反义端粒酶反转录酶对5-羟色胺诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖抑制的机制研究

目的 探讨端粒酶反转录酶(TERT)的反义寡核苷酸(ASODN)在抑制5-羟色胺(5-HT)诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖过程中对细胞凋亡和细胞周期的影响.方法 组织块法培养大鼠PASMC,并将细胞分为对照组(应用RPMI-1640培养液培养)、5-HT组(应用含10-5mol/L 5-HT的培养液培养)、反义核酸组(应用含5-HT、反义TERT寡核苷酸的培养液培养)和正义核酸组(应用含5-HT、正义TERT寡核苷酸的培养液培养).采用Hoechst染色、免疫荧光显微镜检测各组细胞凋亡形态,并采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,免疫组化法检测细胞核增殖抗原(PCNA)在细胞中的表达.结果 Hoechst染色实验显示5-HT组凋亡细胞数(161±33)明显高于对照组(63±16,P＜0.05),而与正义核酸组(177±48)比较差异无统计学意义(P>0.05);反义核酸组凋亡细胞数(289±58)高于5-HT组和正义核酸组(P＜0.05).流式细胞仪检测提示5-HT可促进正常细胞的早期和晚期凋亡,并促使细胞由G1期向S期转化.反义TERT对5-HT引起的细胞凋亡有协同作用,并引起G期阻滞.免疫组化实验显示,5-HT组PASMC的PCNA表达较对照组增加(P＜0.05);正义核酸组PCNA表达高于对照组(P＜0.05),并与,5-HT组表达相近;而反义TERT组PCNA的表达显著低于5-HT组和正义核酸组(P＜0.05).结论 反义TERT可有效抑制5-HT诱导的PASMC增殖,为肺动脉高压的基因治疗提供了理论基础.     

丁酸钠对肝癌Hep G_2细胞株Bcl-2表达的影响

目的：研究丁酸钠（NaB）引起HepG2细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：用不同浓度丁酸钠处理HepG2细胞后，用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测Bcl-2mRNA的表达丰度；Hochest3342核染色后观察HepG2细胞核凋亡形态的变化；原位切口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果：丁酸钠在mRNA水平明显抑制Bcl-2基因的转录；荧光显微镜下可见丁酸钠处理后细胞核出现高度凝聚、边缘化，并可见凋亡小体出现；TUNEL法证明出现细胞凋亡。结论：丁酸钠通过下调Bcl-2的转录和表达，诱导肝癌HepG2细胞的凋亡。     

反义STAT3寡核苷酸对B16细胞辐射敏感性的研究

目的 探讨反义STAT3转染鼠恶性黑色素瘤B16细胞后,肿瘤细胞辐射敏感性的变化。方法 利用反义寡核苷酸转染B16细胞后,以不同剂量γ射线照射。通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖变化,Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察。用Annexin V/PI复染,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率的变化。结果 反义STAT3转染后加以γ射线照射,B16细胞的增殖相比于两者单独作用组受到明显抑制,细胞凋亡水平也增加。结论 反义STAT3寡核苷酸联合γ射线对B16细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强,提高了鼠黑色素瘤B16细胞的辐射敏感性;表明阻断STAT3蛋白表达可能成为一种新的提高肿瘤辐射敏感性的有效手段。     

肼致心肌成纤维细胞凋亡作用机制的研究

目的观察肼作用于体外培养心肌成纤维细胞的凋亡情况并探讨其机制。方法将新生大鼠心肌成纤维细胞培养标本分为对照组和肼处理组。用2mmol／L浓度的肼处理细胞72h后Hoeehst33258染色，荧光显微镜下观察凋亡细胞核的变化；膜蛋白V／磺化丙啶双染流式细胞仪检测细胞凋亡率和坏死率；Rodamine123荧光染色流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位的变化；Western blot检测凋亡相关蛋白Bax／Bob2和Caspase-3表达的变化。结果肼处理后的细胞与对照组相比，出现明显的细胞凋亡的核浓缩、核聚集形态；细胞凋亡率和坏死率与对照组比较差异均有显著性；细胞内线粒体膜电位降低；Bax表达增高、Bcl-2表达降低、Caspase-3表达增高。结论肼可引起心肌成纤维细胞凋亡，并可能通过线粒体通路即肼损伤线粒体引起Bcl-2表达降低，Bax表达增加致使线粒体膜通透性转换孔开放，膜电位降低，细胞色素C释放入胞浆，激活Caspase-3，引起细胞凋亡。     

miR-1抑制SDF-1表达和分泌调控HMSC-bm向肝癌细胞迁移

目的 明确肿瘤抑制性micro RNA-1（miR-1）能否通过抑制SDF-1的表达和分泌,调控骨髓间充质干细胞（HMSC-bm）向肿瘤组织的转移.方法 （1）分别利用miR-1表达质粒pSuper-miR-1和miR-1反义寡核苷酸,在肝癌细胞系HepG2中过表达或下调miR-1,Western blot和酶联免疫吸附实验分别检测肝癌细胞蛋白裂解物和培养上清液中SDF-1的表达和分泌水平;（2）构建融合SDF-1 3UTR的pGL3重组萤光素酶报告基因载体,将其与pSuper-miR-1共转染HEK293细胞,利用双萤光报告基因检测系统检测重组萤光素酶的表达情况.（3）利用pSuper-miR-1或miR-1反义寡核苷酸转染接种于Transwell下层小室的HepG2细胞过表达miR-1或下调miR-1水平,检测TransweH上层小室HMSC-bm向下层小室HepG2肝癌细胞的迁移情况.结果 （1）在肝癌细胞,HepG2过表达miR-1能够显著抑制SDF-1蛋白表达和分泌,而下调miR-1水平则能够诱导SDF-1的表达和分泌.（2） miR-1能够抑制携带SDF-1 3UTR的pGL3重组萤光素酶报告基因活性.（3）在Transwell下层小室的HepG2细胞中过表达miR-1后,上层小室中HMSC-bm向下层小室迁移细胞数量显著减少,而下调下层小室HepG2细胞中miR-1表达水平,则明显增加HMSC-bm向HepG2肝癌细胞的迁移.结论 miR-1能够直接抑制肝癌细胞SDF-1的表达和分泌,并藉此降低肝癌细胞对HMSC-bm的趋化作用.     

MicroRNA-124对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察miR-124对内皮细胞增殖和凋亡的影响,探讨miR-124在动脉粥样硬化中的作用.方法 采用荧光定量PCR检测miR-124在40例冠心病患者及40例正常对照血浆中的表达水平,CCK-8和BrdU法检测miR-124对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响,TUNNEL染色检测miR-124对HUVECs凋亡的影响,Western blotting检测miR-124对HUVECs促凋亡蛋白cleaved caspase 3及抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响.结果 与对照组比较,miR-124在冠心病患者血浆中的表达明显降低.CCK-8和BrdU检测结果提示miR-124可明显促进HUVECs增殖;TUNNEL染色及Western blotting检测结果提示,miR-124可明显降低HUVECs凋亡细胞的比例及cleaved caspase 3表达,同时增加Bcl-2的表达.结论 MiR-124可促进HUVECs的增殖并抑制其凋亡,为深入认识动脉粥样硬化的发病机制提供了理论依据.     

阻断血管内皮生长因子表达对食管癌细胞放射敏感性的影响

目的 观察转染反义VEGF cDNA质粒和反义寡核苷酸后,TE-1食管癌细胞在体外的生长状况、VEGF表达水平及其放射敏感性的变化。方法 分别用反义VEGF cDNA质粒及空载体质粒和反义VEGF寡核苷酸经Lipofectamine^TM2000介导转染TE-1细胞,然后经γ射线照射。采用RT-PCR、Western blotting、流式细胞术、MTT法和克隆形成实验分别检测4组细胞照射前后VEGF基因的表达、凋亡率和细胞周期变化、细胞增殖情况以及转染细胞放射敏感性的变化。结果 将反义VEGF cDNA和反义寡核苷酸成功转入食管癌TE-1细胞后,VEGF表达水平明显降低,细胞增殖反应、细胞周期无明显变化,亦未见明显凋亡发生。照射后4组细胞增殖情况未见明显差异;反义组细胞凋亡率略有上升, 放射敏感性增加。结论 转染反义VEGF cDNA质粒和反义寡核苷酸可抑制食管癌TE-1细胞VEGF表达,联合放射线作用,对TE-1细胞的增殖无明显影响,而对其放射敏感性有增强作用。     

HER-2反义寡核苷酸对靶基因抑制作用的时相变化与微观分布研究

目的:研究靶向HER-2基因、具有不同活性的反义硫代寡核苷酸(S-ODNs)在SK-BR-3细胞内的微观分布差异,以及与靶基因转录和翻译抑制作用的关系.方法:运用实时定量PCR和Western印迹方法检测反义寡核苷酸对细胞靶基因转录和翻译抑制的时相性变化,用激光扫描共聚焦显微镜(LSM)观察6-羧基荧光素标记S-ODNs在靶细胞内的分布.结果:反义S-ODNs能够在mRNA与蛋白水平抑制HER-2的表达.不同序列的抑制活性各不相同,但最大抑制强度均出现于转染后48～72 h之间,此后靶基因表达逐渐恢复.高活性序列主要均匀分布于细胞核,且持续时间长,低活性序列呈点状分布于胞质,少量分布于细胞核且持续时间短.结论:活性不同的S-ODNs亚细胞分布有显著区别,且分布变化与对靶基因的抑制效应具有对应关系.     

Caspases在消炎痛所致胃黏膜细胞凋亡中的作用

目的　研究大鼠在体情况下消炎痛(IND) 所致胃黏膜细胞凋亡过程中caspase 3、8基因及蛋白表达的变化,以探讨其黏膜损伤机制。方法　SD大鼠以不同剂量IND(30、60、90、120mg/kg)灌胃后3h处死,另设对照组。采用TUNEL标记技术检测黏膜细胞凋亡;分别采用原位分子杂交和RT PCR检测caspase 3基因表达的变化,应用免疫组化方法同步检测caspase 3、8蛋白表达的变化。结果　TUNEL标记显示对照组大鼠胃黏膜仅见少量凋亡细胞,IND组凋亡细胞数明显增加,计算机图像分析显示阳性细胞平均像素点在IND 30、60、90、120mg/kg组分别为对照组的6 3、8 0、12 6和17 1倍(P<0 01);原位分子杂交显示,caspase 3 mRNA在对照组胃黏膜呈弱阳性表达,IND 30~90mg/kg组呈中等至强阳性,120mg/kg组呈强阳性表达,与对照组相比均有显著差异(P<0 01), caspase 3 mRNA表达变化同细胞凋亡之间呈明显正相关(r=0 9642,P<0 01);RT PCR显示对照组胃黏膜中caspase 3 mR NA表达量极少,IND各剂量组的caspase 3/βactin吸光度比值较对照组明显升高(P<0 01);免疫组化染色显示对照组胃黏膜caspase 3、8蛋白均呈弱阳性表达,caspase 3表达水平强于caspase 8(P<0 05),IND使caspase 3、8蛋白表达呈中等至强阳性,明显高于对照组(P<0 05),IND各剂量组caspase 3     

上调microRNA-150表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨上调microRNA- 150 (miR- 150)表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 SMMC7721细胞分成miR-150感染组(加入pGIPZ-miR-150慢病毒表达载体)、阴性对照组(加入只含GFP的慢病毒载体)和空白对照组(不转染).采用荧光定量PCR检测miR-150的表达情况,Western blotting检测靶基因c-Myb蛋白的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 荧光定量PCR结果显示,转染miR-150pGIPZ后,SMMC7721细胞miR-150表达量(2.48±0.15)较阴性对照组(0.81±0.09)增加了2倍(p＜0.01).CCK-8法检测结果显示,与阴性对照组和空白对照组比较,miR-150组的细胞增殖率显著降低(P＜0.05).Western blotting检测结果表明,miR-150组细胞c-Myb蛋白表达(0.31±0.07)与空白对照组(0.80±0.09)及阴性对照组(0.81±0.08)相比明显减少(P＜0.0l).流式细胞仪检测结果显示,miR-150组细胞凋亡率(19.36％±1.78％)与阴性对照组(5.12％±0.54％)及空白对照组(4.68％±0.35％)相比明显增加(P＜0.01).结论 上调miR-150表达可通过降低靶基因c-Myb的表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-150可能成为肝癌靶向治疗新的靶基因.     

Optimization of the system of medical service of students of Cadet Schools of the Ministry of Defense of the Russian Federation

One of the factors of the successful military career guidance Cadet schools students is preserving and promoting their health. Medical support of children and adolescents aged 10-17 years should include the full range of medical and preventive measures defined for this group. The state of providing outpatient care for pupils at the Cadet School in St. Petersburg was studied. These results show that full medical care in accordance with the standards can be based only on children's health clinics. It is important that the organization of medical support pupils cadet schools should be cooperate with civilian health care.     

Estimation of accumulated dose of radiation by method of ESR-spectrometry of dental enamel of mammals

ESR-spectrometry was used to investigate radiation-induced paramagnetic centers in enamel of mammals: carnivores (polar bear and fox), ungulates (reindeer, European bison, moose), and man. Values at half the microwave power saturation of the radiation signal, P_1/2, evaluated at room temperature, was found to range from 16 to 26 mW for animals and man. A new approach to discrimination of the radiation induced signal from the total ESR spectrum of reindeer enamel is proposed. ‘Dose-response’ dependencies of enamel of different species mammals were measured within the dose range from 0.48 up to 10.08 Gy. Estimations of ‘radiosensitivity’ enamel of carnivores and ungulates showed good agreement with radiosensitivity enamel of man by ESR method.     

带状疱疹83例误诊原因分析

带状疱疹是由水痘—带状疱疾病毒引起的皮肤科常见疾病。其主要的病理损害,一是受累神经的严重炎症性浸润,继而导致受侵犯神经节内神经细胞变性、坏死;二是皮肤的水泡。迅速抑制神经节和相应的感觉神经纤维的充血、水肿和坏死,防止粘连形成,达到迅速镇痛、改善皮损,缩短病程及防止后遗症的发生是治疗的关键。因而,尽早明确诊断,     

海马头部浅沟消失对海马硬化诊断价值的探讨

目的　探讨海马头部浅沟消失对海马硬化的诊断价值。方法　对 18例经组织学检查证实的海马硬化患者的MRI检查资料和 18例年龄相匹配的对照组进行回顾性分析 ,观察海马头部浅沟的显示情况、海马头部大小和信号改变。结果　 18例海马硬化患者中 ,16例硬化侧海马头部浅沟消失 ,1例硬化侧海马头部浅沟明显变浅 ,几乎消失 ,1例硬化侧海马头部浅沟存在。硬化侧海马头部均有萎缩 ,并在T2 WI和液体衰减恢复 (FLAIR)成像呈高信号。海马头部浅沟消失对海马硬化诊断的敏感性为 88.9% ,特异性为 10 0 %。结论　海马头部浅沟消失是诊断海马硬化的一个可靠征象 ,结合患侧海马有萎缩性改变和T2 加权成像信号增高 ,可肯定诊断海马硬化。     

肝癌转移机制研究进展

肝癌细胞的侵袭和转移是肝癌治疗失败和患者致死的主要原因，因此，了解肝癌侵袭转移的相关机制十分重要。肿瘤转移是一个多步骤的复杂的生物学过程，多个因素参与了肿瘤转移的调控，癌基因的表达上调、抑癌基因的失活、免疫基因的失调、肿瘤细胞间粘附作用的丧失、新生血管的形成、蛋白水解酶的合成、细胞的迁移能力增强、肿瘤细胞和基底膜的粘附等等，都是促进肿瘤转移复发的重要因素。     

跟骨骨折临床治疗探讨

目的：探讨跟骨骨折的分型与临床治疗措施的选择。方法：自2002年1月-2008年1月，选择我科收治的跟骨骨折患者中的100例，分为手术组与非手术组，其中非手术组50例，手术组50例；男85例，女15例。结果：手术治疗组患者术后跟部疼痛不适、行走受限较非手术组明显轻。结论：手术治疗能大限度恢复跟骨的解剖结构，减少跟骨骨折所致的并发症。