含量,通过相似度计算结合聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)对15批样品进行质量分析。结果苍术UPLC指纹图谱共标识出25个共有峰,经鉴定,其中2个共有峰为绿原酸和苍术素。15批苍术样品指纹图谱相似度为0.738～0.997;HCA和PCA将15批样品分为三类,OPLS-DA共标记和筛选出7个差异标志物;山东样品中苍术素含量最高、绿原酸含量最低,内蒙古和河北样品中2种成分含量相差不大。结论本研究建立的指纹图谱和多成分定量方法稳定可靠,可为苍术的质量控制提供参考。     

不同产地白芷药材质量评价

目的:建立白芷药材特征图谱方法,并同时测定6个指标成分含量,为白芷药材质量控制提供依据。方法:采用UPLC建立白芷药材特征图谱及含量同时测定的方法,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行相似度评价,确定共有峰并指认,运用主成分、系统聚类、正交偏小二乘法对白芷药材的相对峰面积分析,筛选影响白芷药材质量的标志物成分,并进行含量测定。结果:16批白芷药材特征图谱中共标定了11个共有峰,指认其中7个化学成分,其相似度大于0.95,采用正交偏小二乘判别分析筛选出影响白芷药材质量的6个标志物,分别为峰10(珊瑚菜素)、峰2(白当归素)、峰11(异欧前胡素)、峰1(水合氧化前胡素)、峰8、峰5(佛手柑内酯),对其中水合氧化前胡素、白当归素、佛手柑内酯、欧前胡素、珊瑚菜素、异欧前胡素共6个指标成分进行含量测定。结论:该测定方法简便准确、重复性良好,为白芷药材的质量控制和评价提供了依据。     

木香HPLC指纹图谱的建立及其抗氧化、抗辐射作用谱效关系研究

目的 建立木香Aucklandia lappa的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱并对特征峰进行液相色谱串联三重四级杆质谱仪（LC-MS）分析,考察木香抗氧化、抗辐射的谱效关系。方法 对12批不同产地的木香药材进行HPLC分析,建立指纹图谱。采用LC-MS技术对指纹图谱中的共有特征峰进行结构分析。以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率为抗氧化作用的药效指标,研究其抗氧化作用。采用MTT法检测辐射后的UC-MSC细胞活性,以细胞活力值为抗辐射作用的药效指标,研究其抗辐射作用。采用灰色关联分析法建立谱效关系,研究木香抗氧化与抗辐射的物质基础。结果 通过指纹图谱的建立,共标定了12个共有峰,其中12批药材相似度均大于0.971。通过文献比对和LC-MS数据解析,确定了3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、东莨菪内酯、木香烃内脂和去氢木香内酯等12个特征峰成分。通过清除DPPH自由基结果发现,12批木香均有抗氧化能力,谱效分析结果显示,去氢木香内酯同分异构体和去氢木香内酯与抗氧化能力有密切关系。通过细胞活力值显示,12批木香部分批次具有抗辐射能力。根据谱效关系分析,发现木香抗辐射与诱导...     

土木香药材HPLC指纹图谱研究及土木香内酯和异土木香内酯测定

目的建立土木香药材的指纹图谱,测定主成分土木香内酯和异土木香内酯的量,为土木香药材的鉴别及质量控制提供依据。方法采用HPLC-DAD法。色谱条件:Hichrom C18(250 mm×4.6 mm,5.0μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长为254 nm(指纹图谱),220 nm。结果建立了土木香药材的指纹图谱,同时测定了15批药材中土木香内酯及异土木香内酯的量。结论方法稳定可靠,重现性和精密度良好,可作为土木香药材的指纹图谱及主成分测定的方法,为该药材的标准化种植及质量控制提供科学依据。     

基于主成分分析及聚类判别模式的木香UPLC指纹图谱研究

目的建立木香药材UPLC指纹图谱及3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量测定方法,对不同产地木香的质量进行较全面的评价。方法采用YMC Trait C18(100 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,指纹图谱检测波长为254 nm,3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量测定检测波长为327 nm,柱温30℃,体积流量0.30 mL/min。采用相似度评价、聚类分析和主成分分析对13批木香药材指纹图谱进行研究。结果建立了木香药材的UPLC指纹图谱,确定了8个共有峰;相似度评价、聚类分析和主成分分析结果表明,13批木香药材质量存在差异,不同产地以及同一产地药材均有一定差异。结论本研究为木香药材的质量控制提供了较为全面、有效的快速评价方法。     

青蒿UPLC指纹图谱的建立与多种成分含量测定

目的:建立30批青蒿样品的UPLC指纹图谱及有机酸类、黄酮类、香豆素类等成分的含量测定方法。方法:采用Agilent Eclipise Plus C_(18)(50 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱;以0.1%磷酸溶液-甲醇为流动相,梯度洗脱;建立指纹图谱;并对青蒿中有机酸类、黄酮类、香豆素类等9个成分进行含量测定。结果:建立了青蒿UPLC指纹图谱及同时测定多成分含量的方法。9种成分在测定范围内线性关系良好,不同产地的青蒿药材质量存在一定差异。江苏盱眙的青蒿综合评价质量最优。结论:本实验建立的方法准确可靠,可同时测定青蒿中东莨菪内酯、滨蒿内酯、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、木犀草素、芹菜素、猫眼草黄素、艾黄素的含量。     

枳实肉和瓤的UPLC指纹图谱和多成分定量分析比较研究

选择20批次枳实,以肉和瓤2个部位为研究对象。采用UPLC分别建立枳实肉和瓤的指纹图谱,肉中标定17个共有峰,瓤中标定10个共有峰,指认了6种黄酮类成分,分别为芸香柚皮苷、柚皮苷、野漆树苷、橙皮苷、新橙皮苷和川陈皮素。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件进行相似度分析,枳实肉和瓤与各自的对照图谱相似度较好,均大于0.90;同一批次枳实肉和瓤的相似度为0.850～0.983。采用SPSS 17.0和SIMCA 14.1软件对枳实肉和瓤的共有峰进行聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析,结合对照图谱共确定枳实肉和瓤的12个差异性成分。在此基础上对6种指认的黄酮类成分和辛弗林进行含量测定。所建立的UPLC指纹图谱和多成分定量分析方法可用于枳实的质量评价,研究结果为枳实"翻肚如盆口"性状特征的科学内涵提供部分科学依据。     

忍冬属药材川银花与金银花 山银花的鉴别研究

目的 通过性状和显微鉴别及超高效液相色谱法（UPLC）指纹图谱比较忍冬属药材川银花、金银花和山银花的异同,为这3种药材的鉴定提供参考。方法 利用性状和显微鉴别对川银花、金银花和山银花药材的特征进行研究;采用UPLC,Waters BEH Phenyl（100 mm×2.1 mm,1.7 μm）色谱柱,以乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）为流动相洗脱,流速为0.3 mL·min^–1,柱温为30 ℃,检测波长为240 nm;采用SPSS 20.0软件对数据进行分析。结果 3种忍冬属药材的性状和显微鉴别特征存在差异;UPLC指纹图谱结果显示,川银花共有峰为11个,金银花共有峰为14个,山银花共有峰为8个,3种药材共有峰为8个,且种内相似度很高,种间相似度较低;通过聚类分析可以将36批药材分为3类;采用主成分分析能区分3种药材。结论 性状和显微鉴别及UPLC指纹图谱均能鉴别3种忍冬属药材。     

补骨脂药材UPLC指纹图谱建立及12种主要成分含量测定

目的建立补骨脂Psoralea corylifolia药材的UPLC指纹图谱,同时对其中12种成分进行含量测定,为其质量控制提供参考。方法采用Shim-pack GIST-HP色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm);以水和乙腈为流动相,梯度洗脱,建立10个产地29个批次的补骨脂药材的UPLC指纹图谱,并采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012年版)进行相似度评价。同时测定了补骨脂药材中12种成分的含量。结果建立了补骨脂药材的UPLC指纹图谱,29批药材的相似度在0.827~0.989,共标定出21个共有峰,并指认出其中12个色谱峰。定量分析条件方法学考察结果良好,29批药材中补骨脂素、异补骨脂素、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、欧前胡素、补骨脂宁、补骨脂定、4,5-去氢异补骨脂定、补骨脂乙素、异补骨脂色烯查耳酮、补骨脂酚的质量分数依次为1.08~6.95、0.76~5.01、0~0.62、0.40~2.54、0.32~1.75、0~0.25,0.06~0.73、0.23~1.83、0~0.27、0.86~6.86、0.08~1.59、4.20~20.76 mg/g。结论UPLC指纹图谱结合多成分同时测定的方法,操作简便,结果准确、稳定,可为补骨脂药材的质量评价提供参考。     

木香、川木香、土木香、青木香和红木香药材的ITS2条形码分子鉴定

通过分析木香、川木香、土木香、青木香、红木香药材的ITS2（internal transcribed spacer 2）条形码序列,探讨木香类药材鉴定新方法。对60份样品提取基因组DNA,PCR扩增ITS2序列并进行双向测序,所得序列经CodonCode Aligner拼接后,采用 MEGA5.0 软件进行序列比对,计算种内和种间遗传距离（K2P）,构建邻接树（neighbor-joing tree,NJ Tree）。结果表明,无论是菊科的木香、川木香、土木香,还是马兜铃科的青木香和五味子科的红木香,ITS2序列种内变异均小于种间变异,ITS2序列所有单倍型比对后长度为272 bp,变异位点达到162个;遗传距离显示物种种内平均K2P远远小于种间平均K2P;NJ树结果显示木香、川木香、土木香、青木香和红木香药材可明显区分,且能鉴别川木香的2个基原物种。因此,ITS2序列可用于鉴定木香、川木香、土木香、青木香、红木香药材,为临床安全用药提供依据。     

Fingerprint Analysis of Codonopsis Radix by HPLC Coupled with Chemometrics Analysis

Objective To establish a validated high performance liquid chromatography(HPLC)for the fingerprint analysis of Codonopsis Radix and for the determination of lobetyolin.Methods HPLC coupled with diode array detection method was employed to establish the fingerprint profile and quantitative determination of lobetyolin in Codonopsis Radix.Principal component analysis method was employed to analyze the 52 Codonopsis Radix samples.Results The reference chromatogram was generated with 25 common peaks showing good separation from adjacent peaks.Conclusion Statistical analysis of the obtained data demonstrates that the developed HPLC fingerprint combined with chemometric is a reliable method for the similar evaluation and quality assessment of Codonopsis Radix,and other traditional Chinese herbs.     

甘草超高液相色谱指纹图谱研究

目的建立甘草的超高液相色谱(UPLC)指纹图谱,为其质量标准的建立提供依据。方法采用反相超高液相色谱法,以Waters Acquity UPLC BEH C18(1.7μm,2.1 mm×100 mm)为色谱柱,乙腈-0.05%磷酸为流动相,梯度洗脱,流速0.4 mL/min,检测波长分别为237、355 nm,柱温30℃,进样量2μL,记录时间51 min。结果UPLC指纹图谱的方法学考察结果符合技术要求。共标定甘草UPLC指纹图谱的24个指纹峰,指认其中甘草酸、芹糖基异甘草苷、甘草查尔酮A、异甘草素、甘草苷、甘草素、异甘草苷、刺甘草查尔酮和光甘草定9个指纹峰。11批甘草样品指纹图谱在波长237 nm处的相似度为0.940~0.988,波长355 nm处的相似度为0.831~0.982。结论本研究建立的甘草UPLC指纹图谱可为甘草质量标准的建立提供依据。     

当归标准汤剂质量评价体系的建立

目的:建立当归标准汤剂的质量控制方法,为其他中药饮片标准汤剂的质量评价提供参考。方法:收集代表性当归饮片,制备当归标准汤剂;测定阿魏酸含量,建立指纹图谱并采用UPLC-Q-TOF/MS对主要色谱峰进行结构确认,明确汤剂中的主要化学成分;计算出膏率、指标成分转移率,评价工艺的稳定性。结果:当归标准汤剂中阿魏酸平均质量分数0.077%;与对照指纹图谱相比,指纹图谱相似度均0.9;当归标准汤剂对照指纹图谱主要共有峰有11个,包括有机酸类、挥发油类、核苷类等;当归标准汤剂平均出膏率51%,阿魏酸平均转移率78.5%。结论:建立的质量评价方法可用于系统评价当归标准汤剂,为当归水煎剂相关制剂的质量控制制定提供参考。     

甘草饮片标准汤剂的研究

制备了15批不同产地的甘草饮片标准汤剂,对甘草苷和甘草酸进行含量测定,计算转移率与出膏率,并建立了HPLC指纹图谱分析方法。通过对15批甘草饮片标准汤剂进行测定,甘草苷和甘草酸转移率范围分别为59.4%~87.4%和49.8%~78.9%,出膏率范围为29.9%~38.9%,并用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012A)软件进行指纹图谱分析,确定了10个共有峰,对15批甘草饮片标准汤剂分别进行了相似度评价,其相似度均大于0.9。该研究中甘草饮片标准汤剂制备方法规范,15批样品质量稳定,指纹图谱相似度高,其方法精密度、稳定性和重复性良好,可为甘草配方颗粒的质量控制提供参考。     

不同商品规格羌活药材的HPLC指纹图谱分析

目的：建立不同商品规格羌活药材的HPLC指纹图谱,为羌活商品等级的划分和羌活药材质量的控制提供实验依据。方法：通过市场调查和文献研究,了解羌活药材商品状况,按照基原结合药材形态将羌活划分为蚕羌、条羌和大头羌3种商品规格。采用高效液相色谱-光电二极管阵列检测技术（HPLC-PDA）,以乙腈-0.3%乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,建立不同商品规格羌活药材的指纹图谱;采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2004A版）进行共有峰确认及相似度评价;通过SPSS 19.0软件采用主成分分析对指纹图谱进行模式识别。结果：分别建立了蚕羌、条羌和大头羌3种商品规格羌活药材的指纹图谱,从蚕羌中标定了22个共有峰,条羌中标定了23个共有峰,大头羌中标定了29个共有峰。相似度评价结合主成分分析结果显示相同商品规格羌活质量较为稳定,不同商品规格羌活的化学成分组成和含量差异显著。结论：所建立的指纹图谱方法可以很好地区别不同商品规格的羌活,可为羌活商品等级的划分及其质量控制提供参考。     

赤首乌和白首乌的HPLC指纹图谱鉴定研究

目的建立赤、白首乌HPLC指纹图谱鉴定方法。方法用RP-HPLC(DAD)法,梯度洗脱,测定赤、白首乌、加工炮制品及其何首乌粉的指纹图谱,并作相似度比较分析。结果何首乌不同样品指纹图谱相似度较好,而何首乌与白首乌的指纹图谱具有明显区别,何首乌炮制前后、白首乌加工前后也有差异。结论HPLC指纹图谱具有重现性好、特征性强、方法简便等特点,可用于赤、白首乌药材的鉴别。     

党参标准汤剂质量评价的建立

目的:建立党参标准汤剂的质量控制方法,评价其质量的稳定性和主要影响因素。方法:收集有代表性的党参药材及饮片,制备党参标准汤剂;建立UPLC指纹图谱及党参炔苷的含量测定方法,采用UPLC-Q-TOF/MS对主要色谱峰进行结构确认,明确标准汤剂中的主要化学成分;计算出膏率、指标成分转移率和溶液p H等参数,评价工艺的稳定性。结果:党参标准汤剂中党参炔苷平均质量分数0.02%,指纹图谱相似度均0.9;党参标准汤剂对照指纹图谱主要共有峰有12个,出膏率45.4%,转移率58.1%。结论:建立的系统评价党参标准汤剂的质量评价方法稳定可行,党参饮片厚度是影响其标准汤剂出膏率的主要因素。     

藤梨根药材HPLC指纹图谱及质量研究

目的:建立藤梨根药材的HPLC-UV特征指纹图谱,为其品质评价提供参考.方法:以乙腈-0.25％甲酸水为流动相梯度洗脱,测定波长280 nm,指纹图谱相似度评价软件确定共有峰后,建立藤梨根的标准指纹图谱并计算了每批药材的相似度,利用聚类分析方法对指纹图谱数据进行分析.结果:建立了含有15个共有指纹峰的藤梨根HPLC-UV特征指纹图谱,并标定熊果酸、油酸、阿魏酸、槲皮素等7种共有成分.结论:该方法快速、准确,可用于评价藤梨根药材质量.     

中药鬼臼毒性成分HPLC/UV指纹图谱分析方法研究及与威灵仙、龙胆HPLC图谱比较

目的：建立一个快速鉴别区分鬼臼、龙胆、威灵仙的分析方法。方法：以鬼臼所含毒成分为分析对象,选择适宜的ＨＰＬＣ条件,建立了指纹图谱分析方法,并对该方法进行了考察。结果：方法学考察结果表明,本研究建立的分析方法有较好重现性与复现性;鬼臼指纹图谱与威灵仙、龙胆ＨＰＬＣ图谱截然不同。结论：ＨＰＬＣ指纹图谱分析法可简便快速地鉴别区分鬼臼（桃儿七）、龙胆、威灵仙,并可用于不同来源鬼臼的鉴别。