脂质体介导C-myc基因反义寡核苷酸对人膀胱癌细胞系Biu-87的生物学影响

目的 :探讨应用脂质体 (LR )介导C -myc基因反义寡核苷酸 (ASODN)对人膀胱癌细胞系Biu - 87的生物学影响。方法 :采用细胞计数、MTT比色法评价反义C -myc寡核苷酸对Biu - 87细胞体外增殖的影响 ,应用免疫组化 (SABC)、DAB显色检测C -myc反义寡核苷酸作用癌细胞后C -myc蛋白的表达情况。结果 :脂质体介导C -myc反义寡核苷酸组与对照组相比 ,Biu - 87细胞增殖活性受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ,12h后可抑制C -myc基因蛋白表达。结论 :脂质体介导C -myc反义寡核苷酸可抑制人膀胱癌细胞体外增殖活性。应用反义技术封闭C -myc癌基因表达 ,为膀胱癌的基因治疗提供了新的思路     

脂质体介导反义寡核苷酸体外抗乙型肝炎病毒作用的研究

 目的 研究脂质体介导的反义寡核苷酸在体外对乙型肝炎病毒基因复制和表达的抑制.方法 以2.2.15细胞为靶细胞,针对HBV S基因和PreC基因翻译起始区设计合成了16聚硫代反义寡核苷酸(Phosphorothioate AntiflenseOllgormcleotides,PS-ASON),脂质体促进转染.用放射免疫测定法(RLA)测乙型肝炎病毒HBsSg、HBeAg含量.结果 脂质体介导PS-ASON在浓度1μmol/L时特异性抑制90%HBsAg和92%HBeAg的产生,同时未见对细胞的毒性作用.脂质体介导反义寡核苷酸(Antisense Oligonucleotides,ASON)的抗病毒作用显著高于单独用ASON(P<0.01).结论 脂质体介导的ASON是一种很有潜力的抗HBV药物.     

靶向人乙型肝炎病毒siRNA的构效关系研究

目的:在体外模型HepG2.2.15细胞中研究靶向人乙型肝炎病毒(HBV)小分子干扰RNA(siRNA)的构效关系.方法:靶向HBV基因不同位置合成21条siRNA,分析多条siRNA在HBV 8个基因型(共120条序列)中的保守性情况以及siRNA的二级结构特点.利用乙肝表面抗原(HBsAg)ELISA定量方法与荧光定量PCR方法检测8iRNA在不同浓度下(1,10,100 nmoL/L)对HepG2.2.15细胞中乙肝病毒HBsAg和mRNA表达的抑制情况.SPSS进行定量构效关系(QSAR)分析.结果:半数(13/21)的siRNA以浓度依赖模式抑制靶基因的表达(P＜0.05).其中537,672,1263,1658等序列活性显著高于阳性对照序列.QSAR分析显示siRNA基因型同源性(P＜0.01)、S/P和X区(P＜0.05)与siRNA活性有紧密关系;重叠基因[S/P/前基因组(pregenome)mRNA]区域局部靶mRNA二级结构保守性、发卡环、多茎环和茎的碱基数目与siRNA活性相关(R=0.994,P=0.009).结论:siRNA的靶点序列、siRNA本身的一级序列与二级结构对其抑制靶基因的活性有显著影响,具有明显的构效关系.优选siRNA可能作为治疗多基因型乙肝感染的候选序列.     

反义显像技术在肿瘤诊断中的应用

反义显像技术以放射性核素标记的人工合成的寡核苷酸为显像剂，通过体内核酸杂交而显示特异性癌基因过度表达的癌组织。肿瘤癌基因的特异性、放射性核素的选择以及标记化合物的稳定性、比放射性等诸参数均影响显像效果。成功的反义显像要求寡核苷酸探针具有容易大量合成、体内稳定、能与靶序列结合并且不发生非序列性特异性结合等特点。反义显像以癌基因为基础，使肿瘤显像进入基因水平     

hTERT基因反义核酸对Hela宫颈癌细胞端粒酶活性的影响

研究人类端粒酶催化亚单位（hTERT)基因的反义寡核苷酸对宫颈癌细胞的影响。方法：采用TRAP－ELISA检测Hela细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化。结果：hTERT基因反义核酸能有效抑制Hela细胞端粒酶活性。结论：hTERT基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性，为肿瘤治疗提供了一个有效的新途径。     

Sanger测序法确证硫代修饰反义脱氧寡核苷酸的序列

目的：建立一种简便、可靠的硫代修饰反义脱氧寡核苷酸序列确证方法，为反义药物的质量控制及新药研究与开发奠定基础。方法：选择含有待测反义脱氧寡核苷酸序列在内的一段靶基因为模板，以待测序的硫代修饰反义脱氧寡核苷酸作为下游引物，同时在其上游设计一条引物，进行PCR扩增，使待测序的反义序列以修饰形式掺入到PCR扩增产物中；以上述掺入反义序列的PCR扩增产物为模板，利用Sanger双脱氧链终止测序法对其进行自动序列分析。结果：该方法可对不同长度硫代修饰的反义序列进行测定，并且可有效地检测出合成过程中产生的突变和缺失序列，与质谱法相比，仪器和试剂更普及，方法易于掌握且测序成本低，用样量少。结论：该方法可用于硫代修饰反义脱氧寡核苷酸药物的序列确证。     

DNA-PKcs失活对c-Myc蛋白表达的影响

目的：通过DNA-PKcs表达抑制的细胞模型，研究DNA-PKcs与癌基因c-myc表达调控的关系。方法：利用siRNA技术或抑制剂建立DNA-PKcs表达抑制细胞模型，Western印迹检测DNA-PKcs和c-Myc蛋白表达变化，Northern印迹检测癌基因c-myc的mRNA表达，SEAP检测系统检测c-myc转录活性变化。结果：稳定表达DNA-PKcs siRNA的细胞DNA-PKcs蛋白和c-Myc蛋白表达明显降低，同时c-myc转录活性也被抑制，但c-myc在mRNA水平无明显变化。渥曼青霉素（wortmannin，0．2μmol／L）同样也可抑制c-Myc蛋白表达和转录活性，而对c-myc的mRNA表达无影响。结论：DNA-PKcs参与c-myc基因的表达调控，DNA-PKcs是一个潜在的肿瘤治疗靶分子。     

肿瘤抑制基因XAF1启动子序列中活性IRF-1作用元件的鉴定

目的在XAF1的转录起始序列中鉴定一具有高度活性的IRF-1作用元件。方法通过生物信息学分析发现XAF1转录起始处(-30~-38nt)有一潜在的干扰素(IFN)调节因子1结合元件(IRF-E),与同义IRF-E序列同源性达76.2%,命名为IRFE-XAF1。应用凝胶电泳迁移实验(EMSA)检测IRFE-XAF1的核蛋白结合活性,并分别定点突变其核心序列内-34nt和序列旁-28nt,检测突变后XAF1启动子活性变化及对IFN-α作用的影响。结果EMSA实验发现32P标记的含IRFE-XAF1的双链寡核苷酸DNA探针可与细胞核蛋白结合,且可被IRF-E同义探针阻断,定点突变后结合活性丧失,证实该IRFE-XAF1位点具有与转录因子结合的活性。含该IRFE-XAF1位点的XAF1启动子序列具有启动子活性且可被IFN-α诱导,IRFE-XAF1序列定点突变后启动子活性明显降低,其中-34nt突变后完全消除了IFN-α上调启动子活性的作用。结论XAF1的转录起始序列具有一高度活性的IRF-E,其序列为-38ntGAAACGAAA-30nt,这一发现提示XAF1是IFN-α诱导肿瘤细胞分化的作用基因。     

反义STAT3寡核苷酸对B16细胞辐射敏感性的研究

目的 探讨反义STAT3转染鼠恶性黑色素瘤B16细胞后,肿瘤细胞辐射敏感性的变化。方法 利用反义寡核苷酸转染B16细胞后,以不同剂量γ射线照射。通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖变化,Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察。用Annexin V/PI复染,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率的变化。结果 反义STAT3转染后加以γ射线照射,B16细胞的增殖相比于两者单独作用组受到明显抑制,细胞凋亡水平也增加。结论 反义STAT3寡核苷酸联合γ射线对B16细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强,提高了鼠黑色素瘤B16细胞的辐射敏感性;表明阻断STAT3蛋白表达可能成为一种新的提高肿瘤辐射敏感性的有效手段。     

c-fos反义寡核苷酸激活caspase 3诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的 探讨c-fos反义探针诱导人肝癌HepG2细胞凋亡以及caspase3在其中的作用.方法 人肝癌HepG2细胞分为3组,①对照组:加生理盐水10μl;②c-fos正义寡核苷酸(SO)处理组:加入SO 10μl(5μg/μl);③c-fos反义寡核苷酸(ASO)处理组:加入ASO 10μl(5μg/μl).各组细胞再培养1h后进行后续实验.采用Hoeschst 33258染色检测细胞凋亡情况,并分别运用实时荧光定量PCR和Western blotting 检测 caspese 3在mRNA和蛋白水平的表达变化.结果 Hoechst 33258细胞染色显示,对照组和SO处理组的细胞核为弥散均匀的圆形或椭圆形荧光,而ASO处理组的细胞核或细胞质内可见致密浓染的颗粒、新月体或环状荧光,核同缩,部分切片可见核碎裂.PCR和Western blotting检测显示,与对照组和SO处理相比,ASO处理组caspase 3 mRNA和蛋白的表达均明显上调.结论 c-fos反义探针可以诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,且caspase 3参与了此过程.     

Correlation of HER-2/neu overexpression with mammography and age distribution in primary breast carcinomas

RATIONALE AND OBJECTIVES: HER-2/neu is a valuable prognostic and therapeutic marker in primary breast carcinoma. The objective of this study was to determine the mammographic and patient characteristics (age) that correlate with HER-2/neu overexpression in primary breast carcinoma. MATERIALS AND METHODS: HER-2/neu characteristics and preoperative mammograms were available in 498 patients with 543 primary breast carcinomas (526 invasive carcinomas and 17 ductal carcinoma in situ). HER-2/neu status was determined by immunohistochemistry and fluorescence in situ hybridization. For evaluation of patient age distribution, age was divided into 5 groups. For mammography, breast composition and abnormal findings were categorized. Abnormal findings were divided into mass, calcification, architectural distortion, asymmetric density, or none. RESULTS: For age distribution, women under than 50 years had more frequent HER-2/neu overexpression than women aged 60-69 years (P < .05). On mammography, there was no significant correlation between breast composition and HER-2/neu status (P > .05). Calcifications were more significantly frequent in carcinomas with HER-2/neu overexpression (56%) than in those without HER-2/neu overexpression (40%) (P = .001). Of the 242 carcinomas with calcifications on mammography, fine linear morphology was more significantly frequent in carcinomas with HER-2/neu overexpression (20%) when compared with those without HER-2/neu overexpression (10%) (P = .023). Diffuse distribution of calcifications was more common in carcinomas with HER-2/neu overexpression (11%) compared with carcinomas without HER-2/neu overexpression (5%) (P = .051). CONCLUSION: HER-2/neu overexpression in primary breast carcinoma is correlated with patients' age (under age 50) and calcifications at mammography.     

p185HER-2蛋白胞外区的表达及其结合肽的筛选

目的：构建p185^HER-2蛋白胞外区的原核表达裁体，实现p185^HER-2蛋白胞外区的表达。以纯化p185^HER-2蛋白胞外区为靶，从噬菌体肽库中筛选其结合肽，用于肿瘤导向治疗。方法：从含有HER-2全长cDNA的质粒psv^2-cerbB-2中克隆了人p185^HER-2蛋白胞外区cDNA，将此cDNA克隆到pET-30a 表达栽体中，构建p185蛋白胞外区的表达栽体。表达的p185^HER-2蛋白胞外区通过Zn^2 螯合层析柱进行纯化。以纯化的p185^HER-2蛋白胞外区为靶，通过淘洗方法进行噬茵体肽库筛选。结果与结论：构建了p185^HER-2蛋白胞外区的原核表达栽体，实现了p185^HER-2蛋白胞外区的高表达。通过Zn^2 螯合层析柱实现一步纯化，p185^HER-2蛋白胞外区的纯度达到95％。从噬菌体随机环七肽库中找到了一组具有核心序列p185^HER-2蛋白胞外区结合肽。这些p185^HER-2蛋白胞外区结合肽有可能成为肿瘤治疗的新的候选分子。     

非肿块型乳腺癌的 MRI 表现与 HER-2表达的相关性研究

目的：探讨非肿块型乳腺癌的 MRI 表现与人类表皮生长因子受体2(HER-2)表达的相关性。方法收集经病理证实的乳腺癌74例,术前 MRI 动态增强表现为非肿块样强化。使用免疫组化染色测定 HER-2的表达情况;应用χ2检验、Fisher 确切概率法及 Spearman 秩相关分析病灶的形态学特征、动态增强参数及表观扩散系数(ADC)值与 HER-2表达的相关性。结果肿瘤大小与 HER-2阳性表达呈正相关(r=0.341,P=0.003);ADC 值与 HER-2阳性表达呈正相关(r=0.317,P =0.006);峰值时间与 HER-2阳性表达呈负相关(r=-0.244,P=0.036);而病灶分布特征、内在强化方式及时间-信号强度曲线类型与 HER-2表达均无明显相关性(P 值均>0.05)。结论肿瘤大小、峰值时间及 ADC 值与 HER-2的表达有一定的相关性,可间接为非肿块型乳腺癌的临床治疗方案选择及预后评估提供参考依据。     

基于18F-FDG PET/CT图像建立的多元影像组学模型对乳腺癌原发灶HER-2表达状态的预测价值

目的 评估基于18F-氟脱氧葡萄糖（FDG） PET/CT图像建立的多元影像组学模型对乳腺癌原发灶人表皮生长因子受体2（HER-2）表达状态的预测价值。 方法 回顾性分析2010年1月1日至2019年12月31日于天津医科大学肿瘤医院行18F-FDG PET/CT检查的273例女性乳腺癌患者的临床和影像学资料,年龄26~78（51.8±10.8）岁。根据乳腺癌原发灶HER-2表达状态的不同将患者分为HER-2阳性组和HER-2阴性组,比较2组患者的临床特征和PET/CT代谢参数的差异。勾画原发灶的感兴趣区,提取所有影像组学特征并建立基于PET/CT图像的影像组学特征模型,将样本中70%的患者作为训练集,剩余30%的患者作为测试集,采用受试者工作特征曲线比较PET/CT代谢参数及影像组学模型对乳腺癌原发灶HER-2表达状态的预测能力,采用十折交叉验证计算预测模型的平均性能。采用Wilcoxon秩和检验比较组间各PET代谢参数是否存在差异。计数资料的比较采用χ2检验,计量资料的比较采用两独立样本t检验和Mann-Whitney U秩和检验。 结果 HER-2阳性组患者106例、阴性组患者167例。HER-2阴性组患者合并腋下淋巴结转移的比例较HER-2阳性组患者高[85.03%（80/106）对75.47%（142/167）],且差异有统计学意义（χ2=3.900,P<0.05）。除腋下淋巴结转移情况外,2组患者的年龄、病理学类型及肿瘤分期间的差异均无统计学意义（t=?0.028,χ2=5.429、1.891,均P>0.05）。2组患者的PET代谢参数最大标准化摄取值、平均标准化摄取值、标准化摄取值峰值、肿瘤代谢体积、病灶糖酵解总量之间的差异均无统计学意义（Z=?1.583~?0.064,均P>0.05）。最终筛选出具有较好预测价值的37个影像组学特征建立组学特征模型,其中,PET影像组学参数8个、CT影像组学参数29个。在训练集中,影像组学特征模型曲线下面积（AUC）、准确率、灵敏度和特异度分别为0.913（95% CI:0.871~0.954）、0.882（95%CI:0.832~0.922）、0.849（95%CI:0.759~0.910）和0.910（95%CI:0.841~0.952）;在测试集中,影像组学特征模型AUC、准确率、灵敏度和特异度分别为0.820（95%CI:0.723~0.918）、0.830（95%CI:0.738~0.900）、0.875（95%CI:0.701~0.959）和0.807（95%CI:0.683~0.892）;经十折交叉验证后,影像组学模型的AUC、准确率、灵敏度、特异度的均值分别为0.818、0.847、0.908、0.764。 结论 相较于传统的PET代谢参数,基于18F-FDG PET/CT图像建立的多元影像组学模型对乳腺癌原发灶HER-2表达状态有较好的预测价值,有助于临床医师筛选曲妥珠单抗受试人群,改善患者预后。     

原子力显微镜对结合HER-2后乳腺癌细胞膜的观察

目的 通过原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)观察人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)表达的乳腺癌细胞膜的表面形态变化,为提高乳腺癌HER-2检测的敏感性和精确性提供新方法.方法 利用AFM分别观察不同组织学类型的人类表皮生长因子受体抗体阳性表达和阴性表达的乳腺癌细胞膜表面形态特征并对特征参数平均粗糙度、平均峰高度、平均凹陷深度和表面积差值进行定量测量,采用统计学方法进行差异性分析.结果 HER-2阳性表达组的乳腺癌细胞形态和阴性表达组相比具有明显的不同:HER2阴性表达的乳腺癌细胞膜隆起较“尖锐”,隆起物高且偏细,每个单倍计数面积内的隆起物数目较多;而HER2阳性表达的乳腺癌细胞膜隆起较“粗大”,隆起物低且偏粗,每个单位计数面积内的隆起物数目明显减少.两组细胞在平均粗糙度[(21.87 ±2.46)/(32.65±1.03),P＜0.000]、平均峰高度[(13.94±1.01)/(31.15±3.89),P＜0.001]、平均凹陷深度[(11.09±6.36)/(33.58±3.15),P＜0.001]和表面积差值[(6.27±2.03)/(19.65±1.13),P＜0.001]方面具有明显差异(P＜0.05).不同组织学类型的乳腺癌细胞膜表面形态变化趋势与此一致.结论 细胞膜表面结构因细胞功能状态的不同而不相同.相同肿瘤细胞在不同功能状态下,其细胞膜在形态结构上存在很大的差异,这为探讨肿瘤的发生机制、发展过程和早期诊断及细胞诊断提供依据,为提高HER-2的阳性率诊断提供新方法.     

EGFR、HER-2/neu蛋白在胃癌中的表达及其预后价值研究

目的 研究胃癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)、HER-2/neu蛋白的表达与临床病理特征及生存时间的关系,探讨其作为胃癌预后指标的可行性.方法 应用免疫组织化学法检测103例胃癌标本中EGFR、HER-2/neu蛋白的表达,并将检测结果与患者临床病理特征进行综合分析.结果 在103例胃癌组织中,EGFR、HER-2/neu蛋白的阳性表达率分别为42.7%(44/103)、31.1%(32/103),而胃正常组织中均无表达.EGFR、HER-2/neu蛋白表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、部位、分化程度均无相关性(P＞0.05),而与肿瘤的浸润深度、病理分期、淋巴结转移、远处转移相关(P＜0.05).EGFR、HER-2/neu蛋白表达阳性患者的中位生存时间分别为11.0和10.1个月,表达阴性患者的中位生存时间分别为65.2和64.5个月,表达阳性与阴性患者的生存时间有显著性差异(P＜0.05).EGFR与HER-2/neu蛋白联合表达与生存时间相关(PEGFR＝0.027,PHER-2/neu＝0.000,rEGFR＝1.965,rHER-2/neu＝3.153),二者阳性表达时有减少胃癌患者生存时间的危险,HER-2/neu阳性表达的危险度相对较大.结论 测定胃癌组织中EGFR、HER-2/neu蛋白的表达,有助于判断患者预后,也为分子靶向治疗药物在胃癌的应用提供了理论依据.     

Comparing the intracellular fate of components within a noncovalent streptavidin nanoparticle with covalent conjugation

IntroductionAuger radiotherapy requires adequate tumor delivery and high nuclear accumulation and retention. We hypothesize that the noncovalent nature of a streptavidin/biotin three-component nanoparticle possessing these qualities may be required for dissociation of the radiolabeled oligomer and its accumulation into the cell nucleus.MethodsAs a test of our hypothesis, the intracellular fate of an antisense oligomer when incubated as the nanoparticle and when incubated while covalently conjugated to the antibody was compared. The three-component noncovalent nanoparticle consisted of streptavidin linking three biotinylated components: a Cy3-labeled anti-RIα antisense phosphorodiamidate morpholino (MORF) oligomer, a tat transfecting peptide and the anti-Her2 herceptin antibody. The covalent constructs included an anti-RIα antisense DNA conjugated to a radiolabeled herceptin and a fluorescent DNA conjugated to native herceptin. Fluorescence microscopy in SK-BR-3 (Her2+) cells was used to evaluate the fate of the fluorescent Cy5.5-DNA and Cy3-MORF, while the subcellular accumulation of the ¹¹¹In-labeled herceptin and herceptin-DNA in both SK-BR-3 and MDA-MB-231 (Her2) cells was determined by isolating and counting the nuclear fractions.ResultsPreviously, we demonstrated that when incubated as the three-component nanoparticle consisting of herceptin and streptavidin and ^99mTc-labeled antisense MORF, only the MORF accumulated in the nucleus of Her2+ cells. In this investigation, clear evidence was observed of nuclear accumulation of the antisense oligomer within the noncovalent nanoparticle as before, but when incubated as the covalent construct, by both fluorescence microscopy and nuclear counting, no evidence of nuclear accumulation was observed.ConclusionThe weaker noncovalent biotin–streptavidin bond may be essential for adequate delivery of the radiolabeled antisense oligomer to the nucleus of tumor cells.     

体素内不相干运动联合扩散峰度成像对乳腺癌HER-2表达的判断价值

目的 探讨体素内不相干运动成像(IVIM)联合扩散峰度成像(DKI)对乳腺癌HER-2表达状态的诊断价值.方法 选取本院经病理证实的乳腺癌患者201例,HER-2阳性组106例,HER-2阴性组95例,所有病例均行IVIM及DKI检查.分析两组间的临床病例资料和表观扩散系数(ADC)、真实扩散系数(D)、灌注相关扩散系...     

ER阴性原发性乳腺癌HER-2过表达与X线表现及临床特征相关分析

目的：探讨雌激素受体阴性(ER-)乳腺癌患者中,人类表皮生长因子受体-2过表达(H ER-2+)与 X线及临床病理特征的关系。方法收集资料完整的ER-乳腺癌患者190例,其中 HER-2+患者78例,HER-2无过表达(HER-2-)患者112例,比较2组患者的 X线表现和临床病理特征。结果 HER-2+组与 HER-2-组比较,年龄分布具有显著性差异(P<0.001),HER-2+多见于高年龄患者(>60岁);HER-2+组更多伴有淋巴结转移(P=0.011)。X线表现方面,单纯钙化多见于 HER-2+组(P=0.000),单纯肿块多见于 HER-2-组(P<0.001)。HER-2+组多为分叶状肿块(P<0.001),毛刺多见(P=0.000),而 HER-2-组多为圆形肿块(P=0.014),边缘光滑(P=0.000)。钙化表现上,HER-2+组更多表现为恶性钙化(P=0.000)。结论 ER-乳腺癌 HER-2具有一定的临床及 X线特征,可以为临床医师在乳腺癌个体化诊疗中提供重要参考依据。     

HER-2在骨肉瘤中蛋白表达、基因扩增及临床意义研究

目的探讨骨肉瘤中人类表皮生长因子受体-2(HER-2)的蛋白表达、基因扩增及其临床意义。方法收集2002年1月至2015年6月辽宁省人民医院的51例骨肉瘤及20例骨软骨瘤存档蜡块,采用免疫组化法检测其HER-2蛋白表达情况;采用免疫荧光原位杂交技术(FISH)检测HER-2基因扩增情况。结果在骨肉瘤及骨软骨瘤中HER-2蛋白的阳性表达率分别为64.7%及0;HER-2基因扩增的阳性率分别为58.8%、10.0%;组间比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论骨肉瘤中HER-2基因扩增及蛋白表达均高于骨软骨瘤,可作为其分子靶向治疗的靶点。